CN106973793B - 一种三叶青快繁技术及用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基 - Google Patents
一种三叶青快繁技术及用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种三叶青快繁技术及用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，包括如下步骤：(1)取三叶青外植体，将其用流水冲洗2～3小时；(2)将冲洗后的三叶青外植体用体积分数为60～70％的乙醇溶液浸泡1～3分钟；(3)将经酒精溶液浸泡的三叶青外植体使用0.1％氯化汞溶液冲洗1～2分钟；(4)将经氯化汞溶液消毒的三叶青外植体使用蒸馏水冲洗3～5次，并使用滤纸吸干其表面的水分；(5)将经上述消毒处理的三叶青外植体斜插入诱导培养基中培养。本发明可明显提高三叶青块根组织的成活率。本发明提供的三叶青快繁技术可快速得到三叶青的药效部位，缩短了三叶青生长周期，也可应用于三叶青大面积种植，有利于保护野生三叶青种质资源。
Description
技术领域
本发明属于组织培养领域，具体为一种三叶青快繁技术及用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基。
背景技术
三叶青是葡萄科多年生蔓生藤本植物，整株均可入药，地下块根药效更加。三叶青块根粗壮，一般常见有纺锤形、椭圆形或卵圆形。叶互生，叶柄2-4cm，掌状复叶。小叶片呈狭椭圆形至狭卵状椭圆形，长约3-7cm，宽约1.5-3cm。中央小叶较两侧者略大，叶缘具刺状疏齿，叶子两面都无毛，或仅在下面中脉上被毛。由于传统三叶青繁殖方式周期长、收益低，因此寻找一种快速繁殖三叶青的方法是亟待解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种三叶青快繁技术及用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，该光触媒诱导培养基可明显提高三叶青块根组织的成活率。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种三叶青快繁技术，包括如下步骤：
(1)取三叶青外植体，将其用流水冲洗2～3小时；
(2)将冲洗后的三叶青外植体用体积分数为60～70％的乙醇溶液浸泡1～3分钟；
(3)将经酒精溶液浸泡的三叶青外植体使用0.1％氯化汞溶液冲洗1～2分钟；
(4)将经氯化汞溶液消毒的三叶青外植体使用蒸馏水冲洗3～5次，并使用滤纸吸干其表面的水分；
(5)将经上述消毒处理的三叶青外植体斜插入诱导培养基中培养。
更加具体的，步骤(1)中冲洗时间为2小时。
作为优选，步骤(2)中乙醇溶液的体积分数为65％。
本发明还提供了一种用于三叶青组织培养的诱导培养基，按重量计，该诱导培养基包括如下组分：硝酸铵0.8-1.2g、磷酸二氢钾0.4-0.6g、氯化钠0.8-1.2g、葡萄糖1.2-1.4g、抗菌剂0.1-0.5g、氯化钙0.2-0.3g、甘氨酸0.04-0.06g、维生素0.04-0.08g、七水硫酸镁0.2-0.4g、纯净水80-100g、蔗糖1-3g、生长素0.01-0.02g、细胞分裂素0.03-0.05g、激动素0.01-0.02g以及玉米素0.01-0.02g。
作为优选，所述抗菌剂包括纳米二氧化钛、纳米氧化锌以及氨苄中的至少一种。
作为优选，所述维生素包括维生素B1和维生素B6中的至少一种。
作为优选，所述诱导培养基按重量计，包括如下组分：硝酸铵0.8-1.2g、磷酸二氢钾0.4-0.6g、氯化钠0.8-1.2g、葡萄糖1.2-1.4g、纳米二氧化钛0.2-0.3g、纳米氧化锌0.2-0.3g、氨苄0.01-0.03g、氯化钙0.2-0.3g、甘氨酸0.04-0.06g、维生素B1 0.02-0.04g、维生素B2 0.02-0.04g、七水硫酸镁0.2-0.4g、纯净水80-100g、蔗糖1-3g、生长素0.01-0.02g、细胞分裂素0.03-0.05g、激动素0.01-0.02g以及玉米素0.01-0.02g。
本发明所提供的培养基内含有植物组织培养过程中需要的无机营养物：七水硫酸镁、氯化钙、硝酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠；碳源：葡萄糖；有机附加物：甘氨酸和维生素；生长调节剂。上述五大类营养物质是植物组织生长过程中不可或缺的；
同时，0.8-1.2g硝酸铵为三叶青组织生长提供了充足的氮源，可以有效促进植物细胞中蛋白质、叶绿素以及核酸的生成；0.4-0.6g磷酸二氢钾也为三叶青组织细胞中生物膜、核苷酸以及核酸的形成提供了充足的磷元素，并且磷酸二氢钾所提供的钾元素可以促进氮素代谢以及碳水化合物的转移，从而加快了三叶青组织细胞的生长；0.2-0.3g氯化钙为三叶青组织细胞壁的生长提供了充足的钙元素；此外，该培养基还添加了七水硫酸镁作为镁源，加快叶绿素的形成；培养基内添加的有机附加物和生长调节剂可以促进三叶青组织快速生长。
更加具体地，上述诱导培养基，按重量计，包括如下组分：硝酸铵1.0g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠1.0g、葡萄糖1.3g、纳米二氧化钛0.25g、纳米氧化锌0.25g、氨苄0.02g、氯化钙0.25g、甘氨酸0.05g、生长素0.015g、细胞分裂素0.04g、激动素0.015g、玉米素0.015g、维生素B1 0.03g、维生素B2 0.03g、七水硫酸镁0.3g、蔗糖2g以及纯净水90g。
作为优选，上述诱导培养基还包括琼脂。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的三叶青快繁技术可快速得到三叶青的药效部位，缩短了三叶青生长周期，也可应用于三叶青大面积种植，有利于保护野生三叶青种质资源。
具体实施方式
下面采用具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细说明。
实施例1
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵0.8g、磷酸二氢钾0.4g、氯化钠0.8g、葡萄糖1.2g、纳米二氧化钛0.8g、纳米氧化锌0.2g、氨苄0.01g、氯化钙0.2g、甘氨酸0.04g、生长素0.01g、细胞分裂素0.03g、激动素0.01g、玉米素0.01g、维生素B1 0.02g、维生素B2 0.02g、七水硫酸镁0.2g、蔗糖1g以及纯净水80g。
对比例1-1
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵0.8g、磷酸二氢钾0.4g、氯化钠0.8g、葡萄糖1.2g、氯化钙0.2g、甘氨酸0.04g、纳米二氧化钛0.2g、纳米氧化锌0.2g、维生素B1 0.02g、维生素B2 0.02g、七水硫酸镁0.2g、蔗糖1g以及纯净水80g。
对比例1-2
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵0.8g、磷酸二氢钾0.4g、氯化钠0.8g、葡萄糖1.2g、纳米二氧化钛0.2g、纳米氧化锌0.2g，氯化钙0.2g、甘氨酸0.04g、生长素0.01g、细胞分裂素0.03g、激动素0.01g、玉米素0.01g、维生素B1 0.02g、维生素B2 0.02g、七水硫酸镁0.2g以及纯净水80g。
对比例1-3
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵0.8g、磷酸二氢钾0.4g、氯化钠0.8g、葡萄糖1.2g、氨苄0.01g、氯化钙0.2g、甘氨酸0.04g、生长素0.01g、细胞分裂素0.03g、激动素0.01g、玉米素0.01g、维生素B10.02g、维生素B2 0.02g、七水硫酸镁0.2g、蔗糖1g以及纯净水80g。
实施例2
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.0g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠1.0g、葡萄糖1.3g、纳米二氧化钛0.25g、纳米氧化锌0.25g、氨苄0.02g、氯化钙0.25g、甘氨酸0.05g、生长素0.015g、细胞分裂素0.04g、激动素0.015g、玉米素0.015g、维生素B1 0.03g、维生素B2 0.03g、七水硫酸镁0.3g、蔗糖2g以及纯净水90g。
对比例2-1
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.0g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠1.0g、葡萄糖1.3g、氯化钙0.25g、甘氨酸0.05g、纳米二氧化钛0.25g、纳米氧化锌0.25g、维生素B1 0.03g、维生素B2 0.03g、七水硫酸镁0.3g、蔗糖2g以及纯净水90g。
对比例2-2
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.0g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠1.0g、葡萄糖1.3g、纳米二氧化钛0.25g、纳米氧化锌0.25g，氯化钙0.25g、甘氨酸0.05g、生长素0.015g、细胞分裂素0.04g、激动素0.015g、玉米素0.015g、维生素B1 0.03g、维生素B2 0.03g、七水硫酸镁0.3g以及纯净水90g。
对比例2-3
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.0g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠1.0g、葡萄糖1.3g、氨苄0.02g、氯化钙0.25g、甘氨酸0.05g、生长素0.015g、细胞分裂素0.04g、激动素0.015g、玉米素0.015g、维生素B1 0.03g、维生素B2 0.03g、七水硫酸镁0.3g、蔗糖2g以及纯净水90g。
实施例3
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.2g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠1.2g、葡萄糖1.4g、纳米二氧化钛0.3g、纳米氧化锌0.3g、氨苄0.03g、氯化钙0.3g、甘氨酸0.06g、生长素0.02g、细胞分裂素0.05g、激动素0.02g、玉米素0.02g、维生素B1 0.04g、维生素B2 0.04g、七水硫酸镁0.4g、蔗糖3g以及纯净水100g。
对比例3-1
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.2g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠1.2g、葡萄糖1.4g、氯化钙0.3g、甘氨酸0.06g、纳米二氧化钛0.3g、纳米氧化锌0.3g、维生素B1 0.04g、维生素B2 0.04g、七水硫酸镁0.4g、蔗糖3g以及纯净水100g。
对比例3-2
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.2g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠1.2g、葡萄糖1.4g、纳米二氧化钛0.3g、纳米氧化锌0.3g，氯化钙0.3g、甘氨酸0.06g、生长素0.02g、细胞分裂素0.05g、激动素0.02g、玉米素0.02g、维生素B1 0.04g、维生素B2 0.04g、七水硫酸镁0.4g以及纯净水100g。
对比例3-3
本实施例提供一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，按重量比计，由以下物质组成：
硝酸铵1.2g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠1.2g、葡萄糖1.4g、氨苄0.03g、氯化钙0.3g、甘氨酸0.06g、生长素0.02g、细胞分裂素0.05g、激动素0.02g、玉米素0.02g、维生素B10.04g、维生素B2 0.04g、七水硫酸镁0.4g、蔗糖3g以及纯净水100g。
实施例4
本实施例在上述光触媒诱导培养基的基础上，提供一种三叶青快繁技术，包括如下步骤：
(1)取三叶青外植体，将其用流水冲洗2～3小时；
(2)将冲洗后的三叶青外植体用体积分数为60～70％的乙醇溶液浸泡1～3分钟；
(3)将经酒精溶液浸泡的三叶青外植体使用0.1％氯化汞溶液冲洗1～2分钟；
(4)将经氯化汞溶液消毒的三叶青外植体使用蒸馏水冲洗3～5次，并使用滤纸吸干其表面的水分；
(5)将经上述消毒处理的三叶青外植体斜插入诱导培养基中培养。
测试例1
将实施例1-实施例3编号为1～3，对比例1-1～1-3、对比例2-1～2-3以及对比例3-1～3-3所提供的培养基编号为a1～a3、b1～b3、c1～c3，将取自浙江农林大学实验基地的三叶青块根按照实施例4所提供的步骤处理后，分别接种至上述培养基上，每组分别设置20个对照实验组；
接种后将各培养基在26±1℃微光条件下培养20天，观察比较各培养基内三叶青块根组织细胞的生长情况统计如表1所示：
表1三叶青块根组织细胞生长情况统计表
Claims (3)
1.一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，其特征在于，按重量计，包括如下组分：硝酸铵0.8-1.2g、磷酸二氢钾0.4-0.6g、氯化钠0.8-1.2g、葡萄糖1.2-1.4g、纳米二氧化钛0.2-0.3g、纳米氧化锌0.2-0.3g、氨苄0.01-0.03g、氯化钙0.2-0.3g、甘氨酸0.04-0.06g、维生素B1 0.02-0.04g、维生素B2 0.02-0.04g、七水硫酸镁0.2-0.4g、纯净水80-100g、蔗糖1-3g、生长素0.01-0.02g以及细胞分裂素0.03-0.05g，激动素的重量为0.01-0.02g以及玉米素的重量为0.01-0.02g。
2.根据权利要求1所述的一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，其特征在于，按重量计，包括如下组分：硝酸铵1.0g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠1.0g、葡萄糖1.3g、纳米二氧化钛0.25g、纳米氧化锌0.25g、氨苄0.02g、氯化钙0.25g、甘氨酸0.05g、生长素0.015g、细胞分裂素0.04g、激动素0.015g、玉米素0.015g、维生素B1 0.03g、维生素B2 0.03g、七水硫酸镁0.3g、蔗糖2g以及纯净水90g。
3.根据权利要求1所述的一种用于三叶青组织培养的光触媒诱导培养基，其特征在于，还包括琼脂。
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| 三叶青茎段外植体组织培养体系的优化及印度梨形孢对其生长的影响;史清英;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20150515;第22页第1.2.1-1.2.3节，第24页第2.2-2.4节 |
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