CN104522313A

CN104522313A - 虫草属菌种发酵物在降低牛乳体细胞数量中的应用

Info

Publication number: CN104522313A
Application number: CN201410691428.5A
Authority: CN
Inventors: 李晓祥; 桂向东; 徐自奥
Original assignee: ANHUI XINXING BIOENGINEERING Co Ltd; HEFEI MICRO BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Current assignee: Hefei Micro Biological Engineering Co ltd
Priority date: 2014-11-25
Filing date: 2014-11-25
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2034-11-25
Also published as: CN104522313B

Abstract

本发明公开了虫草属菌种发酵物在降低牛乳体细胞数量中的应用，公开了虫草属菌种发酵物在提高奶牛产奶量、制备预防奶牛乳腺炎的饲料中的应用，所述应用包括：将所述虫草属菌种发酵物饲喂泌乳奶牛。所述虫草属菌种发酵物是由虫草属真菌经液体发酵或固体发酵获得的。本发明利用含所述虫草饲料添加剂的饲料饲喂泌乳奶牛，与对照组相比，能够显著提高奶牛的产奶量，所产牛乳中脂肪含量、蛋白质含量大大提高，体细胞数量却大大降低，且停止饲喂后所产牛乳的体细胞数量仍旧维持在较低的水平。表明虫草饲料添加剂能够有效改变奶牛的健康状况，提高所产牛乳的品质，能够有效预防奶牛乳腺炎，降低牛乳中体细胞数量并长期处于较低水平。

Description

虫草属菌种发酵物在降低牛乳体细胞数量中的应用

技术领域

本发明涉及一种奶牛的饲养方法，具体涉及虫草属菌种发酵物在降低牛乳体细胞数量中的应用。

背景技术

牛乳中的体细胞数(somatic cell count，SCC)是指每毫升牛乳中的体细胞总数，其主要成分是白细胞，约占99％，其余1％为乳腺上皮细胞。SCC的高低直接反映出奶牛的健康状况，对乳成分和乳制品质量有着广泛和复杂的影响。

在正常情况下，牛乳体细胞数不可能为零，牛乳中体细胞数一般在30万/mL以下。当奶牛乳房受到病菌侵袭或乳房损伤时，乳腺分泌大量白细胞进入其中，把细菌包围起来并吞噬掉，随着炎症的加剧，体细胞数会急剧增加，当炎症消失后，体细胞数会逐渐减少。另外体细胞数过高，还会造成奶损失和导致牛乳质量下降，表现为乳脂率、乳蛋白率降低,钙含量下降，钠及氯含量上升，影响牛乳的营养价值。

在饲养过程中滥用化学药物，导致耐药菌泛滥，使牛乳中体细胞愈加难以控制，严重影响了牛乳品质和人类健康。目前，国内外降低牛乳“体细胞数”的药物均依赖化学合成药物或者中药加化学药物组方，这种药物的不足之处在于，病原菌会很快产生耐药性，并且会产生药物残留，对牛乳的饮用者具有潜在的健康威胁。

随着人们对乳制品品质的要求日益提高，研究者们对控制体细胞数的研究也越来越重视，都在寻找安全、无残留的绿色天然生物产品，以期有效降低牛乳中的体细胞数量，生产出低体细胞数量的高品质牛乳。

冬虫是我国名贵的真菌药物和高级补品，广义上的虫草是指虫生子囊真菌侵染昆虫或节肢动物，最后形成的真菌子实体(子座)与昆虫或节肢动物的复合体。虫草属真菌约有400余种，其中最名贵的是冬虫夏草(Cordyceps sinensis)，是麦角菌科线形虫草属真菌(Ophiocordyceps)寄生于蝠蛾属(Hepialus spp.)的幼虫体内形成的复合体，是青藏高原高海拔地区的特有物种，简称“虫草”，是中国传统的名贵中药。目前世界上已发现同属“虫草属”的虫草已有三百五十种之多，其中在中国已发现过六十余种，包含冬虫夏草(C.sinensis)、北冬虫夏草(C.militaris)、大团虫草(C.ophioglossoides)、亚香棒虫草(C.hawkesii)、古尼虫草(C.gunnii)、珊瑚虫草(C.martialis)、镰刀状虫草(C.falcata)、泰山虫草(C.taishanensis)、山西虫草(C.shanxiensis)、凉山虫草(C.liangshanensis)、新疆虫草(C.gracilis)、香棒虫草(C.barnesii)、蝉花(C.sobolifera)等等。虽然已发现的品种繁多，但大多虫草都有非常强的提高免疫能力的作用。

现已先后成功开发出的虫草产品有：(1)金水宝胶囊，1987年上市，是采用从青海冬虫夏草中分离所得蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)Cs-4菌株制备而成的；(2)百令胶囊，是以沈南英等在1983年分离出的中国被毛孢(Synnematum sinense sp.)为菌种生产的；(3)至灵胶囊，是用从冬虫夏草分离纯化出来的被孢霉菌(Mortierella sp)发酵得到的菌丝体制成的；(4)宁心宝胶囊，为从新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌虫草头孢(Cephalosporium sinensis Chen.sp.nov),经液体深层发酵所得；(5)心肝宝胶囊，是1986年以冬虫夏草新鲜标本中分离出来的虫草头孢菌,是一种真菌寄生菌粉红胶霉(Gliocladium roseum(Link)Bain)。

虫草产品在动物上的应用也获得了一些成果。特别是地顶孢霉培养物具有多种生物学功能，比如，中国文献(魏建忠等，地顶孢霉培养物对保育仔猪生产性能及免疫水平的影响，动物营养与饲料科学，2009，36(2)：33-35.)公开了地顶孢霉培养物能够提高保育仔猪的生产性能及免疫水平。

公告号为CN101797014 B的中国专利文献公开了一种低胆固醇营养禽蛋的生产方法及其产品，该专利发现虫草能提高禽蛋质量内涵，生产出低胆固醇的高品质禽蛋。但目前还没有虫草在奶牛生产中应用的报道。

公告号为CN101002592A的中国专利报道了一种古尼拟青霉新型营养型虫草饲料添加剂的生产方法，但是该专利申请是披露该虫草饲料添加剂用于改善禽畜的口感和风味，没有提到或者暗示在奶牛中的应用。

公开号为CN 101066090 B的中国专利报道了一种虫草激活强化免疫饲料添加剂，采用北虫草菌种和冬虫夏草菌种混合培养，所得复合培养物干燥后即为该饲料添加剂，该专利也没有提示或者暗示虫草饲料添加剂在奶牛中的应用。

发明内容

本发明提供了虫草饲料添加剂在饲养泌乳奶牛中的应用，利用含该虫草饲料添加剂的饲料饲喂奶牛，不仅能提高奶牛的产奶量，增加牛乳中脂肪和蛋白质的含量，降低牛乳中体细胞数量，还能预防奶牛乳腺炎。

分别地，本发明提供了虫草属菌种发酵物在降低牛乳体细胞数量中的应用。

本发明提供了虫草属菌种发酵物在提高奶牛产奶量中的应用。

本发明提供了虫草属菌种发酵物在制备预防奶牛乳腺炎的饲料中的应用。

本发明中，所述虫草属菌种发酵物是由虫草属真菌经液体发酵或固体发酵获得的，可以是液体发酵菌液，可以是利用液体发酵固形物制备成的菌粉，也可以是固体发酵物。

所述虫草属真菌为古尼虫草(Cordyceps.gunnii)菌种、冬虫夏草(C.sinensis)菌种、北冬虫夏草(C.militaris)菌种、亚香棒虫草(C.hawkesii)菌种、新疆虫草(C.gracilis)菌种、大团虫草(C.ophioglossoides)菌种或蝉花(C.sobolifera)菌种中的至少一种。

如未作特殊说明，本发明所指虫草属真菌是指从虫草中分离得到的寄生真菌，该寄生真菌形成相应虫草中的子座。

这六类虫草是目前市场上最为常见、最具代表性的虫草，申请人发现这六类虫草属真菌均能有效提高奶牛产奶量、提高牛乳中脂肪和蛋白的含量、降低牛乳体细胞数量、预防奶牛乳腺炎；表明虫草属菌种发酵物在奶牛生产中具有共同作用特点。

所述古尼虫草菌种可选用地顶孢霉(Acremonium terricola)，所述冬虫夏草菌种可选用中国被毛孢(Synnematium sinense sp.)，所述北冬虫夏草菌种可选用蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris)，所述亚香棒虫草菌种可选用霍克斯拟青霉(Paecilomyceshawkesii)，所述新疆虫草菌种可选用羽束梗孢霉(Paraisaria sp.)，所述大团虫草菌种可选用大团囊菌(Elaphomyces granulatus)，所述蝉花菌种可选用蝉白僵菌(Beauveriasobolifera)。

作为优选，所述虫草属真菌为地顶孢霉(Acremonium terricola)。与其他虫草属真菌的发酵物相比，地顶孢霉发酵物能够获得更好的饲喂效果。

所述虫草属菌种培养物可通过以下发酵方法制备获得：

(1)液体种子发酵：将活化后的虫草属真菌接种于一级发酵罐中，进行种子培养，获得种子液；

所述接种量优选为8～12％，所述种子培养的参数控制在：温度25℃，通气量1.00L/(L·min)，培养时间84h。

(2)液体发酵：将种子液接种于二级发酵罐中，进行发酵，获得虫草属真菌液体发酵菌液；

所述种子液的接种量优选为8～12％，所述发酵的的参数控制在：温度25℃，通气量1.00L/(L·min)，培养时间84h。

(3)固体发酵：将所述虫草属真菌液体发酵菌液接种于固体培养基中，平铺后进行固体发酵，获得虫草属真菌固体培养物。

所述虫草属真菌液体发酵菌液的接种量优选为15％，平铺后物料厚度保持在3cm左右，所述固体发酵的参数控制在：温度恒定25℃，湿度70％，发酵时间165～170h；待菌丝长满固体培养基后，培养结束。

所述虫草属真菌液体发酵菌液可直接作为本发明的虫草属菌种发酵物，用于饲喂奶牛；也可对其进行离心，收集菌丝和固形物，将该菌丝和固形物置于45℃热风干燥至水分降至8wt％以下，粉碎，获得虫草属真菌液体发酵菌粉，该菌粉也可作为本发明的虫草属菌种发酵物物，用于饲喂奶牛。

所述虫草属真菌固体培养物经60℃热风干燥至水分降至8wt％以下，粉碎，也可作为本发明的虫草属菌种发酵物，用于饲喂奶牛。

可采用如下的液体培养基配方进行液体种子发酵和液体发酵：蔗糖2.0％、蛋白胨0.4％、酵母浸出粉0.3％、玉米粉0.5％、MgS0₄7H₂O 0.02％、K₂HP0₄0.04％。自然pH。

可采用如下的固体培养基配方进行固体发酵：土豆淀粉83％、玉米粉10％，白砂糖2％、蛋白胨2％、蚕蛹粉2.5％、硫酸镁0.2％、柠檬酸铵0.2％、磷酸二氢钾0.1％、维生素B₁100mg、水，pH值5～7。

所述应用包括：将所述虫草属菌种发酵物饲喂泌乳奶牛。

经饲喂该虫草属菌种发酵物后，与对照组相比较，奶牛产奶量最低能增长0.84％，且增长率随饲喂量增加而增加；奶牛所产牛乳中的体细胞数量能减少到2×10⁵个/ml以下；牛乳中脂肪含量最低能增长8.47％，蛋白含量最低能增长6.18％，且脂肪和蛋白的增长率均随饲喂量增加而增加。

作为优选，以干重计，所述虫草属菌种发酵物的饲喂量为不少于5g/头/天。

试验发现，虫草属菌种发酵物的饲喂量在5g/头/天时，即能提高奶牛产奶量、提高牛乳中脂肪和蛋白的含量、降低牛乳体细胞数量。并且，随虫草属菌种发酵物的饲喂量逐渐增加，上述效果愈加明显。

作为进一步优选，以干重计，所述虫草属菌种发酵物的饲喂量为5～30g/头/天。在该饲喂量范围内，奶牛的产奶量、所产牛乳中脂肪和蛋白的含量、体细胞数量已能获得较大程度的改善，饲喂量为30g/头/天时，改善效果最佳。继续增加饲喂量，产奶量、牛乳中脂肪和蛋白含量或将继续提高，牛乳中体细胞数量或将继续降低，也可能到达某一值后不再提高或降低。由于本发明的虫草属菌种发酵物对奶牛并无任何毒副作用，所以增加饲喂量对奶牛本身的生产不会有任何影响。为获得相应的饲喂效果，本领域技术人员可以根据饲养条件以及饲料配方选择具体的饲喂量。

一种提高奶牛产奶量、降低牛乳体细胞数量的方法，包括：将虫草属菌种发酵物饲喂泌乳奶牛，以干重计，所述虫草属菌种发酵物的饲喂量为不少于5g/头/天；

所述虫草属菌种发酵物是由虫草属真菌经液体发酵或固体发酵获得的；可以是液体发酵菌液，可以是利用液体发酵固形物制备成的菌粉，也可以是固体发酵物。

在用于饲喂奶牛时，本发明所述的虫草属菌种发酵物可单独作为饲料添加剂，也可以与其他饲料添加剂混合使用，与其它饲料添加剂混合使用共同发挥其效能，保持或增强喂饲效果。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明利用虫草属菌种发酵物饲喂泌乳奶牛，与对照组相比，能够显著提高奶牛的产奶量，所产牛乳中脂肪含量、蛋白质含量大大提高，体细胞数量却大大降低，且停止饲喂后所产牛乳的体细胞数量仍旧维持在较低的水平，牛奶中体细胞的高低与奶牛的乳房炎或隐性乳房炎直接相关。因此，表明虫草饲料添加剂能够有效改变奶牛的健康状况，提高所产牛乳的品质，能够有效预防奶牛乳腺炎，降低牛乳中体细胞数量并长期处于较低水平。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

实施例1 地顶孢霉培养物(虫草欣康)在奶牛生产中的应用

1、地顶孢霉培养物(菌液、菌粉、固体培养物)的制备

(1)地顶孢霉液体发酵菌液制备

①古尼虫草菌种：地顶孢霉(Acremonium terricola)MKL18

②液体发酵培养基

一级种子液体发酵培养基：600g白砂糖、200g酵母粉、10g MgSO₄、10g KH₂PO₄，溶解于20L水，自然pH；121℃高压蒸汽灭菌15min，备用。

二级种子液体发酵培养基：6000g白砂糖、2000g黄豆粉、2000g酵母粉、100gMgSO₄,100g KH₂PO₄，溶解于200L水，自然pH；121℃高压蒸汽灭菌15min，备用。

③液体发酵

液体种子发酵：液体发酵控制参数为温度25℃，通气量1.00L/(L·min)，接种量10％，300L气升式发酵罐装液量67％，发酵时间84h。

液体发酵：液体发酵控制参数为温度25℃，通气量1.00L/(L·min)，接种量10％，300L气升式发酵罐装液量67％，发酵时间84h。

发酵完成后即得地顶孢霉菌液。

④质量分析

测定结果见表1：

表1 地顶孢霉菌液质量检验结果

检测项目	检测值
		蛋白质g/L	4.6
虫草多糖g/L	0.65
		腺苷mg/L	11.2
麦角甾醇mg/L	89.7

(2)地顶孢霉液体发酵菌粉制备

①地顶孢霉菌液制备

依据“(1)地顶孢霉液体发酵菌液制备”中的方法生产地顶孢霉菌液。

②分离收集

从发酵罐中泵出菌液，采用离心方法分离收集菌丝和固形物。

③干燥粉碎

收集液体发酵菌丝和固形物，45℃热风干燥至水分降至8wt％以下，粉碎装袋，密封，避光储藏。

④质量分析

测定结果见表2：

表2 地顶孢霉菌粉质量检验结果

检测项目	检测值
		水分％	6.2
蛋白质％	31.5
		虫草多糖％	5.3
腺苷mg/kg	686
		麦角甾醇mg/kg	780

(3)地顶孢霉固体培养物制备

①地顶孢霉菌液制备

②固体发酵培养基：玉米粉55％、小麦次粉5％、豆粕25、花生粕5％、麦麸9.8％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.05％、磷酸二氢钾0.05％、磷酸二氢钠0.05％；自然pH，100℃蒸汽灭菌6h，备用。

③固体发酵：将新鲜地顶孢霉菌液与固体培养基按照重量比15％搅拌接种，平铺在浅盘上发酵，物料厚度3cm，温度恒定25℃，湿度70％，发酵时间168h。

④干燥粉碎:收集地顶孢霉固体培养物，60℃热风干燥至水分降至8wt％以下，粉碎装袋，密封，避光储藏。

⑤质量分析

测定结果见表3：

表3 地顶孢霉固体培养物质量检验结果

检测项目	检测值
		水分％	5.8
蛋白质％	27.8
		虫草多糖％	3.3
腺苷mg/kg	652
		麦角甾醇mg/kg	627

2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响

(1)试验动物：以河北某个养殖有限公司的100头泌乳奶牛为试验动物，随机分为10组，即9个试验组和1个对照组。

(2)饲喂量

每头成年奶牛日饲10kg精饲料(日精料配方为：玉米52％、麦麸5％、玉米皮5％、豆粕8％、棉籽粕12％、菜籽粕8％、DDGS3％、石粉2％、氧化镁0.3％、尿素1％、食盐0.7％、小苏打1％、磷酸氢钙1％、预混料1％、等等)。

试验组分为：地顶孢霉液体发酵菌液、液体发酵菌粉、固体培养物三个试验组，每个试验组分为低、中、高三个剂量组。按照地顶孢霉固体培养物含量折算，分别在10kg精饲料中添加试验物0.05％(低剂量组)、0.1％(中剂量组)、0.3％(高剂量组)，地顶孢霉液体发酵菌液按照固体培养物进行折算。对照组中平均每头成年奶牛日饲10kg饲料，饲料中不添加试验物。

(3)试验步骤

①开始饲喂前，观察泌乳奶牛3天，记录其进食量、产奶量；

②按照第(2)部分的内容饲喂试验组和对照组，饲养过程中，按照养殖场管理制度，记录每组奶牛的产奶量、采食、粪便、健康状况。

(4)地顶孢霉固体培养物对奶牛产奶量的影响

饲喂期间，每日分别记录试验组和对照组每头奶牛的产奶量，计算周平均日产奶量，结果见表4。

表4 地顶孢霉固体培养物对奶牛产奶量的影响(kg)

由表4可见，试验组和对照组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期减少，但减小幅度比对照组低。

试验结束时试验组低、中、高剂量组的平均日产奶量与对照组比较均有增加，分别增加0.29、1.38、3.24kg；在试验第8周时，产奶量差距显著，分别增加1.10、1.70、6.78kg；与对照组比较，产奶量分别提高0.84、3.97、9.33％。

试验结果表明：与对照组比较，地顶孢霉固体培养物能提高泌乳奶牛的产奶量，并且产奶量随着地顶孢霉固体培养物添加量的增加而增加，提示大剂量添加将能更好增加产奶量。

(5)地顶孢霉液体发酵菌粉对奶牛产奶量的影响

饲喂期间，每日分别记录试验组和对照组每头奶牛的产奶量，计算周平均日产奶量，结果见表5。

表5 地顶孢霉液体发酵菌粉对奶牛产奶量的影响(kg)

由表5可见，试验组和对照组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期减少，但减小幅度比对照组低。

试验结束时试验组低、中、高剂量组的平均日产奶量与对照组比较均有增加，分别增加0.44、1.08、2.64kg；在试验第8周时，产奶量差距显著，分别增加1.19、1.64、4.56kg；与对照组比较，产奶量分别提高1.15、2.83、6.91％。

试验结果表明：与对照组比较，地顶孢霉液体发酵菌粉能提高泌乳奶牛的产奶量，并且产奶量随着地顶孢霉液体发酵菌粉添加量的增加而增加，提示大剂量添加将能更好增加产奶量。

(6)地顶孢霉液体发酵菌液对奶牛产奶量的影响

饲喂期间，每日分别记录试验组和对照组每头奶牛的产奶量，计算周平均日产奶量，结果见表6。

表6 地顶孢霉液体发酵菌液对奶牛产奶量的影响(kg)

由表6可见，试验组和对照组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期减少，但减小幅度比对照组低。

试验结束时试验组低、中、高剂量组的平均日产奶量与对照组比较均有增加，分别增加-0.04、0.83、2.28kg；在第8周时，产奶量差距显著，分别增加1.19、1.64、4.56kg；与对照组比较，产奶量分别提高-0.10、2.17、5.97％。

试验结果表明：与对照组比较，地顶孢霉液体发酵菌液能提高泌乳奶牛的产奶量，并且产奶量随着地顶孢霉液体发酵菌液添加量的增加而增加，提示大剂量添加将能更好增加产奶量。

以上三种不同的地顶孢霉培养物(菌液、菌粉、固体培养物)试验结果显示，与对照组比较，三者都有增加奶牛产奶量的作用，随着添加量的增加而增加。同时看出，同等剂量情况下，地顶孢霉固体培养物提高产奶量的作用更强。

3、虫草欣康(地顶孢霉培养物)对牛乳的主要营养成分的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。

在试验期的第0、10、20、30、40、50、60、70天时，分别测定试验组、对照组所产牛乳中的脂肪、蛋白质含量。

(1)地顶孢霉固体培养物对牛乳的主要营养成分的影响

结果见表7。

表7 地顶孢霉固体培养物对牛乳的主要营养成分的影响

由表7可见，与试验前相比，试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的脂肪含量有所下降。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的的脂肪含量比对照组分别高出10.59、16.95、17.80％。

试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量却比试验前有所上升。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的蛋白质含量比对照组分别高出6.18、12.37、14.09％。

与对照组比较，地顶孢霉固体培养物可以显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

(2)地顶孢霉液体发酵菌粉对牛乳的主要营养成分的影响

结果见表8。

表8 地顶孢霉液体发酵菌粉对牛乳的主要营养成分的影响

由表8可见，与试验前相比，试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的脂肪含量有所下降。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的的脂肪含量比对照组分别高出11.44、18.22、22.88％。

试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量却比试验前有所上升。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的蛋白质含量比对照组分别高出7.22、10.65、12.03％。

与对照组比较，地顶孢霉液体发酵菌粉可以显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

(3)地顶孢霉液体发酵菌液对牛乳的主要营养成分的影响

结果见表9。

表9 地顶孢霉液体发酵菌液对牛乳的主要营养成分的影响

由表9可见，与试验前相比，试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的脂肪含量有所下降。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的的脂肪含量比对照组分别高出8.47、13.56、17.37％。

试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量却比试验前有所上升。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的蛋白质含量比对照组分别高出6.53、11.34、12.03％。

与对照组比较，地顶孢霉液体发酵菌液可以显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

4、虫草欣康(地顶孢霉培养物)对牛乳体细胞数量的影响

在试验期的第0、10、20、30、40、50、60、70天时，测定试验组、对照组所产牛乳中的体细胞数量

(1)地顶孢霉固体培养物对牛乳体细胞数量的影响

结果见表10。

表10 地顶孢霉固体培养物对牛乳体细胞数量的影响

由表10可见，试验期第70天时，试验组低、中、高各剂量组所产奶牛中的体细胞数目相对对照组分别下降了52.33、69.65、71.40％。在试验期第50天之后，试验组中、高剂量组所产牛乳中体细胞降到20万/ml以下，而对照组均高于20万/ml，且随饲喂时间延长，牛乳中体细胞数有升高趋势。表明地顶孢霉固体培养物能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数。

(2)地顶孢霉液体发酵菌粉对牛乳体细胞数量的影响

结果见表11。

表11 地顶孢霉液体发酵菌粉对牛乳体细胞数量的影响

由表11可见，试验期第70天时，试验组低、中、高各剂量组所产奶牛中的体细胞数目相对对照组分别下降了50.78、66.34、69.84％。在试验期第50天之后，试验组中、高剂量组所产牛乳中体细胞降到20万/ml以下，而对照组均高于20万/ml，且随饲喂时间延长，牛乳中体细胞数有升高趋势。表明地顶孢霉液体发酵菌粉能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数。

(3)地顶孢霉液体发酵菌液对牛乳体细胞数量的影响

结果见表12。

表12 地顶孢霉液体发酵菌液对牛乳体细胞数量的影响

由表12可见，试验期第70天时，试验组低、中、高各剂量组所产奶牛中的体细胞数目相对对照组分别下降了49.81、65.18、70.23％。在试验期第50天之后，试验组中、高剂量组所产牛乳中体细胞降到20万/ml以下，而对照组均高于20万/ml，且随饲喂时间延长，牛乳中体细胞数有升高趋势。表明地顶孢霉液体发酵菌液能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数。

以上三种不同的地顶孢霉培养物试验结果显示，与对照组比较，试验组显著降低牛奶中体细胞，加大剂量能降到20万/ml以下，显示与剂量有关。

(4)相同饲养条件的两个养殖场牛乳中体细胞数量的比较

2013年饲喂试验结束后，在相同饲养条件下考察试验牛场(此前饲喂过含地顶孢霉固体发酵培养物和对照牛场(未饲喂过含地顶孢霉固体发酵培养物的饲料)中泌乳奶牛所产牛乳中体细胞的含量，结果见表13。

表13 相同饲养条件的两个养殖场牛乳中体细胞数量的比较

测定日期	对照牛场(万/ml)	试验牛场(万/ml)
			4月26日	34.4	24.1
4月27日	27.5	24.2
			4月30日	36.2	25.0
5月1日	32.6	20.4

5月2日	39.0	15.5
			5月3日	36.0	20.1
5月4日	41.0	18.9
			5月5日	43.0	21.0
5月7日	36.3	27.0
			5月8日	34.8	18.3
5月9日	40.1	17.6
			5月10日	44.7	13.5
5月12日	24.4	18.1
			5月13日	33.2	28.8
5月14日	32.0	15.4
			5月16日	47.1	22.1
5月17日	20.9	27.3
			5月18日	34.5	29.9
5月19日	37.7	22.5
			5月20日	35.4	32.4
5月21日	48.0	24.3
			5月22日	33.2	22.3
5月23日	37.6	17.4

由表13可见，饲喂试验结束后一个月内，试验牛场中奶牛所产牛乳的体细胞数维持在非常低的水平，在20万/ml左右浮动；而对照牛场中奶牛所产牛乳的体细胞数则在40万/ml左右；与对照牛场相比，试验牛场中奶牛所产牛乳的体细胞数显著降低，降幅为39.5％。表明虫草欣康不仅在饲喂期能有效改善奶牛健康状况，在饲喂期后较长时间内仍能持续发挥作用，将牛乳的体细胞数量维持在较低水平，在预防奶牛乳腺炎中具有突出表现。

(5)经济效益分析

据《泌乳与挤奶》【美】简.胡曼等著，石燕等译(中国农业大学出版社，2004，北京)等报道，牛乳中体细胞数量与奶牛乳区感染率和奶牛预期产奶量损失之间存在着下列关系(假定某牛群平均产奶量为7000kg/头，鲜奶价格为3.5元/kg),则该牛的鲜奶损失见表14。

表14 奶中体细胞数量与乳区感染率和预期产奶量损失之间的关系

由表14可见，在20万—50万/ml之间，牛乳中体细胞数量每上升3万/ml，乳区感染率约上升1％，产奶量下降约0.5％。由表13可知，试验牛场奶牛所产牛乳中体细胞数量平均为21.9万/ml，鲜奶损失几乎为零。而对照牛场奶牛所产牛乳中体细胞数量平均为36.2万/ml，则与试验牛场相比，对照牛场每头奶牛的损失鲜奶量为(36.2-21.9)/3×0.5％×7000＝166.83kg；如果不及时治疗，损失将进一步增加。

此外如果对照牛场的奶牛症状转变为临床型乳腺炎，不仅产奶量会迅速下降，还有增加药费支出(每头牛约200元)，加上使用抗生素之后需要弃奶7日的损失，估计对照牛场每头奶牛损失应该在2000元左右。

综上所述，应用虫草欣康改善牛群健康状况，降低牛乳中体细胞数，综合经济效益非常可观，且牛群健康状况良好。

实施例2 地顶孢霉培养物(虫草欣康)与其它添加剂组合在奶牛生产中的应用

采用上述地顶孢霉培养物与不同的饲料添加剂混合，制备成混合型饲料添加剂，可以和地顶孢霉培养物混合的添加剂很多，如：伽马氨基丁酸、益母草、金银花、连翘、蒲公英、防风等等。下面以伽马氨基丁酸和益母草为例说明地顶孢霉培养物能与各种饲料添加剂组合，在奶牛生产中应用。

取伽马氨基丁酸、益母草细粉(100目)，分别与地顶孢霉固体发酵培养物按照50:50的比例混合，制备成试验用混合型饲料添加剂，即：含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂、含益母草地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂。分别在10kg精料中添加试验物0.05％、0.1％、0.3％。对照组中平均每头成年奶牛日饲10kg饲料，饲料中不添加试验物。

1、含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响

饲喂期间，每日分别记录试验组和对照组每头奶牛的产奶量，计算周平均产奶量，试验结果见表15。

表15 含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对奶牛产奶量的影响(kg)

由表15可见，试验组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期增加，并且随着添加量的增加，产奶量增大，在试验结束时产奶量增加最大。对照组在试验期间的产奶量有所降低。

在试验第8周时试验组低、中、高剂量组的平均日产奶量与试验前产奶量比均有增加，分别增加1.79、2.64、3.59kg，对照组减少1.14kg。

试验结果表明：与对照组比较，添加伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂能提高泌乳奶牛的产奶量，并且产奶量随着添加量的增加而增加，提示大剂量添加将能更好增加产奶量。

2.含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂饲对牛乳的主要营养成分的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表16。

表16含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对牛乳的主要营养成分的影响

由表16可见，与试验前相比，试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的脂肪含量有所下降。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的的脂肪含量比对照组分别高出18.26、23.48、29.65％。

试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量却比试验前有所上升。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的蛋白质含量比对照组分别高出10.0、15.71、16.78％。

与对照组比较，添加伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合饲料添加剂可以显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

3.含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对牛乳体细胞数量的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表17.

表17 含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对牛乳体细胞数量的影响

由表17可见，试验期第70天时，试验组低、中、高各剂量组所产奶牛中的体细胞数目相对对照组分别下降了56.28、68.68、71.78％。在试验期第50天之后，试验组中、高剂量组所产牛乳中体细胞降到20万/ml左右，而对照组均高于20万/ml，且随饲喂时间延长，牛乳中体细胞数有升高趋势。表明含伽马氨基丁酸地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数；伽马氨基丁酸的加入不影响地顶孢霉培养物发挥其效能。

4.含益母草地顶孢霉培养物饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响

饲喂期间，每日分别记录试验组和对照组每头奶牛的产奶量，计算周平均产奶量，试验结果见表18。

表18 含益母草的型饲料添加剂对奶牛产奶量的影响(kg)

由表18可见，试验组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期增加，并且随着添加量的增加，产奶量增大，在试验结束时产奶量增加最大。对照组在试验期间的产奶量有所降低。

在试验第8周时试验组低、中、高剂量组的平均日产奶量与试验前产奶量比均有增加，分别增加1.61、2.76、3.44kg，对照组减少1.14kg。

试验结果表明：与对照组比较，添加益母草地地顶孢霉培养物混合饲料添加剂能提高泌乳奶牛的产奶量，并且产奶量随着添加量的增加而增加，提示大剂量添加将能更好增加产奶量。

5.含益母草地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂饲对牛乳的主要营养成分的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表19.

表19 含益母草地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对牛乳的主要营养成分的影响

由表19可见，与试验前相比，试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的脂肪含量有所下降。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的的脂肪含量比对照组分别高出13.91、27.39、39.56％。

试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量却比试验前有所上升。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的蛋白质含量比对照组分别高出12.5、22.5、26.78％。

与对照组比较，添加益母草地顶孢霉培养物混合饲料添加剂可以显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

6.含益母草地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对牛乳体细胞数量的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表20.

表20 益母草地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂对牛乳体细胞数量的影响

由表20可见，试验期第70天时，试验组低、中、高各剂量组所产奶牛中的体细胞数目相对对照组分别下降了59.87、70.96、75.04％。在试验期第50天之后，试验组中、高剂量组所产牛乳中体细胞降到20万/ml左右，而对照组均高于20万/ml，且随饲喂时间延长，牛乳中体细胞数有升高趋势。表明含益母草地顶孢霉培养物混合型饲料添加剂能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数。

实施例3 北冬虫夏草菌种培养物在奶牛生产中的应用

1、北冬虫夏草菌种培养基配方及其培养

(1)北冬虫夏草菌种：蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris)；

(2)培养基

①斜面培养基：PDA培养基，即马铃薯葡萄糖琼脂培养基。去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1g、琼脂20g、水1000ml。自然pH。

②液体种子培养基：蔗糖2.0％、蛋白胨0.4％、酵母浸出粉0.3％、玉米粉0.5％、MgS0₄7H₂O 0.02％、K₂HP0₄0.04％。自然pH.

③固体培养基：土豆淀粉83％、玉米粉10％，白砂糖2％、蛋白胨2％、蚕蛹粉2.5％、硫酸镁0.2％、柠檬酸铵0.2％、磷酸二氢钾0.1％、维生素B₁100mg、水PH值5-7.

(3)发酵方法：

①液体发酵

液体发酵：液体发酵控制参数为温度25℃，通气量1.00L/(L·min)，接种量10％，300L气升式发酵罐装液量67％，发酵时间84h。得到蛹草拟青霉菌液。

②固体发酵：将蛹草拟青霉菌液与固体培养基按照重量比15％搅拌接种，平铺在浅盘上发酵，物料厚度3cm，温度恒定25℃，湿度70％，发酵时间168h左右，观察菌丝长满固体培养基，培养结束。

③干燥粉碎:收集蛹草拟青霉固体培养物，60℃热风干燥至水分降至8wt％以下，粉碎装袋，密封，避光储藏。

2、活性成份测定

表21 蛹草拟青霉固体培养物质量检验结果

检测项目	检测值
		水分％	7.1
蛋白质％	24.6
		虫草多糖％	3.2
腺苷mg/kg	420
		麦角甾醇mg/kg	280

3、蛹草拟青霉固体培养物喂泌乳奶牛及对产奶量的影响

取蛹草拟青霉固体培养物分别在奶牛10kg精料中添加试验物0.05、0.1、0.3％。对照组中平均每头成年奶牛日饲10kg饲料，饲料中不添加试验物。

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表22。

表22 蛹草拟青霉固体培养物对奶牛产奶量的影响(kg)

由表22可见，试验组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期增加，并且随着添加量的增加，产奶量增大，在试验结束时产奶量增加最大。对照组在试验期间的产奶量有所降低。

试验结果表明：与对照组比较，蛹草拟青霉固体培养物能提高泌乳奶牛的产奶量，并且产奶量随着添加量的增加而增加。但是同等剂量情况下，蛹草拟青霉固体培养物比地顶孢霉培养物的作用弱，提示：地顶孢霉培养物在奶牛中应用更佳。

4.蛹草拟青霉固体培养物对牛乳的主要营养成分的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表23。

表23 蛹草拟青霉固体培养物对牛乳的主要营养成分的影响

由表23可见，与试验前相比，试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的脂肪含量有所下降。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的的脂肪含量比对照组分别高出12.38、25.23、44.95％。

试验组各剂量组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量却比试验前有所上升。饲喂结束后，试验组低、中、高剂量组的蛋白质含量比对照组分别高出4.18、15.21、19.77％。

与对照组比较，蛹草拟青霉固体培养物可以显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

5.蛹草拟青霉固体培养物对牛乳体细胞数量的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表24。

表24 蛹草拟青霉固体培养物对牛乳体细胞数量的影响

由表24可见，试验期第70天时，试验组低、中、高各剂量组所产奶牛中的体细胞数目相对对照组分别下降了61.06、67.41、69.47％。在试验期第50天之后，试验组中、高剂量组所产牛乳中体细胞降到20万/ml左右，而对照组均高于20万/ml，且随饲喂时间延长，牛乳中体细胞数有升高趋势。表明蛹草拟青霉固体培养物能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数。

实施例4 其它虫草菌种培养物在奶牛生产中的应用

1、实验用虫草菌种

(1)冬虫夏草菌种：中国被毛孢(Synnematium sinense sp.)；

(2)亚香棒虫草菌种：霍克斯拟青霉(Paecilomyces hawkesii)；

(3)新疆虫草菌种：羽束梗孢霉(Paraisaria sp.)；

(4)大团虫草菌种：大团囊菌(Elaphomyces granulatus)；

(5)蝉花菌种：蝉白僵菌(Beauveria sobolifera)。

2、统一培养基配方及其培养

本实施例所用的培养基以及培养方法与实施例2“1、北冬虫夏草培养基配方及其培养”部分内容相同。

3、活性成份测定

表25 虫草培养物质量检验结果

注：虫草1为中国被毛孢(Synnematium sinense sp.)，虫草2为霍克斯拟青霉(Paecilomyces hawkesii)，虫草3为羽束梗孢霉(Paraisaria sp.)，虫草4为大团囊菌(Elaphomyces granulatus)，虫草5为蝉白僵菌(Beauveria sobolifera)，下同。

4、五种虫草菌种培养物喂泌乳奶牛及对产奶量的影响

取各虫草菌种培养物，分别在10kg奶牛精料中添加0.3％的试验物，此为实验组；对照组中平均每头成年奶牛日饲10kg饲料，饲料中不添加试验物。

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表26。

表26 各虫草菌种培养物对奶牛产奶量的影响(kg)

由表26可见，各虫草试验组奶牛在试验期内的日产奶量平均值均比预试期增加，不同虫草产奶量增加值有差异，在试验结束时产奶量增加最大，而对照组在试验期间的产奶量有所降低。

5.五种虫草菌种培养物对牛乳的主要营养成分的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表27、28。

表27 五种虫草菌种培养物对牛乳中脂肪含量的影响

由表27可见，与试验前相比，各试验组牛乳中脂肪含量基本保持不变或者略有上升，但对照组牛乳中的脂肪含量却有所下降。饲喂结束后，各试验组的脂肪含量比对照组分别高出6.50、3.54、1.77、8.26、7.96％。

表28 五种虫草菌种培养物对牛乳中蛋白含量的影响

由表28可见，各试验组和对照组奶牛所产牛乳中的蛋白质含量均比试验前有所上升，但各试验组的蛋白含量增幅比对照组大。饲喂结束后，各试验组的蛋白质含量比对照组分别高出13.86、8.99、7.49、6.74、4.49％。

由此可见，与对照组比较，五种虫草菌种培养物均可显著提高牛乳中的脂肪和蛋白质含量。

6.五种虫草菌种培养物对牛乳体细胞数量的影响

喂饲方法和试验组别设计同“2、虫草欣康(地顶孢霉培养物)饲喂泌乳奶牛及对产奶量的影响”项下方法。结果见表29。

表29 五种虫草菌种培养物对牛乳体细胞数量的影响

由表29可见，试验期第70天时，各试验组所产牛乳中的体细胞数目相对对照组分别下降了71.03、57.40、50.52、69.66、73.79％。表明各虫草菌种培养物均能有效改善奶牛健康状况，有效降低牛乳中体细胞数。

Claims

1.虫草属菌种发酵物在降低牛乳体细胞数量中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述牛乳中的体细胞数量少于2×10⁵个/ml。

3.虫草属菌种发酵物在提高奶牛产奶量中的应用。

4.虫草属菌种发酵物在制备预防奶牛乳腺炎的饲料中的应用。

5.如权利要求1～4任一所述的应用，其特征在于，包括：将所述虫草属菌种发酵物饲喂泌乳奶牛。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，以干重计，所述虫草属菌种发酵物的饲喂量为不少于5g/头/天。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述虫草属菌种发酵物是由虫草属真菌经液体发酵或固体发酵获得的。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述虫草属真菌为古尼虫草(Cordyceps.gunnii)菌种、冬虫夏草(C.sinensis)菌种、北冬虫夏草(C.militaris)菌种、亚香棒虫草(C.hawkesii)菌种、新疆虫草(C.gracilis)菌种、大团虫草(C.ophioglossoides)菌种或蝉花(C.sobolifera)菌种中的至少一种。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述虫草属真菌为地顶孢霉(Acremonium terricola)、中国被毛孢(Synnematium sinense sp.)、蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris)、霍克斯拟青霉(Paecilomyces hawkesii)、羽束梗孢霉(Paraisaria sp.)、大团囊菌(Elaphomyces granulatus)或蝉白僵菌(Beauveria sobolifera)中的至少一种。

10.一种提高奶牛产奶量、降低牛乳体细胞数量的方法，其特征在于，包括：将虫草属菌种发酵物饲喂泌乳奶牛，以干重计，所述虫草属菌种发酵物的饲喂量为不少于5g/头/天；

所述虫草属菌种发酵物是由虫草属真菌经液体发酵或固体发酵获得的。