CN104569088A - 电化学法血液检测试纸条及其制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种电化学法血液检测试纸条及其制造方法。该试纸条包括绝缘基板、导电层、绝缘层、亲水性盖板、反应层和滤血装置。本发明还提供了上述试纸条的制造方法。本发明的试纸条制作成本低廉，制造方法简单，且量化生产速度快，可以避免红细胞裂解、进样量不准确和细胞压积等对实验结果的影响，可提高测量结果的重现性，使测量结果更准确。

Description

电化学法血液检测试纸条及其制造方法

技术领域

本发明涉及一种电化学法血液检测试纸条及其制造方法，属于生物医学测试领域。

背景技术

心血管疾病也被大众俗称为三高症，它作为一类严重影响人类健康的疾病在近年来已愈来愈得到广泛的关注。心血管疾病是一系列由于循坏系统失常引起的疾病，最常见的包括：心脏病、高血压、高血脂和糖尿病等。在我国，60岁以上的老年人中约有40-45％同时患有这一类疾病中的多种症状。在发达国家，例如美国，据不完全统计，约有超过七千万人患有心血管疾病，而其他西方国家也面临着同样的问题。虽然目前的医疗水平相对过去已经更加先进，但是即便凭借现在相对完善的治疗手段，每年死于心血管疾病患者的数字依然高居不下。我国每年死于该疾病的人数超过约300万，而全世界每年死于该疾病的人数高达1500万。因此，提早的预防和早期治疗是防止此类疾病发生和因此死亡的最佳方法。

由于大众对心血管疾病的日趋了解，对它的提早预防更加重视，胆固醇、甘油三酯等血液指标的快速检测已越来越受到临床的高度重视。血液总胆固醇是指血液中脂蛋白中总胆固醇含量，包括胆固醇脂和游离态胆固醇，它在血清中的浓度可以作为脂肪代谢的指标。多项研究表明，胆固醇在血液中含量过高(超过220mg/dL)与诸多疾病的引发都相关，例如心脏病、糖尿病、动脉粥样硬化、肾病综合症、肝胆系统疾病等。此外，研究还表明，血液中胆固醇含量与死于心血管疾病的概率成正比。因此，血液总胆固醇的检测可以作为提早诊断、治疗判断或病程监测的依据。而提早发现胆固醇含量的异常可以大大降低心血管疾病的患病甚至由此导致死亡的几率。

目前常用于检测血液总胆固醇的方法主要分为化学法和酶法。化学法包括目前国际上通用的参考方法ALBK法，还有HPLC法。酶法最成熟也是常用的例如胆固醇氧化酶-过氧化物酶-4氨基安替比林和酚法。国内外的市场上也已有一些血清总胆固醇(TC)快速检测产品出现，这些产品主要分为光化学和电化学两种检测原理。采用光化学方法的最众所周知的产品有罗氏的Accutrend系列；采用电化学方法的有美国百美的Q.Step血糖、胆固醇两用检测系统，国内杭州艾康生物的总胆固醇分析仪，还有台湾武鼎生物、聿新生物、勤立生物等公司的胆固醇检测产品。这些床旁检测产品的出现给个人用户提供了极大的方便，使得人们对于血脂指标的监测和对心血管疾病的提早预防有了更快捷的方法。

发明内容

为了解决上述的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种电化学法检测试纸条。该试纸条可以避免红细胞等物质与反应层及反应试剂的直接接触，同时也可精准控制进样量，使测试结果免受红细胞的干扰并具有良好的精准度。

本发明的目的还在于提供一种电化学法检测试纸条的制造方法。

为达到上述目的，本发明提供一种电化学法检测试纸条。该试纸条包括绝缘基板、导电层、绝缘层、亲水性盖板、反应层和滤血装置；

所述导电层包括工作电极和参比电极，并位于所述绝缘基板的表面；

所述绝缘层位于所述绝缘基板与所述导电层的同一侧上方；

所述绝缘层开设反应槽，以使部分工作电极和参比电极暴露在反应槽内，且所述反应槽在靠近滤血膜一侧设有开口；

所述滤血装置包括滤血膜，该滤血膜固定在所述绝缘基板的上表面，并与所述绝缘层并列设置；

所述亲水性盖板位于所述绝缘层的上方，并与所述反应槽形成虹吸通道，

所述亲水性盖板靠近滤血膜一侧设有突出的朝向滤血膜的引流装置；所述引流装置部分被所述滤血膜覆盖；

所述反应层位于所述虹吸通道内并覆盖在所述虹吸通道内的工作电极和参比电极；

根据本发明所述的试纸条，上述虹吸装置的宽度可以根据现场需要进行调整。

根据本发明所述的试纸条，上述引流装置可根据现场使用的需要进行合理设计。

在本发明的优选实施例中，上述引流装置为引针，其被包埋在滤血膜下面，依靠其不同于绝缘基板的亲水性质，来引导经过滤血装置过滤的血浆，使其快速进入虹吸通道并充满反应槽。根据现场使用的需要可对上述引针的形状进行合理的设计。

根据本发明所述的试纸条，上述虹吸通道的优势在于可以精确地控制进入反应槽的样本量；此外，在制备反应层时，也可以用该通道来控制其扩散的形状和趋势。

根据本发明所述的试纸条，优选所述滤血膜的一侧与绝缘层一层相接触。

根据本发明所述的试纸条，滤血膜为单层或多层；可以采用滤血领域具有良好全血分离效果的膜材料，其包括由玻璃纤维、无纺布、滤纸或聚砜类材料制成的滤血膜，同时，还可以在单层滤血膜上加盖亲水性纱网，使样品均匀覆盖。

根据本发明所述的试纸条，滤血膜是通过超声冷焊接的方式固定到绝缘基板的上表面的；

优选所述超声冷焊接是采用点焊的方式进行的，其焊接力度为2-4bar，焊接时间为0.01-0.5s。

根据本发明所述的试纸条，上述超声冷焊接的焊接位点可根据现场应用需要进行设计，本发明给出了其中一种焊接位点e-1的设计图，其焊接位点如图5所示。超声冷焊接的焊接的参数，焊头的模具都必须根据具体的试纸条结构和滤血膜材料来进行优化，避免由于焊接不实而引起的滤血膜剥落以及焊接力量过度引起的滤膜破碎等情况出现。

本发明中经过对焊接参数的优化和焊头的优化设计，最终可以有效并快速地将滤血膜材料固定在绝缘基板上，其中较优的方法是采用点焊的方式进行，即焊接模具是根据试纸条的设计需要，在焊头上加工出一排形状规则排列整齐的凸起平面，在这些焊接面上可以雕刻斜纹，使焊接效果更佳牢固。经过对焊头模具的设计，可以将滤血膜的一小部分面积牢固地焊接在绝缘基板上，并同时避免整面焊接对电极的损害。

在制造上述试纸条时，可以根据滤血膜膜材料的不同以及厚度的不同，对焊接参数进行调整。

本发明所采用的超声冷焊接法可通过对焊接参数、焊接方式及焊接位点的特殊设计，牢固地将滤血膜固定在绝缘基板的特定位置，并且通过对焊接处做的细微设计，可以有效地固定血液在滤血膜上渗滤的有效面积，防止血液的四处扩散；该方法不同于其它热塑方法，属于冷焊接法，可以最大程度上减小膜材和基板材料的变形，并能防止在试纸条制备过程中生物活性物质的失活；另外，该过程操作简单，方便快捷，可以在几秒之内完成封装，成本低廉。

根据本发明所述的试纸条，滤血膜覆盖引流装置长度的1/2至2/3。

在本发明中，上述反应层可以通过丝网印刷或者滴酶的方式被固化在试纸条的电极上。其扩散的形状可由上述虹吸通道来有效地控制，该反应层最好将三个电极都有效地覆盖，这样可以依靠其亲水性来加快进样的速度。该反应层可以是单层也可以是多层结构，多层结构可以采用先固化一层亲水性高分子涂层，再固化生物活性物质层，这样可以尽量避免酶和电子介体与电极直接接触，从而对电极造成的负面影响；

优选上述亲水性高分子涂层包括由水溶性纤维素及其衍生物制成的涂层；还优选上述水溶性纤维素及其衍生物包括羧甲基纤维素及其钠盐、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、微晶纤维素中的一种或几种的组合。

该反应层包括生物活性物质、缓冲物质、电子介体、表面活性物质、高分子聚合物，优选所述反应层进一步包含分散剂、稳定剂及增稠剂中的至少一种；

根据本发明所述的试纸条，上述生物活性物质可以根据试纸条所检测的血液中的不同物质而进行选择，譬如：当使用本发明的试纸条检测血液中总胆固醇的含量时，生物活性物质包括胆固醇酯酶/胆固醇氧化酶体系或胆固醇酯酶/胆固醇脱氢酶体系；当使用本发明的试纸条检测血液中甘油三酯含量时，生物活性物质为甘油三酯体系，其包括脂肪酶、甘油激酶、L-α磷酸甘油氧化酶；

当使用本发明的试纸条检测血液中甘油三酯含量时，上述反应层还可以进一步包括ATP和氯化镁。

上述缓冲物质可以是本领域采用的常规缓冲溶液，优选为磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸缓冲溶液或碳酸缓冲溶液；还优选上述缓冲物质的pH值为5.8-7.5；

根据本发明所述的试纸条，所述电子介体包括普鲁士蓝、二茂铁、导电石墨、碳纳米管、硫堇、铁氰化钾及吩嗪硫酸甲酯中的一种或几种的组合；

根据本发明所述的试纸条，所述表面活性物质包括Tween 20、TritonX-100、聚氧化乙烯、甘油、脂肪酸中的一种或几种的组合；

根据本发明所述的试纸条，所述高分子聚合物包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、明胶中的一种或几种的组合。

根据本发明所述的试纸条，上述分散剂包括水溶性低分子蜡类物质，优选为聚乙二醇2000或乙烯-丙烯酸共聚物；

上述稳定剂包括脂质或糖类物质，优选脂质包括磷脂类两性脂质，更优选为卵磷脂、磷脂酰乙醇胺，磷脂酰丝氨酸；优选糖类物质包括海藻糖或蔗糖；

上述增稠剂包括水溶性纤维素及其衍生物或水溶性胶原蛋白；优选水溶性纤维素及其衍生物包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素。

根据本发明所述的试纸条，以上述反应层的总重量计，反应层包括0.05-2wt％生物活性物质、80-95wt％缓冲物质、3-15wt％电子介体、0.01-1.5wt％表面活性物质、0.2-8wt％高分子聚合物；

优选上述生物活性物质为1-1.5wt％，电子介体为8％-15wt％；表面活性物质为0.05-0.3wt％，高分子聚合物为4-6wt％。

根据本发明所述的试纸条，导电层还包括判断电极；暴露在反应槽内的工作电极、参比电极和判断电极相对位置为工作电极和参比电极靠近反应槽开口一侧，优选所述判断电极位于所述虹吸通道的顶端并被反应层部分覆盖；

上述判断电极位于所述虹吸通道的顶端，该“顶端”是指位于虹吸通道内且远离滤血装置的一端；即与虹吸通道的开口一端相对的另一端。

所述工作电极、参比电极及判断电极由碳和/或金属制成；

优选所述金属包括金、银或铂。

根据本发明所述的试纸条，上述导电层包括工作电极、参比电极及判断电极，其工作原理是：在测试启动(施加测量电压)前，在工作电极上施加一个较小的电压，当血浆样本进入反应槽体并铺满整个虹吸通道，同时覆盖了工作电极、参比电极和判断电极时，工作电极与判断电极之间可以形成通路，相应的电化学传感器可以测量到一个较小的电流值，此时开始启动测量模式；但是，当血浆样本进入虹吸通道但并未充满反应槽时，血浆样本未接触到判断电极，使得工作电极与判断电极之间无法形成通路或回路电流过小，未达到开始检测所设定的阈值，从而判断未完成进样，此时无法启动测量模式。

本发明采用的判断电极的优势在于：可以有效避免在加样量不足时引起测试结果偏高的现象；由图1所示，判断电极位于整个虹吸通道的最上端，因此只有进样量足以布满整个虹吸通道时才能进行测量，这样可以准确的控制进样量，使测试结果更准确；此外，本发明中的这种电极体系，可以准确地判断经过滤的血浆样本是否完全进入了虹吸通道，并能够在进样成功后即时启动测量模式，相当于将不同样本的进样时间进行了校正，这样可以有效并准确地控制测试时间，使得测量结果更加精确，提高了测量的重现性。

根据本发明所述的试纸条，绝缘层包括双面胶或绝缘漆；

优选所述双面胶由聚烯或聚酯材料制成，其厚度为0.05-0.5mm；

更优选所述双面胶为美国AR或3M的双面胶。

根据本发明所述的试纸条，绝缘漆包括热固性或紫外光固化类绝缘漆。

根据本发明所述的试纸条，亲水性盖板由一面附有亲水层的聚酯类材料制成；优选上述亲水层位于朝向上述反应槽的一侧；还优选上述亲水层由亲水性的压敏胶涂层构成。

根据本发明所述的试纸条，亲水性盖板上方开有通气孔；

优选该通气孔位于所述虹吸通道顶端所对应的亲水性盖板上，并使得虹吸通道与外界相通；

优选该通气孔的直径为0.2-0.8mm。该通气孔使经过滤的血浆样本可以通过虹吸原理快速地进入反应槽。

根据本发明所述的试纸条，绝缘基板选自聚碳酸酯板、聚氯乙烯板、聚乙烯板、聚丙烯板、聚对苯二甲酸乙二醇酯板、聚酰胺树脂板、聚苯乙烯板、玻璃纤维板及陶瓷板中的任一种。

根据本发明所述的试纸条，绝缘基板设置有透气孔，该透气孔位于亲水性盖板正下方，被所述滤血膜覆盖；上述“正下方”是指反应槽开口所朝向的方向。

根据本发明所述的试纸条，根据现场实际需要，在绝缘基板可开设有一个或多个透气孔，该透气孔被覆盖在滤血膜下方，有利于滤血装置上下气压的平衡，以实现快速渗滤的效果。透气孔的加工可以在最开始对绝缘基板的加工时进行，在本发明的优选实施例中，绝缘基板开设有两个透气孔。

根据本发明所述的试纸条，该试纸条可以包括两块绝缘基板，在其中一块绝缘基板上开设透气孔，开设透气孔的绝缘基板位于另一块绝缘基板的正下方；该试纸条也可以仅使用一块绝缘基板，根据现场实际需要可将其设计为所需要的形状，并在其合适的位置开设透气孔。在本发明的实施例中是采用了两块绝缘基板。

根据本发明所述的试纸条，滤血装置可采用单层或多层的滤血膜结构，该滤血膜用于分离全血样本中的血细胞和血浆，其位置位于虹吸通道的下方，覆盖一部分亲水性盖板下端的引流装置，并覆盖住绝缘基板上的透气孔。被滤血装置过滤的血浆由亲水性引流装置引流并虹吸进入反应槽内，在反应槽内与生物活性物质发生生物化学反应并产生电效应。本发明的滤血装置位于虹吸通道的下方，其优于现有技术中采用的传统垂直过滤进样的滤血装置，本发明的滤血装置可以避免滤血膜上的样品，尤其是红细胞，与反应槽和生物活性物质的直接接触从而引起的溶血等现象对测试信号的干扰；此外，由于反应槽处于半封闭状态，与滤血膜不接触，这样可以避免经过滤后的血清被滤血膜反吸，尤其是在较干燥的环境下，这样可以保证进样量的定量准确性，使测试结果更精准。同时，本发明采用的滤血装置可以排除细胞压积对测试结果干扰。

本发明还提供了上述的电化学法血液检测试纸条的制造方法，其包括以下步骤：

将所述电极固定在所述绝缘基板上，并烘干，优选在80-90℃下烘干；

将绝缘层铺设到所述绝缘基板与所述电极同一侧的上方，并在绝缘层上形成反应槽，然后进行固化，优选在紫外光条件下固化，更优选固化5-15s；

在绝缘层的反应槽内，将反应层固化到试纸条上，并干燥，优选在40-60℃干燥15-30min；更优选在50℃干燥30min；

再将设有引流装置的亲水性盖板铺设到绝缘层上方；

将滤血膜固定在绝缘基板的上表面，该滤血膜覆盖透气孔并部分覆盖引流装置；

其中还优选在绝缘基板的相应位置开设透气孔。

根据本发明的方法，可以根据构成上述工作电极、参比电极、判断电极材料的不同，选择合适的方式将其固定到绝缘基板上；例如：若上述工作电极、参比电极、判断电极由金组成，则可以采用溅射的方式将其固定到绝缘基板上；而在本申请的优选实施例中，上述工作电极、参比电极、判断电极均是由碳构成；因此可以采用丝网印刷的方式将工作电极、参比电极、判断电极同时或分步印刷到绝缘基板。

根据本发明的方法，所述反应层可以通过丝网印刷或者滴酶的方式被固化在试纸条反应槽内的电极上。

本发明的电化学法血液检测试纸条采用的是电化学原理，当被测试样本到达反应层时并与反应层内的生物活性物质发生生物化学反应并产生电信号，该电信号可被电化学传感器采集，并将信号的强度与血液样本中的胆固醇浓度建立线性关系，来定量分析血液中总胆固醇的含量。

本发明的电化学法血液检测试纸条制作成本低廉，制造方法简单，且量化生产速度快，但却可以避免红细胞裂解、进样量不准确和细胞压积等对实验结果的影响。

本发明的电化学法血液检测试纸条采用工作电极、参比电极和判断电极的三电极体系，可以有效避免在加样量不足时引起测试结果偏高，可以准确地控制进样量，使测试结果更准确；可以有效并准确地控制测试时间，使得测量结果更加精确，提高测量结果的重现性。

不同于现有技术采用的垂直滤血进样结构，本发明的电化学法血液检测试纸条采用的滤血膜位于进样口下端，避免了滤血膜上的红细胞等物质与反应层及活性物质的直接接触从而导致的信号干扰，同时也可以精准地控制进样量，使测试结果免受红细胞的干扰并有良好的实验精准度。

附图说明

图1为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的导电层结构示意图；

图2为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的侧面示意图；

图3为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的绝缘漆层与电极覆盖的示意图；

图4为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的亲水性盖板覆盖在电极表面的绝缘漆层上的示意图；

图5为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的滤血装置的示意图；

图6为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的绝缘基板上透气孔设计的示意图；

图7为实施例1的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的反应层覆盖在虹吸通道内的示意图。

主要附图标号说明：

a 绝缘基板 b-1 工作电极 b-2 判断电极 b-3 参比电极 c 绝缘漆层 d亲水性盖板 e 单层滤血膜 e-1 焊接位点 f 透气孔 g 反应层 h 带透气孔的绝缘基板 i 通气孔 j 引针。

具体实施方式

为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。

实施例1

本实施例提供了一种电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条，该试纸条包括绝缘基板、导电层、绝缘漆层、亲水性盖板、反应层和滤血装置；

上述绝缘基板包括一块绝缘基板a、一块带透气孔f的绝缘基板h，带透气孔f的绝缘基板h位于绝缘基板a的正下方；该试纸条的绝缘基板h上的透气孔f设计的示意图如图6所示；

上述导电层，位于绝缘基板a的表面上，其包括工作电极b-1、参比电极b-3及判断电极b-2，导电层结构示意图如图1所示，该试纸条的侧面示意图如图2所示；

上述绝缘漆层c位于绝缘基板a与导电层的同一侧上方，该绝缘漆层c开设有反应槽，以使部分工作电极b-1和参比电极b-3暴露在反应槽内，且该反应槽在靠近单层滤血膜e一侧设有开口；该试纸条的绝缘漆层与电极覆盖的示意图如图3所示；

上述亲水性盖板d位于绝缘漆层c的上方，并与反应槽形成虹吸通道，该亲水性盖板d靠近单层滤血膜e一侧设有突出的朝向单层滤血膜的引针j；在虹吸通道顶端所对应的亲水性盖板d上开有通气孔i；亲水性盖板d覆盖在电极表面的绝缘漆层c上的示意图如图4所示；

上述反应层g位于虹吸通道内并覆盖在所述虹吸通道内的工作电极b-1和参比电极b-3；上述判断电极b-2位于虹吸通道的顶端并被反应层g部分覆盖；该试纸条的反应层g覆盖在虹吸通道内的示意图如图7所示；

上述滤血装置包括单层滤血膜e，该单层滤血膜e固定在带透气孔的绝缘基板h的上表面并部分覆盖上述引针j长度的2/3；该试纸条的滤血装置示意图如图5所示。

实施例2

本实施提供了上述实施例1中的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条的制造方法，其包括以下步骤：

准备两块聚对苯二甲酸乙二醇酯板，先用打孔装置在其中一块聚对苯二甲酸乙二醇酯板的相应位置打好透气孔；

使用设计好的网版并采用丝网印刷的方式将工作电极、参比电极和判断电极印刷在聚对苯二甲酸乙二醇酯板上，在80-90℃条件下烘干；上述工作电极、参比电极和判断电极均由碳制成。

然后再用网版印刷光固化的绝缘漆层覆盖到带有碳工作电极、参比电极和判断电极的聚对苯二甲酸乙二醇酯板的上表面，并在紫外光条件下固化5-15s；

在绝缘漆层控制的反应槽内，按照表1的配方采用滴酶的方式将反应层固化到试纸条上，并在50℃干燥30min；

再将带有引针的亲水性盖板粘贴到绝缘漆层的上方，使酶斑在绝缘漆层控制的反应槽内，且在亲水性盖板的下方，以形成虹吸通道；

将滴酶后的电极板用双面胶和亲水性盖板进行粘贴和覆盖，将由不对称聚砜膜材料制成的单层滤血膜覆盖在聚对苯二甲酸乙二醇酯板上的透气孔上、并使其部分覆盖亲水盖板的引针长度的2/3，先通过黏附在聚对苯二甲酸乙二醇酯板的双面胶来固定单层滤血膜，然后采用超声冷焊接的方式来封装，其中，采用的焊接参数为：焊接力度2-4bar，焊接时间0.01-0.3s，并采用如图5所示的焊接位点的设计，使单层滤血滤膜牢固无损地封装在试纸条上，得到上述电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条。

表1

物质	含量
		磷酸盐缓冲溶液(pH7.4、0.1M)	89％
铁氰化钾	8％
		胆酸钠	0.2％
海藻糖	2％
		Triton X-100	0.03％
胆固醇酯酶	0.6kU/mL
		胆固醇氧化酶	2kU/mL

实施例3

使用实施例2制造的电化学法血液总胆固醇含量检测试纸条对新鲜抗凝血样的总胆固醇含量进行测试，测试结果如表2所示。

表2

实施例4

采用具有垂直过滤进样结构的试纸条对新鲜抗凝血样的总胆固醇含量进行测试，其他条件同实施例3，测试结果如表3所示。

表3

如表2、表3所示：将使用本发明的试纸条得到的测试结果与采用具有垂直过滤进样结构的试纸条得到的测试结果进行对比，本发明的试纸条所得到的测试结果与医院生化仪所测得的测试结果比对后发现，本发明的试纸条所得到的测试结果的测试回推浓度及回推浓度偏差均小于10％，而采用具有垂直过滤进样结构的试纸条得到的测试结果的重现性和准确性明显差于采用本发明试纸条所测得的测试结果。

实施例5

本实施例提供了一种电化学法血液甘油三酯含量检测试纸条，该试纸条与实施例1及实施例2中试纸条的区别在于：生物活性物质为甘油三酯体系，并按照表4的配方采用滴酶的方式将反应层固化到试纸条上。

表4

物质	含量
		磷酸盐缓冲溶液(pH7.4、0.1M)	87％
铁氰化钾	8％
		胆酸钠	0.2％
海藻糖	2％
		Triton X-100	0.03％
ATP	1.75％
		氯化镁	0.05％
脂肪酶	10kU/mL
		甘油激酶	2kU/mL
L-α磷酸甘油氧化酶	1.5kU/mL

实施例6

使用实施例5制造的电化学法血液甘油三酯含量检测试纸条对新鲜抗凝血样的甘油三酯含量进行测试，测试结果如表5所示。

表5

实施例7

采用具有垂直过滤进样结构的电化学法血液甘油三酯含量检测试纸条对新鲜抗凝血样的甘油三酯含量进行测试，其他条件同实施例6，测试结果如表6所示。

表6

如表5、表6所示：将使用本发明的电化学法血液甘油三酯含量检测试纸条得到的测试结果与采用具有垂直过滤进样结构的试纸条得到的测试结果进行对比，本发明的试纸条所得到的测试结果与医院生化仪所测得的测试结果比对后发现，本发明的试纸条所得到的测试结果的测试回推浓度及回推浓度偏差均小于10％，而采用具有垂直过滤进样结构的试纸条得到的测试结果的重现性和准确性明显差于采用本发明试纸条所测得的测试结果。

Claims (10)

1.一种电化学法血液检测试纸条，其中，该试纸条包括绝缘基板、导电层、绝缘层、亲水性盖板、反应层和滤血装置；

所述导电层包括工作电极和参比电极，并位于所述绝缘基板的表面；

所述绝缘层位于所述绝缘基板与所述导电层的同一侧上方，

所述滤血装置包括滤血膜，该滤血膜固定在所述绝缘基板的上表面，并与所述绝缘层并列设置；优选所述滤血膜的一侧与绝缘层一层相接触；

所述绝缘层开设反应槽，以使部分工作电极和参比电极暴露在反应槽内，且所述反应槽在靠近滤血膜一侧设有开口；

所述亲水性盖板位于所述绝缘层的上方，并与所述反应槽形成虹吸通道；

所述亲水性盖板靠近滤血膜一侧设有突出的朝向滤血膜的引流装置；所述引流装置部分被所述滤血膜覆盖；

优选所述滤血膜覆盖所述引流装置长度的1/2至2/3；

所述反应层位于所述虹吸通道内并覆盖在所述虹吸通道内的工作电极和参比电极；

优选该反应层包括生物活性物质、缓冲物质、电子介体、表面活性物质、高分子聚合物；更优选所述反应层进一步包含分散剂、稳定剂及增稠剂中的至少一种；

还优选所述缓冲物质包括磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸缓冲溶液或碳酸缓冲溶液；还优选所述缓冲物质的pH值为5.8-7.5；

还优选所述电子介体包括普鲁士蓝、二茂铁、导电石墨、碳纳米管、硫堇、铁氰化钾及吩嗪硫酸甲酯中的一种或几种的组合；

还优选所述表面活性物质包括Tween 20、TritonX-100、聚氧化乙烯、甘油、脂肪酸中的一种或几种的组合；

还优选所述高分子聚合物包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、明胶中的一种或几种的组合；

还优选所述分散剂包括水溶性低分子蜡类物质，更优选为聚乙二醇2000或乙烯-丙烯酸共聚物；

还优选所述稳定剂包括脂质或糖类物质，更优选所述脂质包括磷脂类两性脂质，所述糖类物质包括海藻糖或蔗糖；

最优选所述磷脂类两性脂质为卵磷脂、磷脂酰乙醇胺，磷脂酰丝氨酸；

还优选所述增稠剂包括水溶性纤维素及其衍生物或水溶性胶原蛋白；更优选所述水溶性纤维素及其衍生物包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其中，以所述反应层的总重量计，所述反应层包括0.05-2wt％的生物活性物质、80-95wt％的缓冲物质、3-15wt％的电子介体、0.01-1.5wt％的表面活性物质、0.2-8wt％的高分子聚合物；

优选所述生物活性物质为1-1.5wt％；

优选所述电子介体为8％-15wt％；

优选所述表面活性物质为0.05-0.3wt％；

优选所述高分子聚合物为4-6wt％。

3.根据权利要求1或2所述的试纸条，其中，所述滤血膜为单层或多层；

优选所述滤血膜包括由玻璃纤维、无纺布、滤纸或聚砜类材料制成的滤血膜。

4.根据权利要求3所述的试纸条，其中，所述滤血膜是通过超声冷焊接的方式固定到绝缘基板的上表面的；

优选所述超声冷焊接是采用点焊的方式进行的，更优选焊接力度为2-4bar，焊接时间为0.01-0.5s。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试纸条，其中，所述反应层为在所述工作电极和参比电极上先固化一层亲水性高分子涂层，再固化反应层；

优选所述亲水性高分子涂层包括由水溶性纤维素及其衍生物制成的涂层；还优选所述水溶性纤维素及其衍生物包括羧甲基纤维素及其钠盐、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、微晶纤维素中的一种或几种的组合。

6.根据权利要求1-5任一项所述的试纸条，其中，所述导电层还包括判断电极；暴露在反应槽内的工作电极、参比电极和判断电极相对位置为工作电极和参比电极靠近反应槽开口一侧，优选所述判断电极位于所述虹吸通道的顶端并被反应层部分覆盖；

优选所述工作电极、参比电极及判断电极由碳和/或金属制成；

更优选所述金属包括金、银或铂。

7.根据权利要求1-6任一项所述的试纸条，其中，所述绝缘层包括双面胶或绝缘漆；

优选所述双面胶由聚烯或聚酯材料制成，更优选其厚度为0.05-0.5mm；

更优选所述双面胶为美国AR或3M的双面胶；

还优选所述绝缘漆包括热固性或紫外光固化类绝缘漆。

8.根据权利要求1-7任一项所述的试纸条，其中，所述亲水性盖板由一面附有亲水层的聚酯类材料制成；

优选所述亲水层位于朝向所述反应槽的一侧；

还优选所述亲水层由亲水性的压敏胶涂层构成；

还优选所述亲水性盖板上方开有通气孔；

更优选该通气孔位于所述虹吸通道顶端所对应的亲水性盖板上，并使得虹吸通道与外界相通；

最优选该通气孔的直径为0.2-0.8mm。

9.根据权利要求1-8任一项所述的试纸条，其中，所述绝缘基板选自聚碳酸酯板、聚氯乙烯板、聚乙烯板、聚丙烯板、聚对苯二甲酸乙二醇酯板、聚酰胺树脂板、聚苯乙烯板、玻璃纤维板及陶瓷板中的任一种；

优选所述绝缘基板设置有透气孔，该透气孔位于亲水性盖板正下方，被所述滤血膜覆盖。

10.权利要求1-9任一项所述的电化学法血液检测试纸条的制造方法，其包括以下步骤：

将所述电极固定在所述绝缘基板上，并烘干，优选在80-90℃下烘干；

将绝缘层铺设到所述绝缘基板与所述电极同一侧的上方，并在绝缘层上形成反应槽，然后进行固化，优选在紫外光条件下固化，更优选固化5-15s；

在绝缘层的反应槽内，将反应层固化到试纸条上，并干燥，优选在40-60℃干燥15-30min；更优选在50℃干燥30min；

再将设有引流装置的亲水性盖板铺设到绝缘层上方；

将滤血膜固定在绝缘基板的上表面，该滤血膜覆盖透气孔并部分覆盖引流装置；

其中还优选在绝缘基板的相应位置开设透气孔。