CN101074963B

CN101074963B - 电化学胆固醇检测电极测试条和其制造方法

Info

Publication number: CN101074963B
Application number: CN2006100805487A
Authority: CN
Inventors: 陈慧玲; 杨金昌; 涂耀仁; 郭蕙兰; 陈筑瑄; 徐详崴
Original assignee: Bioptik Technology Inc
Current assignee: Bioptik Technology Inc
Priority date: 2006-05-17
Filing date: 2006-05-17
Publication date: 2011-07-06
Anticipated expiration: 2026-05-17
Also published as: HK1107403A1; CN101074963A

Abstract

本发明提供一种电化学胆固醇检测电极测试条和其制造方法。本发明的电极测试条是利用生物活性物质与血液中胆固醇发生生化或化学反应而产生电效应，再配合感测器装置来检测出血液中总胆固醇含量。所述电极测试条至少包含传递所述生化或化学反应中所产生的电效应的电极系统、生物反应膜和位于所述生物反应膜上的样品过滤膜，其中所述样品过滤膜上方两端各具有样品吸入口。

Description

电化学胆固醇检测电极测试条和其制造方法

技术领域

本发明涉及一种电化学生物检测电极测试条和其制造方法，并且特别是关于一种抛弃式电化学胆固醇检测电极测试条和其制造方法。

背景技术

二十世纪以来，随着医疗体系的进步，人类寿命也不断延长，各种文明病更普遍地存在于社会中，心脏病即是其中重要的例子。据世界卫生组织(WHO)统计，西元2,000年全球死于血管疾病约有1,670万人，患有心血管疾病估计约有1亿5千万人。近五十年来的研究使我们已知胆固醇与心血管疾病有着密切关系。胆固醇过高，一直是现代人健康的主要危机。根据JAMA由美国西北大学医学院Stamler所做研究报告(Stamler J，Relationship of Basel ine Serum Cholesterol Levels in3Large Cohorts of YoungerMen to Long-Term Coronary，Cardiovascular，and All-Cause Mortal ity and toLongevity，JAMA2000 Jul19；284(3)：311-8)发现，年轻时血液中胆固醇含量过高，晚年死于心脏病的机率越大。长期胆固醇如果高于240毫克/分升(mg/dL)的男性，死于心脏病的比率是胆固醇在正常值(低于200mg/dL)男性的2至3.6倍；至于年轻男性的胆固醇若超过280mg/dL，死亡的比率更比正常者多达8至12倍。此外，胆固醇含量过高的男性死于心脏病以外的疾病的比率也很高，因为这些疾病与胆固醇过量也有直接相关。由The New England Journal of Medicine的报告(The Long-Term Intervention withPravastatin in Ischaemic Disease(LIPID)Study Group， Prevention ofCardiovascular Events and Death with Pravastatin in Patients with Coronary HeartDisease

此外，胆固醇过低不正常，常是罹患癌症的警讯。早期对胆固醇指数与疾病关联性的研究(Seal US，Doe RP，Byar DP，Corle DK.Response of Serum Cholesterol andTriglycerides to Hormone Treatment and the Relation of Pretreatment Values toMortality in Patients with Prostatic Cancer.Cancer.1976Sep，38(3)：1095-107；Dilman VM，Berstein LM，0stroumova MN，Tsyrlina YV，Golubev AG.Related ArticlesPeculiarities of Hyperlipidaemia in Tumour Patients.Br J Cancer.1981May；43(5)：637-43)中就已发现，低胆固醇指数将增加死于癌症的机率，如肺癌(Horai T，Nakamura N，Tateishi R，Hattori S.Related Articles，Glycosaminoglycans in HumanLung Cancer.Cancer.1981Nov l；48(9)：2016-21)和大肠结肠癌(Siemianowicz K，Serum Total Cholesterol and Triglycerides Levels in Patients with Lung Cancer.Int J Mol Med2000Feb；5(2)》：201-5)。胆固醇指数突然大幅度下滑，而体重保持稳定或是减轻，可能就是癌症发生的征兆(ZureikM，Declin in Serum Total Cholesteroland the Risk of Death from Cancer.Epidemiology1997Mar；8(2)：137-43)。所以，定时测量胆固醇指数，观察其指数变化，不但能预防心血管疾病发生，也能知悉癌症的造访，可说是一举两得。综合以上可知，胆固醇的检测功能不论对一般人预防保健或是高胆固醇患者治疗过程都十分重要，并且市场应用性极广。

由于生活饮食的改善，通常会摄取过量的饱和脂肪酸食物和高胆固醇类食物，长久累积下来高胆固醇会对身体健康构成影响，血液中含有过高的胆固醇容易积聚在血管壁上，血管变得狭窄甚至闭塞，容易导致冠心病或中风，为了及早预防心血管疾病的产生，因此开发可抛弃式电化学生物检测电极测试条检测血液中总胆固醇含量，以达成自我保健的目的。

电化学生物检测电极测试条早已应用于市面上，现有许多居家自行操作的血糖测试条。例如同为申请人拥有的中国台湾专利公告第475,983号所公开的简易制造的片状电化学检测电极测试条，即是应用于居家自行操作的血糖和尿酸测试条。然而，目前市面上尚未有任何利用电化学生物检测电极测试条来检测血液中总胆固醇含量的应用。

发明内容

本发明的目的涉及提供一种电化学胆固醇检测电极测试条，其是利用生物反应膜与样品接触发生生化或化学反应而产生电效应的检测原理，来检测血液中总胆固醇含量。

本发明的另一目的涉及提供一种简易制造电化学胆固醇检测电极测试条的方法，所述方法可有效简化生物反应膜的工艺，快速而且可大量制造，提供大众普遍使用。

附图说明

图1是本发明的电化学胆固醇检测电极测试条的示意图；

图2是本发明的电化学胆固醇检测电极测试条的侧视图；

图3是本发明的电化学胆固醇检测电极测试条的构造示意图；和

图4是本发明的电化学胆固醇检测电极测试条与生化分析仪COBAS MIRA的测量结果比较图。

具体实施方式

本发明涉及一种利用生物活性物质与样品中特定待测物发生生化或化学反应而产生电效应的电化学生物检测电极测试条，其配合感测器装置的使用，可非常特异性地且灵敏地测试样品中的待测物，即血液中所含胆固醇。简单地说，由于本发明电极测试条的检测方法采用电化学原理，可直接对样品中待测物定量。

本发明的电化学生物检测电极测试条，如图1和图2所示，包含平板状的电绝缘基底101；电极系统，位于平板状的电绝缘基底101的表面上，至少包含两个分开而互不接触的阳极部分103a和阴极部分103b；反应区空间107，于平板状的电绝缘基底101与电极系统的同一侧上方覆盖具有开口的第一电绝缘平板113a，以形成固定宽度的中央凹槽通道的反应区，使得电极系统的阳极部分103a未被第一电绝缘平板113a覆盖的裸露部分一端形成参考电极且另一端形成阳极接头，而所述电极系统的阴极部分103b未被第一电绝缘平板113a覆盖的裸露部分一端形成工作电极且另一端形成阴极接头，再于第一电绝缘平板113a上覆盖一个具有开口的第二电绝缘平板113b，以形成承载生物反应膜和样品的空间；以及生物反应膜(未显示)，覆盖于未被第一电绝缘平板113a所覆盖的电极系统的表面和未被电极系统所覆盖的平板状的电绝缘基底101的表面上，其是由至少一种生物活性物质及混合物溶液组成，其中生物活性物质用于与接触的样品产生电化学反应。

在本发明电极测试条的反应区空间107中，是以第二电绝缘平板113b的开口为样品滴入口。此外，第一、第二和第三电绝缘平板113a、113b及113c之间的凹槽通道用以形成过滤膜区，位于生物反应膜的同一侧表面上，此过滤膜区包含一个或一个以上样品过滤膜，较佳为具有三种不同孔径大小的样品过滤膜121、122和123，用以分离血液中的血浆和血细胞，使血液经此分离过程后，仅有血浆与生物反应膜进行生化或化学反应。

本发明的电极测试条进一步包含第四电绝缘平板113d，其具有比前三者更宽的两端开口的凹槽通道，位于第三电绝缘平板113c表面上方；以及具两端虹吸式开口的盖板116，位于第四电绝缘平板113d表面上，与第一气体排出口及第二气体排出口(未显示)形成血液流通道；盖板116的下方贴附亲水性薄膜124，其用以加速样品吸入速度，使样品迅速充满样品收集区131，以减少样品吸入速度不一而造成样品取样不足，进而造成的读数误差。

本发明的电化学胆固醇检测电极测试条的优选具体实施例构造示意图请参考图3。如图3所示，此电极测试条呈矩形片状，其结构主要包含平板状的电绝缘基底101，位于电绝缘基底101表面上的电极系统103a及103b，具有开口的第一电绝缘平板113a局部覆盖于电极系统103a及103b上以形成固定宽度的凹槽通道，与样品产生反应的生物反应膜(未显示)，样品过滤膜121及122，第二电绝缘平板113b，样品过滤膜123，第三电绝缘平板113c，第四电绝缘平板113d，其两端具样品吸入口113d-1及113d-2，亲水性薄膜124，以及盖板116。

在本发明中，平板状的电绝缘基底101的适用材料并无特殊限制，优选为具有平直的表面、具有电绝缘特性以及耐50℃以上加热处理的耐热能力，以便于导电层及生物反应膜的加热干燥固化处理。适用的材料如聚碳酸酯(PC)板、聚氯乙烯(PVC)板、聚丙烯(PP)板、玻璃纤维板(FR-4)、电木板、陶瓷板(CEM-1)或玻璃板等。

本发明的电极系统可以是二极式电极系统，其包含二条分开而互不接触的阳极部分103a和阴极部分103b，用以连接电流式感测器装置；阴极部分以第一电绝缘平板113a局部覆盖，裸露两端分别是工作电极和阴极接头，而阴极部分103b的工作电极随后以生物反应膜覆盖，用以检测样品在电化学反应时诱发的电效应，阴极接头则用以连接电流式感测装置。阳极部分103a同样以第一电绝缘平板113a局部覆盖，裸露两端分别是参考电极和阳极接头，而阳极部分的参考电极随后以生物反应膜覆盖，用以配合工作电极对样品作电效应的检测。

在本发明的电化学胆固醇检测电极测试条中，具有开口的第一电绝缘平板113a以不覆盖住阳极接头、阴极接头、工作电极及参考电极的情况下被覆于平板状的电绝缘基底101的表面上，并形成固定宽度的凹槽通道。第一电绝缘平板113a的合适厚度约为0.15毫米或以上，以避免阻力过大。未覆盖第一电绝缘平板113a的固定宽度的凹槽通道的工作电极与参考电极两部分会形成反应区，此反应区为生物反应膜所覆盖，以利于容纳样品。

本发明的生物反应膜是由生物反应试剂滴加并干燥而获得，其包含生物活性物质，例如经固化或未固定化的酶、抗体、抗原和微生物细胞动植物细胞中具有生物性辨识能力的成分，及包含高分子聚合物、导电介质、表面活性剂和缓冲溶液的混合物溶液。其中，当本发明的电化学胆固醇检测电极测试条用于检测血液中胆固醇含量时，生物反应膜中生物活性物质较佳选自胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶所组成的群组；而其使用量为8至20微升(μl)可检测出血液中胆固醇含量。

高分子聚合物用于固定生物活性物质和导电介质。此高分子聚合物占生物反应试剂中的约0.1至6％之间，可选自聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl Pyrrolidone，PVP)、聚乙二醇(Polyethylene Glycol，PEG)、白明胶、葡聚糖(dextran)、聚乙烯醇(polyvinylalcohol，PVA)、甲基纤维素、羧基甲基纤维素和白蛋白所组成的群组。

生物反应膜的另一组分是导电介质，其用于接收或提供生物活性物质与样品中待测物的生化或化学反应时所需的电子转移。此时的电化学反应的电势、电阻或电流变化，可由电极系统103a及103b与生物反应膜接触的工作电极与参考电极传导至电极系统的另一端的阴极接头与阳极接头。当此电化学胆固醇检测电极测试条与感测器连接时，此感测器可通过电压输出装置对电极测试条施加外加电压，以及讯号接收装置，将前述电化学反应的电势、电阻或电流变化接收，通过显示装置将讯号转换成待测物浓度显示。适用的导电介质选自由硫堇(thionine)、吩嗪硫酸甲酯(phenazine methosulfate)、铁氰化钾(potassium ferrocynaide)和甲基紫精(methyl viologen)所组成的群组，本发明的具体实施例中使用铁氰化钾作为导电介质，生物反应膜组成分的导电介质占反应膜组成配方重量百分比的约2至20％之间。

生物反应膜的另一组分是表面活性剂，其用于使生物反应试剂能分散覆盖至疏水性的测试区域，表面活性剂占反应试剂组成配方重量百分比的约0.1至1％之间。适合的表面活性剂包含Tween20、TritonX-100、聚氧化乙烯、甘油、脂肪酸、油酸或磷脂酰胆碱。

生物反应膜的另一组分是缓冲溶液，可由柠檬酸、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、三羟甲基氨基甲烷(Tris)或硼酸盐和去离子水组成，此缓冲溶液占反应试剂重量百分比的约84至97％之间。此缓冲溶液是用于当与样品接触时，能使整体反应中保持生物活性物质的最佳活性。

在生物反应膜上方可覆盖三种不同孔径大小的样品过滤膜121、122和123，此等过滤膜的适用材质可为无纺布、玻璃纤维、滤纸或尼龙，其中孔径较小的样品过滤膜121置于生物反应膜上方，孔径大小约为0.1至3微米(μm)，另一孔径较大的样品过滤膜122则置于孔径小的样品过滤膜的上方，孔径大小约为1至10微米，还有亲水性的样品过滤膜123置于前两者的上方，可加速血液的扩散速率。样品过滤膜121及122覆盖于，较佳紧贴于生物反应膜上方，其用意在于利用两种不同孔径大小的滤材将血液中的血细胞截留在过滤膜上方，而仅有血浆可通过过滤膜与生物反应膜进行反应。

本发明的电极测试条中采用两端具有虹吸式开口的盖板116，用以保护生物反应膜免于遭受污染，并限制定量样品进入反应区中，以降低检测误差反应区。

本发明还提供一种制造电化学胆固醇检测测试条的方法，其包含下列步骤：

(a)提供平板状的电绝缘基底；

(b)于所述平板状的电绝缘基底的表面上形成导电层，并使所述导电层形成至少包含两个分开而互不接触的阳极部分及阴极部分的电极系统；

(c)于所述电极系统上覆盖具有开口的第一电绝缘平板，以形成固定宽度的凹槽通道，使所述电极系统的阳极部分未被所述第一电绝缘平板覆盖的裸露部分一端形成至少参考电极和另一端形成阳极接头，而所述电极系统的阴极部分未被所述第一电绝缘平板覆盖的裸露部分一端形成至少工作电极和另一端形成阴极接头；

(d)将生物反应试剂滴加于所述凹槽通道上，所述生物反应试剂含有至少一种生物活性物质以与接触的样品产生电化学反应；

(e)进行干燥，使所述生物反应试剂形成生物反应膜，覆盖于所述凹槽通道底部而形成的反应区；

(f)于所述反应区上方覆盖一个或一个以上样品过滤膜，用以分离血细胞及血浆，使分离后仅有血浆与所述生物反应膜进行反应；以及

(g)将第二电绝缘平板覆盖于所述样品过滤膜上，所述第二电绝缘平板对应于所述第一电绝缘平板的凹槽通道的位置具有开口，其中所述平板状绝缘基底、所述凹槽通道的第一间隙壁及第二间隙壁和所述第二电绝缘平板围成反应区空间。

根据本发明制造电化学胆固醇检测电极测试条的方法，首先在平板状的电绝缘基底101的任一平直表面上以网版印出至少一层分开而互不接触的包含阳极部分103a与阴极部分103b的电极系统，如图3所示。电极系统的材料并无特殊限制，为任何适合网版印刷的导电性材料，可以选自碳胶、银胶、金胶、碳银混合胶及铜胶，然后于60-80℃下干燥固化。

在本发明制法的(c)步骤中，以具有双面胶的第一电绝缘平板113a覆盖于电极系统的同一侧表面上，第一电绝缘平板113a的较佳厚度约为0.15mm或以上，且保留部分裸露的电极系统以形成阳极接头及阴极接头。第一电绝缘平板113a的开口处和平板状的电绝缘基底101所形成的凹槽通道即为包含生物反应膜的反应区。

在步骤(d)和(e)中，优选以双程式滴加方式将生物反应试剂形成于反应区表面上。此双程式分别为高分子聚合物层及生物活性物质反应层两层，每形成一层必须要先经40至60℃下干燥，其中高分子聚合物层混合溶液是由高分子聚合物和缓冲溶液所组成，而生物活性物质反应层混合溶液是由导电介质、表面活性剂和缓冲溶液所组成。

在步骤(f)中，优选将具有三种不同孔径大小的样品过滤膜贴覆在生物反应膜上。这些过滤膜的适用材质包含无纺布、玻璃纤维、滤纸或尼龙，其中孔径较小的样品过滤膜置于生物反应膜上方，孔径大小约为0.1-3μm，另一孔径较大的过滤膜则置于孔径小的过滤膜的上方，孔径大小约为1-10μm；这两个样品过滤膜紧贴于生物反应膜上方，还有亲水性的样品过滤膜123置于前两者的上方，可加速血液的扩散速率，并用带开口的第二电绝缘平板113b加以覆盖。

本发明电化学胆固醇检测电极测试条中电绝缘平板的开口优选为正方形或长方形孔状。

本发明制造方法另包含覆盖下方贴附亲水性薄膜124的左右两端具虹吸式开口的盖板，使反应区的左右两端各具有样品吸入口。

本发明电极测试条的检测方法相当容易于片状电极的电化学测定器中进行。将待测样品，即血液，由样品吸入口113d-1及113d-2吸入以快速充满样品收集区131，再以样品过滤膜121、122和123将血液中的血细胞截留于样品过滤膜122和123中，使血液经过滤后仅存血浆流入反应区空间107的反应区，于是样品中待测物，即胆固醇会与生物反应膜的生物活性物质和导电介质产生氧化还原反应，利用电化学测定器即可很容易测得反应所产生的电流，进而推知待测物的浓度。

本发明还提供一种电化学检测仪器，包含一种可抛弃式电化学胆固醇检测电极测试条和一个感测器装置，可直接分析样品中待测物的含量。

以下实施例将对本发明做进一步的说明，但并非用以限制本发明的实施范围，任何熟悉本发明技术领域的普通技术人员，在不违背本发明的精神下所能够达成的修改和变化，均属于本发明的范围。

实施例1

在聚碳酸酯绝缘基底的平直表面上，以网版印出二个分开而互不接触的碳胶导电层的阳极部分与阴极部分，在60至80℃的温度下烘干后，于电极系统的同侧表面覆盖具有开口的电绝缘平板，以形成固定宽度的凹槽通道的反应区，并保留部分裸露的电极系统的阳极部分与阴极部分，以分别形成阳极接头与阴极接头。所述凹槽通道所形成的区域即为覆盖生物反应膜的反应区。

之后将含表1的配方成份及比例的生物反应试剂，以滴加方式加注到凹槽通道中，在40至60℃下干燥。再将样品过滤膜、具开口的电绝缘平板和左右两端具虹吸式开口的盖板，依序组合贴上后，形成本发明的电化学胆固醇检测电极测试条。

表1 生物反应试剂的配方

羧甲基纤维素(Carboxymethyl cellulose) 0.5％

甲基纤维素(Methyl cellulose) 0.8％

胆固醇酯酶(Cholesterol esterase)(120U/mg) 0.1％

胆固醇氧化酶(Cholesterolo xidase)(25U/mg) 0.6％

赤血盐(铁氰化钾，Potassium ferricyanide) 7％

磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0；0.1M) 90.9％

TritonX-1000 0.1％

将制得的电化学胆固醇检测电极测试条，以胆固醇标准溶液进行胆固醇含量测试，发现本发明电化学胆固醇检测电极测试条所测得的胆固醇浓度与生化分析仪COBARSMIRS测得的胆固醇读数相近，如图4所示。

实施例2

重复实施例1的步骤，其中生物反应试剂的配方成份和比例改如表2中所示。

表2 生物反应试剂的配方

每100ml的生物反应剂配方含量

白蛋白(Albumin) 0.45g

甲基纤维素 0.3g

聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone) 0.5g

胆固醇酯酶(120U/mg) 75KU

胆固醇氧化酶(25U/mg) 175KU

赤血盐(铁氰化钾) 9g

柠檬酸溶液(0.1M) 45ml

磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0；0.1M) 加至100ml

Triton X-100 500ul

测试结果表2-1所示：

表2-1

胆固醇(CHOL)浓度(毫克/分升)	平均值(n＝3*)
		125	116
147	143
		192	205
224	240

*n＝3表示重复测试三次

实施例3

重复实施例1的步骤，其中生物反应试剂的配方成份和比例改如表3所示。

表3 生物反应试剂的配方

每100ml的生物反应剂配方含量

白蛋白 0.5g

甲基纤维素 0.4g

胆固醇酯酶(120U/mg) 90KU

胆固醇氧化酶(25U/mg) 120KU

赤血盐(铁氰化钾) 12g

磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0；0.1M) 加至100ml

Triton X-100 100ul

测试结果如表3-1所示：

表3-1

CHOL浓度(毫克/分升)	平均值(n＝3)
		157	144.0
218	207.9
		296	283.3

实施例4

重复实施例1的步骤，其中生物反应试剂的配方成份和比例改如表4所示。

表4 生物反应试剂的配方

每100ml的生物反应剂配方含量

羧甲基纤维素 0.3g

白蛋白 0.4g

胆固醇酯酶(120U/mg) 150KU

胆固醇氧化酶(25U/mg) 250KU

赤血盐(铁氰化钾) 10g

磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0；0.2M) 加至100ml

Triton X-100 200ul

测试结果如表4-1所示：

表4-1

CHOL浓度(毫克/分升)	平均值(n＝10*)
		90	95.2
180	188.4
		270	275.3
315	319.2

*n＝10表示重复测试十次

综上所述，虽然本发明已由优选实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何所述领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，可做出各种改动和修正，因此本发明的保护范围当以所附的权利要求书所界定的为准。

Claims

1.一种电化学胆固醇检测电极测试条，其包含：

平板状的电绝缘基底；

电极系统，位于所述平板状电绝缘基底的表面上，所述电极系统至少包含工作电极与参考电极；

反应区空间，在所述平板状的电绝缘基底与所述电极系统的同一侧上方覆盖具有开口的第一电绝缘平板，以形成固定宽度的凹槽通道的反应区，再覆盖具有开口的第二电绝缘平板，以形成承载生物反应膜和样品的空间；

生物反应膜，位于所述电极系统的表面上并覆盖所述反应区，其包含至少一种生物活性物质，用以与接触的样品产生生化或化学反应，其中所述生物活性物质选自由胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶所组成的群组；和

一个或一个以上样品过滤膜，位于所述生物反应膜上，用以分离血液中的血细胞和血浆，使分离后仅有血浆与所述生物反应膜进行反应。

2.根据权利要求1所述的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述平板状的电绝缘基底选自由聚碳酸酯板、聚氯乙烯板、聚丙烯板、玻璃纤维板FR-4、电木板、陶瓷板CEM-1和玻璃板所组成的群组。

3.根据权利要求1所述的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述电极系统是二极式电极系统。

4.根据权利要求1所述的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述第一电绝缘平板的厚度至少为0.15毫米。

5.根据权利要求1所述的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述生物反应膜包含生物活性物质、表面活性剂、高分子聚合物与导电介质。

6.根据权利要求5所述的电化学胆固醇检测电极测试条，其中表面活性剂选自由Tween 20、Tritonx-100、聚氧化乙烯、甘油、脂肪酸和磷脂酰胆碱所组成的群组。

7.根据权利要求6的电化学胆固醇检测电极试条，其中表面活性剂为油酸。

8.根据权利要求5所述的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述高分子聚合物选自由聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇、白明胶、葡聚糖、聚乙烯醇、甲基纤维素和羧基甲基纤维素所组成的群组。

9.根据权利要求5的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述导电介质选自由硫堇、吩嗪硫酸甲酯、铁氰化钾和甲基紫精所组成的群组。

10.根据权利要求1的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述样品过滤膜包含无纺布、玻璃纤维、滤纸或尼龙。

11.根据权利要求1的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述电极测试条包含二个具有不同孔径的样品过滤膜，其中孔径较小的过滤膜的孔径大小为0.1至3μm，孔径较大的过滤膜的孔径大小为1至10μm。

12.根据权利要求1的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述电极测试条包含具有加速血液扩散的亲水性样品过滤膜。

13.一种电化学胆固醇检测电极测试条，其包含：

平板状的电绝缘基底；

电极系统，位于所述平板状电绝缘基底的表面上，所述电极系统至少包含工作电极和一参考电极，并且所述工作电极和所述参考电极分开而互不接触；

第一电绝缘平板覆盖于所述电极系统上，所述第一电绝缘平板具有开口，以形成固定宽度的凹槽通道，并且所述凹槽通道底部暴露出部分的电极系统，所述凹槽通道具有第一间隙壁和第二间隙壁；

生物反应膜，覆盖所述凹槽通道底部暴露出部分的电极系统，所述生物反应膜含有至少一种生物活性物质以与接触的样品产生生化或化学反应，其中所述生物活性物质选自由胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶所组成的群组；

一个或一个以上样品过滤膜，位于所述生物反应膜上，用以分离血液中的血细胞和血浆，使分离后仅有血浆与所述生物反应膜进行反应；和

第二电绝缘平板，覆盖于所述样品过滤膜上，所述第二电绝缘平板对应于所述第一电绝缘平板的凹槽通道的位置具有开口，其中所述平板状绝缘基底、所述第一间隙壁、所述第二间隙壁和所述第二电绝缘平板围成反应区空间。

14.根据权利要求13的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述生物反应膜包含生物活性物质、表面活性剂、高分子聚合物与导电介质。

15.根据权利要求14的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述表面活性剂选自由Tween 20、TritonX-100、聚氧化乙烯、甘油、脂肪酸和磷脂酰胆碱所组成的群组。

16.根据权利要求15的电化学胆固醇检测电极试条，其中表面活性剂为油酸。

17.根据权利要求14的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述高分子聚合物选自由聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇、白明胶、葡聚糖、聚乙烯醇、甲基纤维素和羧基甲基纤维素所组成的群组。

18.根据权利要求14的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述导电介质选自由硫堇、吩嗪硫酸甲酯、铁氰化钾和甲基紫精所组成的群组。

19.根据权利要求13的电化学胆固醇检测电极测试条，其中样品过滤膜包含无纺布、玻璃纤维、滤纸或尼龙。

20.根据权利要求13的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述第一电绝缘平板的厚度至少为0.15微米。

21.根据权利要求13的电化学胆固醇检测电极测试条，其中所述反应区空间是以所述开口为样品吸入口，以及在所述凹槽通道未被所述第一和第二间隙壁阻挡的两端分别为第一气体排出口和第二气体排出口。

22.一种电化学胆固醇检测电极测试条的制造方法，其包含下列步骤：

(a)提供平板状的电绝缘基底；

(b)在所述平板状的电绝缘基底的表面上形成导电层，并使所述导电层形成包含两个分开而互不接触的阳极部分和阴极部分的电极系统；

(c)在所述电极系统上覆盖具有开口的第一电绝缘平板，以形成固定宽度的凹槽通道，使所述电极系统的阳极部分未被所述第一电绝缘平板覆盖的部分一端形成至少一个参考电极，所述电极系统的阴极部分未被所述第一电绝缘平板覆盖的部分一端形成至少一个工作电极；

(d)将生物反应试剂滴加到所述凹槽通道底部未被所述第一电绝缘平板覆盖的电极系统上，所述生物反应试剂含有至少一种生物活性物质以与接触的样品产生生化或化学反应，其中所述生物活性物质选自由胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶所组成的群组；

(e)进行干燥，使所述生物反应试剂形成生物反应膜，覆盖于所述凹槽通道底部以形成反应区；

(f)在所述生物反应膜上方覆盖一个或一个以上样品过滤膜，用以分离血液中的血细胞和血浆，使分离后仅有血浆与所述生物反应膜进行反应；和

(g)将第二电绝缘平板覆盖于所述样品过滤膜上，所述第二电绝缘平板对应于所述第一电绝缘平板的凹槽通道的位置具有开口。

23.根据权利要求22的制造方法，其中所述电极系统的阳极部分未被所述第一电绝缘平板覆盖的另一端形成阳极接头，所述电极系统的阴极部分未被所述第一电绝缘平板覆盖的另一端形成阴极接头。

24.根据权利要求22的制造方法，其另包含将两端具有虹吸式开口的盖板覆盖于所述第二电绝缘平板上，使所述反应区具有左右两端的样品吸入口。

25.根据权利要求22的制造方法，其中所述生物反应试剂是由生物活性物质与混合物溶液所组成，并且其中所述混合物溶液包含导电介质、高分子聚合物、表面活性剂与缓冲溶液。

26.根据权利要求25的制造方法，其中所述表面活性剂占所述生物反应试剂组成配方重量百分比介于0.1至1％之间。

27.根据权利要求25的制造方法，其中所述高分子聚合物占所述生物反应试剂组成配方重量百分比介于0.1至6％之间。

28.根据权利要求25的制造方法，其中所述缓冲溶液占所述生物反应试剂组成配方重量百分比介于84至97％之间。

29.根据权利要求25的制造方法，其中所述导电介质占所述生物反应试剂组成配方重量百分比介于2至20％之间。