CN104498428A - 一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法 - Google Patents
一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104498428A CN104498428A CN201510002099.3A CN201510002099A CN104498428A CN 104498428 A CN104498428 A CN 104498428A CN 201510002099 A CN201510002099 A CN 201510002099A CN 104498428 A CN104498428 A CN 104498428A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- reoxygenation
- fluorocarbon emulsion
- box
- fluorocarbon
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
本发明提供了一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,然后在进气口通入氮气;将盒子放入37摄氏度培养箱中培养一段时间;将氟碳乳剂与培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液;将缺氧处理后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧。设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养。最后通过一定的表征手段检测细胞在氟碳乳剂作用下复氧的变化。
Description
技术领域
本发明涉及纳米材料的应用领域,具体地,涉及一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法。
背景技术
全氟碳化合物是碳氢化合物中的氢原子被氟原子全部取代后形成的一类环状或直链状有机化合物,由于碳原子与氟原子的强作用力,氟碳化合物具有非常好的稳定性。全氟碳化合物不溶于水,有很好的溶解非极性气体的功能,可以作为氧气和二氧化碳的运载体。生物医学应用上的氟碳化合物溶解氧能力为35-44mmol/L,溶解二氧化碳能力为200mmol/L,由于其具有良好的溶解或释放出氧的能力,氟碳化合物已被应用于以氟碳溶液为气体交换媒介的部分液体通气治疗急性呼吸窘迫综合征中,但是,虽然该方法能够改善呼吸窘迫症患者的肺顺应性和氧合情况,却也容易引起额外肺损伤,且应用必须在医院中进行。而采用吸入通气,不仅可以改善肺顺应性和氧合情况,也能减轻肺部炎症反应(解放军医学杂志,2009,34:746),具有潜在的研究价值。该方法的相关报道较少,仍需进一步研究。
目前,对于细胞的缺氧模型的建立已经有许多研究,而对于细胞复氧的研究仍然不多。在细胞缺氧后,采用氟碳乳剂作用下进行复氧的研究更少,或者相关报道采用的所采用的仪器复杂,要求较高,不存在广泛的普适性。
发明内容
针对现有领域的不足,本发明的目的是提供一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法。该方法操作简便,设备要求低,实验结果稳定,为研究外源性的携氧物质对细胞缺氧以后复氧效果的影响提供了实验方案。
为实现这样的目的,本发明采用如下技术方案:
一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于该方法的具体步骤为:
a.缺氧模型的建立:采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,然后在进气口通入氮气;
b.将盒子放入37摄氏度培养箱中培养一段时间;
c.将氟碳乳剂与含培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液;
d.将缺氧后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧。
e.设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养。最后通过一定的表征手段检测细胞在氟碳乳剂作用下复氧后的变化。
优选地,上述自制的密闭盒子,其进气口应在上方,出气口应该下方,能更有效的排尽盒子内的氧气。
优选地,上述细胞放入密闭盒子做缺氧处理前,应将培养基换成无血清培养基,以达到更好的缺氧效果。
优选地,上述密闭盒子中同氮气前,应在盒内敞口放一培养皿的水,以保证盒内足够的湿度,使实现结果更有效。
优选地,上述氮气通气时间应在10分钟以上。
优选地,上述缺氧培养时间应为4-24小时。
优选地,上述步骤c中的氟碳溶液浓度应控制在0.05mg/ml-1mg/ml(以氟碳含量计)之间,过低浓度没有效果,过高浓度会对细胞造成过大伤害,影响实验结果。
优选的,上述复氧时间应为2-12小时。
优选的,上述步骤e中的表征手段为检测细胞活性,细胞活性氧自由基含量,细胞内蛋白的表达等其中的至少一种。
与现有技术方案相比,本发明具有如下的有益效果:
本发明的优点在于模型建立方法简单,操作简便,设备要求低,实验结果稳定,为研究外源性的携氧物质对细胞缺氧以后复氧效果的影响提供了普适性的实验方案。
附图说明
图1为实施例1,2,3的细胞复氧图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1:
a.缺氧模型的建立:采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,换上无血清培养基,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,盒内敞口放一培养皿的水,然后在进气口通入氮气10分钟;
b.将盒子放入37摄氏度培养箱中培养4小时;
c.将氟碳乳剂与含培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液分别为0.1mg/ml,0.2 mg/ml,0.4 mg/ml;
d.将缺氧后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧2小时。
e.设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养。最后通过检测细胞活性研究在氟碳乳剂作用下复氧后活性的变化。
本实施例检测结果如图1所示。
实施例2:
a.缺氧模型的建立:采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,换上无血清培养基,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,盒内敞口放一培养皿的水,然后在进气口通入氮气10分钟;
b.将盒子放入37摄氏度培养箱中培养8小时;
c.将氟碳乳剂与含培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液分别为0.1mg/ml,0.2 mg/ml,0.4 mg/ml;
d.将缺氧后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧2小时。
e.设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养。最后通过检测细胞活性研究在氟碳乳剂作用下复氧后活性的变化。
本实施例检测结果如图1所示。
实施例3;
a.缺氧模型的建立:采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,换上无血清培养基,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,盒内敞口放一培养皿的水,然后在进气口通入氮气10分钟;
b.将盒子放入37摄氏度培养箱中培养24小时;
c.将氟碳乳剂与含培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液分别为0.1mg/ml,0.2 mg/ml,0.4 mg/ml;
d.将缺氧后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧2小时。
e.设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养。最后通过检测细胞活性研究在氟碳乳剂作用下复氧后活性的变化。
本实施例检测结果如图1所示。
实施例4:
a.缺氧模型的建立:采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,换上无血清培养基,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,然后在进气口通入氮气20分钟;
b.将盒子放入37摄氏度培养箱中培养12小时;
c.将氟碳乳剂与含培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液分别为0.1mg/ml,0.2 mg/ml,0.4 mg/ml;
d.将缺氧后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧2小时。
e.设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养。最后通过流式细胞检测细胞活性氧自由基含量研究在氟碳乳剂作用下复氧后的变化。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是,本发明并不局限于上述特定实施方式,本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改,这并不影响本发明的实质内容。
Claims (10)
1.一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,通过携氧的氟碳乳剂作用于细胞,可研究外源性的携氧物质对细胞缺氧以后复氧效果的影响。
2.根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,包括如下步骤:
a.缺氧模型的建立:采用自制的密闭盒子,保留一个进气口与出气口,细胞培养到一定浓度后,将细胞培养皿或培养板放入密闭盒子,然后在进气口通入氮气;
b.将盒子放入37摄氏度培养箱中培养一段时间;
c.将氟碳乳剂与培养基混合,配成不同浓度的氟碳溶液;
d.将缺氧后的细胞取出,吸去原培养基,分别换上d中所配的含氟碳培养基及不含氟碳的培养基,在正常氧含量条件下复氧;
e.设置一个对照组,始终在正常氧气条件下培养;
最后通过一定的表征手段检测细胞在氟碳乳剂作用下复氧的变化。
3.根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述自制的密闭盒子,其进气口应在上方,出气口应该下方,这样能更有效的排尽盒子内的氧气。
4.根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述细胞放入密闭盒子做缺氧处理前,应将培养基换成无血清培养基,以达到更好的缺氧效果。
5.根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述密闭盒子中通氮气前,应在盒内敞口放一培养皿的水,以保证盒内足够的湿度,使实现结果更有效。
6.根根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述氮气通气时间应在10分钟以上。
7.根根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述缺氧培养时间应为4-24小时。
8.根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述步骤c中的氟碳溶液浓度应控制在0.05mg/ml-1mg/ml(以氟碳含量计)之间,过低浓度没有效果,过高浓度会对细胞造成过大伤害,影响实验结果。
9.根根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述复氧时间应为2-12小时。
10.根据权利要求1所述一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法,其特征在于,所述步骤e中的表征手段为检测细胞活性,细胞活性氧自由基含量,细胞内蛋白的表达等其中的至少一种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510002099.3A CN104498428B (zh) | 2015-01-05 | 2015-01-05 | 一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510002099.3A CN104498428B (zh) | 2015-01-05 | 2015-01-05 | 一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104498428A true CN104498428A (zh) | 2015-04-08 |
CN104498428B CN104498428B (zh) | 2018-02-09 |
Family
ID=52939882
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510002099.3A Active CN104498428B (zh) | 2015-01-05 | 2015-01-05 | 一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104498428B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107043751A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-08-15 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种缺氧环境下细胞快速复氧的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101032514A (zh) * | 2006-03-11 | 2007-09-12 | 禹城科海生物工程有限公司 | 一种用于改善机体组织供氧溶液的制备方法 |
CN102395548A (zh) * | 2009-04-15 | 2012-03-28 | 奥斯金生医公司 | 全氟化碳类乳液 |
CN102406945A (zh) * | 2011-10-24 | 2012-04-11 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 氟碳化合物与环糊精包合物及其制备方法 |
CN103505416A (zh) * | 2013-09-24 | 2014-01-15 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种携氧氟碳乳剂及其制备方法 |
-
2015
- 2015-01-05 CN CN201510002099.3A patent/CN104498428B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101032514A (zh) * | 2006-03-11 | 2007-09-12 | 禹城科海生物工程有限公司 | 一种用于改善机体组织供氧溶液的制备方法 |
CN102395548A (zh) * | 2009-04-15 | 2012-03-28 | 奥斯金生医公司 | 全氟化碳类乳液 |
CN102406945A (zh) * | 2011-10-24 | 2012-04-11 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 氟碳化合物与环糊精包合物及其制备方法 |
CN103505416A (zh) * | 2013-09-24 | 2014-01-15 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种携氧氟碳乳剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
何佰永 等: "液态氟碳脂质微球靶向损伤心肌细胞的体外实验", 《生物医学工程学杂志》 * |
张艳美 等: "巨噬细胞缺氧复氧模型的制作方法及其生物学意义", 《汕头大学医学院学报》 * |
董华 等: "大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型的建立", 《山西医科大学学报》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107043751A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-08-15 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种缺氧环境下细胞快速复氧的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104498428B (zh) | 2018-02-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106085946B (zh) | 可以悬浮培养的猪睾丸细胞株st-s及其获得方法与应用 | |
CN205099688U (zh) | 一种低氧环境二氧化碳细胞培养箱 | |
CN206279212U (zh) | 一种细胞培养装置 | |
CN103642682B (zh) | 一种高效生物反应器及薯蓣皂苷高效生物水解方法 | |
CN107094752A (zh) | 一种肿瘤组织体外保存液及其制备方法 | |
CN104450519B (zh) | 一种精密控制培养液溶解氧浓度的细胞培养系统 | |
CN201065407Y (zh) | 体外细胞开放式压力程控培养装置 | |
CN104498428A (zh) | 一种氟碳乳剂应用于细胞复氧的模型建立方法 | |
CN204474690U (zh) | 精密控制培养液溶解氧浓度的细胞培养系统 | |
CN111793588B (zh) | 一种厌氧菌培养基及其制备方法 | |
CN108703019A (zh) | 一种灵芝的密封栽培箱及其栽培方法 | |
CN107794248A (zh) | 一种用微载体悬浮培养犬瘟热病毒的方法 | |
CN104025904B (zh) | 松茸菌丝的培养方法及其专用装置 | |
Tannock et al. | Variation of pO2 in the growth medium of spheroids: interaction with glucose to influence spheroid growth and necrosis. | |
CN109010814A (zh) | 副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法 | |
CN108866012A (zh) | 一种猪流行性腹泻病毒悬浮培养连续收毒生产方法 | |
CN103865885A (zh) | 猪细小病毒的培养方法 | |
CN106973793B (zh) | 一种三叶青快繁技术及用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基 | |
CN106222092A (zh) | 全氧式菌包杂交组培活性液体接种技术 | |
CN111450114A (zh) | 过氧化氢银离子复方消毒液及其制备方法 | |
CN111139236A (zh) | 一种粪便样品稳定液及其制备、使用方法 | |
CN107043751A (zh) | 一种缺氧环境下细胞快速复氧的方法 | |
CN104922695A (zh) | 一种长链非编码rna纳米微球的制备及其应用 | |
CN107151647A (zh) | 一种表皮细胞大规模培养方法 | |
CN114657118B (zh) | 一种2bs细胞在生物反应器内的多倍放大方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |