CN102670604B - 含有坎地沙坦、氨氯地平的组合物及其制备、检验方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种组合物，还涉及该组合物的制备方法、检验方法和用途。所述组合物包含治疗有效量的坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐、治疗有效量的氨氯地平或者其药学上可接受的盐，还包括70-150份甘露醇或乳糖、2-5份交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙、5-40份微晶纤维素或玉米淀粉。本发明所述组合物具有辅料配方独特、易于制剂、生产成本不高等优点，能够使用药剂学上的方法制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂等多种口服制剂，并且采用多种检测方法进行检验，产品的质量得到了很大的提高，取得了有益的技术效果。所制得的制剂具有治疗高血压病的作用，还具有心肌保护作用、治疗心绞痛的作用和治疗肾脏疾病的作用。

Description

含有坎地沙坦、氨氯地平的组合物及其制备、检验方法和用途

技术领域

本发明涉及一种组合物，具体来说涉及一种包含坎地沙坦类、氨氯地平和辅料的组合物。本发明还涉及该组合物的制备方法、检验方法和用途。

背景技术

高血压或高血压病是指动脉血压超过正常值的异常情况。1999年世界卫生组织规定：高血压的指标是收缩压≥140mmHg和/或舒张压≥90mmHg。高血压不仅是一个独立的疾病，同时它又作为心脑血管疾病的重要危害因素，导致心、脑、肾等重要器官的损害和相关疾病的发生，其中最常见的有脑中风、心肌梗塞和肾功能衰竭等。

1959年全国普查高血压平均患病率为5.11％，1979年为7.73％，1991年为11.88％；2000-2001年35-74岁的高血压患病率为27.2％，高血压患者约1.2亿人。2002年全国营养状况调查结果显示我国18岁以上高血压发病率为18.8％、患病人数达1.6亿，较1991年增长31％。有报道老年高血压病患病率已达38.2％-57.0％。我国高血压状态仍处于“一高”(高患病率)“三低”(低知晓率、低治疗率和低控制率)状态。

目前临床上数以百万计的高血压患者虽然服药但血压却不能完全达标，绝大部分的高血压患者都需要服用一种以上的降压药物才能达到目标血压，尤其是老年高血压患者，以及伴有糖尿病、心血管疾病的高血压患者。对于那些需要多种药物治疗来实现血压达标的病人，采用固定复方制剂作为一线治疗方案可以减少多药治疗时常会出现的漏服药或忘服药的问题，同时还可以降低药物副作用，减轻病人的用药治疗负担，从而极大地改善患者治疗的依从性，提高血压达标率。在《中国高血压防治指南》(2009基层版)中，也明确了复方降压药物在2级和3级高血压患者降压治疗中的地位。同时，多项研究表明，70％-90％的患者需2种以上药物才能使血压达标。联合用药能很好控制血压的原因可能与其同时干预多个高血压病发病机制有关。此外，联合用药具有协同降压作用或叠加效应。并且，联合用药能更好地保护靶器官，也可以降低药物的不良反应。

坎地沙坦(包括坎地沙坦及其药学上可接受的酯或盐)是一种具有高度选择性长效AT1受体拮抗剂，具有亲和力强和离解慢的特点，其代表性的品种为坎地沙坦酯。坎地沙坦酯的化学名称为：(±)-1-[[(环己氧代)羰基]氧代]乙基-2-乙氧基-1-[[2′-(1H-四氮唑基-5)-[1，1′-联苯基]-4-基]甲基]-1H-苯并咪唑-7-羧酸酯，其分子式为：C₃₃H₃₄N₆O₆，分子量为：610.66。坎地沙坦酯在体内迅速被水解成活性代谢物坎地沙坦，坎地沙坦为选择性血管紧张素Ⅱ受体(AT1)拮抗剂，通过与血管平滑肌AT1受体结合而拮抗血管紧张素Ⅱ的血管收缩作用，从而降低末梢血管阻力。该药用于治疗原发性高血压，可单独使用，也可与其它抗高血压药物联用。

氨氯地平(包括氨氯地平及其药学上可接受的盐)为钙离子拮抗剂，可以阻滞钙离子跨膜进入心肌和血管平滑肌细胞，通过扩张外周小动脉和冠状动脉，减少总外周血管阻力，用于治疗高血压；还可以解除冠状动脉痉挛，降低心脏的后负荷，减少心脏能量消耗和对氧的需求，从而缓解心绞痛。临床上可单独使用本品治疗也可与其它抗高血压药物、抗心绞痛药物合用。其代表性品种苯磺酸氨氯地平的化学名称为：3-乙基-5-甲基-2-(2-氨基乙氧甲基)-4-(2-氯苯基)-1，4-二氢-6-甲基-3，5-吡啶二羧酸酯苯磺酸盐，分子式为：C₂₀H₂₅ClN₂O₅·C₆H₆O₃S，分子量为：567.05。

坎地沙坦作用于血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，减弱血管紧张素Ⅱ对血管的收缩作用，氨氯地平作用于血管钙离子通道，减少钙离子进入血管细胞，达到舒张血管平滑肌的作用，两者在作用机制与作为位点上具有协同作用，将坎地沙坦和氨氯地平合用能更有效地控制患者的血压。首先，两药的作用机制与作用位点不同，联合应用能产生良好的协同效果，比单独用药能更好的达到降压目的。其次，联合用药中，二者均可以使用临床上的最低剂量，在很大程度上减少的不良反应的发生，能更加有效的对靶器官进行保护，进而提高患者的依从性。第三，临床上对于同时使用两种药物的患者来说，漏服其中一种药物的现象时有发生，这就大大降低的患者对治疗的顺应性，同时也增加了患者高血压复发的风险。相比单独用药，联合用药能显著性降低患者的血压，同时联合用药组患者的副反应发生率低于单独用药组患者，说明联合用药不仅比单独用药更能有效的控制患者的血压，并且还能更好地降低副反应的发生。但是，为了制成满足临床需要的制剂，不但要确定两药合用的剂量，还需要确定合适的辅料。

中国专利CN102342937A公开了一种含有坎地沙坦和氨氯地平的组合物，其中包括氨氯地平水合物晶体2.5～5份、坎地沙坦酯4～16份、可压性淀粉5～50份、微晶纤维素10～60份、低取代羟丙基纤维素15～40、交联聚乙烯吡咯烷酮10～45份、硬脂酸镁1～3份。该组合物仅适用于直接压片，而且其中的交联聚乙烯吡咯烷酮的崩解作用不理想，组合物的用量比例也不尽合理，难于对含有坎地沙坦和/或氨氯地平的该组合物制粒后制成相关制剂，微晶纤维素等辅料的价格也较高。该专利没有提供该组合物的质量检验方法。

发明内容

本发明解决的一个技术问题是提供一种治疗高血压病的组合物，以便能制成符合临床需要的制剂，达到更好的降压效果。

本发明解决的另一个技术问题是提供临床可接受的多种制剂或制成品的制备方法，特别是通过制粒将该组合物制成颗粒剂、片剂、胶囊剂等剂型的方法，并解决产品指标不理想、成本高、质量不稳定等问题。

本发明解决的又一个技术问题是提供含有坎地沙坦和/或氨氯地平的组合物的质量检验方法，以便能更好地控制和提高产品的质量。

本发明解决的再一个技术问题是提供上述组合物的多种用途。

本发明采用的技术方案是：

所述组合物包含治疗有效量的坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐、和/或治疗有效量的氨氯地平或者其药学上可接受的盐，还包括70-150份甘露醇或乳糖、2-6份交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙、5-40份微晶纤维素或玉米淀粉；优选的甘露醇或乳糖为85-105份，交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙为3-5份，微晶纤维素或玉米淀粉为10-35份；更优选的甘露醇或乳糖为95-100份，交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙为3-4份，微晶纤维素或玉米淀粉为18-20份。

其中所述坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐为4-12份，所述氨氯地平或者其药学上可接受的盐为2-8份；优选坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐为7-8份，氨氯地平或者其药学上可接受的盐为2.5-5份。

上述组合物可以包含6-10份坎地沙坦酯或相当量的坎地沙坦，和/或2-6份氨氯地平或相当量的苯磺酸氨氯地平；还包含90-105份甘露醇或乳糖，3-5份交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙，15-25份微晶纤维素或玉米淀粉。优选为：坎地沙坦酯或相当量的坎地沙坦8份，氨氯地平或相当量的苯磺酸氨氯地平2.5-5份，甘露醇或乳糖95-100份，交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙3-4份，微晶纤维素或玉米淀粉18-20份。

当需要进行制粒时，该组合物还应该包含润湿剂或黏合剂，其用量以将组合物制成合适的颗粒为度(即适量)，例如润湿剂6-200份或黏合剂0.2-10份。所述润湿剂或黏合剂经过初筛和进一步的实验，优选2％-6％的羟丙甲纤维素的水或醇溶液，更优选4％-5％的羟丙甲纤维素水溶液。

上述组合物还可以包含0.2-5份的硬脂酸镁或/和聚乙二醇6000作为润滑剂，优选为硬脂酸镁0.25-0.5份或聚乙二醇60001-4份；更优选硬脂酸镁为0.3-0.4份，聚乙二醇6000为2-3份。

上述组合物的优选方案之一是：坎地沙坦酯或相当量的坎地沙坦8份、和/或氨氯地平或相当量的苯磺酸氨氯地平2.5-5份，再加上甘露醇或乳糖95-100份、交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙3-4份、微晶纤维素或玉米淀粉18-20份、5％的羟丙甲纤维素水溶液适量、硬脂酸镁0.3-0.4份。

该组合物的制剂方法可以是：所述坎地沙坦或坎地沙坦酯或药学上可接受的坎地沙坦盐、和/或氨氯地平或药学上可接受的氨氯地平盐、加上甘露醇或乳糖、微晶纤维素或玉米淀粉、交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙混合均匀；或加入润湿剂或黏合剂后制粒，例如以15-25目的筛网进行湿法制粒和整粒，55-65℃干燥；上述中间品还可以加入硬脂酸镁或聚乙二醇6000等润滑剂，分装、压片或装胶囊。

上述含有坎地沙坦和/或氨氯地平的组合物的质量检验方法包括采用高效液相色谱法进行测定，其特征在于：采用同样含有甲醇的流动相A和流动相B或同样含有乙腈的流动相A和流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱时所述流动相A和流动相B所占的比例依次为A高B低，AB相近或B高A低，A高B低。

所述高效液相色谱法通常采用以烷基硅烷键合硅胶(例如十八烷基硅烷键合硅胶或辛基硅烷键合硅胶)作为填充剂，优选十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。

所述高效液相色谱法的色谱柱的理论板数按氨氯地平峰或坎地沙坦峰计算不低于1000，优选不低于1500，更优选不低于2000。

所述高效液相色谱法一般按外标法以峰面积计算含量。

在进行检验时，所述高效液相色谱法可以以40-60∶30-40∶10-20的水-甲醇-乙腈为流动相A，以甲醇或含0.2％-0.5％三乙胺的甲醇溶液为流动相B，用于含量、氨氯地平有关物质、溶出度、释放度或含量均匀度等的测定；优选的流动相A为45-55∶33-38∶12-18的水-甲醇-乙腈，流动相B为甲醇或含0.3％-0.4％三乙胺的甲醇溶液；更优选的流动相A为50∶35∶15的水-甲醇-乙腈，流动相B为甲醇或0.35％的三乙胺甲醇溶液。

为了达到更好的检验效果，可以使所述流动相A中的水含0.3％-1.0％的三乙胺，并用磷酸调pH至3.0-4.0，三乙胺甲醇溶液用磷酸调节pH值至4.0-5.0；优选流动相A中的水含0.5％-0.8％的三乙胺，并用磷酸调pH至3.3-3.7，三乙胺甲醇溶液用磷酸调节pH值至4.3-4.8。

上述方法的检测波长为200-260nm，优选为215±5nm或237±5nm，更优选为237±2nm。

在用所述高效液相色谱法进行含量、溶出度、释放度或含量均匀度等的检验时，优选按下表进行梯度洗脱：

更优选按下表进行梯度洗脱：

最优选按下表进行梯度洗脱：

所述高效液相色谱法中优选含量测定等的供试品溶液的制备方法为：取供试品加乙腈适量，超声使溶解，并用流动相A稀释定容；所述对照品溶液的制备为：对照品加乙腈适量使溶解，用流动相A稀释定容。所述对照品溶液或供试品溶液的浓度为每毫升含氨氯地平或者其药学上可接受盐0.05-0.2mg，和/或每毫升含坎地沙坦或者其药学上可接受酯或盐0.1-0.3mg。

具体的含量测定的方法可以是：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶35∶15的含0.7％三乙胺并用磷酸调pH＝3.5的水-甲醇-乙腈为流动相A，以用磷酸调节pH值至4.5的0.35％三乙胺甲醇溶液为流动相B；检测波长为237nm，理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000，按下表进行梯度洗脱：

精密称取相当于坎地沙坦酯10mg左右的样品细粉适量，置50ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；分别精密称取苯磺酸氨氯地平和/或坎地沙坦酯对照品适量加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.125mg、坎地沙坦酯0.2mg或每毫升约含氨氯地平0.0625mg、坎地沙坦酯0.2mg的溶液作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。

在进行溶出度的测定时，以500-1200ml(优选为800-900ml)的0.5％-2％(优选为1％-1.2％)的聚山梨酯20作为供试品的溶出介质；将对照品加甲醇溶解、用上述溶出介质稀释，制成对照品溶液。所述对照品溶液每毫升含氨氯地平或者其药学上可接受的盐1-5μg，含坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐5-7μg。

在进行含量均匀度的测定时，供试品溶液的制备为：供试品加所述流动相A超声使崩解后加乙腈超声稀释，再加所述流动相A稀释定容；对照品溶液的制备为：氨氯地平或者其药学上可接受的盐、坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐的对照品加乙腈溶解并用所述流动相A稀释定容，所述对照品溶液每毫升含氨氯地平或者其药学上可接受的盐0.05-0.2mg，和/或含坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐0.1-0.3mg。

在测定氨氯地平等有关物质时，优选按下表进行梯度洗脱：

更优选按下表进行梯度洗脱：

最优选按下表进行梯度洗脱：

在测定氨氯地平等有关物质时，供试溶液和对照溶液的制备以流动相A为溶剂。所述供试溶液含氨氯地平或者其药学上可接受的盐0.2-0.3mg/ml，所述对照溶液含氨氯地平或者其药学上可接受的盐0.002-0.003mg/ml。

在测定氨氯地平等有关物质时，所述高效液相色谱法中系统适用性溶液Ⅰ的制备为：氨氯地平或者其药学上可接受盐的对照品加流动相A溶解后加双氧水，使其中双氧水的最终浓度为9％-22％(最好为14％-16％)，加流动相A稀释定容，加热；所述高效液相色谱法中系统适用性溶液Ⅱ的制备为：称取坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐的对照品，加流动相A超声，加入盐酸溶液酸化后放置0.1-1h，调节pH至中性，加流动相A稀释定容。所述系统适用性溶液Ⅰ每毫升含0.2-0.3mg的氨氯地平或者其药学上可接受的盐，所述系统适用性溶液Ⅱ每毫升含0.3-0.5mg的坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐。

在测定氨氯地平等有关物质时，所述高效液相色谱法还包括：取系统适用性溶液Ⅰ注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间6-8分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间为0.4-0.6，其校正因子为2.0；和/或取系统适用性溶液Ⅱ注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间为0.6-0.8及2.7-3.0的峰为坎地沙坦酯的降解峰；取对照溶液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高为满量程的8％-12％，分别取上述供试液和对照液，注入液相色谱仪，在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内计算氨氯地平有关物质的量。所述计算氨氯地平有关物质的量包括：在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，主要杂质即杂质A按乘以校正因子2.0后的峰面积计算(不得大于氨氯地平对照溶液主峰面积的一半)，扣除苯磺酸及坎地沙坦酯降解峰后计算其他杂质峰面积之和(不得大于氨氯地平对照溶液主峰面积)。

具体测定氨氯地平有关物质的方法可以是：取样品细粉适量，用流动相A溶解并稀释制成每1ml中含氨氯地平0.25mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；称取以氨氯地平计的苯磺酸氨氯地平对照品25mg左右，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.5ml置10ml量瓶中，加30％双氧水5ml，加流动相A稀释至刻度，摇匀，在70℃水浴上加热40分钟，滤过，作为系统适用性溶液Ⅰ；和/或精密称取坎地沙坦酯对照品约10mg，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液2ml，放置0.5小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液Ⅱ；照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶35∶15的含0.7％三乙胺并用磷酸调pH＝3.5的水-甲醇-乙腈为流动相A，甲醇为流动相B；按下表进行梯度洗脱：

检测波长为237nm。取系统适用性溶液Ⅰ20μl注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间约7分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间约为0.5，是氨氯地平的主要降解产物，其校正因子为2.0；理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000；和/或取系统适用性溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间约为0.7及2.8的峰为坎地沙坦酯的降解峰；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％，分别取上述供试液和对照液20μl，注入液相色谱仪；在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，供试溶液的色谱图中如显杂质，杂质A按校正后的峰面积乘以校正因子2.0计算不得大于氨氯地平对照溶液主峰面积的一半，扣除苯磺酸及坎地沙坦酯降解峰后，其他杂质峰面积之和不得大于氨氯地平对照溶液主峰面积。

在测定坎地沙坦等有关物质时，所述高效液相色谱法中优选以50-70∶35-50∶0.5-1.5的乙腈-水-醋酸为流动相A，以80-100∶5-15∶0.5-1.5的乙腈-水-醋酸为流动相B；更优选以55-60∶40-45∶0.8-1.2乙腈-水-醋酸为流动相A，以85-95∶8-12∶0.8-1.2的乙腈-水-醋酸为流动相B；最优选的流动相A为57∶43∶1的乙腈-水-醋酸，流动相B为90∶10∶1的乙腈-水-醋酸。

测定坎地沙坦等有关物质时的检测波长为200-320nm，优选为219±5nm或254±5nm，更优选为254±2nm。

在测定坎地沙坦等有关物质时，优选按下表进行梯度洗脱：

更优选按下表进行梯度洗脱：

最优选按下表进行梯度洗脱：

在用高效液相色谱法测定坎地沙坦等有关物质时，还包括调节流速使坎地沙坦峰的保留时间为10-14分钟，调节检测器灵敏度使坎地沙坦峰的峰高约为满量程的8％-12％。

以2-4∶1-3的乙腈-水为溶剂制备供试溶液和对照溶液，优选以3∶2的乙腈-水为溶剂制备供试溶液和对照溶液。所述供试溶液含坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐的浓度为35-45mg/100ml，所述对照溶液含坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐的浓度为0.35-0.45mg/100ml。

在所述高效液相色谱法中，与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦的杂质峰，杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间和坎地沙坦的保留时间比分别在0.4、0.5、0.8、1.1、1.5、2.0附近；按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量(杂质Ⅱ的量不得过1.5％，杂质Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的量不得过0.5％，杂质Ⅵ的量不得过1.0％，其他各杂质的的量均不得过0.25％，总杂质的量不得过4.0％)。

在测定坎地沙坦有关物质时，其具体方法可以是：取样品精密称定，研细，精密称取相当于坎地沙坦酯20mg左右的细粉适量，置50ml量瓶中加3∶2的乙腈-水超声处理使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试溶液；精密称取坎地沙坦酯对照品约20mg置50ml量瓶中，加3∶2的乙腈-水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取1ml置100ml量瓶中，加3∶2的乙腈-水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以57∶43∶1的乙腈-水-醋酸为流动相A，90∶10∶1的乙腈-水-醋酸为流动相B；按下表进行梯度洗脱：

检测波长为254nm；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节流速使坎地沙坦酯峰的保留时间约为12分钟，调节检测器灵敏度，使坎地沙坦酯峰的峰高约为满量程的10％，理论板数按坎地沙坦酯计算应不低于2000；再精密量取上述供试溶液和对照液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图；与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦酯的杂质峰，杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间和坎地沙坦酯的保留时间比分别在0.4、0.5、0.8、1.1、1.5、2.0附近；在供试溶液的色谱图中如显杂质，按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量。其中杂质Ⅱ的量不得过1.5％，杂质Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的量不得过0.5％，杂质Ⅵ的量不得过1.0％，其他各杂质的的量均不得过0.25％，总杂质的量不得过4.0％。

本发明对所述组合物中的主药和制剂辅料的种类、用量进行了研究和筛选，主药的用量比例科学，稀释剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂的种类及用量选择得当，并减少了成本较高的交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素的用量，具有组合物配方独特、易于制剂、生产成本不高等优点，能够使用药剂学上可接受的方法特别是通过制粒制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂等多种口服制剂，并且可以采用多种检验方法进行检测，检验方法简便、准确、重现性好，使得产品的质量稳定，各项技术指标得到了很大的提高，取得了有益的技术效果。所制得的制剂具有治疗高血压病的作用，还具有心肌保护作用、治疗心绞痛的作用和治疗肾脏疾病的作用。

附图说明

图1为苯磺酸氨氯地平溶液的紫外-可见分光光度法的全波长扫描图。

图2为坎地沙坦酯溶液的紫外-可见分光光度法的全波长扫描图。

图3为坎地沙坦酯氨氯地平制剂的高效液相色谱法色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步阐述本发明的具体组合物、其制备方法、检验方法及其有益效果，这些具体实施方式还包含了本发明组合物的药效学试验和临床研究的结果。

实施例1、组合物散剂的小样制备和检验

制备：取6g坎地沙坦酯、7g氨氯地平、80g甘露醇、6g交联羧甲基纤维素钙、6g玉米淀粉混合均匀，制成散剂，分装成1000袋，即得。

检验：【检查】坎地沙坦酯有关物质 取本品，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯18mg)，置50ml量瓶中加乙腈-水(2∶3)超声处理使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试溶液；精密称取坎地沙坦酯对照品约22mg置50ml量瓶中，加乙腈-水(2∶3)溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取1ml置100ml量瓶中，加乙腈-水(2∶3)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以52∶45∶0.5的乙腈-水-醋酸为流动相A，以80∶12∶1.5的乙腈-水-醋酸为流动相B；按下表进行梯度洗脱；检测波长为220nm；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节流速使坎地沙坦酯峰的保留时间约为10分钟，调节检测器灵敏度，使坎地沙坦酯峰的峰高约为满量程的8％，理论板数按坎地沙坦酯计算应不低于1500。再精密量取上述供试溶液和对照液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦酯的杂质峰。在供试溶液的色谱图中，杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间与坎地沙坦酯的保留时间比分别为0.44、0.51、1.11、1.50、1.96；按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量，杂质Ⅰ的量为0.08％，杂质Ⅱ的量为0.38％，杂质Ⅲ的量为0.00％，杂质Ⅳ的量为0.10％，杂质Ⅴ的量为0.08％，杂质Ⅵ的量为0.28％，其他最大单杂的量为0.08％，总杂质的量为0.98％。

氨氯地平有关物质 取本品细粉适量，用流动相A水(含0.3％三乙胺，磷酸调pH＝3.0)-甲醇-乙腈(40∶40∶10)溶解并稀释制成每1ml中含氨氯地平0.2mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释刻度，摇匀，作为对照溶液。称取苯磺酸氨氯地平对照品约25mg(以氨氯地平计)，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.0ml置10ml量瓶中，加20％双氧水4.5ml，加流动相A稀释至刻度，摇匀，在70℃水浴上加热40分钟，滤过，作为系统适用性溶液Ⅰ。称取坎地沙坦酯对照品约8mg，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液2ml，放置0.5小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液Ⅱ。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水(含0.3％三乙胺，磷酸调pH＝3.0)-甲醇-乙腈(40∶40∶10)为流动相A；甲醇为流动相B；按下表进行梯度洗脱，检测波长为237nm。取系统适用性溶液Ⅰ20μl注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间约7分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间约为0.45，是氨氯地平的主要降解产物，其校正因子为2.0。理论板数按氨氯地平峰计算约为3000。取系统适用性溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间约为0.7及2.8的峰为坎地沙坦酯的降解峰。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高约为满量程的8％，分别取上述供试液和对照液20μl，注入液相色谱仪。在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，供试溶液的色谱图中杂质A按校正后的峰面积(乘以校正因子2.0)计算为0.05％，扣除苯磺酸及坎地沙坦酯降解峰后，其他杂质的量为0.07％。

含量均匀度 取本品1袋，置10ml量瓶中，加2ml流动相A超声使崩解并加乙腈超声并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2.5ml置10ml中，用流动相A稀释至刻度作为供试品溶液；分别精密称取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量，加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.15mg和坎地沙坦酯0.25mg的溶液作为对照品溶液，照含量测定项下方法测定含量并计算含量均匀度，结果符合规定(中国药典2010年版二部附录ⅩE)。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水(含0.3％三乙胺，磷酸调pH＝3.0)-甲醇-乙腈(40∶40∶10)为流动相A；0.25％三乙胺甲醇溶液(用磷酸调节pH值至4.8)为流动相B；检测波长为210nm，理论板数按氨氯地平峰计算应不低于1500，按下表进行梯度洗脱。

测定法 取本品，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯10mg)置50ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别精密称取氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.2mg和坎地沙坦酯0.3mg的溶液作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。结果氨氯地平的含量为99.4％，坎地沙坦酯的含量为99.2％。

实施例2、组合物胶囊剂的制备和检验

制备：取10kg坎地沙坦、2.5kg氨氯地平、100kg甘露醇、5kg交联羧甲基纤维素钠、35kg微晶纤维素混合均匀，以2％的羟丙甲纤维素乙醇(乙醇浓度为30％)溶液约20L制软材，以孔径为20目的筛网制粒，58℃干燥，以孔径为16目的筛网整粒，将颗粒与0.5kg硬脂酸镁混合均匀，装胶囊1000000粒，即得。

检验：【检查】坎地沙坦有关物质 取本品10粒，内容物精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦22mg)，置50ml量瓶中加乙腈-水(4∶1)超声处理使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试溶液；精密称取坎地沙坦对照品约18mg置50ml量瓶中，加乙腈-水(4∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取1ml置100ml量瓶中，加乙腈-水(4∶1)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以68∶36∶1.5的乙腈-水-醋酸为流动相A，以95∶6∶0.6的乙腈-水-醋酸为流动相B；按下表进行梯度洗脱；检测波长为300nm；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节流速使坎地沙坦峰的保留时间约为14分钟，调节检测器灵敏度，使坎地沙坦峰的峰高约为满量程的12％，理论板数按坎地沙坦计算应不低于2000。再精密量取上述供试溶液和对照液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦的杂质峰。在供试溶液的色谱图中，杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间和坎地沙坦的保留时间比分别为0.42、0.50、0.78、1.10、1.51、1.98；按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量，杂质Ⅰ的量为0.05％，杂质Ⅱ的量为0.28％，杂质Ⅲ的量为0.00％，杂质Ⅳ的量为0.04％，杂质Ⅴ的量为0.07％，杂质Ⅵ的量为0.16％，其他最大单杂的量为0.09％，总杂质的量为0.69％。

氨氯地平有关物质 取本品细粉适量，用流动相A水(含0.4％三乙胺，磷酸调pH＝4.0)-甲醇-乙腈(60∶30∶20)溶解并稀释制成每1ml中含氨氯地平0.3mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释刻度，摇匀，作为对照溶液。称取氨氯地平对照品约25mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3.0ml置10ml量瓶中，加40％双氧水5.5ml，加流动相A稀释至刻度，摇匀，在60℃水浴上加热30分钟，滤过，作为系统适用性溶液Ⅰ。称取坎地沙坦对照品约12mg，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液1.5ml，放置0.6小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液Ⅱ。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水(含0.4％三乙胺，磷酸调pH＝4.0)-甲醇-乙腈(60∶30∶20)为流动相A；甲醇为流动相B；按下表进行梯度洗脱，检测波长为250nm。取系统适用性溶液Ⅰ20μl注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间约6分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间约为0.6，是氨氯地平的主要降解产物，其校正因子为2.0。理论板数按氨氯地平峰计算应不低于1000。取系统适用性溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间约为0.8及3.0的峰为坎地沙坦的降解峰。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高约为满量程的12％，分别取上述供试液和对照液20μl，注入液相色谱仪。在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，供试溶液的色谱图中杂质A按校正后的峰面积(乘以校正因子2.0)计算为0.06％，扣除坎地沙坦降解峰后，其他杂质的量为0.11％。

含量均匀度 取本品1粒，内容物置10ml量瓶中，加2ml流动相A超声溶解，加乙腈超声并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2.5ml置10ml中，用流动相A稀释至刻度作为供试品溶液；分别精密称取氨氯地平和坎地沙坦对照品适量，加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.07mg和坎地沙坦0.15mg的溶液作为对照品溶液，照含量测定项下方法测定含量并计算含量均匀度(中国药典2010年版二部附录ⅩE)，氨氯地平的平均含量为100.8％，A+1.80S＝2.96，坎地沙坦的平均含量为100.9％，A+1.80S＝7.74。

溶出度 取本品，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)，以0.5％聚山梨酯20溶液1000ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取溶液5ml，滤过，作为供试溶液。取氨氯地平对照品及坎地沙坦对照品适量加甲醇及溶出介质配制成每毫升含坎地沙坦7μg及氨氯地平4μg的溶液，摇匀，滤过，作为对照溶液，按照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每粒坎地沙坦和氨氯地平的溶出量，限度为标示量的75％。结果氨氯地平的溶出度为95.9％，坎地沙坦的溶出度为92.1％。

【含量测定】色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水(含0.9％三乙胺，磷酸调pH＝4.0)-甲醇-乙腈(60∶30∶20)为流动相A；0.45％三乙胺甲醇溶液(用磷酸调节pH值至4.2)为流动相B；检测波长为240nm，理论板数按氨氯地平峰计算应不低于1500，按下表进行梯度洗脱。

测定法 取本品10粒，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯10mg)置50ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别精密称取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.1mg和坎地沙坦酯0.15mg的溶液作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。结果氨氯地平的含量为99.9％，坎地沙坦的含量为100.1％。

实施例3、组合物颗粒剂的制备和检验

制备：取8kg坎地沙坦酯、2.5kg苯磺酸氨氯地平、95kg甘露醇、3kg交联羧甲基纤维素钠、18kg微晶纤维素及适量淀粉混合均匀作为底料，以适量水为润湿剂进行一步制粒，分装成500000袋，每袋1g，即得。

检验：【检查】坎地沙坦酯有关物质 取本品10袋，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯20mg)，置50ml量瓶中加乙腈-水(3∶2)超声处理使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试溶液；精密称取坎地沙坦酯对照品20mg置50ml量瓶中，加乙腈-水(3∶2)溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取1ml置100ml量瓶中，加乙腈-水(3∶2)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(59∶41∶1.2)为流动相A，乙腈-水-醋酸(86∶11∶0.8)为流动相B；按下表进行梯度洗脱；检测波长为254nm；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节流速使坎地沙坦酯峰的保留时间约为12分钟，调节检测器灵敏度，使坎地沙坦酯峰的峰高约为满量程的10％，理论板数按坎地沙坦酯计算约为5000。再精密量取上述供试溶液和对照液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦酯的杂质峰。在供试溶液的色谱图中，杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间和坎地沙坦酯的保留时间比分别为0.41、0.49、0.81、1.09、1.48、1.99，按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量，杂质Ⅰ的量为0.04％，杂质Ⅱ的量为0.27％，杂质Ⅲ的量为0.00％，杂质Ⅳ的量为0.03％，杂质Ⅴ的量为0.07％，杂质Ⅵ的量为0.16％，其他最大单杂的量为0.09％，总杂质的量为0.72％。

氨氯地平有关物质 取本品细粉适量，用流动相A水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)溶解并稀释制成每1ml中含氨氯地平0.25mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释刻度，摇匀，作为对照溶液。称取苯磺酸氨氯地平对照品约25mg(以氨氯地平计)，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.5ml置10ml量瓶中，加30％双氧水5ml，加流动相A稀释至刻度，摇匀，在80℃水浴上加热20分钟，滤过，作为系统适用性溶液Ⅰ。称取坎地沙坦酯对照品约10mg，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液2ml，放置0.3小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液Ⅱ。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A；甲醇为流动相B；按下表进行梯度洗脱，检测波长为237nm。取系统适用性溶液Ⅰ20μl注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间约8分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间约为0.5，是氨氯地平的主要降解产物，其校正因子为2.0。理论板数按氨氯地平峰计算约为4000。取系统适用性溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间约为0.6及2.7的峰为坎地沙坦酯的降解峰。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％，分别取上述供试液和对照液20μl，注入液相色谱仪。在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，供试溶液的色谱图中杂质A按校正后的峰面积(乘以校正因子2.0)计算为0.07％，扣除苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯降解峰后，其他杂质的量为0.08％。

含量均匀度 取本品1袋，置20ml量瓶中，加流动相A[水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)]2ml超声使崩解并加乙腈超声并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2.5ml置10ml中，用流动相A稀释至刻度作为供试品溶液；分别精密称取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量，加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.0625mg和坎地沙坦酯0.2mg的溶液作为对照品溶液，照含量测定项下方法测定含量并计算含量均匀度(中国药典2010年版二部附录ⅩE)，结果苯磺酸氨氯地平的平均含量为101.1％，A+1.80S＝4.20，坎地沙坦酯的平均含量为94.9％，A+1.80S＝7.89，均符合规定。

溶出度 取本品，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)，以2％聚山梨酯20溶液600ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取溶液5ml，滤过，作为供试溶液。取苯磺酸氨氯地平对照品及坎地沙坦酯对照品适量加甲醇及溶出介质配制成每毫升含坎地沙坦酯6μg及氨氯地平4μg的溶液，摇匀，滤过，作为对照溶液，按照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每袋坎地沙坦酯和氨氯地平的溶出量，限度为标示量的75％。结果苯磺酸氨氯地平的溶出度为95.6％，坎地沙坦酯的溶出度为92.8％，均符合规定。

【含量测定】色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水(含1.0％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(54∶37∶13)为流动相A；0.35％三乙胺甲醇溶液(用磷酸调节pH值至4.5)为流动相B；检测波长为237nm，理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000，按下表进行梯度洗脱。

测定法 取本品10袋，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯10mg)置50ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别精密称取氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.0625mg和坎地沙坦酯0.2mg的溶液作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。结果苯磺酸氨氯地平的含量为99.6％，坎地沙坦酯的含量为99.8％。

实施例4、组合物片剂的制备和检验

制备：取8kg坎地沙坦酯、5kg苯磺酸氨氯地平、140kg甘露醇、4kg交联羧甲基纤维素钠、20kg微晶纤维素混合均匀，以6％的羟丙甲纤维素水溶液适量为黏合剂制软材，以孔径为24目的筛网制粒，65℃干燥，以孔径为24目的筛网整粒，将颗粒与4kg聚乙二醇6000混合均匀，压成1000000片，即得。

检验：【检查】坎地沙坦酯有关物质 取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯20mg)，置50ml量瓶中加乙腈-水(3∶2)超声处理使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试溶液；精密称取坎地沙坦酯对照品20mg置50ml量瓶中，加乙腈-水(3∶2)溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取1ml置100ml量瓶中，加乙腈-水(3∶2)稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-醋酸(57∶43∶1)为流动相A，乙腈-水-醋酸(90∶10∶1)为流动相B；按下表进行梯度洗脱；检测波长为254nm；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节流速使坎地沙坦酯峰的保留时间约为12分钟，调节检测器灵敏度，使坎地沙坦酯峰的峰高约为满量程的10％，理论板数按坎地沙坦酯计算约为9000。再精密量取上述供试溶液和对照液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦酯的杂质峰。在供试溶液的色谱图中，杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间和坎地沙坦酯的保留时间比分别为0.44、0.51、0.79、1.11、1.50、1.96，按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量，杂质Ⅰ的量为0.08％，杂质Ⅱ的量为0.36％，杂质Ⅲ的量为0.00％，杂质Ⅳ的量为0.09％，杂质Ⅴ的量为0.09％，杂质Ⅵ的量为0.28％，其他最大单杂的量为0.09％，总杂质的量为0.98％，均符合规定。

氨氯地平有关物质 取本品细粉适量，用流动相A水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)溶解并稀释制成每1ml中含氨氯地平0.25mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释刻度，摇匀，作为对照溶液。称取苯磺酸氨氯地平对照品约25mg(以氨氯地平计)，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.5ml置10ml量瓶中，加30％双氧水5ml，加流动相A稀释至刻度，摇匀，在70℃水浴上加热40分钟，滤过，作为系统适用性溶液Ⅰ。称取坎地沙坦酯对照品约10mg，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液2ml，放置0.5小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液Ⅱ。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A；0.35％三乙胺甲醇溶液(用磷酸调节pH值至4.5)为流动相B；按下表进行梯度洗脱，检测波长为237nm。取系统适用性溶液Ⅰ20μl注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间约7分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间约为0.5，是氨氯地平的主要降解产物，其校正因子为2.0。理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000。取系统适用性溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间约为0.7及2.8的峰为坎地沙坦酯的降解峰。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％，分别取上述供试液和对照液20μl，注入液相色谱仪。在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，供试溶液的色谱图中杂质A按校正后的峰面积(乘以校正因子2.0)计算为0.08％，扣除苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯降解峰后，其他杂质的量为0.09％。

含量均匀度 取本品1片，置10ml量瓶中，加流动相A[水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)]2ml超声使崩解并加乙腈超声并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2.5ml置10ml中，用流动相A稀释至刻度作为供试品溶液；分别精密称取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量，加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.125mg和坎地沙坦酯0.2mg的溶液作为对照品溶液，照含量测定项下方法测定含量并计算含量均匀度(中国药典2010年版二部附录ⅩE)，苯磺酸氨氯地平的平均含量为98.3％，A+1.80S＝4.58，坎地沙坦酯的平均含量为99.8％，A+1.80S＝3.26，均符合规定。

溶出度 取本品，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)，以1％聚山梨酯20溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取溶液5ml，滤过，作为供试溶液。取苯磺酸氨氯地平对照品及坎地沙坦酯对照品适量加甲醇及溶出介质配制成每毫升含坎地沙坦酯6μg及氨氯地平5μg的溶液，摇匀，滤过，作为对照溶液，按照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每片坎地沙坦酯和氨氯地平的溶出量。结果苯磺酸氨氯地平的溶出度为96.4％，坎地沙坦酯的溶出度为93.9％，均符合规定。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A；甲醇为流动相B；检测波长为235nm，理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000，按下表进行梯度洗脱。

测定法 取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于坎地沙坦酯10mg)置50ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别精密称取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成每毫升约含氨氯地平0.125mg和坎地沙坦酯0.2mg的溶液作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。结果苯磺酸氨氯地平的含量为99.7％，坎地沙坦酯的含量为100.0％，均符合规定。

实验例1、组合物辅料及用量的筛选

通过初筛得知：在常用辅料中，甘露醇、乳糖是本发明制剂的较好的稀释剂，两种物质均不吸湿，但由于乳糖会随贮藏时间延长使成品变色，因此优选甘露醇作稀释剂，次选乳糖作稀释剂；微晶纤维素、玉米淀粉既可作稀释剂也可作崩解剂，但由于玉米淀粉相对于微晶纤维素的可压性稍差，因此优选微晶纤维素作本品处方稀释剂；选用交联羧甲基纤维素钠或羧甲基纤维素钙作崩解剂，但羧甲基纤维素钙尚未广泛使用，因此优选交联羧甲基纤维素钠作崩解剂；用润湿剂(例如水、乙醇)或用黏合剂(可以以水或乙醇作为溶剂)产生黏合作用，其中黏合剂优选羟丙甲纤维素，选用硬脂酸镁或聚乙二醇6000作润滑剂。

初筛的较佳用量甘露醇为10％-90％，微晶纤维素为20％-90％，交联羧甲基纤维素钠为2％-5％，羟丙甲纤维素浓度为2％-5％，聚乙二醇6000为小于5％，硬脂酸镁为0.25％-5.0％。根据以上用量范围并结合辅料成本、易得性等设计组合物处方，具体实验安排如下：

1.1 稀释剂用量对处方的影响

通过调整稀释剂甘露醇和微晶纤维素的配伍，以颗粒休止角以及制成片剂的硬度、脆碎度、崩解时限为指标进行考察。结果见表1。

表1 稀释剂用量对处方的影响

试验结果显示，上述3个处方休止角、片剂的硬度、脆碎度无明显差别。处方2与处方1和处方3比较，崩解速度适中。

1.2 润湿剂或黏合剂对处方的影响

通过增加黏合剂羟丙甲纤维素浓度(处方4)，以水代替乙醇作黏合剂溶剂(处方5)，增加以水为溶剂的黏合剂浓度(处方6)，以颗粒色泽以及片剂硬度、脆碎度、崩解时限为指标进行考察，试验结果见表2：

表2 润湿剂或黏合剂对处方的影响

试验结果显示，处方4以乙醇为溶剂配制的黏合剂制得颗粒显淡黄色，而处方5以水为溶剂配制的黏合剂制得颗粒显白色，但处方5压片后的硬度及脆碎度均不如处方4；仍以水为溶剂，随着黏合剂浓度的提高，制得颗粒压片后硬度和脆碎度均达到要求。

1.3 处方优化

通过降低崩解剂用量(处方7)，增加润滑剂聚乙二醇6000(处方8)，增加润滑剂硬脂酸镁用量(处方9)，以颗粒休止角以及片剂硬度、脆碎度、崩解时限为指标，对处方进行以下优化，试验结果见表3：

表3 处方优化试验

试验结果显示，处方7减少崩解剂的用量，即减少交联羧甲基纤维素纳的用量，崩解时间随之延长；处方8加入聚乙二醇6000，对颗粒流动性并无明显改善；本着降低处方辅料种类的原则，适当增加硬脂酸镁用量以提高物料流动性，因此，将处方9作为最佳优选处方之一。

小规格制剂(坎地沙坦酯8mg，氨氯地平2.5mg)与大规格制剂(坎地沙坦酯8mg，氨氯地平5mg)相比，其差别仅由5mg氨氯地平用量降低至2.5mg，对处方无明显影响，因此小规格制剂中辅料的处方量与大规格相同，仅是氨氯地平处方量不同而已。

采用上述处方，试制了两种规格的片剂，分别考察其硬度、脆碎度、崩解时间等指标，结果见表6：

表4 试制片剂的有关指标

检查项	大规格制剂	小规格制剂
			片剂硬度(kg)	5.85	5.81
脆碎度(％)	0.22	0.20
			崩解时间	1′53″	1′42″

结果显示，各项指标与处方9所得数据无明显差别，证明以上处方可重现性好，可用于制剂生产。

在上述优选实验中，将其中甘露醇的量改为95mg或使用乳糖，微晶纤维素的量改为18mg或改为玉米淀粉18mg或20mg，交联羧甲基纤维素钠的量改为4mg或改为交联羧甲基纤维素钙3mg或4mg，试验结果极其相似。

1.4 自制样品与已上市单方制剂的溶出曲线比较

溶出曲线的比较采用已上市的坎地沙坦西酯片(商品名：必洛斯批号：017A)和苯磺酸氨氯地平(商品名：络活喜批号：9580507)的单方制剂与自制的大规格样品(实施例4的片剂)，进行体外释放行为的比较，考察处方9的处方组成合理性。

分别以1％吐温20溶液、水、0.01mol/L的盐酸溶液、pH6.8和pH4.5的缓冲盐为溶出介质，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)，转速为每分钟50转，分别在15、30、45、60、90分钟取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

取坎地沙坦酯对照品和苯磺酸氨氯地平对照品适量，以甲醇配制成每1ml含坎地沙坦酯约0.3mg和苯磺酸氨氯地平(以氨氯地平计)约0.2mg的溶液，再取1ml该溶液置50ml量瓶中，以溶出介质稀释至刻度，摇匀，过滤，作为自制样品对照品溶液。照高效液相色谱法进行测定，计算每片的溶出量。以1％吐温20的水溶液为溶出介质的试验结果如下：

表5 以1％吐温20为溶出介质的溶出量测定

自制品与必洛斯的坎地沙坦酯溶出曲线比较的f2＝73，相似度判断为相似；自制品与络活喜的氨氯地平的溶出曲线比较的f2＝70，相似度判断为相似。以水、0.01mol/L的盐酸溶液、pH6.8和pH4.5的缓冲盐为溶出介质，自制样品与市售坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平的单方制剂的溶出过程也均相似(但坎地沙坦酯的溶出情况均不够理想)。实验结果证明，本品处方组成合理。

实验例2、制备工艺研究

经研究后确定的工艺为：将处方量坎地沙坦酯、苯磺酸氨氯地平、甘露醇、微晶纤维素以及交联羧甲基纤维素钠混合均匀，以2％-6％的羟丙甲纤维素水溶液为黏合剂进行一步制粒，或制软材，以孔径为15-25目的筛网制粒，60℃±5℃干燥，以孔径为15-25目的筛网整粒；包装或将颗粒与硬脂酸镁混合均匀装胶囊或压片。片剂和胶囊剂的检验报告见表6、7。

表6 坎地沙坦酯氨氯地平片(大规格)三批检验报告

表7 坎地沙坦酯氨氯地平胶囊(小规格)三批检验报告

实验例3、压片质量检查

在压片过程中，以片子外观、硬度、脆碎度和片重差异为控制指标，检查结果见表8：

表8 工艺验证试验压片工艺研究

由以上结果可知样品的外观良好，光洁完整，色泽均一，片子硬度适中，片重差异均符合规定，三批试制结果基本一致。

实验例4：实施例4制剂的稳定性研究

(1)影响因素试验

样品在60℃±2℃、相对湿度92.5％±5％(25℃)、相对湿度75％±5％(25℃)、照度4500lx±500lx条件下放置10天，于第5天和第10天取样，按临床用质量标准规定的检测方法检验，样品相对湿度92.5％±5％(25℃)条件下5天检测吸湿增重大于5％，在60℃±2℃、相对湿度75％±5％(25℃)、照度4500lx±500lx条件下放置10天，各项指标均符合规定。

(2)加速试验

样品采用口服固体药用高密度聚乙烯瓶包装，在40℃±2℃相对湿度75％±5％条件下恒温恒湿放置，分别于0、1、2、3、6月取样，按临床用质量标准规定的检测方法，对样品的性状、有关物质、溶出度、含量项目进行检测，各考察项目的各项指标均无明显变化。

(3)长期试验

样品采用口服固体药用高密度聚乙烯瓶包装，在25℃±2℃，相对湿度60％±10％恒温恒湿条件下放置，分别于0、3、6月取样，按临床用质量标准规定的检测方法，对样品的性状、有关物质、溶出度、含量项目进行检测，各考察项目的各项指标均无明显变化。

实验例5、色谱条件的选择

5.1 检测波长选择

取苯磺酸氨氯地平原料适量加甲醇配制成每毫升溶液约含氨氯地平12.5μg的溶液，照紫外-可见分光光度法进行全波长扫描，见图1，另取坎地沙坦酯原料适量加甲醇配制成每毫升溶液中约含坎地沙坦酯20μg的溶液，照紫外-可见分光光度法进行全波长扫描，见图2。由以上图谱可知，氨氯地平在波长215nm、237nm和358nm处有最大吸收，因此可选200-260nm的波长用于氨氯地平含量及有关物质的检测，优选为215±5nm或237±5nm，更优选为237±2nm。坎地沙坦酯在波长219nm、254nm、和305nm处有最大吸收，因此可选200-320nm的波长用于坎地沙坦酯有关物质的检测，优选为219±5nm或254±5nm，更优选为254±2nm。同时，可选200-260nm的波长用于两种成分的检测，优选为215±5nm或237±5nm，在波长237nm处氨氯地平有最大吸收，同时坎地沙坦酯的吸收也较强，因此更优选为237±2nm。

5.2 流动相选择

当采用水(0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相时，氨氯地平的保留时间为约7分钟，坎地沙坦酯40分钟内未出峰，因此考虑提高有机相比例并采用梯度洗脱使氨氯地平和坎地沙坦酯的保留时间提前，以建立高效，快捷，准确的液相分析方法。先采用水(0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A，甲醇为流动相B，A∶B＝50∶50进行等度洗脱。取苯磺酸氨氯地平原料约12.5mg(以氨氯地平计)置50ml量瓶中，加流动相A适量超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml置10ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀。另取坎地沙坦酯原料约20mg置50ml量瓶中，加流动相A超声，坎地沙坦酯不能够完全溶于流动相A中，因此先加乙腈10ml，超声使坎地沙坦酯溶解，再加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml置10ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀。分别取上述供试溶液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，结果由图谱可以看出，坎地沙坦酯的保留时间为7.927min，氨氯地平的保留时间为1.606min，氨氯地平的洗脱时间较短，容易受到溶剂峰的干扰。因此调整A∶B＝85∶15，量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，结果由图谱可以看出：氨氯地平的保留时间为4.281min，较为理想，但是坎地沙坦酯的在30min内没有出峰。为缩短分析时间，拟采用梯度洗脱方式进行洗脱。为减少两相之间的紫外吸收差异，将流动相B调整为0.35％三乙胺甲醇溶液(磷酸调pH＝4.5)按下表进行梯度洗脱。

时间(min)	0	5	8	19	20	25
							A(％)	85	85	50	50	85	85
B(％)	15	15	50	50	15	15

称取坎地沙坦酯氨氯地平制剂的细粉适量(约含坎地沙坦酯10mg)置50ml量瓶中，加流动相A适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，量取上述溶液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，见图3。由图3可以看出，坎地沙坦酯与氨氯地平主峰的分离度为26.207，符合规定，相互之间不干扰测定。经试验，辅料及流动相在上述条件下不干扰测定。

实验例6、含量测定方法验证

6.1 回收试验

分别取苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯约24.3mg和28mg、34.6mg和40mg、45.0mg和52mg，精密称定，分别置同一50ml量瓶中，加入处方量辅料，加乙腈10ml超声使溶解，并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置10ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入色谱仪中，记录色谱图；另取苯磺酸氨氯地平对照品及坎地沙坦酯对照品适量，精密称定，加乙腈适量超声使溶解，并加流动相稀释制成每毫升中约含氨氯地平0.125mg和坎地沙坦酯0.2mg的溶液，同法测定，分别计算氨氯地平和坎地沙坦酯的回收率，结果见表9-10。

表9 氨氯地平含量测定回收试验的试验结果

序号	称样量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
				1	24.4	24.09	98.7
2	24.6	24.63	100.1
				3	24.5	24.59	100.4
4	34.9	35.15	100.7
				5	34.8	35.24	101.3
6	34.6	35.35	102.2
				7	45.4	45.03	99.2
8	45.5	45.66	100.4
				9	45.7	46.64	102.0

氨氯地平含量平均回收率为100.5％，RSD＝1.16％

表10 坎地沙坦酯含量测定回收试验的试验结果

序号	称样量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
				1	27.8	27.16	97.7
2	27.9	27.40	98.2
				3	28.2	27.72	98.3
4	39.9	39.55	99.1
				5	40.2	39.75	98.9
6	40.1	40.59	101.2
				7	52.2	51.42	98.5
8	51.4	50.42	98.1
				9	51.9	52.31	100.8

坎地沙坦酯含量测定的平均回收率为99.0％，RSD＝1.23％

6.2 线性试验

取苯磺酸氨氯地平对照品约12.5mg(以氨氯地平计)、坎地沙坦酯约20mg精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈适量超声使溶解，加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过。分别精密量取续滤液1、3、5、7、9ml至10ml量瓶中，加流动相A至刻度，摇匀，取20μl注入色谱仪中，记录色谱图，结果见表11-12。

表11 氨氯地平含量测定的线性试验

结果表明：在25μg/ml-225μg/ml的浓度范围内氨氯地平的浓度与峰面积呈良好的线性关系，r＝1.0000。

表12 坎地沙坦酯含量测定的线性试验结果

结果表明：在40μg/ml-360μg/ml的浓度范围内坎地沙坦酯的浓度与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.9994。

6.3 精密度试验

6.3.1 重复性

取坎地沙坦酯氨氯地平片细粉适量(约相当于坎地沙坦酯l0mg)精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈l0ml，超声使溶解，加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取20μl注入色谱仪中，记录色谱图，将同一批样品，平行精密测定6次，另取苯磺酸氨氯地平对照品(以氨氯地平计)约12.5mg，坎地沙坦酯对照品约20mg，精密称定，置同一50ml量瓶中，加乙腈l0ml超声使溶解，加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml置l0ml量瓶中加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液同法测定。结果见表13、14。

表13 氨氯地平含量测定的重复性试验结果

次数	1	2	3	4	5	6
							含量(％)	98.5	98.7	99.2	99.3	99.1	99.3

坎地沙坦酯氨氯地平片含量测定氨氯地平的含量平均值为99.0％，RSD＝0.33％。

结果表明：本方法测定氨氯地平含量的重复性较好。

表14 坎地沙坦酯含量测定的重复性试验结果

次数	1	2	3	4	5	6
							含量(％)	99.9	100.1	100.1	100.1	99.8	100.2

坎地沙坦酯氨氯地平片含量测定坎地沙坦酯的含量平均值为100.0％，RSD＝0.16％。

结果表明：本方法测定坎地沙坦酯含量的重复性较好。

6.3.2 中间精密度试验

照上述重复性试验方法于不同时间、不同仪器及不同操作人员，对同一批坎地沙坦酯氨氯地平片中的氨氯地平以及坎地沙坦酯进行含量测定。平行测定6次，结果见表15-16。

表15 氨氯地平含量测定的中间精密度试验结果

序号	1	2	3	4	5	6
							含量(％)	99.7	99.4	100.1	100.0	99.3	99.1

氨氯地平含量测定的重复性试验和中间精密度试验12次测定结果平均值为99.6％，RSD＝0.41％。结果表明本方法测定氨氯地平的含量的中间精密度较好，精密度较高。

表16 坎地沙坦酯含量测定的中间精密度试验结果

序号	1	2	3	4	5	6
							含量(％)	100.4	99.8	100.6	100.5	99.8	99.5

坎地沙坦酯含量测定的重复性试验和中间精密度试验12次测定结果平均值为100.1％，RSD＝0.45％。结果表明本方法测定坎地沙坦酯的含量的中间精密度较好，精密度较高。

以上试验表明，此方法的精密度较好。

实验例7、溶出度检查的溶出介质及溶出体积的选择

试验结果表明，在以水、0.01mol/L的盐酸溶液、pH6.8和pH4.5的磷酸缓冲盐溶液为溶出介质时，坎地沙坦酯氨氯地平片中氨氯地平均能溶出80％以上，但坎地沙坦酯则不能溶出或溶出低于20％；而以0.5％-2％吐温20溶液为溶出介质时，氨氯地平和坎地沙坦酯在45分钟时溶出度均能达90％以上，因此选择将0.5％-2％吐温20溶液作为溶出介质，优选1％-1.2％吐温20溶液作为溶出介质。

取本品，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)进行测定。结果显示，坎地沙坦酯氨氯地平片以500ml为溶出体积时，同时间点取样，各时间点溶出均略低于以900ml为溶出体积时的溶出量，因此可选溶出体积为500ml-1200ml，优选溶出体积为800ml-900ml。

实验例8、氨氯地平相关物质测定

8.1 流动相选择

参考USP32苯磺酸氨氯地平标准，以水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.0)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相，取苯磺酸氨氯地平原料约12.5mg(以氨氯地平计)、坎地沙坦酯原料约20mg，分别置50ml量瓶中，加流动相20ml超声使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果氨氯地平的主峰的保留时间为8.354min，坎地沙坦酯此条件下80分钟未出峰，因此考虑用梯度洗脱以缩短分析时间。以水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.0)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A，甲醇为流动相B，采用以下梯度程序，取苯磺酸氨氯地平原料(以氨氯地平计)约12.5mg、坎地沙坦酯原料约20mg置同一50ml量瓶中，加流动相A20ml超声使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。

时间(min)	0	23	25	28	30	35
							A(％)	100	100	2	2	100	100
B(％)	0	0	98	98	0	0

结果氨氯地平主峰保留时间为8.348min，等度采集时间设定为氨氯地平主峰保留时间的3倍。由于坎地沙坦酯的分子结构中有两个酯键，在一定条件下可能发生水解，而降解产物的极性均较坎地沙坦酯强，可能会影响氨氯地平有关物质的检测，因此考虑做专属破坏试验以验证坎地沙坦酯的降解产物是否会影响氨氯地平的测定。称取坎地沙坦酯原料约40mg置50ml量瓶中，加流动相A20ml超声使溶解，加入1mol/L盐酸溶液5ml放置30分钟，调pH至中性，加流动相至刻度，摇匀，滤过，称取苯磺酸氨氯地平原料约25mg(以氨氯地平计)置50ml量瓶中，加流动相A超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取上述两溶液各5ml置同一量瓶中，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果坎地沙坦酯的主要降解峰的保留时间为8.189min，其与氨氯地平主峰之间的分离度为1.114，不符合规定。

改以水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A，甲醇为流动相B，采用上表进行梯度洗脱。称取苯磺酸氨氯地平原料约12.5mg(以氨氯地平计)置50ml量瓶中，加20ml流动相A超声使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图；称取坎地沙坦酯原料约20mg置50ml量瓶中，加20ml流动相A超声使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图；称取坎地沙坦酯原料约40mg置50ml量瓶中，加20ml流动相A超声使溶解，加入1mol/L盐酸溶液5ml放置30分钟，调pH至中性，加流动相至刻度，摇匀，滤过，称取苯磺酸氨氯地平原料约25mg(以氨氯地平计)置50ml量瓶中，加流动相A超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀、滤过，精密量取上述两溶液各5ml置同一量瓶中，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图；取上述坎地沙坦酯破坏的溶液5ml置10ml量瓶中加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。

称取苯磺酸适量，加流动相A制成每毫升溶液中含苯磺酸1.0mg的溶液，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图；取流动相适量，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图；取处方相当量的辅料(约合氨氯地平12.5mg)置50ml量瓶中，加流动相A20ml超声使溶解，用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。

从结果可以看出，苯磺酸的保留时间为1.531min，氨氯地平的保留时间为7.184min，与氨氯地平相对保留时间约为0.7和2.8处的色谱峰为坎地沙坦酯的降解峰，与氨氯地平主峰的分离度分别为6.874和21.447，符合规定。辅料及空白溶剂在氨氯地平主峰和其杂质峰及坎地沙坦酯降解峰处没有吸收，不影响测定，梯度程序不影响氨氯地平有关物质测定，因此选用水(含0.7％三乙胺，磷酸调pH＝3.5)-甲醇-乙腈(50∶35∶15)为流动相A，甲醇为流动相B，采用梯度洗脱为色谱条件。

8.2 系统适用性试验Ⅰ(杂质A定位试验)

精密称取苯磺酸氨氯地平对照品约25mg(以氨氯地平计)，置25ml量瓶中，加流动相A超声使溶解并稀释至刻度，精密量取2.5ml置10ml量瓶中加30％过氧化氢溶液5ml，在70℃水浴上加热40分钟，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液为系统适用性溶液Ⅰ。精密量取20μl注入色谱仪，记录色谱图。出峰顺序依次为杂质A，氨氯地平，其降解产物即为杂质A(3-乙基-5-甲基-2-(2-氨乙氧甲基)-4-(2-氯苯基)-6-甲基-3，5-吡啶二羧酸酯)。杂质A的保留时间为3.533min，与氨氯地平的相对保留时间约为0.5，分离度为13.420，符合规定，并参照USP32苯磺酸氨氯地平标准其校正因子为2.0。

8.3 系统适用性试验Ⅱ(坎地沙坦酯降解杂质定位试验)

取坎地沙坦酯对照品约10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液5ml，放置0.5小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液Ⅱ，精密量取20μl注入色谱仪，记录色谱图。与氨氯地平相对保留时间约为0.7和2.8的峰为坎地沙坦酯的主要降解峰(6分钟左右的峰由于降解较小，故在氨氯地平有关物质测定中，不予以扣除，记为氨氯地平杂质)。

另外进行了酸性破坏试验、碱性破坏试验、氧化试验、高温分解试验、太阳光照射分解试验等专属性试验，证明氨氯地平的主要降解途径为碱破坏和氧化破坏，坎地沙坦酯降解杂质与氨氯地平主峰的相对保留时间分别约为0.7和2.8，在该位置没有氨氯地平的降解杂质峰，为更好地控制氨氯地平的杂质，通过系统适用性试验，对氨氯地平有关物质测定中与氨氯地平相对保留时间约为0.7和2.8的坎地沙坦酯降解杂质予以扣除。

实验例9、坎地沙坦酯相关物质测定

选择乙腈-水-醋酸(57∶43∶1)为流动相A，乙腈-水-醋酸(90∶10∶1)为流动相B，采用以下梯度程序进行洗脱：

时间(min)	0	30	31	35
					A(％)	100	0	100	100
B(％)	0	100	0	0

调整流速使坎地沙坦酯的保留时间为12分钟。

分别取坎地沙坦酯约20mg、苯磺酸氨氯地平约12.5mg(以氨氯地平计)及处方量辅料，分别置50ml量瓶中，加溶剂[乙腈-水(3∶2)，以下简称溶剂]适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图；另取坎地沙坦酯约20mg、苯磺酸氨氯地平约12.5mg(以氨氯地平计)，置同一50ml量瓶中，加溶剂适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图；另取溶剂适量，滤过，作为空白溶剂，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

由图谱可以看出，坎地沙坦酯的保留时间为11.654min，坎地沙坦酯有关物质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ峰的保留时间与坎地沙坦酯峰的保留时间的比约为0.4、0.5、0.8、1.1、1.5、2.0。其中杂质Ⅲ和杂质Ⅳ与坎地沙坦酯主峰的分离度分别为7.728和8.535，符合规定；氨氯地平的保留时间为1.347min，氨氯地平主峰后无其他杂质峰，氨氯地平主峰与相邻杂质峰之间的分离度为13.547，与坎地沙坦酯主峰及其它各个杂质峰能够很好的分离，不影响坎地沙坦酯的有关物质的测定；辅料和溶剂在坎地沙坦酯主峰及其各杂质峰处均无吸收，不影响测定。因此，选用此色谱条件为坎地沙坦酯有关物质测定的色谱条件。

又对检品进行了酸性破坏试验、碱性破坏试验、氧化试验、高温分解试验、太阳光照射分解试验等专属性试验，证明坎地沙坦酯的主要降解途径为酸破坏、碱破坏、高温及光照破坏，主要降解杂质峰为杂质Ⅱ、Ⅴ，杂质Ⅵ在各破坏试验条件下，略有增长。经强酸、强碱、氧化、高温、光照破坏试验，氨氯地平及其降解杂质对坎地沙坦酯有关物质测定无干扰，辅料对测定亦无干扰，且各降解途径下坎地沙坦酯与其降解杂质峰可以很好的分离，表明此色谱条件专属性好。

另外，对上述含量测定、含量均匀度、溶出度、氨氯地平相关物质、坎地沙坦相关物质等检测方法分别进行了专属性试验、重复性试验、溶液稳定性试验、耐用性试验、回收试验、线性试验、精密度试验、溶出均一性试验、溶出曲线测定等方法学研究，结果证明方法的专属性强，重复性好，能对产品质量做出很好的控制。

实验例10、坎地沙坦酯氨氯地平组合物治疗高血压及其耐受性

试验目的：本研究旨在比较坎地沙坦酯、氨氯地平以及坎地沙坦西酯与氨氯地平联用时的抗高血压作用和耐受性。

受试者：341例男性和女性原发性高血压患者，年龄在21至81岁，坐位舒张压(DBP)在95至114mmHg。

试验方法：多中心、随机、双盲、安慰剂对照的平行组研究。

经过4周的安慰剂导入期之后，341例年龄在21至81岁的患者(231例男性，110例女性)被随机至下列治疗组：坎地沙坦西酯8mg，n＝85；氨氯地平5mg，n＝84；坎地沙坦酯8mg加氨氯地平5mg(实施例4产品)，n＝89；安慰剂，n＝83。

所有治疗组在基线特点上均较好地匹配，例如年龄、种族、身高、体重指数、病史、高血压持续时间、坐位和立位DBP、SBP和心率。大部分(71％)患者既往接受过抗高血压治疗，通常是钙拮抗剂或ACE抑制剂。

试验结果：与安慰剂相比，所有活性治疗方案均导致坐位和立位血压出现了显著的下降(p＜0.001)。与任一药物单用相比，坎地沙坦酯和氨氯地平联用导致了具有统计学意义且在临床上重要的更大程度的血压降低，与氨氯地平相比在校正的平均收缩压(SBP)/DBP降低分别为5.6/2.0mmHg(坐位)和6.7/3.4mmHg(立位)；与坎地沙坦酯相比的降低分别为5.8/0.8mmHg(坐位)和6.8/3.9mmHg(立位)(除了坐位DBP之外，联合治疗与两种单药治疗相比，P＜0.05)。

所有治疗方案均可以被较好地耐受。头痛是所有治疗组中最常见的不良事件。然而，在所有组中，头痛的发生率均低于10％。

试验结果证明，坎地沙坦酯和氨氯地平在原发性高血压患者中的有效性和耐受性。

在临床个例实验中，将制剂中坎地沙坦酯的含量增大至12mg、氨氯地平的含量增大至8mg，其降压效果更明显，但不良反应增加不明显。将制剂中坎地沙坦酯的含量减小至5mg、氨氯地平的含量为2.5mg，其降压效果稍有下降。

实验例11、坎地沙坦氨氯地平组合物的安全性评价

试验目的：测定坎地沙坦酯氨氯地平组合物的长期用药安全性

受试者：共有142例原发性高血压患者参加试验

试验方法：本试验原则上从低剂量(坎地沙坦酯4mg、氨氯地平2.5mg)开始进行联合用药，在考虑降压效果和耐受性的同时，作为最高给药量将剂量增加至坎地沙坦酯8mg和氨氯地平5mg。在治疗期12周以后，每4周对受试者的血压控制状态和耐受性进行综合判定，在此基础上酌情增减试验药品的给药量。另外，在12周以后也可联合使用其它降压药。

试验结果：142例受试者治疗期52周，最终给药量为8/5mg的有97例(68.3％)，8/2.5mg的有13例(9.2％)，4/5mg的有14例(9.9％)，4/2.5mg的有18例(12.7％)，在转入治疗期的病例中，有68.3％的受试者的给药量增加至作为最高给药量的8/5mg。另外，在12周以后为得到更强的降压效果而追加给予其它降压药的受试者有35例(24.6％)。坎地沙坦酯与氨氯地平联合用药时的降压效果即使在52周时仍持续存在，未见降压效果减弱。作为最终给药量，以8/5mg剂量进行给药的受试者(97例)和以8/2.5mg剂量进行给药的受试者(13例)均在52周内显示出持续性的降压效果。

坎地沙坦酯与氨氯地平联合用药时的降压效果可持续52周，未见因长期给药导致降压效果减弱，并且无耐药性。不良反应的发生率并未随着长期给药而显著升高，而且也未见在长期联合用药时增加或新出现的不良反应。

实验例12、Ⅲ期试验-双盲试验

试验目的：研究坎地沙坦酯氨氯地平组合物的有效性

试验人群：轻·中度原发性高血压患者。

试验结果：坎地沙坦酯氨氯地平组合物以8mg/5mg或8mg/2.5mg(实验例2产品)、8mg/0mg、0mg/5mg、0mg/0mg的给药量进行给药，1日给药1次，共给药12周，进行了双盲平行组间比较多机构协同试验。如下表所示：

给药组	波谷时坐位收缩压变化量(mmHg)	波谷时坐位舒张压变化量(mmHg)
			8mg/5mg(n＝101)	-26.77±10.52	-16.18±8.48
8mg/2.5mg(n＝36)	-20.15±9.56	-11.88±5.55
			8mg/0mg(n＝100)	-13.91±11.17	-7.79±8.19
0mg/5mg(n＝99)	-19.91±10.71	-11.23±7.06
			0mg/0mg(n＝36)	-6.22±12.00	-3.00±8.35

结果显示，在8/5mg组中，达到谷值时坐位舒张压和收缩压下降量显著大于8/0组和0/5组，表明8mg坎地沙坦酯与5mg氨氯地平的联合用药具有显著高于8mg坎地沙坦酯和5mg氨氯地平单独给药的降压效果。通过将坎地沙坦酯与氨氯地平联合用药，与单独给予两种药物时相比，降压效果得到增强，表明在8mg坎地沙坦酯与5mg氨氯地平的联合用药下具有较高的降压效果。

就8/2.5组而言，与对照观察期相比，在治疗期结束时的达到谷值时坐位舒张压和收缩压变化量的95％置信区间与8/0mg组重合，与8/0mg组相比有效病例的比例和血压正常化病例的比例也较高。另一方面，在与0/5mg组的比较中，虽然有效病例的比例较高，但与对照观察期相比，在治疗期结束时的达到谷值时坐位舒张压和收缩压的点估计值和血压正常化病例的比例水平相同。因此，上述结果表明，通过将坎地沙坦酯8mg与氨氯地平2.5mg联合用药，与单独给予8mg坎地沙坦酯时相比，降压效果更明显。实施例1、2制剂成品的治疗效果与实施例3、4制剂成品的治疗效果相近似。

此前进行的坎地沙坦酯和氨氯地平的药效学试验主要采用了国际上广泛使用的自发性高血压大鼠模型(SHR)、肾性高血压大鼠(RHR)、卒中易感性自发性高血压大鼠(SHRSP)等各种高血压模型。SHR模型动物的心血管疾病发病率高，但是肾和肾上腺未见器官损伤。通过实验发现，联合用药中，坎地沙坦酯和氨氯地平仅为单独用药的半剂量即可达到同样的降压效果，并且经解剖发现，受试动物的血管肥厚等症状同样得到明显改善。在麻醉豚鼠中，本品可使由冠状动脉栓塞引起的心肌缺血性心电图变化得到改善(抑制ST升高)。另外，在大鼠离体缺血再灌注心脏中，本品可使收缩力得到恢复，抑制组织内的钙离子量，同时本品亦可维持组织内的ATP量和磷酸肌酸量。以上实验证明，坎地沙坦酯氨氯地平组合物具有明显的降血压功效，同时还对心脏、肾脏疾病具有一定的治疗作用。

作为本发明的一种变通方式，在上述各实施例和实验例中，均可以将治疗有效量的坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐、治疗有效量的氨氯地平或者其药学上可接受的盐分别与辅料组成组合物，分别进行制备和质量检验，得到坎地沙坦和氨氯地平两种制剂，并在临床上同时或基本同时服用(例如，制成包含坎地沙坦片和氨氯地平片两种药物的药盒)，达到同样的有益效果。

Claims (56)

1.一种包含治疗有效量的坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐和治疗有效量的氨氯地平或者其药学上可接受的盐的组合物，其特征在于：还包括80-105份甘露醇或乳糖、3-5份交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙、10-35份微晶纤维素或玉米淀粉，所述坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐为4-12份，所述氨氯地平或者其药学上可接受的盐为2-8份。 

2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于：所述坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐为7-8份，所述氨氯地平或者其药学上可接受的盐为2.5-5份。 

3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于：所述甘露醇或乳糖为95-100份，所述交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙为3-4份，所述微晶纤维素或玉米淀粉为18-20份。 

4.根据权利要求1所述组合物，其特征在于：包含6-10份坎地沙坦酯或相当量的坎地沙坦，和2-6份氨氯地平或相当量的苯磺酸氨氯地平；还包含90-105份甘露醇或乳糖，3-5份交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙，15-25份微晶纤维素或玉米淀粉。 

5.根据权利要求4所述组合物，其特征在于：所述坎地沙坦酯或相当量的坎地沙坦为8份、所述氨氯地平或相当量的苯磺酸氨氯地平为2.5-5份，所述甘露醇或乳糖为95-100份，所述交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙为3-4份，所述微晶纤维素或玉米淀粉为18-20份。 

6.根据权利要求1～5之一所述组合物，其特征在于：还包含润湿剂或黏合剂适量。 

7.根据权利要求6所述组合物，其特征在于：所述润湿剂或黏合剂为2％-6％的羟丙甲纤维素的水或醇溶液。 

8.根据权利要求6所述组合物，其特征在于：所述润湿剂或黏合剂为4％-5％的羟丙甲纤维素水溶液。 

9.根据权利要求6所述组合物，其特征在于：还包含0.2-5份的硬脂酸镁或/和聚乙二醇6000。 

10.根据权利要求9所述组合物，其特征在于：所述硬脂酸镁为0.25-0.5份，所述聚乙二醇6000为1-4份。 

11.根据权利要求9所述组合物，其特征在于：所述硬脂酸镁为0.3-0.4份，所述聚乙二醇6000为2-3份。 

12.根据权利要求5所述组合物，其特征在于：还包含4％-5％的羟丙甲纤维素水溶液适量，硬脂酸镁0.3-0.4份。 

13.如权利要求1～12之任一所述组合物的制剂方法，其特征在于：所述坎地沙坦或坎地沙坦酯或药学上可接受的坎地沙坦盐和氨氯地平或药学上可接受的氨氯地平盐，加上甘露醇或乳糖、微晶纤维素或玉米淀粉、交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钙混合均匀。 

14.根据权利要求13所述制剂方法，其特征在于：加入润湿剂或黏合剂后进行制粒。 

15.根据权利要求14所述制剂方法，其特征在于：所述制粒为以15-25目的筛网进行湿法制粒和整粒，55-65℃干燥。 

16.根据权利要求13～15之一所述制剂方法，其特征在于：加入硬脂酸镁或聚乙二醇6000，分装、压片或装胶囊。 

17.权利要求1～12之任一所述的包含治疗有效量的坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐和治疗有效量的氨氯地平或者其药学上可接受的盐的组合物的高效液相色谱检验方法，其特征在于：用同样含有甲醇的流动相A和流动相B或同样含有乙腈的流动相A和流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱时所述流动相A和B所占的比例依次为A高B低，AB相近或B高A低，A高B低。 

18.根据权利要求17所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按氨氯地平峰或坎地沙坦峰计算不低于1000。 

19.根据权利要求17所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按氨氯地平峰或坎地沙坦峰计算不低于2000。 

20.根据权利要求17所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：包括按外标法以峰面积计算含量。 

21.根据权利要求17所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以40-60∶30-40∶10-20的水-甲醇-乙腈为流动相A，以甲醇或含0.2％-0.5％三乙胺的甲醇溶液为流动相B。 

22.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述流动相A为45-55∶33-38∶12-18的水-甲醇-乙腈；所述流动相B为甲醇或含0.3％-0.4％三乙胺的甲醇溶液。 

23.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述流动相A为50∶35∶15的水-甲醇-乙腈，所述流动相B为甲醇或含0.35％三乙胺的甲醇溶液。 

24.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述流动相A中的水含0.3％-1.0％的三乙胺，并用磷酸调pH至3.0-4.0；所述三乙胺甲醇溶液用磷酸调节pH值至4.0-5.0。 

25.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述流动相A中的水含0.5％-0.8％的三乙胺，并用磷酸调pH至3.3-3.7；所述三乙胺甲醇溶液用磷酸调节pH值至4.3-4.8。 

26.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述检测波长为200-260nm。 

27.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述检测波长为215±5nm或237±5nm。 

28.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于，按下表进行梯度洗脱： 

29.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于，按下表进行梯度洗脱： 

30.根据权利要求21所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

31.根据权利要求17～30之一所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：供试品溶液和对照品溶液的制备为：供试品或对照品加乙腈适量使溶解，用流动相A稀释定容。 

32.根据权利要求31所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶35∶15的含0.7％三乙胺并用磷酸调pH＝3.5的水-甲醇-乙腈为流动相A，以用磷酸调节pH值至4.5的0.35％三乙胺甲醇溶液为流动相B；检测波长为237nm，理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000，按下表进行梯度洗脱； 

精密称取相当于坎地沙坦酯10mg左右的样品细粉适量，置50ml量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解并用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；分别精密称取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量加乙腈适量使溶解并用流动相A稀释制成对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。 

33.根据权利要求17～30之一所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以500-1200ml的0.5％-2％的聚山梨酯20作为供试品的溶出介质。 

34.根据权利要求33所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：对照品加甲醇溶解、用所述溶出介质稀释，制成对照品溶液。 

35.根据权利要求17～30之一所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：供试品溶液的制备为：供试品加所述流动相A超声使崩解后加乙腈超声稀释，再加所述流动相A稀释定容；对照品溶液的制备为：对照品加乙腈溶解并用所述流动相A稀释定容。 

36.根据权利要求17～27之一所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

37.根据权利要求36所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

38.根据权利要求36所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

39.根据权利要求36所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：供试溶液和对照溶液的制备以流动相A为溶剂。 

40.根据权利要求36所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：系统适用性溶液I的制备为：氨氯地平或者其药学上可接受盐的对照品加流动相A溶解，加双氧水并使系统适用性溶液I的双氧水最终浓度为9％-22％，加流动相A定容，加热；系统适用性溶液II的制备为：称取坎地沙坦或者其药学上可接受的酯或盐的对照品，加流动相A超声，加入盐酸溶液酸化后放置，调节pH至中性，加流动相A定容。 

41.根据权利要求40所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：取系统适用性溶液I注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间6-8分钟，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间为0.4-0.6，其校正因子为2.0；和取系统适用性溶液II注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间为0.6-0.8及2.7-3.0的峰为坎地沙坦酯的降解峰；取对照溶液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高为满量程的8％-12％，分别取上述供试液和对照液，注入液相色谱仪，计算氨氯地平有关物质的量。 

42.根据权利要求41所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述计算氨氯地平有关物质的量包括：在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，杂质A按乘以校正因子2.0后的峰面积计算，扣除苯磺酸及坎地沙坦酯降解峰后计算其他杂质。 

43.根据权利要求36所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：取样品细粉适量，用流动相A溶解并稀释制成每1ml中含氨氯地平0.25mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释刻度，摇匀，作为对照溶液；称取以氨氯地平计的苯磺酸氨氯地平对照品25mg左右，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.5ml置10ml量瓶中，加30％双氧水5ml，加流动相A稀释至刻度，摇匀，在70℃水浴上加热40分钟，滤过，作为系统适用性溶液I；和精密称取坎地沙坦酯对照品10mg左右，置25ml量瓶中，加流动相A适量，超声，加入1mol/L的盐酸溶液2ml，放置0.5小时，调节pH至中性，加流动相A至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性溶液II；照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶35∶15的含0.7％三乙胺并用磷酸调pH＝3.5的水-甲醇-乙腈为流动相A；甲醇为流动相B；按下表进行梯度洗脱； 

检测波长为237nm；取系统适用性溶液I20μl注入色谱仪，调节流速使氨氯地平出峰时间为7分钟左右，出峰顺序依次为杂质A和氨氯地平，杂质A与氨氯地平的相对保留时间为0.5左右，是氨氯地平的主要降解产物，其校正因子为2.0；理论板数按氨氯地平峰计算应不低于2000；和取系统适用性溶液II20μl注入液相色谱仪，与氨氯地平相对保留时间为0.7及2.8左右的峰为坎地沙坦酯的降解峰；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氨氯地平主成分色谱峰的峰高为满量程的10％左右，分别取上述供试液和对照液20μl，注入液相色谱仪；在氨氯地平峰保留时间的3倍范围内，杂质A按校正后的峰面积乘以校正因子2.0计算不大于氨氯地平对照溶液主峰面积的一半，扣除苯磺酸及坎地沙坦酯降解峰后，其他杂质峰面积之和不大于氨氯地平对照溶液主峰面积。 

44.根据权利要求17～20之一所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以50-70∶35-50∶0.5-1.5的乙腈-水-醋酸为流动相A，以80-100∶5-15∶0.5-1.5的乙腈-水-醋酸为流动相B。 

45.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以55-60∶40-45∶0.8-1.2的乙腈-水-醋酸为流动相A，以85-95∶8-12∶0.8-1.2的乙腈-水-醋酸为流动相B。 

46.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述流动相A为57∶43 ∶1的乙腈-水-醋酸，所述流动相B为90∶10∶1的乙腈-水-醋酸。 

47.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：检测波长为200-320nm。 

48.根据权利要求47所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：所述检测波长为219±5nm或254±5nm。 

49.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

50.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

51.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：按下表进行梯度洗脱： 

52.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：还包括调节流速使坎地沙坦峰的保留时间为10-14分钟，调节检测器灵敏度使坎地沙坦峰的峰高为满量程的8％-12％。 

53.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：包括以2-4∶1-3的乙腈-水为溶剂制备供试溶液和对照溶液。 

54.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：以3∶2的乙腈-水为溶剂制备供试溶液和对照溶液。 

55.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦的杂质峰，杂质I、II、III、IV、V、VI峰的保留时间和坎地沙坦的保留时间比分别在0.4、0.5、0.8、1.1、1.5、2.0左右；按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量。 

56.根据权利要求44所述高效液相色谱检验方法，其特征在于：取样品精密称定，研细，精密称取相当于坎地沙坦酯20mg左右的细粉适量，置50ml量瓶中加3∶2的乙腈-水超声处理使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试溶液；精密称取坎地沙坦酯对照品 20mg左右置50ml量瓶中，加3∶2的乙腈-水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取1ml置100ml量瓶中，加3∶2的乙腈-水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以57∶43∶1的乙腈-水-醋酸为流动相A，90∶10∶1的乙腈-水-醋酸为流动相B；按下表进行梯度洗脱； 

检测波长为254nm；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节流速使坎地沙坦酯峰的保留时间为12分钟左右，调节检测器灵敏度，使坎地沙坦酯峰的峰高为满量程的10％左右，理论板数按坎地沙坦酯计算应不低于2000；再精密量取上述供试溶液和对照液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图；与氨氯地平主峰相对保留时间大于1.0的杂质计为坎地沙坦酯的杂质峰，杂质I、II、III、IV、V、VI峰的保留时间和坎地沙坦酯的保留时间比分别为0.4、0.5、0.8、1.1、1.5、2.0左右，按外标法以峰面积分别计算各有关物质的含量；杂质II的量不超过1.5％，杂质III、IV、V的量不超过0.5％，杂质VI的量不超过1.0％，其他各杂质的的量均不超过0.25％，总杂质的量不超过4.0％。