CN114097944A - 一种中药多糖饲料添加剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药多糖饲料添加剂及制备方法和应用,这种中药多糖饲料添加剂由下述重量份数的成份组成:乳铁蛋白5‑10份、中链甘油三酯3‑5份,β葡聚糖10‑15份、槟榔多糖20‑40份、牛大力多糖10‑30份、红芪多糖10‑30份、绿葡萄藻多糖20‑50份、枯草芽孢杆菌发酵产物20‑40份。本发明提供的一种中药多糖饲料添加剂,用于生猪养殖,可预防猪瘟、非洲猪瘟、高致病性猪蓝耳病等烈性病毒性传染病。
Description
技术领域
本发明涉及饲料添加剂技术领域,具体涉及一种中药多糖饲料添加剂及其制备和应用。
背景技术
中国是世界公认的生猪养殖大国,如何有效预防疫病,是我国养猪生产面临的一个主要问题,其中猪瘟、非洲猪瘟、高致病性猪蓝耳病等烈性病毒性传染病是危害养殖业的大敌。我国自2018年8月爆发非洲猪瘟以来,迅速蔓延到全国,造成极其惨重的损失,一场始料不及的非瘟造成各种肉类蛋白大幅涨价,直接导致2019年中国的CPI比同期上升0.5%,极大影响了十几亿人口的生活水平。后非洲猪瘟时代,防控非洲猪瘟与产业稳定发展需同时进行。虽然国家出台了支持生猪发展的一系列优惠政策,但由于没有疫苗及药物的防控保障,仍然存在不敢养、养不活的问题,难以消除非洲猪瘟给养猪业带来的威胁和恐惧。在病毒肆虐而缺乏有效防控疫苗和药物的情况下,急需研究以中药及天然成分为主的猪瘟防控饲料产品。
发明内容
本发明提供一种用于预防非洲猪瘟、猪瘟、猪蓝耳病的中药多糖饲料添加剂,包括如下重量份的各组分:乳铁蛋白5-10份、中链甘油三酯3-5份,β葡聚糖10-15份、槟榔多糖20-40份、牛大力多糖10-30份、红芪多糖10-30份、绿葡萄藻多糖20-50份、枯草芽孢杆菌发酵产物20-40份。
其中优选的是,包括如下重量份的各组分:乳铁蛋白7份、中链甘油三酯5份,β葡聚糖11份、绿葡萄藻多糖40份、槟榔多糖30份、牛大力多糖20份、红芪多糖20份、枯草芽孢杆菌发酵产物30份。
并提供上述中药多糖饲料添加剂的制备方法,包括如下步骤:
S1将枯草芽孢杆菌经两次扩大培养得种液,将种液接种至发酵培养基中于pH6.5-pH7.5、溶解氧60-70%、37度条件下发酵培养30-40小时,再调整发酵条件为pH4-pH4.5、溶解氧10-20%、37度培养6-10小时后将发酵液回调pH至7,并同时匀速流加发酵液体积2%-5%的0.1mol/L氯酸钠,离心、烘干得发酵粉;
S2制备槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖;
S3将配方量的乳铁蛋白、中链甘油三酯、β葡聚糖、槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖、枯草芽孢杆菌发酵产物进行混合即得。
上述任一方案中优选的是,发酵培养基组份为每升水中含葡萄糖50g、蛋白胨20g、酵母粉10g、三水合磷酸二氢钾5g、氯化钠1g、硫酸镁2g、硫酸铵1.5g。
上述任一方案中优选的是,步骤S2中牛大力多糖的制备方法为:将牛大力切片,8倍重量水量,加热至90℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积10%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
上述任一方案中优选的是,步骤S2中槟榔多糖的制备方法为:将新鲜槟榔果洗净直接进行物理压榨,经过过滤收集果汁,收集残渣,向残渣加5倍水量80度下提取3小时,过滤得提取液;合并提取液和果汁,减压浓缩至原体积20%,加入乙醇使乙醇含量为80%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
上述任一方案中优选的是,步骤S2中红芪多糖的制备方法为:将红芪切片,8倍重量水量,加热至95℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积15%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
上述任一方案中优选的是,步骤S2中绿葡萄藻多糖的制备方法为:将新鲜的绿葡萄藻淡水洗净,破碎后加入5倍重量水量,加热至40度,提取8h,过滤,将滤液减压浓缩至原体积20%;冷却至室温,加入乙醇使含醇量为85%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
上述任一方案中优选的是,一次扩大培养:将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中LB培养基中30-37度、200-400rpm条件下培养24h,LB培养基初始pH7,得一级种子液;
二次扩大培养:将一级种子液再次接种至LB培养基中扩大培养,30-37度、200-400rpm条件下培养12h,接种量为LB培养基体积5-10%,得种液。
本发明的有益效果为:本发明提供的一种中药多糖饲料添加剂,主要成分含有乳铁蛋白、中链甘油三酯、β葡聚糖、中药多糖添加剂和枯草芽孢杆菌发酵产物,协同增效,能显著提高猪的机体免疫力,拌食猪饲料用于生猪养殖,内调外疏,能提高生猪的非特异免疫和特异性免疫,从而降低猪瘟、非洲猪瘟、高致病性猪蓝耳病等病毒感染对机体的危害,增加机体抗病能力,达到预防效果。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明,但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
本发明提供一种用于预防非洲猪瘟的中药多糖添加剂,其包括如下重量份的各组分:乳铁蛋白5-10份、中链甘油三酯3-5份,β葡聚糖10-15份、槟榔多糖20-40份、牛大力多糖10-30份、红芪多糖10-30份、绿葡萄藻多糖20-50份、枯草芽孢杆菌发酵产物20-40份。
上述中药多糖添加剂的制备方法包括如下步骤:
1.将枯草芽孢杆菌经两次扩大培养得种液,具体为:
一次扩大培养:将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中30-37度、200-400rpm条件下培养24h,LB培养基初始pH7,得一级种子液;
二次扩大培养:将一级种子液再次接种至LB培养基中扩大培养,30-37度、200-400rpm条件下培养12h,接种量为LB培养基体积5-10%,得种液。
2.将种液接种至发酵培养基中于pH6.5-7.5、溶解氧60-70%、37度条件下发酵培养30-40小时,搅拌转速300rpm,再加入1mol/L盐酸调整发酵条件为pH4、溶解氧10-20%、37度培养6-10小时后加入1mol/氢氧化钠将发酵液回调pH至7,搅拌转速500rpm,并同时匀速流加发酵液体积2%-5%的0.1mol/L氯酸钠;
其中,发酵培养基组份为每升水中含葡萄糖50g、蛋白胨20g、酵母粉10g、三水合磷酸二氢钾5g、氯化钠1g、硫酸镁2g、硫酸铵1.5g。
3.将发酵液离心、50度烘干得发酵粉;
4.制备槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖;
槟榔多糖的制备方法为:将新鲜槟榔果洗净直接进行物理压榨,经过过滤收集果汁,收集残渣,向残渣加5倍水量80度下提取3小时,过滤得提取液;合并提取液和果汁,减压浓缩至原体积20%,加入乙醇使乙醇含量为80%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
牛大力多糖的制备方法为:将牛大力切片,8倍重量水量,加热至90℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积10%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
红芪多糖的制备方法为:将红芪切片,8倍重量水量,加热至95℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积15%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
葡萄藻多糖制备方法为:将新鲜的绿葡萄藻淡水洗净,破碎后加入5倍重量水量,加热至40度,提取8h,过滤,将滤液减压浓缩至原体积20%;冷却至室温,加入乙醇使含醇量为85%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
5.将配方量的乳铁蛋白、中链甘油三酯、β葡聚糖、槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖、枯草芽孢杆菌发酵产物进行混合即得。
材料来源说明,枯草芽孢杆菌,北京中科质检生物技术有限公司ID183710,产品编号ZKCCT-020;其余材料均为市售,不再进一步说明。
实施例1
本实施例中的中药多糖添加剂包括如下重量份的各组分:包括如下重量份的各组分:乳铁蛋白7份、中链甘油三酯5份,β葡聚糖11份、槟榔多糖30份、牛大力多糖20份、红芪多糖20份、绿葡萄藻多糖40份、枯草芽孢杆菌发酵产物30份。
上述中药多糖添加剂的制备方法包括如下步骤:
1.将枯草芽孢杆菌经两次扩大培养得种液,具体为:
一次扩大培养:将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中LB培养基中35度、300rpm条件下培养24h,LB培养基初始pH7,得一级种子液;
二次扩大培养:将一级种子液再次接种至LB培养基中扩大培养,35度、300rpm条件下培养12h,接种量为LB培养基体积10%,得种液。
2.将种液接种至发酵培养基中于pH7、溶解氧70%、37度、搅拌转速300rpm条件下发酵培养35小时,再加入1mol/L盐酸调整发酵条件为pH4、溶解氧10%、37度、搅拌转速500rpm培养8小时后加入1mol/氢氧化钠将发酵液回调pH至7,并同时匀速流加发酵液体积4%的0.1mol/L氯酸钠;
其中,发酵培养基组份为每升水中含葡萄糖50g、蛋白胨20g、酵母粉10g、三水合磷酸二氢钾5g、氯化钠1g、硫酸镁2g、硫酸铵1.5g。
3.将发酵液离心、50度烘干得发酵粉;
4.制备槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖;
将新鲜槟榔果洗净直接进行物理压榨,经过过滤收集果汁,收集残渣,向残渣加5倍水量80度下提取3小时,过滤得提取液;合并提取液和果汁,减压浓缩至原体积20%,加入乙醇使乙醇含量为80%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
将牛大力切片,8倍重量水量,加热至90℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积10%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
将红芪切片,8倍重量水量,加热至95℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积15%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
将新鲜的绿葡萄藻淡水洗净,破碎后加入5倍重量水量,加热至40度,提取8h,过滤,将滤液减压浓缩至原体积20%;冷却至室温,加入乙醇使含醇量为85%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。S5将配方量的乳铁蛋白、中链甘油三酯、β葡聚糖、绿葡萄藻多糖、枸杞多糖、甘草多糖、枯草芽孢杆菌发酵产物进行混合即得。
实施例2
本实施例的中药多糖添加剂包括如下重量份的各个组份:乳铁蛋白5份、中链甘油三酯5份,β葡聚糖10份、槟榔多糖40份、牛大力多糖30份、红芪多糖30份、绿葡萄藻多糖50份、枯草芽孢杆菌发酵产物20份。
制备方法与实施例一的不同之处在于步骤S2如下:
将种液接种至发酵培养基中于pH6.5、溶解氧60%、37度条件下发酵培养30小时,再调整发酵条件为pH4、溶解氧15%、37度培养10小时后将发酵液回调pH至7,并同时匀速流加发酵液体积2%的0.1mol/L氯酸钠。
实施例3
本实施例的中药多糖添加剂包括如下重量份的各个组份:乳铁蛋白10份、中链甘油三酯3份,β葡聚糖15份、槟榔多糖20份、牛大力多糖10份、红芪多糖10份、绿葡萄藻多糖20份、枯草芽孢杆菌发酵产物40份。
制备方法与实施例一的不同之处在于步骤S2如下:
将种液接种至发酵培养基中于pH7.5、溶解氧70%、37度条件下发酵培40小时,再调整发酵条件为pH4.5、溶解氧20%、37度培养7小时后将发酵液回调pH至7,并同时匀速流加发酵液体积4%的0.1mol/L氯酸钠。
对比例1
本对比例中的中药多糖添加剂按重量份包括如下组份:槟榔多糖30份、牛大力多糖20份、红芪多糖20份、绿葡萄藻多糖40份、枯草芽孢杆菌发酵产物30份。
各个组份的制备方法同实施例一,与实施例一不同之处在于未加入乳铁蛋白、中链甘油三酯和β葡聚糖。
对比例2
本对比例中的中药多糖添加剂各个组份与实施例一相同。
本对比例与实施例一的区别在于枯草芽孢杆菌的发酵条件不同,其具体如下:将种液接种至发酵培养基中于pH7、溶解氧70%、37度、搅拌转速300rpm条件下发酵培养43小时,并于发酵过程最后7小时匀速流加发酵液体积4%的0.1mol/L氯酸钠;期间并未改变溶解氧以及pH值。
对比例3
本对比例的中药多糖添加剂各个组份与实施例一相同。
本对比例与实施例一的区别在于枯草芽孢杆菌的发酵条件不同,具体区别在于发酵后段并未流加氯酸钙。
对比例4
本对比例中多糖种类以及用量如下:牛大力多糖20份、红芪多糖20份、绿葡萄藻多糖40份。
其余组份与实施例一相同。
对比例5
本对比例中多糖种类以及用量如下:槟榔多糖30份、红芪多糖20份、绿葡萄藻多糖40份。
其余组份与实施例一相同。
对比例6
本对比例中多糖种类以及用量如下:槟榔多糖30份、牛大力多糖20份、绿葡萄藻多糖40份。
其余组份与实施例一相同。
对比例7
本对比例中多糖种类以及用量如下:槟榔多糖30份、牛大力多糖20份、红芪多糖20份。
其余组份与实施例一相同。
取上述实施例以及对比例制得的中药多糖添加剂验证对猪瘟(CSFV)的预防效果,包括如下四个验证试验:
验证试验一
试验步骤:
1.将悬浮细胞以1000细胞(100μL)每孔的密度加入96孔板,培养20h。
2.取实施例1至3和对比例1至7制得的多糖中药使用添加30%超纯水的DMEM进行配置,配置浓度2g/100ml,得测试液1-6。
3.将上述测试液分别对96孔板中生长的Vero细胞进行处理,处理浓度80μM,每个测试液4孔重复。
4.用新鲜培养基将病毒稀释到200TCID50/100μL。
5.将50μL猪瘟病毒稀释液加入96孔板中,培养72小时后观察记录每孔CPE程度(%)试验结果如下表所示:将悬浮细胞以1000细胞(100μL)每孔的密度加入96孔板,培养20h,加入80μM、30%超纯水的DMEM,后接种50μL病毒稀释液培养72小时,6孔重复作为对照。
6.记录统计,结果见表1。
验证试验二
1.选取220头阴性成年壮猪,其中200头每20头一组,分别喂食实施例1至3以及对比例1-7制得的中药多糖添加剂,给药组按基础粮的2%重量配给实施例一制得中药多糖添加剂,喂食两周,20头作为对照喂食基础粮。
2.取试验生猪血液样本离心获血清5ml。
3.将含有经过20h培养悬浮细胞(1000细胞/100μL每孔)的96孔板中加入上述上清80μM。
4.用新鲜培养基将猪瘟病毒稀释到200TCID50/100μL。
5.将50μL病毒稀释液加入96孔板中,培养72小时后观察记录每孔CPE程度(%)。
6.试验结果见表1。
表1猪瘟验证试验一、验证试验二
试验一 | CPE | 试验二 | CPE |
实施例1 | 3% | 实施例1 | 2% |
实施例2 | 6% | 实施例2 | 4% |
实施例3 | 4% | 实施例3 | 5% |
对比例1 | 5% | 对比例1 | 95% |
对比例2 | 95% | 对比例2 | 91% |
对比例3 | 92% | 对比例3 | 95% |
对比例4 | 4% | 对比例4 | 78% |
对比例5 | 7% | 对比例5 | 85% |
对比例6 | 3% | 对比例6 | 83% |
对比例7 | 4% | 对比例7 | 74% |
对照 | 96% | 对照 | 97% |
结合表1能够得出:
1.实施例1-3制得的中药多糖添加剂在验证试验一和二中均具有良好的病毒抑制效果。
2.由对比例1在两个验证试验的结果可以看出,本发明申请中的辅料(乳铁蛋白、中链甘油三酯,β葡聚糖)本身对病毒并无效果,但其在生猪体内能够起到转运有效物质的作用,使得生猪血清能够对病毒具有抑制效果。
3.对比例2-3在验证试验中能够看出,当改变发酵条件以及流程后,本实施例提供的中药多糖添加剂并不具备抑制病毒的效果。
4.由对比例4-7在验证试验一中的测试结果能够看出多糖添加物对病毒抑制效果并无影响,但在验证试验二中能够明显看出,这四种多糖无论缺少哪一种,其效果均明显不如实施例1至3制备的多糖,其可能在于多种多糖的配合作用能内调外疏,提高生猪的非特异免疫和特异性免疫,使生猪代谢循环加快。
验证试验三
将验证试验二中喂食实施例1至3制得的中药多糖添加剂生猪改喂基础粮,14d、21d、28d后取血清再次重复验证试验二中的测试,结果见表2.
表2添加剂预防时效试验
试验三 | 14d(CPE) | 21d(CPE) | 28d(CPE) |
实施例1 | 7% | 6% | 61% |
实施例2 | 3% | 6% | 58% |
实施例3 | 6% | 10% | 72% |
由表2数据可知,在停喂后其药效依然能够维持至少21天,因此在日常预防过程中,可以施行每间隔21天进行一次持续14天的混药喂食。
验证试验四
1.选择160头壮猪进行复养试验,地点海南某猪场,此前曾发生猪瘟。
2.对该批生猪进行猪瘟病毒检测,其中试剂盒使用莼试生物的猪瘟病毒/口蹄疫病毒通用型(CSFV/FMDV-U)核酸试剂盒,确保试验前该批生猪均为阴性。
3.选120头作为实验组:给药拌食两周,使用实施例1-3制得中药多糖添加剂按日喂粮重量的2%使用,两周后改喂基础粮。
选40头作为对照组:正常喂食同量基础粮。
4.于试验开始后7d、14d、28d统计生猪状态,并于36d进行病毒检测统计存活率,结果见表3。
表3猪瘟复养试验
由验证试验4可知,在使用了实施例1至3制得的多糖中药后,相对于对照组,试验组明显获得了对猪瘟病毒的抵抗力。
取上述实施例以及对比例制得的中药多糖添加剂验证对非洲猪瘟(ASFV)的预防效果,进行复养试验,试验步骤与方法猪瘟验证试验四相同,试剂盒使用上海研尊非洲猪瘟病毒核测试剂盒(荧光PCR法)-YZP963652,结果见表4.
表4非洲猪瘟复养试验
从表4可知,本发明提供的中药多糖添加剂对非洲猪瘟(ASFV)也具有良好的预防效果,对于数据结果分析参照猪瘟(CSFV)部分。
本发明人还实验性的进行了一次对于猪蓝耳病的复养试验:
1.选择70头壮猪进行复养试验,地点海南某猪场,此前曾发生猪蓝耳病。
2.对该批生猪进行猪蓝耳病病毒检测,试剂盒使用上海帛科生物技术有限公司猪蓝耳病病毒经典型(PRRSV-C)核酸试剂盒,确保试验前该批生猪均为阴性。
3.选60头作为实验组:给药拌食两周,使用实施例1-3制得中药多糖添加剂按日喂粮重量的2%使用,两周后改喂基础粮。
选10头作为对照组:正常喂食同量基础粮。
4.于试验开始后5d、10d、15d统计生猪状态,并于15d进行病毒检,结果见表7。
表7
组 | 症状(5d) | 症状(10d) | 症状(15d) | 病毒检测阳性(15d) | 阳性率% |
实施例1 | 1 | 3 | 6 | 6 | 30% |
实施例2 | 1 | 3 | 5 | 6 | 30% |
实施例3 | 0 | 5 | 8 | 9 | 45% |
对照 | 4 | 9 | 10 | 10 | 100% |
由表7可以发现,本发明提供的中药多糖添加剂对于预防猪蓝耳病也具有一定效果,对照组的10头生猪均感染该病毒,而实施例一直三制备的添加剂则感染率明显低于对照组。
Claims (10)
1.一种中药多糖饲料添加剂,其特征在于,包括如下重量份的各组分:乳铁蛋白5-10份、中链甘油三酯3-5份,β葡聚糖10-15份、槟榔多糖20-40份、牛大力多糖10-30份、红芪多糖10-30份、绿葡萄藻多糖20-50份、枯草芽孢杆菌发酵产物20-40份。
2.根据权利要求1所述的一种中药多糖饲料添加剂,其特征在于,包括如下重量份的各组分:乳铁蛋白7份、中链甘油三酯5份,β葡聚糖11份、槟榔多糖30份、牛大力多糖20份、红芪多糖20份、绿葡萄藻多糖40份、枯草芽孢杆菌发酵产物30份。
3.根据权利要求1或2所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1将枯草芽孢杆菌经两次扩大培养得种液,将种液接种至发酵培养基中于pH6.5-pH7.5、溶解氧60-70%、37度条件下发酵培养30-40小时,再调整发酵条件为pH4-pH4.5、溶解氧10-20%、37度培养6-10小时后将发酵液回调pH至7,并同时匀速流加发酵液体积2%-5%的0.1mol/L氯酸钠,离心、烘干得发酵粉;
S2制备槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖;
S3将配方量的乳铁蛋白、中链甘油三酯、β葡聚糖、槟榔多糖、牛大力多糖、红芪多糖、绿葡萄藻多糖、枯草芽孢杆菌发酵产物进行混合即得。
4.根据权利要求3 所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,发酵培养基组份为每升水中含葡萄糖50g、蛋白胨20g、酵母粉10g、三水合磷酸二氢钾5g、氯化钠1g、硫酸镁2g、硫酸铵1.5g。
5.根据权利要求3所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,步骤S2中槟榔多糖的制备方法为:将新鲜槟榔果洗净直接进行物理压榨,经过过滤收集果汁,收集残渣,向残渣加5倍水量80度下提取3小时,过滤得提取液;合并提取液和果汁,减压浓缩至原体积20%,加入乙醇使乙醇含量为80%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
6.根据权利要求3所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,步骤S2中牛大力多糖的制备方法为:将牛大力切片,8倍重量水量,加热至90℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积10%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
7.根据权利要求3所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,步骤S2中红芪多糖的制备方法为:将红芪切片,8倍重量水量,加热至95℃,提取4h,过滤,滤渣加4倍量水,提取1h,过滤,合并二次滤液,减压浓缩至原体积15%;浓缩液放至室温,加入乙醇使含醇量为75%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心除去沉淀,上清液经膜过滤得精提液,减压浓缩后,干燥即得。
8.根据权利要求3所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,步骤S2中绿葡萄藻多糖的制备方法为:将新鲜的绿葡萄藻淡水洗净,破碎后加入5倍重量水量,加热至40度,提取8h,过滤,将滤液减压浓缩至原体积20%;冷却至室温,加入乙醇使含醇量为85%,边加边搅拌,4℃静置12小时,离心得沉淀,沉淀烘干即得。
9.根据权利要求3所述中药多糖饲料添加剂的制备方法,其特征在于,
一次扩大培养:将枯草芽孢杆菌接种至LB培养基中LB培养基中30-37度、200-400rpm条件下培养24h,LB培养基初始pH7,得一级种子液;
二次扩大培养:将一级种子液再次接种至LB培养基中扩大培养,30-37度、200-400rpm条件下培养12h,接种量为LB培养基体积5-10%,得种液。
10.一种权利要求1或2所述的中药多糖饲料添加剂用于预防猪瘟、非洲猪瘟、猪蓝耳病。
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