CN104561156B - 制备饱和型磷脂的方法 - Google Patents

Abstract

本申请提供了制备饱和型磷脂的方法，包括以下步骤：将溶解于疏水常数Log P为3以上、优选为3‑8、更优选为3.5‑5.3的溶剂的磷脂与固定化磷脂酶、脂肪酸接触，其中，所述脂肪酸为碳原子数大于18的脂肪酸，优选地，所述磷脂酶选自磷脂酶A1、A2或其混合物。本申请还提供了通过所述方法制备的磷脂、包含所述磷脂的组合物以及所述磷脂的用途。

Description

制备饱和型磷脂的方法

发明领域

本申请涉及制备饱和型磷脂的方法以及通过所述方法制备的饱和型磷脂，其可用于例如制备食品、药品或保健品。

发明背景

磷脂作为一种构成生命的基础物质，普遍存在于动植物细胞的原生质及细胞膜中。磷脂一直被广泛用于食品添加剂和保健品中。近年来，结构型磷脂因其特殊功能性而受到普遍关注，饱和型磷脂(也称为氢化磷脂)是其中一种。由于天然磷脂分子中含有大量不饱和脂肪酸，因而很不稳定，在空气中易于氧化酸败，产生难闻气味，限制其在化妆品及医药行业中的应用，由此需要对其进行改性后才能满足其应用，从而导致氢化磷脂被开发出来。宋兰等(氢化大豆卵磷脂的研制与应用，《农产品加工(学刊)》，2008年第07期)描述了饱和型磷脂在烘培食品、巧克力、冰激凌、脂质体方面的应用。中国专利申请200610104939.8公开了饱和型磷脂的用途，以其为基料制备脂肪乳注射剂，由于饱和磷脂的稳定性，不易分解，从而抑制了毒性成分的产生，提高了药物安全性和制剂的质量。

一般饱和型磷脂的制备是通过氢化反应，其机理是固-液-气三相体系中，氢在三相体系中扩散到催化剂表面，被其活性中心吸附，形成表面吸附态氢，磷脂的不饱和脂肪酸链遇到吸附态氢发生氢化反应。但该方法的缺点是易发生异构化反应，易生成反式脂肪酸，不利于人体健康，且所用催化剂易于失活造成成本增加。关于上述技术，可参考以下文献：氢化大豆磷脂的制备，何凤英，《湖南化工》，1999年04期；大豆粉末磷脂的氢化，黄国文等，《中国油脂》，2003年02期；氢化大豆卵磷脂的研究，张智等，《食品科学》，2008年29卷10期；氢化大豆卵磷脂的制备及精制工艺研究，章飞，硕士论文，2006年；中国专利200710144518.2；欧洲专利申请EP0386923A1；以及美国专利申请US2007179305A1。

近年的研究中开发了通过酶催化制备饱和型磷脂的方法。关于该技术，可参考以下文献：脂肪酶催化棕榈酸和大豆磷脂的酸解反应研究，班婷婷等，《食品工业科技》，2011年02期；Production of structured phospholipid by lipase-catalyzed acidolysis:optimization using response surface methodology,Lifeng Peng et al.,Enzyme andMicrobial Technology,Volume31,Issue4,Pages523-532；Phospholipase A1-catalyzedsynthesis of phospholipids enriched in n-3polyunsaturated fatty acidresidues,In-Hwan Kim et al.,Enzyme and Microbial Technology,Volume40,Issue5,Pages 1130-1135；Synthesis of structured phospholipid by immobilizedphopholipase A2catalyzed acidolysis,Anders Falk Vikbjerg et al.,Journal ofBiotechnology,Volume128,Issue3,Pages545-554；Parameters affectingincorporation and by-product formation during the production of structuredphospholipids by lipase-catalyzed acidolysis in solvent-free systems,A.F.Vikbjerg et al.,Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic,Volume36,Issues1-6,Pages14-21；Preparation of Therapeutic Phospholipids through PorcinePancreatic Phospholipase A2-Mediated Esterification and Lipozyme-MediatedAcidolysis,Masashi Hosokawa et al.,Journal of the American Oil Chemists’Society,Volume72,Issue11,pp1287-1291；中国专利201110072914.5；PCT国际申请WO2005/038037A2；以及PCT国际申请WO91/03564A1。

本领域中现需要改进的制备饱和型磷脂的方法，而本申请满足了这一需求，同时还实现了其他优势。

发明概述

第一方面，本申请提供了制备饱和型磷脂的方法，包括以下步骤：将溶解于疏水常数Log P为3以上、优选为3-8、更优选为3.5-5.3的溶剂的磷脂与固定化磷脂酶、脂肪酸接触，其中所述脂肪酸为碳原子数大于18的脂肪酸。

在一些实施方案中，所述溶剂为烷烃，优选C₆-C₁₂烷烃，进一步优选正己烷、壬烷和/或异辛烷。

在一些实施方案中，所述磷脂酶选自磷脂酶A1、A2或其混合物。

在一些实施方案中，磷脂酶选自磷脂酶A1，例如Lecitase Ultra。

在一些实施方案中，固定化磷脂酶是通过将磷脂酶固定于碱性离子交换树脂而获得的。

在一些实施方案中，所述方法还包括在反应完成后除去脂肪酸并脱去溶剂。

在一些实施方案中，磷脂为粉末磷脂、磷脂酰胆碱富集物、磷脂酰乙醇胺富集物和磷脂酰肌醇富集物中的一种或多种，优选地，所述磷脂来源于植物性油料作物，优选来源于大豆、葵花籽、菜籽、花生、米糠或棉籽，或来源于动物，优选为鱼或虾。在一些实施方案中，脂肪酸选自花生酸、山俞酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或以上的任意组合。

在一些实施方案中，脂肪酸和磷脂的摩尔比例为约20:1-4:1，优选为约15:1-6:1。

在一些实施方案中，固定化磷脂酶中的磷脂酶与磷脂的质量比为约50:1-4:1，优选为约30:1-5:1。

在一些实施方案中，所述接触在约40-70℃，优选45-60℃下进行。

在一些实施方案中，所述接触进行约8-72小时，优选进行约24-48小时。

第二方面，本申请提供了通过上述实施方案的方法获得的磷脂。

第三方面，本申请提供了包含第二方面所述的磷脂的组合物，例如食品、药品或保健品组合物。

第四方面，本申请提供了第二方面所述的磷脂在制备食品、药品或保健品中的用途。

第五方面，本申请提供了第二方面所述的磷脂作为食品添加剂或补充剂的用途。

发明的详细描述

本申请主要涉及利用酶法制备饱和型磷脂的新方法，其具有至少一种以下优势:

(1)显著降低产品磷脂自身不饱和酸含量，在一些实施方案中，能降低至14%以下；

(2)产品中饱和脂肪酸的占比较高，在一些实施方案中，能达到60%以上；

(3)由此制备的饱和型磷脂可作为氢化磷脂和部分氢化磷脂的替代品；

(4)无需担心生成反式脂肪酸；以及

(5)酶法制备具有减少环境污染，降低成本的效果。

第一方面，本申请提供了制备饱和型磷脂的方法，包括以下步骤：将溶解于疏水常数Log P为3以上、优选为3-8、更优选为3.5-5.3的溶剂的磷脂与固定化磷脂酶、脂肪酸接触，其中所述脂肪酸为碳原子数大于18的脂肪酸。

疏水常数Log P是本领域技术人员所公知的，指辛醇-水双相体系的分配系数，是表征有机溶剂疏水性的重要参数。各种溶剂的疏水常数LogP值可从多种途径获得，例如可参考1）钱峰等，非水介质中磷脂酶A1催化水解磷脂酰胆碱的研究，中国油脂，2007,32(11):55-58;2）Baokang Yang,Shu-Jung Kuo et al.,Solvent suitability for lipase-mediated acyl-transfer and esterification reactions in microaqueous milie isrealted to substrate and product polarities.Enzyme Microb.Technol.,1994,vol.16,July,page577-583以及3)Extremophiles Handbook;Koki Horikoshi。

在一些实施方案中，所述溶剂为烷烃，优选C₆-C₁₂烷烃，进一步优选正己烷（Log P=3.5）、异辛烷（Log P=4.3）和/或壬烷（Log P=5.3）。

磷脂酶是本领域已知的水解甘油磷脂的一类酶，按照其水解位点的不同，通常可分为磷脂酶A1、A2、B(A1和A2的混合物)、C、D。磷脂酶可以是天然存在的形式或经过人工改造，并且可以通过自行提取和/或改造或商业途径购买等多种途径获得。

在一些实施方案中，磷脂酶选自磷脂酶A1、A2或其混合物(磷脂酶B)。在一些实施方案中，磷脂酶选自磷脂酶A1，例如Lecitase Ultra。

磷脂酶的固定化是本领域中公知的技术，可通过将磷脂酶固定于多种固体载体获得。在一些实施方案中，固定化磷脂酶是通过将磷脂酶固定于碱性离子交换树脂而获得的。可以使用的碱性离子交换树脂的实例包括但不限于Amberlite IRA900Cl、AmberliteFPA91Cl、AmberliteFPA54、D301R、D392、D380、D382、D284、D280、D845、JK206、DuoliteA-161、LX1000HA，Dowex1*2等。

以固定化磷脂酶A1为例，可以通过商业途径购买磷脂酶A1和碱性离子交换树脂，并按照本领域中已知的技术制备固定化磷脂酶A1，例如可参见后文实施例部分描述的方法，也可参考朱珊珊等，磷脂酶A1的固定化及应用研究，中国油脂，2010，35(12):33-37；李浔等，固定酶法催化合成生物柴油I.大孔树脂固定化脂肪酶的制备，应用化工，2008，37(7):735-738;徐娟等，离子交换树脂固定化a-淀粉酶的研究，食品工业科技，2008，29(4):75-77;DANIEL Otzen,Differential adsorption of variants of the thermomyceslanuginosus lipase on a hydrohpobic surface suggests a role for localflexibility，Colloids and Surfaces B：Biolnterfaces，2008，64:223-228；Roger A，Enzyme Immobilization The Quest for Optimum Performance，Adv.Synth.Catal.，2007，349:1289-1307等方法制备。

在一些实施方案中，所述方法还包括在反应完成后除去脂肪酸并脱去溶剂。

在一些实施方案中，磷脂可来源于植物性油料作物（包括但不限于：大豆、葵花籽、菜籽、花生、米糠、棉籽），或来源于动物（包括但不限于鱼、虾）。

在一些实施方案中，磷脂可以为粉末磷脂、磷脂酰胆碱富集物、磷脂酰乙醇胺富集物、磷脂酰肌醇富集物等中的一种或多种，可通过商购途径获得，也可自行制备。对于本领域的技术人员而言，这些磷脂的制备方法是熟知的，例如，浓缩磷脂可参考：胡兴中，大豆浓缩磷脂生产工艺，中国油脂，2007，32(9):18-21；赵勇等，陶瓷膜微滤制备食用级浓缩磷脂的研究，中国油脂，2007，32(7):56-59；于殿宇等，萃取法制备透明浓缩磷脂的工艺研究，食品科学，2009，30(6):132-134等方法制备。粉末磷脂制备方法可参考：李桂华等，高纯度大豆粉末磷脂制取工艺的研究，中国粮油学报，2002，17(5)：55-60；陆文达，优质大豆粉末磷脂制备方法研究，粮食与油脂，2002，05：7-9等方法制备，也可将浓缩磷脂经有机溶剂，如丙酮处理而制备或通过超临界CO2方法萃取得到；磷脂酰胆碱富集物可参考：王成涛等，不同方法精制的磷脂酰胆碱纯度及脂肪酸组成分析，河南工业大学学报，2009，30(6):47-51；汪勇等，大豆磷脂酰胆碱分离、纯化和检测方法，粮食与油脂，2003，02：6-8；罗世龙等，葵花籽磷脂的精制及应用研究，硕士论文，2012，05；汪燕等，离子交换树脂分离纯化大豆磷脂酰胆碱的研究，硕士论文，2007，06等方法制备。磷脂酰乙醇胺富集物可参考：李星全等，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺的柱层析分离，哈尔滨医科大学学报，1990，24(6):488-489；宋华等，柱层析法分离大豆磷脂，中国油脂，2005，30(2):41-43等方法制备；磷脂酰肌醇富集物可参考：邓启刚等，大豆肌醇磷脂的分离技术研究，化学工程师，2003，99(6):14-16；田玉刚等，大豆磷脂酰肌醇分离方法综述，粮食与油脂，2008，5:1-3；姜波等，天然磷脂分离纯化研究，硕士论文，2009，06等方法制备。

在一些实施方案中，脂肪酸选自花生酸、山俞酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或以上的任意组合。在一些实施方案中，脂肪酸为饱和脂肪酸。在一些实施方案中，脂肪酸为不饱和脂肪酸，包括单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，脂肪酸为二十二碳六烯酸(DHA)。在一些实施方案中，脂肪酸为山俞酸。在一些实施方案中，脂肪酸为二十碳五烯酸(EPA)。

在一些实施方案中，脂肪酸和磷脂的摩尔比例为约4:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1、约10:1、约11:1、约12:1、约13:1、约14:1、约15:1、约16:1、约17:1、约18:1、约19:1、或约20:1等。

对于粉末磷脂、磷脂酰胆碱富集物、磷脂酰乙醇胺富集物、磷脂酰肌醇富集物等磷脂制备物中的磷脂的摩尔计算是本领域技术人员所公知的，例如可参见本申请发明人陈斌斌的硕士论文：水相体系中磷脂酶A1改性大豆磷脂研究，河南工业大学，2010年5月。

在一些实施方案中，固定化磷脂酶中的磷脂酶与磷脂的质量比为约50:1、约49:1、约48:1、约47:1、约46:1、约45:1、约44:1、约43:1、约42:1、约41:1、约40:1、约39:1、约38:1、约37:1、约36:1、约35:1、约34:1、约33:1、约32:1、约31:1、约30:1、约29:1、约28:1、约27:1、约26:1、约25:1、约24:1、约23:1、约22:1、约21:1、约20:1、约19:1、约18:1、约17:1、约16:1、约15:1、约14:1、约13:1、约12:1、约11:1、约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1或约4:1等。

在一些实施方案中，所述接触在约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、约50℃、约51℃、约52℃、约53℃、约54℃、约55℃、约56℃、约57℃、约58℃、约59℃、约60℃、约61℃、约62℃、约63℃、约64℃、约65℃、约66℃、约67℃、约68℃、约69℃、或约70℃下进行。

在一些实施方案中，所述接触进行约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约25小时、约26小时、约27小时、约28小时、约29小时、约30小时、约31小时、约32小时、约33小时、约34小时、约35小时、约36小时、约37小时、约38小时、约39小时、约40小时、约41小时、约42小时、约43小时、约44小时、约45小时、约46小时、约47小时、约48小时、约49小时、约50小时、约51小时、约52小时、约53小时、约54小时、约55小时、约56小时、约57小时、约58小时、约59小时、约60小时、约61小时、约62小时、约63小时、约64小时、约65小时、约66小时、约67小时、约68小时、约69小时、约70小时、约71小时、或约72小时。

在一些实施方案中，反应中还伴随搅拌，例如搅拌速度可以为约100至约1000rpm，例如约100rpm、110rpm、120rpm、130rpm、140rpm、150rpm、160rpm、170rpm、180rpm、190rpm、200rpm、210rpm、220rpm、230rpm、240rpm、250rpm、260rpm、270rpm、280rpm、290rpm、300rpm、310rpm、320rpm、330rpm、340rpm、350rpm、360rpm、370rpm、380rpm、390rpm、400rpm、410rpm、420rpm、430rpm、440rpm、450rpm、460rpm、470rpm、480rpm、490rpm、500rpm、510rpm、520rpm、530rpm、540rpm、550rpm、560rpm、570rpm、580rpm、590rpm、600rpm、610rpm、620rpm、630rpm、640rpm、650rpm、660rpm、670rpm、680rpm、690rpm、700rpm、710rpm、720rpm、730rpm、740rpm、750rpm、760rpm、770rpm、780rpm、790rpm、800rpm、810rpm、820rpm、830rpm、840rpm、850rpm、860rpm、870rpm、880rpm、890rpm、900rpm、910rpm、920rpm、930rpm、940rpm、950rpm、960rpm、970rpm、980rpm、990rpm、1000rpm。

应当理解，本文所用的术语“约”(例如，在组分配比、反应温度和反应时间中)以本领域技术人员通常能够理解的含义来解释。一般情况下，术语“约”可以理解为给定数值的正负5%范围内的任意数值，例如，约X可以代表95%X至105%X的范围中的任意数值。

还应当理解，本文中给出的具体数值(例如，在组分配比、反应温度和反应时间中)不仅可作为单独的数值理解，还应当认为提供了某一范围的端点值，并且可以相互组合提供其他范围。例如，当公开了反应可以进行8小时或16小时时，也相应地公开了反应可以进行8-16小时。

第二方面，本申请提供了通过上述实施方案的方法获得的磷脂。

第三方面，本申请提供了包含第二方面所述的磷脂的组合物，例如食品、药品或保健品组合物。磷脂是食品、药品或保健品生产领域中常用的成分。例如，在日化行业，磷脂可作为表面活性剂，在如化妆水，面霜，香波，液体洗涤剂等中的应用；在食品行业，磷脂可作为乳化剂，在如烘焙制品，巧克力，冰激凌，奶粉等中的应用；在医药行业，磷脂可作为分散剂，润湿剂，透皮促进剂，前体药物制剂载体等功能性成分，在如液体制剂（注射液，脂质体，乳剂），半固体制剂（乳膏剂，油膏剂），固体制剂（片剂，颗粒剂，胶粘剂）和前体药物制等中的应用；在其它工业中，磷脂可作为助剂，生产乳化剂，分散剂，加脂剂，润滑剂，和柔软剂等；添加量可根据不同产品工艺调整。

第四方面，本申请提供了第二方面所述的磷脂在制备食品、药品或保健品中的用途。

第五方面，本申请提供了第二方面所述的磷脂作为食品添加剂或补充剂的用途。

应当理解，以上详细描述仅为了使本领域技术人员更清楚地了解本申请的内容，而并非意图在任何方面加以限制。本领域技术人员能够对所述实施方案进行各种改动和变化。

实施例

提供以下实施例进一步描述本申请，而并非加以任何限制。

材料和方法

实施例中使用的主要试剂如下：

大豆粉末磷脂，参考李桂华等，高纯度大豆粉末磷脂制取工艺的研究，2002，17(5):55-60的方法制备；

葵花籽磷脂酰胆碱富集物，参考罗世龙等，葵花籽磷脂的精制及应用研究，硕士论文，2012，05的方法制备。

大豆粉末磷脂及葵花籽磷脂酰胆碱富集物脂肪酸组成如下:

二十二碳六烯酸(DHA)、硬脂酸、山俞酸和二十碳五烯酸(EPA)分别购自厦门汇盛生物有限公司和国药集团化学试剂有限公司；

固定化磷脂酶A1为发明人自行制备，脂肪酶Lipozyme TLIM、Novzyme435购自诺维信有限公司，其中，固定化磷脂酶A1的制备方法如下：

称取100g碱性离子交换树脂于250ml三角瓶中，加入25ml磷脂酶A1酶液(LecitaseUltra，购自诺维信公司)，用1mol/L NaOH调整pH值为8，在4℃摇床中以100转/分钟（rpm）的速度振荡6小时，然后将酶取出放入干净的培养皿中，放入通风橱内进行干燥；

其中，使用的碱性离子交换树脂分别为Amberlite IRA900Cl（固定化磷脂酶A1-1）和D845（固定化磷脂酶A1-2）。

正己烷（Log P=3.5）、甲苯（Log P=2.8）、叔丁醇（Log P=0.8）、异辛烷（Log P=4.3），壬烷（Log P=5.3）购自国药集团化学试剂有限公司。

对制备的磷脂样品脂肪酸组成的检测方法如下：

(1)样品处理方法：

取磷脂样品用正己烷溶解，在硅胶板上样，选用正己烷:无水乙醚:乙酸乙酯：甲酸=60:38:2:1的展开剂进行展开，分离脂肪酸，收集磷脂层；收集样品后，参考国标GB/T17376-2008的方法，将样品甲酯化后进样，进行脂肪酸分析。

(2)脂肪酸分析

仪器：Agilent7820A；

柱子：毛细管柱，固定相CP-Si8850*0.25；

检测器：FID；

分析方法可参考国标GB/T17377-2008。

制备实施例1

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL正己烷中，以大豆粉末磷脂：DHA摩尔比为1：8加入DHA，以大豆粉末磷脂：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-1，在55℃下、250rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得磷脂样品1。

比较实施例1：

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL正己烷中，以大豆粉末磷脂：硬脂酸摩尔比为1：8加入硬脂酸，以大豆粉末磷脂：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-1，在55℃下、250rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得对照样品1。

比较实施例2：

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL正己烷中，以大豆粉末磷脂：DHA摩尔比为1：8加入DHA，以大豆粉末磷脂：Lipoz_yme TLIM质量比为1：10加入Lipozyme TLIM，在55℃下、250rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得对照样品2。

比较实施例3：

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL正己烷中，以大豆粉末磷脂：DHA摩尔比为1：8加入DHA，以大豆粉末磷脂：Novzyme435质量比为1：10加入Novzyme435，在55℃下、250rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得对照样品3。

比较实施例4：

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL甲苯中，以大豆粉末磷脂：DHA摩尔比为1：8加入DHA，以大豆粉末磷脂：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-1，在55℃下、250rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得对照样品4。

比较实施例5：

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL叔丁醇中，以大豆粉末磷脂：DHA摩尔比为1：8加入DHA，以大豆粉末磷脂：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-1，在55℃下、250rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得对照样品5。

制备实施例2：

取500mg葵花籽磷脂酰胆碱富集物，溶于5mL正己烷中，以葵花籽磷脂酰胆碱富集物：山俞酸摩尔比为1：8加入山俞酸，以葵花籽磷脂酰胆碱富集物：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-2，在55℃下、300rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得磷脂样品2。

制备实施例3：

取200mg大豆粉末磷脂，溶于5mL正己烷中，以大豆粉末磷脂：DHA摩尔比为1：8加入DHA，以大豆粉末磷脂：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-2，在60℃下、400rpm搅拌下进行反应，在反应48小时取样，获得磷脂样品3。

制备实施例4：

取400mg葵花籽磷脂酰胆碱富集物，溶于8mL异辛烷中，以葵花籽磷脂酰胆碱富集物：山俞酸摩尔比为1：10加入山俞酸，以葵花籽磷脂酰胆碱富集物：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-1，在50℃下、500rpm搅拌下进行反应，在反应48小时取样，获得磷脂样品4。

制备实施例5：

取800mg葵花籽磷脂酰胆碱富集物，溶于25mL壬烷中，以葵花籽磷脂酰胆碱富集物：EPA摩尔比为1：12加入EPA，以葵花籽磷脂酰胆碱富集物：磷脂酶A1质量比为1：10加入固定化磷脂酶A1-1，在55℃下、400rpm搅拌下进行反应，在反应24小时取样，获得磷脂样品5。

测试结果：

以上制备实施例和比较实施例中获得磷脂样品的脂肪酸分析如下(单位为百分比)：

通过以上数据可以看出，使用本发明的方法制备获得的磷脂样品的饱和脂肪酸比例均达到了80以上，显著高于比较实施例及反应原料，更可通过与不同脂肪酸反应可获得所需不同脂肪酸组成产品。产品饱和脂肪酸比例的提高将显著提高产品的抗氧化性及稳定性，抑制氧化酸败不良气味产生，从而扩展产品用途，更有利于储存，提高在医药，高级化妆品及轻工业中的作用。

Claims (4)

1.制备饱和型磷脂的方法，包括以下步骤：

将溶解于疏水常数Log P为3-8的溶剂的磷脂与固定化磷脂酶、脂肪酸接触，其中，

所述脂肪酸选自花生酸、山俞酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或以上的任意组合；

所述溶剂为C₆-C₁₂烷烃；

所述磷脂酶为磷脂酶A1，

所述磷脂为粉末磷脂、磷脂酰胆碱富集物、磷脂酰乙醇胺富集物和磷脂酰肌醇富集物中的一种或多种，并且来源于大豆、葵花籽、菜籽、花生、米糠或棉籽，

所述脂肪酸和所述磷脂的摩尔比例为15:1-6:1，

所述固定化磷脂酶中的磷脂酶与所述磷脂的质量比为15:1-5:1，

所述接触在50-60℃下进行24-48小时。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述溶剂的疏水常数Log P为3.5-5.3。

3.如权利要求1中所述的方法，其中所述烷烃为正己烷、壬烷和/或异辛烷。

4.如权利要求1-3中任一项中所述的方法，还包括在反应完成后除去所述脂肪酸并脱去溶剂。