CN104569392A - 一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104569392A
CN104569392A CN201310516668.7A CN201310516668A CN104569392A CN 104569392 A CN104569392 A CN 104569392A CN 201310516668 A CN201310516668 A CN 201310516668A CN 104569392 A CN104569392 A CN 104569392A
Authority
CN
China
Prior art keywords
quality control
elisa
add
kit
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201310516668.7A
Other languages
English (en)
Inventor
黄文喜
章平
谢文锋
梁李新
叶晶龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Kangrun Biotech Co Ltd
Original Assignee
Guangzhou Kangrun Biotech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Kangrun Biotech Co Ltd filed Critical Guangzhou Kangrun Biotech Co Ltd
Priority to CN201310516668.7A priority Critical patent/CN104569392A/zh
Publication of CN104569392A publication Critical patent/CN104569392A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法，属于免疫分析医学诊断技术领域。该试剂盒依捕获法ELISA原理研制而成，包括ELISA预包被微孔板条、阳性质控、阴性质控、临界质控、酶结合物100×、样本稀释液、浓缩洗液20×、底物显色液和终止液。本试剂盒采用酶标抗原代替酶标抗体，酶标抗原不会与非特异性吸附于ELISA板的抗体结合。

Description

一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法，属于免疫分析医学诊断技术领域。 
背景技术
梅毒是梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP）引起的一种临床表现极为复杂，几乎可累及全身各器官的性病。1999年全国共报告梅毒病例80406例，2009年报告327433例，年发病率为24.66/10万，发病率年均增长14.3%；先天梅毒报告病例由1997年的109例，到2009年增加到10757例，发病率年均增长49.2%。广东省是梅毒的高峰省份，占全国报告总数的10%以上。2010年全省报告梅毒45399例，报告发病率47.10/10万，较2006年增长86.34%，流行呈现快速上升趋势，位居全省乙类法定传染病发病的第三位，流行形势日益严峻，已构成严重的公共卫生问题。为遏止梅毒疫情连年攀升的严峻形势，国家卫生部制定的《中国预防与控制梅毒规划(2010-2020年)》。 
梅毒的实验室检测在梅毒诊断、治疗与控制中起着重要的作用。血清学检测是诊断梅毒的重要实验室检测方法。目前梅毒的血清学检测方法主要有两种：一类是非TP抗原血清试验，如快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)等，此类试验为机体感染后产生的自身免疫学抗体，可随着疾病的痊愈而减低，因此，临床上可用作疗效的观察。但是，该试验受多种因素影响，常出现生物学假阴性和假阳性结果，且极早期或晚期梅毒常表现阴性反应而无诊断价值。另一类是TP抗原血清实验，如TP血球凝集试验(TPHA)、TP明胶凝集试验(TPPA)、TP荧光抗体吸收试验(FTA-ABS)、TP酶联免疫吸附试 验(TP-ELISA)等，这类试验为TP特异性抗体试验，临床上常作为梅毒的确认试验。此类试验主要检测TP-IgG抗体，感染机体产生IgG晚于IgM抗体，但产生后终生持续阳性反应，且可穿过胎盘或血脑屏障进入胎儿或脑脊液，因此，不能用作梅毒极早期诊断、疗效观察、先天梅毒和神经梅毒的诊断。利用生物信息学技术筛选TP抗原的特异性表位，再以表位多肽为基础建立ELISA方法用于病原微生物的血清学诊断是目前本领域的一个发展方向。 
梅毒研究的一个极其重要的研究方向是对暴露于TP表面的抗原的鉴别。然而，一方面由于TP膜蛋白的稀少性以及膜结构本身的脆弱性，另一方面由于TP不能在体外培养的特性，导致对于TP特征性的抗原的研究一直困难重重，并充满争议。随着分子生物学技术的发展，TP的全基因组DNA序列已解析，其全长为1138006bp，包含1041个开放读码框(ORF)，这为从基因文库中筛选TP诊断和疫苗候选基因奠定了基础。随着对梅毒研究的不断深入，基因组水平筛选识别在兔及人体中对TP感染免疫中有重要作用的抗原，很多有意义的外膜蛋白抗原被识别出来。TP的膜蛋白p15、p17、p47等是主要的抗原蛋白，具有较高的敏感性和特异性。考虑到大片段的重组抗原可能与其它成分存在同源性和交叉反应性，应用只含有一个抗原决定簇的小片段的多肽抗原，尽量避开与其它成分的同源性，理论上应可以提高检测的特异性。 
抗TP-IgM抗体是感染梅毒后最早产生的抗体，一般于感染后两周即可从血清中测出，因此是梅毒早期感染并活动的标志。晚期潜伏梅毒患者出现IgM抗体阳性，需要考虑是否再感染或体内未清除病灶再燃的情况。此外，新生儿血液中或成人脑脊液中检测到梅毒IgM抗体，是诊断先天性梅毒或神经性梅毒的重要指标。但我国学者对梅毒IgM抗体在临床检测研究开展的也较少，主要原因在于进口试剂盒价格昂贵，而国产梅毒IgM抗体检测试剂盒尚未面世。试剂 盒研发相对滞后的主要原因在于梅毒重组抗原制备技术落后，核心技术被国外大型试剂公司垄断。尽管国内已成功地将重组抗原制备技术用于TP-IgG检测试剂盒研制，但是适用于梅毒IgM检测的梅毒重组抗原难以突破。本项目从梅毒重组抗原制备这个核心环节入手，创建TP-IgM-ELISA检测试剂盒，填补国内空白，对于有效控制梅毒的传播有重要社会与经济意义。 
发明内容
本发明的目的是提供一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法。 
本发明提供的技术方案是：一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒，所述试剂盒依捕获法ELISA原理研制而成，包括： 
a)ELISA板条：每个试剂盒包含1块ELISA板，每块板含可拆卸的已包被羊抗人IgM抗体的ELISA微孔板条，规格为8孔×12条； 
b)阳性质控：为梅毒特异性IgM抗体阳性血清，1.2ml×1瓶； 
c)阴性质控：为梅毒特异性IgM抗体阴性血清，1.2ml×2瓶； 
d)临界质控：为梅毒特异性IgM抗体弱阳性血清，1.2ml×1瓶； 
e)酶结合物100×：含辣根过氧化物酶标记的纯化梅毒螺旋体膜蛋白p15-17-47基因重组融合蛋白； 
f)样本稀释液：含20%BSA、8.0g/L NaCl、0.2g/L KH2PO4、2.9g/L Na2HPO4·12H2O、0.2g/L KCl、0.03%的Proclin300，pH7.4的磷酸盐缓冲液，115ml×1瓶； 
g)浓缩洗液20×：为20倍浓缩的pH7.4的含1%体积百分比吐温-20的2M磷酸盐缓冲溶液100ml； 
h)底物液：称取200mg四甲基联苯胺TMB，用无水乙醇溶解后，以双蒸水定容至1000ml，配置成显色液A；称取9.33g柠檬酸，14.6g磷酸氢二钠，加入0.75%质量体积比的过氧化氢尿素6.4ml，调pH到5.0-5.4，双蒸水定容至1000ml，配置成显色液B；显色液A、B等体积混合，即为底物显色剂，15ml×1瓶； 
i)终止液：0.5M硫酸溶液15ml×1瓶。 
所述酶结合物的制备方法是：采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶偶联于p15-17-47融合蛋白上，具体步骤是：(1)称取5mg HRP溶解于1ml蒸馏水中。(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。(3)将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。(4)加20μl0.2M pH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化HRP的pH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg p15-17-47融合蛋白至1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。(5)加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。(6)将上述液装入透析袋中，用0.15M pH7.4PBS透析，4℃过夜。(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M pH7.4的PBS中。(9)将上述溶液装入透析袋中，用0.15M pH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物。 
所述试剂盒操作步骤是： 
a)加样：取出所需数量的微孔，做标记，用样本稀释液以1：51稀释样本，质控无须稀释；在相应微孔中加入100μl各质控及稀释后的样本，盖板，将微孔置于37±1℃孵育60±5min。 
b)洗板：弃孔内液体，以1：21稀释后的浓缩洗液洗板5次，拍尽残余水分。 
c)加酶：加入100μl用样本稀释液以1：101稀释后的酶结合物，盖板，将微孔置于37±1℃孵育60±5min。 
d)洗板：弃孔内液体，以1：21稀释后的浓缩洗液洗板5次，拍尽残余水分。 
e)显色：在所有微孔中加入100μl底物液，室温孵育30±2min。 
f)终止：在所有微孔中加入100μl终止液，轻拍混匀。 
g)测定：30min内用酶标仪（450nm）读取吸光度值。 
所述试剂盒相关性能如下： 
1）敏感性 
所述试剂盒与德国Trinity Biotech公司Syphilis-IgM Capture试剂盒（ELISA法，批号020）进行比较以分析其敏感性。共183份血清用于此次试验，比较结果如下： 
表1所述试剂盒相对于Syphilis-IgM Capture试剂盒的敏感性 
相对敏感性=84/90=93.33% 
相对特异性=91/93=97.85% 
总一致性=175/183=95.63% 
2）特异性 
所述试剂盒对129份健康献血者血清进行检测，结果均为阴性，特异性100%。 
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。以下实施例将有助于本领域普通技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。 
下述实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法。 
通过下述实施例对本发明的技术特征作详细描述。 
实施例梅毒特异性IgM抗体ELISA检测试剂盒的制备 
1）微孔板的制备 
用碳酸盐缓冲液（配方NaCO31.6g/L、NaHCO3·H2O3.2g/L，pH9.6）稀释羊抗人IgM抗体，用方阵法确定最佳包被浓度为5μg/ml，取可拆96孔酶标板，每孔加入100μl，4℃包被24小时，然后用PBST（配方KH2PO40.27g/L、Na2HPO41.42g/L、NaCl8g/L、KCl0.2g/L、吐温-200.05%，pH7.4）洗涤2次，用5%脱脂奶粉37℃封闭1h，用PBST充分洗涤，室温风干，制备得ELISA微孔板。 
2）酶结合物100×的制备 
(1)称取5mg HRP溶解于1ml蒸馏水中。(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。(3)将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。(4)加20μl0.2M pH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化HRP的pH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg p15-17-47融合蛋白至1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。(5)加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。(6)将上述液装入透析袋中，用0.15M pH7.4PBS透析，4℃过夜。(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二 次，最后沉淀物溶于少量0.15M pH7.4的PBS中。(9)将上述溶液装入透析袋中，用0.15M pH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物。 
3）浓缩洗液20×的制备 
称取356.1g Na2HPO4·H2O和312.1g NaH2PO4·2H2O，用双蒸水充分溶解，加入0.5ml吐温-20，混匀，用双蒸水定容至1000ml。 
4）样本稀释液的制备 
称取200g BSA、8.0g NaCl、0.2g KH2PO4、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KCl，用双蒸水依次溶解后混合，加入0.3ml Proclin300，用双蒸水定容至1000ml。 
5）底物液的制备 
称取200mg四甲基联苯胺TMB，用无水乙醇溶解后，以双蒸水定容至1000ml，配置成显色液A；称取9.33g柠檬酸，14.6g磷酸氢二钠，加入0.75%质量体积比的过氧化氢尿素6.4ml，调pH到5.0-5.4，双蒸水定容至1000ml，配置成显色液B；显色液A、B等体积混合，即为底物液。 
6）终止液的制备 
量取27.2ml浓硫酸（98%）稀释定容至1000ml。 
7）试剂盒的组装 
a)ELISA板条：每个试剂盒包含1块ELISA板，每块板含可拆卸的已包被羊抗人IgM抗体的ELISA微孔板条，规格为8孔×12条； 
b)阳性质控：为梅毒特异性IgM抗体阳性血清，1.2ml×1瓶； 
c)阴性质控：为梅毒特异性IgM抗体阴性血清，1.2ml×2瓶； 
d)临界质控：为梅毒特异性IgM抗体弱阳性血清，1.2ml×1瓶； 
e)酶结合物100×，0.12ml×1瓶； 
f)样本稀释液，115ml×1瓶； 
g)浓缩洗液20×，15ml×1瓶； 
h)终止液，15ml×1瓶。 
8）试剂盒操作步骤 
a)加样：取出所需数量的微孔，做标记，用样本稀释液以1：51稀释样本，质控无须稀释；在相应微孔中加入100μl各质控及稀释后的样本，盖板，将微孔置于37±1℃孵育60±5min。 
b)洗板：弃孔内液体，以1：21稀释后的浓缩洗液洗板5次，拍尽残余水分。 
c)加酶：加入100μl用样本稀释液以1：101稀释后的酶结合物，盖板，将微孔置于37±1℃孵育60±5min。 
d)洗板：弃孔内液体，以1：21稀释后的浓缩洗液洗板5次，拍尽残余水分。 
e)显色：在所有微孔中加入100μl底物液，室温孵育30±2min。 
f)终止：在所有微孔中加入100μl终止液，轻拍混匀。 
g)测定：30min内用酶标仪（450nm）读取吸光度值。 
9）判定标准 
有效性检测应满足以下条件：临界质控的吸光值应≥1.5倍的阴性质控吸光值，且≤0.5倍阳性质控吸光值。 
计算临界质控的平均吸光值。 
ISR=样本吸光值/临界质控平均吸光值。 
当ISR<0.90时，结果为阴性；当ISR>1.10时，结果为阳性；当0.91≤ISR≤1.09时，结果为可疑。 

Claims (6)

1.一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法，其特征在于，所述试剂盒依捕获法ELISA原理研制而成，包括：
a)ELISA板条：每个试剂盒包含1块ELISA板，每块板含可拆卸的已包被羊抗人IgM抗体的ELISA微孔板条，规格为8孔×12条；
b)阳性质控：为梅毒特异性IgM抗体阳性血清，1.2ml×1瓶；
c)阴性质控：为梅毒特异性IgM抗体阴性血清，1.2ml×2瓶；
d)临界质控：为梅毒特异性IgM抗体弱阳性血清，1.2ml×1瓶；
e)酶结合物100×：含辣根过氧化物酶标记的纯化梅毒螺旋体膜蛋白p15-17-47基因重组融合蛋白；
f)样本稀释液：含20%BSA、8.0g/L NaCl、0.2g/L KH2PO4、2.9g/LNa2HPO4·12H2O、0.2g/L KCl、0.03%的Proclin300，pH7.4的磷酸盐缓冲液，115ml×1瓶；
g)浓缩洗液20×：为20倍浓缩的pH7.4的含1%体积百分比吐温-20的2M磷酸盐缓冲溶液100ml；
h)底物液：称取200mg四甲基联苯胺TMB，用无水乙醇溶解后，以双蒸水定容至1000ml，配置成显色液A；称取9.33g柠檬酸，14.6g磷酸氢二钠，加入0.75%质量体积比的过氧化氢尿素6.4ml，调pH到5.0-5.4，双蒸水定容至1000ml，配置成显色液B；显色液A、B等体积混合，即为底物液，15ml×1瓶；
i)终止液：0.5M硫酸溶液15ml×1瓶。
2.如权利要求1所述检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述梅毒螺旋体膜蛋白p15-17-47基因重组融合蛋白为p15、p17和p47三个蛋白片断的有效表位片断。
3.如权利要求1所述梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶结合物的制备方法是：采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶偶联于p15-17-47融合蛋白上，具体步骤是：(1)称取5mg HRP溶解于1ml蒸馏水中。(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。(3)将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。(4)加20μl0.2M pH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化HRP的pH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg p15-17-47融合蛋白至1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。(5)加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。(6)将上述液装入透析袋中，用0.15M pH7.4PBS透析，4℃过夜。(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M pH7.4的PBS中。(9)将上述溶液装入透析袋中，用0.15M pH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物。
4.如权利要求1所述检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒操作步骤是：
a)加样：取出所需数量的微孔，做标记，用样本稀释液以1：51稀释样本，质控无须稀释；在相应微孔中加入100μl各质控及稀释后的样本，盖板，将微孔置于37±1℃孵育60±5min。
b)洗板：弃孔内液体，以1：21稀释后的浓缩洗液洗板5次，拍尽残余水分。
c)加酶：加入100μl用样本稀释液以1：101稀释后的酶结合物，盖板，将微孔置于37±1℃孵育60±5min。
d)洗板：弃孔内液体，以1：21稀释后的浓缩洗液洗板5次，拍尽残余水分。
e)显色：在所有微孔中加入100μl底物液，室温孵育30±2min。
f)终止：在所有微孔中加入100μl终止液，轻拍混匀。
g)测定：30min内用酶标仪（450nm）读取吸光度值。
5.如权利要求4所述的操作步骤，其特征在于，有效性检测应满足以下条件：临界质控的吸光值应≥1.5倍的阴性质控吸光值，且≤0.5倍阳性质控吸光值。
6.如权利要求4所述的操作步骤，其特征在于，结果判断步骤如下：
a)计算临界质控的平均吸光值。
b)ISR=样本吸光值/临界质控平均吸光值。
c)当ISR<0.90时，结果为阴性；当ISR>1.10时，结果为阳性；当0.91≤ISR≤1.09时，结果为可疑。
CN201310516668.7A 2013-10-28 2013-10-28 一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法 Pending CN104569392A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310516668.7A CN104569392A (zh) 2013-10-28 2013-10-28 一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310516668.7A CN104569392A (zh) 2013-10-28 2013-10-28 一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104569392A true CN104569392A (zh) 2015-04-29

Family

ID=53085946

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310516668.7A Pending CN104569392A (zh) 2013-10-28 2013-10-28 一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104569392A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108152511A (zh) * 2017-12-20 2018-06-12 广州瑞辉生物科技股份有限公司 柯萨奇A16病毒抗原多肽及其IgM抗体检测试剂盒
CN108169484A (zh) * 2017-12-20 2018-06-15 广州瑞辉生物科技股份有限公司 EV71病毒抗原多肽及其IgM抗体检测试剂盒
CN108414762A (zh) * 2018-01-12 2018-08-17 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 一种草鱼IgM单克隆抗体、其制备方法及其应用
CN111289745A (zh) * 2020-03-25 2020-06-16 中山生物工程有限公司 新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒及其检测方法
WO2021072599A1 (zh) * 2019-10-14 2021-04-22 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 用于检测tp抗体的试剂盒以及方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6097273A (ja) * 1983-11-01 1985-05-31 Fujirebio Inc 梅毒抗体の測定方法
CN102183646A (zh) * 2010-12-16 2011-09-14 孙爱华 一种检测梅毒血清抗体的rTpN15-17-47-ELISA的制备方法
CN202372508U (zh) * 2011-12-19 2012-08-08 天津中新科炬生物制药有限公司 一种梅毒螺旋体IgM抗体的检测试纸
CN103267846A (zh) * 2013-06-09 2013-08-28 湖南农业大学 一种检测2型猪圆环病毒IgM抗体的ELISA试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6097273A (ja) * 1983-11-01 1985-05-31 Fujirebio Inc 梅毒抗体の測定方法
CN102183646A (zh) * 2010-12-16 2011-09-14 孙爱华 一种检测梅毒血清抗体的rTpN15-17-47-ELISA的制备方法
CN202372508U (zh) * 2011-12-19 2012-08-08 天津中新科炬生物制药有限公司 一种梅毒螺旋体IgM抗体的检测试纸
CN103267846A (zh) * 2013-06-09 2013-08-28 湖南农业大学 一种检测2型猪圆环病毒IgM抗体的ELISA试剂盒

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
0 E IJSSELMUIDEN ET AL: "An 1gM capture enzyme linked immunosorbent assay to detect 1gM antibodies to treponemes in patients with syphilis", 《ENITOURIN MED.》 *
NEUZA SATOMI SATO: "《Syphilis - Recognition, Description and Diagnosis》", 21 November 2011, IN TECH *
PHILIPP P. BOSSHARD: "Usefulness of IgM-specific enzyme immunoassays for serodiagnosis of syphilis: Comparative evaluation of three different assays", 《JOURNAL OF INFECTION》 *
暴银凤 等: "梅毒螺旋体多表位重组抗原的研制及其应用", 《中华检验医学杂志》 *
欧阳照萍 等: "酶联免疫病毒抗体检测试剂的研制及应用", 《第九次全国生物制品学术会议论文集》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108152511A (zh) * 2017-12-20 2018-06-12 广州瑞辉生物科技股份有限公司 柯萨奇A16病毒抗原多肽及其IgM抗体检测试剂盒
CN108169484A (zh) * 2017-12-20 2018-06-15 广州瑞辉生物科技股份有限公司 EV71病毒抗原多肽及其IgM抗体检测试剂盒
CN108414762A (zh) * 2018-01-12 2018-08-17 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 一种草鱼IgM单克隆抗体、其制备方法及其应用
WO2021072599A1 (zh) * 2019-10-14 2021-04-22 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 用于检测tp抗体的试剂盒以及方法
CN111289745A (zh) * 2020-03-25 2020-06-16 中山生物工程有限公司 新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Infantino et al. Serological assays for SARS-CoV-2 infectious disease: benefits, limitations and perspectives
CN104569392A (zh) 一种检测梅毒特异性IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法
CN103620409B (zh) 用于减少非特异性结合的免疫检验方法和试剂
CN112964884B (zh) 一种诊断标志物及其在covid-19诊断及冠状病毒既往感染检测中的应用
CN102243232A (zh) 肠道病毒71型抗体(IgM)诊断试剂盒(酶联免疫法)
ES2786637T3 (es) Anticuerpo monoclonal específico para la proteína P del Virus Respiratorio Sincicial humano y uso del mismo para la detección y diagnóstico de infección por VRS
CN112946261A (zh) 一种基于三聚体s蛋白rbd-ace2结合竞争的新冠病毒中和抗体检测试剂盒
CN102236017A (zh) 用于检测非洲猪瘟病毒抗体的间接elisa试剂盒及其用途
EP4113121A1 (en) Antigen for 2019 novel coronavirus and detection use thereof
Byrnes et al. A SARS-CoV-2 serological assay to determine the presence of blocking antibodies that compete for human ACE2 binding
Wang Significance of IgA antibody testing for early detection of SARS‐CoV‐2
CN1651918A (zh) 重组抗原pp65包被酶标反应板的制法及ELISA检测试剂盒
KR20080012449A (ko) 뉴클레오캡시드 또는 스파이크 단백질을 이용한 사스진단방법
Melgoza‐González et al. Analysis of IgG, IgA and IgM antibodies against SARS‐CoV‐2 spike protein S1 in convalescent and vaccinated patients with the Pfizer‐BioNTech and CanSinoBio vaccines
ES2647764T3 (es) Diagnósticos de vacunación mejorados
ES2898068T3 (es) Anticuerpos monoclonales específicos para el antígeno pIII de Adenovirus humano (ADV), producidos y secretados por hibridomas celulares, útiles para la detección y el diagnóstico de la infección causada por ADV
Wood et al. Evaluation of a commercial monoclonal antibody-based enzyme immunoassay for detection of adenovirus types 40 and 41 in stool specimens
CN101936998B (zh) 犬用抗狂犬病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒
Liu et al. Antibody responses in COVID-19 patients
CN106896224A (zh) 一种猪瘟新型抗体elisa检测试剂盒
US20050100883A1 (en) Peptide-based diagnostic reagents for SARS
CN103364552A (zh) 猪细小病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法和其应用
CN103063841A (zh) 一种流行性出血热病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法
CN117229367A (zh) 一种非洲猪瘟病毒抗原表位多肽及elisa抗体检测试剂盒
CN109799342A (zh) 一种o型口蹄疫病毒抗体竞争elisa检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150429