CN104521560A - 一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法 - Google Patents

一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法，该方法包括以下步骤：1)分子鉴定：ITS扩增、产物测序-Blast同源数据比较、确定分类地位；2)母种：外源添加物对宾王菇母种菌丝生长的影响试验-培养条件，对宾王菇母种菌丝生长的影响试验，得出：椰汁+PDA培养基配方；3)原种：通过对液体培养基配方筛选研究：得出麦粒浸汁，土豆200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.15g，牛肉膏3g；4)栽培种；5)制种工艺；6)出菇培养基配方。本发明解决了宾王菇制种过程中因培养时间过长而导致污染率高的问题，从而提高宾王菇的生物学转化率。

Description

一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法
技术领域
本发明属于食用菌分类及菌种制作工艺技术领域，涉及一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法。
背景技术
现阶段宾王菇的分类仅局限于从形态和化学反应进行鉴定，结论为宾王菇属于伞菌目，白蘑科，离褶伞属的烟色离褶伞，本发明发现，宾王菇不单单为烟色离褶伞，还有荷叶离褶伞，从而更加明确了宾王菇的分类地位；现有技术的母种菌丝长满18×180mm的试管斜面培养基，需要15～18天；原种一般采用500ml罐头瓶草炭与玉米芯配方制作，培养一般需要45～60天；栽培种采用750ml罐头瓶制备，大约需要培养45～60天才能长满，污染率高。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法，通过分子鉴定手段，明确宾王菇系统分类学地位；通过改变宾王菇菌丝生长的环境条件，来加快宾王菇菌丝生长速度，缩短制种周期，解决宾王菇制种过程中因培养时间过长而导致污染率高的问题，从而提高宾王菇的生物学转化率。
其具体技术方案为：
一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法，包括以下步骤：
1)分子鉴定：ITS扩增---产物测序-Blast同源数据比较---确定分类地位；
2)母种：外源添加物香蕉对宾王菇母种菌丝生长的影响试验-培养条件对宾王菇母种菌丝生长的影响试验，得出培养基配方：土豆100g，香蕉100g，葡萄糖20g，牛肉膏4g，琼脂20g，水1000ml；培养条件为温度25℃～27℃，PH值为6～7。
3)原种：通过对液体培养基配方筛选研究：得出麦粒70g浸汁(浸泡12小时后，煮沸过滤取其汁液)，土豆200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.15g，牛肉膏3g，水1000ml；
4)栽培种：培养基配方：麦粒10％，草炭40％，玉米芯或秸杆30％，麦麸18％，石膏％，石灰1％；
5)制种工艺：母种-原种-栽培种；
6)出菇培养基配方：麦粒10％，草炭40％，玉米芯或秸杆30％，麦麸18％，石膏％，石灰1％。
优选地，所述浸汁麦粒的制备方法为：麦粒80g浸泡12小时后，煮沸过滤取其汁液。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1.通过分子鉴定，明确宾王菇的分类地位，更加有利于摸清宾王菇的生物学特性，提高制种成功率及生物学转化率。
2.通过母种培养条件及添加物的研究，发现宾王菇在土豆100g，香蕉100g，葡萄糖20g，牛肉膏4g，琼脂20g，水1000ml的培养基上，27℃培养，11天左右就能长满试管，污染率为0，培养时间缩短为5～8天；
3.通过原种由固体菌种转化为液体菌种，在对其培养基配方进行改良，发现宾王菇在麦粒浸汁培养基上，26℃，PH值为7.5的条件下培养，10～13天菌丝布满液体培养基内，污染率降低5～10％，培养时间缩短为30～45天；
4.通过栽培种培养基配方的研究，750ml罐头瓶制备栽培种，30～40天即可长满菌瓶，比原有技术缩短培养时间10～15天，污染率降低10～15％。
4.利用栽培种的培养基配方栽培出菇，生物学转化率由以前的54％提高到60％。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
2012年预计生产宾王菇菌种2000袋，3月5日开始接母种，3月11日接液体原种，3月24日接栽培种，到4月30日菌丝长满菌袋，从母种到栽培种共用时间56天，比常规接种方法缩短50多天，母种污染率为0，原种污染率0，栽培种污染率仅为3％，利用栽培种的培养基配方栽培出菇，生物学转化率由以前的54％提高到60％。
通过本发明，使母种菌丝生长速度大幅提高，10天长满试管斜面；原种由固体菌种改为液体菌种，优化培养基配方，10～13天即可制作好；栽培种30～40天菌丝长满菌瓶，从而大大缩短制种周期，减少因培养时间过长而造成的污染率。首次将分子标记技术应用到宾王菇分类上，通过ITS测序，明确宾王菇的分类地位，从而更加有针对性地研究宾王菇的种性，有利于解决宾王菇生物学转化率低的问题；通过改变宾王菇培养基配方展开对宾王菇生物学特性的研究，从而解决菌丝生长缓慢的问题，缩短制种周期，提高宾王菇制种成功率。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (2)

1.一种宾王菇分子鉴定及菌种生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)分子鉴定：ITS扩增、产物测序-Blast同源数据比较、确定分类地位；
2)母种：培养基配方为：土豆100g，香蕉100g，葡萄糖20g，牛肉膏4g，琼脂20g，水1000ml；培养条件为温度25℃～27℃，PH值为6～7；
3)原种：液体培养基配方为：浸汁麦粒70g，土豆200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.15g，牛肉膏3g，水1000ml；
4)栽培种：培养基配方为：麦粒10％，草炭40％，玉米芯或秸杆30％，麦麸18％，石膏％，石灰1％；
5)制种工艺：母种、原种、栽培种；
6)出菇培养基配方：麦粒10％，草炭40％，玉米芯或秸杆30％，麦麸18％，石膏％，石灰1％。
2.根据权利要求1所述的宾王菇分子鉴定及菌种生产方法，其特征在于，所述浸汁麦粒的制备方法为：麦粒80g浸泡12小时后，煮沸过滤取其汁液。
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