CN103315191B - 一种猪用免疫增强剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种猪用免疫增强剂及其制备方法，属于饲料添加剂技术领域。本发明的猪用免疫增强剂组成为：酵母β-葡聚糖12-20份，杨树花提取物10-20份，竹笋壳提取物15-20份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉15-25份，蜂胶6-10份，γ-氨基丁酸2-5份，甘露寡糖1-4份，绿原酸3-5份。本发明经科学配伍，通过增强机体特异和非特异免疫功能及调控肠道免疫发育，提高机体的免疫水平，从而提高猪的健康度，提高饲料利用率，促进猪快速生长，是一种绿色安全高效的猪用免疫增强剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种免疫增强剂，尤其涉及一种猪用免疫增强剂及其制备方法。
背景技术
近年来，随着我国养猪业的迅速发展，集约化程度的提高，国内外畜禽贸易的日益频繁，疾病传播机会增加，传染病频繁流行，多种类型病原混合感染，免疫抑制性疾病危害加大，造成疫苗免疫效果不佳，严重影响了养猪业的发展。同时由于高密度的养殖及管理的不善，常会引发养殖动物的应激反应，导致机体的免疫系统受到抑制，造成疾病频发，给养殖户带来了巨大的经济损失。大量使用抗生素来确保动物健康成了大部分养殖户常采用的措施，而由此带来的是病原菌对抗生素耐性增强及肉制品质量的下降，这给人类健康带来了严重的影响。
酵母β-葡聚糖是一种天然免疫增强剂，能提高动物机体的免疫性能，减少各种应激反应，改善动物的健康状况。其作用主要通过以下几方面实现：1、通过活化胃肠组织中的嗜中性粒细胞和吞噬细胞，由此进一步活化和影响“免疫-神经-内分泌”调控网络，增强其抗感染、抗应激和细胞适应性保护能力，同时通过提高动物血清中溶菌酶的水平，提高机体抗体效价水平；2、由于酵母β-葡聚糖具有特殊的β-(1,3)键，它能与具有相应受体的吞噬细胞如吞噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞等结合，进而活化巨噬细胞，诱导巨噬细胞产生NO和IL-1等细胞因子，从而发挥免疫调节微生物作用；3、胶体态酵母β-葡聚糖可诱发机体表达O2和H2O2等活性氧，而活性氧家族可以杀灭有害微生物，对机体起保护作用。
杨树花提取物内含黄酮类和酚甙类化合物，具有明显的抗菌止痢、清热解毒、健脾养胃的功能，而且含有较丰富的营养物质，这些营养物质和生物活性物质可促进动物的生长发育，提高畜产品的产量和质量。
竹笋壳提取物含有没食子酸、表儿茶素、对香豆酸等酚类物质，具有抗氧化活性、抑菌活性及具有提高机体非特异性免疫水平。
产植酸酶枯草芽孢杆菌可提供植酸酶，提高有效磷利用率，缓解植酸影响动物对蛋白质的消化利用，同时兼具有益菌的作用，调节肠道菌群，促进肠道发育及提高机体免疫。
源自自然界的一些天然物质不仅具有良好的营养特性，同时还具有抗菌消炎、抗氧化、调节机体免疫功能等作用具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种效果显著、性能稳定的猪用免疫增强剂，以减少养猪生产中免疫力低造成的经济损失；提高猪的健康度，促进猪生长，同时减少抗生的使用，为消费者提供绿色安全的肉产品。
本发明提供的技术方案如下：
一种猪用免疫增强剂及其制备方法，由以下重量份数原料组成：酵母β-葡聚糖12-20份，杨树花提取物10-20份，竹笋壳提取物15-20份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉15-25份，蜂胶6-10份，γ-氨基丁酸2-5份，甘露寡糖1-4份，绿原酸3-5份。
所述杨树花提取物的制备方法如下：
取干燥的杨树花粉碎，过40目，置于容器中添加5-8倍量的水，控制温度90-100℃保持1-1.5h，过滤取滤液，再加入乙醇浓度至45％进行沉淀，得到的上清液，真空浓缩后冷冻干燥获得杨树花提取物。
所述竹笋壳提取物的制备方法：取干燥的竹笋壳粉碎，过40目筛，置于容器中加入30倍量的65％的乙醇，控制温度80-90℃保持2-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥即获得竹笋壳提取物。
所述产植酸酶枯草芽孢杆菌制备方法如下：产植酸酶枯草芽孢杆菌经接种发酵培养获得发酵液，发酵液真空冷冻干燥获得产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉。
所述产植酸酶枯草芽孢杆菌发酵培养基组成为：重量百分比，蔗糖5％，葡萄糖2％，竹笋壳提取物0.8％，酵母β-葡聚糖0.2％，蛋白胨0.4％，大豆蛋白粉0.6％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，不足部分纯净水补足，pH6.0。
本发明产品制备方法如下：
将酵母β-葡聚糖、杨树花提取物、竹笋壳提取物、真空冷冻干燥法制备的产植酸酶枯草芽孢杆菌制剂、蜂胶、γ-氨基丁酸、甘露寡糖和绿原酸混合均匀。
本发明制得的猪用免疫增强剂在每吨饲料中的添加量为1.5-2.0kg。
有益效果：
酵母β-葡聚糖是从酵母菌中提取的一种具有多种生物学活性的物质，由酵母β-(1,3)-葡聚糖和β-(1,6)-葡聚糖组成，两者比例为85:15。作为免疫激活剂可以有效的提高动物血清中溶菌酶的水平，提高机体抗体效价水平；还可活化巨噬细胞，诱导巨噬细胞产生NO和IL-1等细胞因子，从而发挥免疫调节微生物作用。杨树花提取物具有清热解毒、健脾养胃、化湿和止痢，提高消化酶活性，抑制大肠杆菌和沙门菌的梳理，提高乳酸杆菌的数量发功能。竹笋壳提取物含有没食子酸、表儿茶素、对香豆酸等酚类物质，具有抗氧化活性及提高机体非特异性免疫水平的作用。通过科学配比，可有效提高机体的免疫力具有良好效果。产品中添加了产植酸酶枯草芽孢杆菌菌剂，产植酸酶枯草芽孢杆菌在发酵过程中有效吸收了竹笋壳提取物和酵母β-葡聚糖活性成分，有效增强了其产植酸酶的能力，同时实现了组分疗效的有益叠加。本发明产品可有效增强猪的免疫力，促进猪的健康生长，还具有提高饲料利用率，降低饲料成本，提高养殖效益。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明产品组成及工艺。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中分离提取条件进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
本发明所用的产植酸酶枯草芽孢杆菌菌种购于中国工业微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为B10333。
产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉的制备：
1、发酵液的获得：采用斜面菌种逐级扩培获得产植酸酶枯草芽孢杆菌发酵液；
(1)一级种子培养：将保藏的的产植酸酶枯草芽孢杆菌斜面菌种接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床160转/分，培养温度为30℃，培养时间为24小时；
(2)二级种子培养：将一级种子按照10％的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；
(3)三级种子培养：将二级种子以10％接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床120转/分，培养稳定为30℃，培养时间24小时；
(4)一级种子罐培养：将三级种子以10％接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量为100L，培养温度28℃，搅拌速度110转/分，通风量(V/V)1:0.5，罐压为0.05Mpa，培养时间24小时
(5)发酵培养：将一级种子罐菌种以10％接种量接入总容积为1.5吨的二级种子罐，发酵培养基装量为1吨，培养温度28℃，搅拌速度110转/分，通风量(V/V)1:0.5，罐压为0.05Mpa，培养时间24小时，培养结束菌浓度在11×108个/ml。
(6)离心分离：采用离心机分离获得菌体。
(7)真空冷冻干燥：添加保护剂后采用真空冷冻干燥工艺处理获得干粉菌剂，保护剂组成为脱脂奶10％、乳糖5％、甘油5％。真空冷冻干燥工艺参见中国科学院微生物研究所编著菌种保藏手册，1980年出版，第610-653页。
本发明斜面培养基重量百分比组成为：马铃薯(煮汁)20％，葡萄糖2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，琼脂2.0％，不足部分纯净水补足。
本发明中一级种子、二级种子、三级种子、一级种子罐、二级种子罐培养基重量百分比组成均为：蔗糖5％，葡萄糖2％，蛋白胨0.4％，大豆蛋白粉0.6％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，不足部分纯净水补足，pH6.0。
所述产植酸酶枯草芽孢杆菌发酵培养基组成为：重量百分比，蔗糖5％，葡萄糖2％，竹笋壳提取物0.8％，酵母β-葡聚糖0.2％，蛋白胨0.4％，大豆蛋白粉0.6％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，不足部分纯净水补足，pH6.0。
实施例1
一种猪用免疫增强剂及其制备方法，有以下重量份数的原料组成：一种猪用免疫增强剂及其制备方法，由以下重量份数原料组成：酵母β-葡聚糖12份，杨树花提取物10份，竹笋壳提取物15份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉15份，蜂胶6份，γ-氨基丁酸2份，甘露寡糖1份，绿原酸3份。
所述杨树花提取物的制备方法如下：
取干燥的杨树花粉碎，过40目，置于容器中添加5倍量的水，控制温度90℃保持1h，过滤取滤液，再加入乙醇浓度至45％进行沉淀，得到的上清液，真空浓缩后冷冻干燥获得杨树花提取物。
所述竹笋壳提取物的制备方法：取干燥的竹笋壳粉碎，过40目筛，置于容器中加入30倍量的65％的乙醇，控制温度80℃保持2h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥即获得竹笋壳提取物。
制备方法：将酵母β-葡聚糖、杨树花提取物、竹笋壳提取物、真空冷冻干燥法制备的产植酸酶枯草芽孢杆菌制剂、蜂胶、γ-氨基丁酸、甘露寡糖和绿原酸混合均匀即得。
本发明制得的猪用免疫增强剂在每吨饲料中的添加量为1.5kg。
实施例2
一种猪用免疫增强剂及其制备方法，有以下重量份数的原料组成：一种猪用免疫增强剂及其制备方法，由以下重量份数原料组成：酵母β-葡聚糖18份，杨树花提取物15份，竹笋壳提取物18份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉20份，蜂胶8份，γ-氨基丁酸3份，甘露寡糖2.5份，绿原酸4份。
所述杨树花提取物的制备方法如下：
取干燥的杨树花粉碎，过40目，置于容器中添加6倍量的水，控制温度95℃保持1.25h，过滤取滤液，再加入乙醇浓度至45％进行沉淀，得到的上清液，真空浓缩后冷冻干燥获得杨树花提取物。
所述竹笋壳提取物的制备方法：取干燥的竹笋壳粉碎，过40目筛，置于容器中加入30倍量的65％的乙醇，控制温度85℃保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥即获得竹笋壳提取物。
制备方法：同实施例1.
本发明制得的猪用免疫增强剂在每吨饲料中的添加量为1.8kg。
实施例3
一种猪用免疫增强剂及其制备方法，有以下重量份数的原料组成：一种猪用免疫增强剂及其制备方法，由以下重量份数原料组成：酵母β-葡聚糖20份，杨树花提取物20份，竹笋壳提取物20份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉25份，蜂胶10份，γ-氨基丁酸5份，甘露寡糖4份，绿原酸5份。
所述杨树花提取物的制备方法如下：
取干燥的杨树花粉碎，过40目，置于容器中添加8倍量的水，控制温度100℃保持1.5h，过滤取滤液，再加入乙醇浓度至45％进行沉淀，得到的上清液，真空浓缩后冷冻干燥获得杨树花提取物。
所述竹笋壳提取物的制备方法：取干燥的竹笋壳粉碎，过40目筛，置于容器中加入30倍量的65％的乙醇，控制温度90℃保持4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥即获得竹笋壳提取物。
制备方法：同实施例1
本发明制得的猪用免疫增强剂在每吨饲料中的添加量为2.0kg。
采用实施例2制备的猪用免疫增强剂做以下验证。
试验方法：
试验动物选择广南(湛江)家丰饲料有限公司下属养殖场平均体重为(6.98±0.12)kg的健康断奶仔猪120头，经统计分析体重差异不显著。采用单因子随机化设计，将120头健康断奶仔猪，按公母各半，分成2组(对照组和试验组)，每组6个重复，每个重复10头猪。试验组添加实施例2制得的本发明产品，对照组不添加本发明产品。连续饲喂15天，与对照组相比，使用发明饲料添加剂可获得如下效果：
| 项目 | 对照组 | 试验组 | 偏差 |
| 始重(kg) | 7.04 | 6.92 | -- |
| 末重(kg) | 10.94 | 11.36 | -- |
| 日增重(g/d﹒头) | 260 | 296 | 13.8％ |
| 日采食量(g/d﹒头) | 364.0 | 373.0 | 2.5％ |
| 料肉比 | 1.40 | 1.26 | -10.0％ |
| 腹泻率(％) | 15.4 | 2.4 | -84.4％ |
| 呼吸道疾病发病率(％) | 28.5 | 3.1 | -89.1％ |
试验结果表明，在断奶仔猪日粮中添加本产品，仔猪的日增重比对照组有较大提高；料肉比有明显降低；仔猪腹泻率和呼吸道疾病发病率显著降低。
本发明例2饲料添加剂在哺乳母猪中的使用效果试验
在广南(湛江)家丰饲料有限公司下属猪场进行了为期21天的饲喂试验。试验采用单因素对比设计，随机选取30头健康的、产仔头数与出生均重相近的、胎次均为2或3胎的哺乳母猪，随机分为2组(即试验组和对照组)，每组15个重复。其中：试验组日粮添加由实施例2制备得的本产品，对照组不添加本发明产品。记录仔猪断奶重、死亡率、腹泻率和呼吸道疾病发病率。
| 项目 | 对照组 | 试验组 | 备注 |
| 平均产活仔数(头数) | 10.8 | 11.2 | -- |
| 出生均重(kg) | 1.46 | 1.48 | -- |
| 21天平均断奶仔猪(头) | 9.1 | 10.6 | 16.5％ |
| 死亡率％ | 15.4 | 5.0 | -67.5％ |
| 21天断奶窝重(kg) | 63.9 | 78.5 | 22.7％ |
| 21天断奶均重(kg) | 7.02 | 7.41 | 5.5％ |
| 腹泻率(％) | 12.6 | 3.4 | -73.0％ |
| 呼吸道疾病发病率(％) | 26.3 | 3.2 | -87.8％ |
试验结果表明，在哺乳母猪日粮中添加本产品，产猪仔的体重比对照组有较大提高；仔猪腹泻率和呼吸道疾病发病率显著降低。
以上两例试验表明：本发明产品可改善母猪和仔猪机体免疫能力，显著降低仔猪腹泻率和呼吸道疾病发病率，提高养殖质量和效益。
Claims (8)
1.一种猪用免疫增强剂，由以下重量份的原料组成：
酵母β-葡聚糖12-20份，杨树花提取物10-20份，竹笋壳提取物15-20份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉15-25份，蜂胶6-10份，γ-氨基丁酸2-5份，甘露寡糖1-4份，绿原酸3-5份；
所述杨树花提取物的制备方法如下：取干燥的杨树花粉碎，过40目，置于容器中添加5-8倍量的水，控制温度90-100℃保持1-1.5h，过滤取滤液，再加入乙醇浓度至45%进行沉淀，得到的上清液，真空浓缩后冷冻干燥获得杨树花提取物；
所述竹笋壳提取物的制备方法：取干燥的竹笋壳粉碎，过40目筛，置于容器中加入30倍量的65%的乙醇，控制温度80-90℃保持2-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥即获得竹笋壳提取物；
所述产植酸酶枯草芽孢杆菌制备方法如下：产植酸酶枯草芽孢杆菌经接种发酵培养获得发酵液，发酵液真空冷冻干燥获得产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉。
2.如权利要求1所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于：所述产植酸酶枯草芽孢杆菌发酵培养基组成为：重量百分比，蔗糖5%，葡萄糖2%，竹笋壳提取物0.8%，酵母β-葡聚糖0.2%，蛋白胨0.4%，大豆蛋白粉0.6%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.1%，不足部分纯净水补足，pH6.0。
3.如权利要求1所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于由以下重量份数的原料组成：酵母β-葡聚糖18份，杨树花提取物15份，竹笋壳提取物18份，产植酸酶枯草芽孢杆菌菌粉20份，蜂胶8份，γ-氨基丁酸3份，甘露寡糖2.5份，绿原酸4份。
4.如权利要求1或3所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于：所述杨树花提取物的制备方法如下：取干燥的杨树花粉碎，过40目，置于容器中添加6倍量的水，控制温度95℃保持1.25h，过滤取滤液，再加入乙醇浓度至45%进行沉淀，得到的上清液，真空浓缩后冷冻干燥获得杨树花提取物。
5.如权利要求1或3所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于：所述竹笋壳提取物的制备方法：取干燥的竹笋壳粉碎，过40目筛，置于容器中加入30倍量的65%的乙醇，控制温度85℃保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥即获得竹笋壳提取物。
6.如权利要求1或3所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于其制备方法：将酵母β-葡聚糖、杨树花提取物、竹笋壳提取物、真空冷冻干燥法制备的产植酸酶枯草芽孢杆菌制剂、蜂胶、γ-氨基丁酸、甘露寡糖和绿原酸混合均匀。
7.如权利要求1所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于：在每吨猪饲料中的添加量为1.5-2.0kg。
8.如权利要求7所述的一种猪用免疫增强剂，其特征在于：在每吨猪饲料中的添加量为1.8kg。
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