CN104473988A - 千里光注射液及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及兽用注射液技术领域，特别涉及一种千里光注射液及其制备方法与应用。该千里光注射液含有千里光提取物，所述的千里光提取物为千里光60％乙醇提取物。本发明采用千里光千里光60％乙醇提取物作为有效部位制备千里光注射液，其操作简单，成本较低，可以应用于工业化大生产。制备得到的千里光注射液，具有良好的杀菌功效，对呼吸系和消化系混合性细菌感染的防治具有良好的效果，其有效治疗率达到93％。

Description

千里光注射液及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及兽用注射液技术领域，特别涉及一种千里光注射液及其制备方法与应用。
背景技术
千里光(Sonecio scandens Buch.-Ham.)为菊科千里光属多年生攀缘草本植物，又名九里明、一扫光、千里及等，始载于《本草拾遗》。全草入药，有清热解毒、清肝明目、去腐生肌、杀虫止痒之效，能治风湿、骨痛、皮炎、湿疹、下痢、疮疖和咽喉肿痛等。千里光在全国22个省和自治区均有分布。在广东省，千里光在18个地级市有分布，以粤西地区最为明显。
千里光有广谱抗生素作用，对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、志贺、鲍氏、宋内痢疾杆菌均有较强的抑制作用，在较高浓度下，对致病性大肠杆菌及绿脓杆菌亦有抑制作用，对变形、蜡样、炭疽等杆菌及八叠球菌也有不同程度的抑制作用。在植物学、药理学和毒理学上，千里光均不同于千里光属其他植物，民间将千里光用于治疗皮肤湿疹疮疖、伤寒、菌痢、大叶性肺炎、目赤肿痛、杀虫、止痒等多种疾病，但将千里光作为兽用药物用于治疗动物疾病的并不多见。
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种千里光注射液。
本发明的另一目的在于提供所述的千里光注射液的制备方法。
本发明的再一目的在于提供所述的千里光注射液的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种千里光注射液，含有千里光提取物。
所述的千里光提取物为千里光60％乙醇提取物。
所述的千里光60％乙醇提取物采用如下方法进行制备：取千里光药材，加入纯净水进行回流提取，过滤，取滤渣晾干后，加入60％乙醇回流提取2-3次，过滤，合并滤液，浓缩，得到千里光60％乙醇提取物；每克千里光药材加入纯净水7-10毫升，每克千里光药材加入60％乙醇7-10毫升。
所述的回流提取的次数优选为2-3次；
所述的浓缩为于70-80℃浓缩2-3小时。
所述的回流提取优选为90-100℃回流提取2-3小时。
所述的千里光注射液的制备方法，包括如下步骤：将3-10％千里光60％乙醇提取物、0.1-0.5％黄胺增效剂TMP、8-20％多元醇、0.1-0.5％增溶剂、0.05-0.50％防腐剂、注射用水搅拌均匀形成悬浮液；另取0.2-0.6％稳定剂加入上述悬浮液中，边加边搅拌，最后加注射用水至处方量，搅拌均匀，精滤，得到千里光注射液。
所述多元醇优选为乙二醇、丙二醇或丙三醇。
所述的增溶剂优选为聚山梨酯类、司盘类或甘油。
所述的防腐剂优选为苯甲醇、苯扎氯铵或柠檬酸。
所述的稳定剂优选为柠檬酸盐、酒石酸盐或磷酸盐。
所述的百分比均为质量体积百分比。
所述的千里光注射液应用于制备防治动物呼吸系和消化系混合性细菌感染的药物。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：本发明采用千里光千里光60％乙醇提取物作为有效部位制备千里光注射液，其操作简单，成本较低，可以应用于工业化大生产。制备得到的千里光注射液，具有良好的杀菌功效，对呼吸系和消化系混合性细菌感染的防治具有良好的效果，其有效治疗率达到93％。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
千里光60％乙醇提取物采用如下方法进行制备：取千里光药材，加入纯净水进行100℃回流提取3小时，过滤，取滤渣晾干后，加入60％乙醇90℃回流提取3小时、2次，过滤，合并滤液，80℃浓缩3小时，得到千里光60％乙醇提取物；每克千里光药材加入纯净水10毫升，每克千里光药材加入60％乙醇10毫升。
将3％千里光60％乙醇提取物、0.1％黄胺增效剂TMP、8％乙二醇、0.1％聚山梨酯类、0.05％苯甲醇、注射用水搅拌均匀形成悬浮液；另取0.2％柠檬酸盐加入上述悬浮液中，边加边搅拌，最后加注射用水至处方量，搅拌均匀，精滤，得到千里光注射液。
实施例2
千里光60％乙醇提取物采用如下方法进行制备：取千里光药材，加入纯净水进行100℃回流提取2小时，过滤，取滤渣晾干后，加入60％乙醇90℃回流提取2小时、3次，过滤，合并滤液，70℃浓缩3小时，得到千里光60％乙醇提取物；每克千里光药材加入纯净水8毫升，每克千里光药材加入60％乙醇8毫升。
千里光注射液的制备方法，包括如下步骤：将10％千里光60％乙醇提取物、0.5％黄胺增效剂TMP、20％丙二醇、0.5％甘油、0.50％苯扎氯铵、注射用水搅拌均匀形成悬浮液；另取0.6％酒石酸盐加入上述悬浮液中，边加边搅拌，最后加注射用水至处方量，搅拌均匀，精滤，得到千里光注射液。
实施例3
千里光60％乙醇提取物采用如下方法进行制备：取千里光药材，加入纯净水进行100℃回流提取3小时，过滤，取滤渣晾干后，加入60％乙醇100℃回流提取2小时、2次，过滤，合并滤液，80℃浓缩2小时，得到千里光60％乙醇提取物；每克千里光药材加入纯净水7毫升，每克千里光药材加入60％乙醇7毫升。
千里光注射液的制备方法，包括如下步骤：将5％千里光60％乙醇提取物、0.3％黄胺增效剂TMP、10％丙三醇、0.3％甘油、0.30％柠檬酸、注射用水搅拌均匀形成悬浮液；另取0.4％磷酸盐加入上述悬浮液中，边加边搅拌，最后加注射用水至处方量，搅拌均匀，精滤，得到千里光注射液。
效果实施例
一、药理学研究
(1)所进行的5种不同提取物的提取率分别为：水提物24.09％，体积分数60％乙醇提取物18.02％、体积分数70％乙醇提取物16.67％、体积分数80％乙醇提取物8.33％、体积分数90％乙醇提取物3.20％。
(2)千里光乙醇提取物中明显含有黄酮及其甙类、蒽醌及其甙类、酚类、氨基酸和鞣质等，还含有皂苷、有机酸、挥发油和生物碱等。新发现千里光含有强心苷。千里光全草总生物碱提取物中含PAs，但在5种提取物中未检查出PAs。
(3)体外抗菌试验筛选出千里光体积分数60％乙醇提取物(SSE60)为千里光抗菌有效部位。
(4)体内感染试验结果表明：高剂量SSE60不但能显著延长胞内菌鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的死亡时间，而且可以显著提高小鼠存活率。
(5)体内抗内毒素试验表明：SSE60高、中剂量组小鼠死亡率分别比生理盐水组均降低20％；在延长小鼠的生存时间方面，SSE60高、中、低剂量组和生理盐水组相比，均差异不显著。
(6)免疫试验结果表明：SSE60能明显抑制迟发性变态反应。高剂量SSE60能显著增强小鼠T淋巴细胞酯酶染色作用。SSE60高、中剂量组能增强吞噬细胞的吞噬功能，其中高剂量组与生理盐水组相比，差异极显著。SSE60高、中和低剂量组小鼠的脾脏指数分别比生理盐水对照组高25％、5％和14％；与生理盐水对照组相比，SSE60高、中和低剂量组小鼠的胸腺指数分别高68％、32％和32％，其中高剂量组增加显著，中剂量组和低剂量组增加不显著，并且随着剂量的增加，胸腺指数呈上升的趋势。
二、SSE60抗菌促生长作用及药物代谢动力学研究
从SSE60的化学成分分析着手，研究了SSE60的体内外抗菌作用、促生长作用；以抗炎药理效应法和镇痛药理效应法，研究了SSE60的药物代谢动力学。
(1)SSE60对肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis，SE)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium，ST)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus，BC)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae，SAg)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli，EC26、EC37)的体外抗菌试验表明，SsE对上述7种细菌的抑菌圈直径均在10～19mm，为敏感；MIC试验表明，SSE60除对EC26和SA为0.0625g/mL，对其余5种细菌均为0.0313g/mL；MBC试验表明，SSE60除对SAg为0.0313g/mL，对其余6种细菌均为0.0625g/mL。
(2)SSE60对EC37的体内抗菌试验表明，SSE60对EC37感染小鼠有明显治疗作用，效果与庆大霉素组相当。
(3)SSE60对小鼠的促生长试验结果表明，各试验组小鼠全期平均日增重均有提高(P<0.05)；料重比降低(P<0.05)；胴体重和屠宰率显著提高(P<0.05)。一定剂量SSE60对小鼠的肾脏指数、肺脏指数、脑指数的影响较小(P>0.05)，而对心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数影响较大。一定剂量SSE60能明显提高小鼠血清ALB含量、提高A/B比值、血清CHO含量和GLU含量，能影响肝组织AKP、GOT和GPT活力。
(4)以抗炎药理效应法研究SSE60的药动学结果表明，SSE60最低起效量为57.40mg/kg。在小鼠体内的代谢符合一级反应一室模型，模型表达式为C＝1436.227e^(－0.1334t)－1436.227e^(－0.237t)；一级消除速率常数Ke＝0.1334h－1，消除半衰期t1/2Ke＝5.1949h，一级吸收速率常数Ka＝0.237h－1，吸收半衰期t1/2Ka＝2.9241h，血药峰浓度Cmax＝1436.227mg·kg－1，达峰时间tmax＝5.5474h，清除率Cl＝0.0553mg·kg－1·h－1，药—时曲线下面积AUC＝16826.35mg·kg－1·h，表观分布容积V＝0.4142mg·kg－1，滞后期t0＝0.0104h。
(5)以镇痛药理效应法研究SSE60的药动学结果表明，SSE60最低起效量为58.29mg/kg。在小鼠体内的代谢符合一级反应一室模型，模型表达式为C＝385.6512e^(－0.0701t)－385.6512e^(－0.2858t)；一级消除速率常数Ke＝0.0701h－1，消除半衰期t1/2Ke＝9.8859h，一级吸收速率常数Ka＝0.2858h－1，吸收半衰期t1/2Ka＝2.4248h，血药峰浓度Cmax＝385.6512mg·kg－1，达峰时间tmax＝6.5154h，清除率Cl＝0.1357mg·kg－1·h－1，药-时曲线下面积AUC＝6850.818mg·kg－1·h，表观分布容积V＝1.9358mg·kg－1，滞后期t0＝0.0335h。
三、系统地进行了SSE60的毒理学安全性评价
采用改良寇氏法测定了SSE60经腹腔注射给予昆明系小鼠的半数致死量，根据急性毒性分级标准对SSE60的毒性进行了推断；以所测LD50为剂量依据，利用剂量递增法，研究了SSE60对昆明系小鼠的蓄积作用，并进行了耐受性试验；利用小鼠骨髓微核试验、精子畸形试验和Ames试验，进行了SSE60致突变作用的研究；进行了SSE60的亚急性毒性试验；进行了SSE60的长期毒性试验和致肝癌性检查(血清AFP检测)；利用三段生殖毒性试验对SSE60的生殖毒性进行了研究；并对较长时间给予SSE60能否引起小鼠的生长发育、内脏器官及血常规和血液生化指标等变化进行了研究。以上研究首次发现：
(1)SSE60对雌雄兼有昆明系小鼠腹腔注射的LD50为(3911.11±153.14)mg/kg，95％可信限是(3760.97～4067.24)mg/kg，属于低毒物质。
(2)SSE60对雌雄兼有昆明系小鼠的蓄积系数为5.26，属于弱蓄积性物质；小鼠对SSE60具有明显的耐受性。
(3)391mg/kg及以下剂量的SSE60未引起昆明系小鼠骨髓细胞微核发生率升高。
(4)391mg/kg及以下剂量的SSE60未引起昆明系小鼠精子畸形发生率升高。
(5)Ames试验结果发现，在有或无S9活化液时，每平皿8μg～5000μg的SSE60均未使组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌株TA97、TA98、TA100和TA102的菌落回变数发生变化。
(6)亚急性毒性试验发现，SSE60各剂量组分别与阴性对照组比较，供试小鼠无明显病理组织学变化；391mg/kg和130mg/kg的SSE60能明显提高小鼠的饲料利用率，促进体重增加。
(7)长期(90天)给予391mg/kg及以下剂量的SSE60，对小鼠的行为、生长发育、血液生理生化和脏器系数等指标均无不良影响，能明显促进小鼠生长；未引起血清AFP含量升高，不具有致肝癌性。
(8)在妊娠前期及中期分别给予39mg/kg～391mg/kg的SSE60，对小鼠交配行为、受孕能力未产生不良影响。在器官形成期，未表现出胎儿致畸性。在围产期和哺乳期，对孕鼠、哺乳鼠和胎鼠及新生仔鼠无潜在不良影响。
四、对千里光注射液进行质量检查，总体结果令人满意。抗菌试验证明，其抗菌能力与市售双黄连注射液相当。自2005年以来，共在某三个养鸡场的12000只三黄肉鸡亚临床和临床病例中应用千里光注射液，用于呼吸系和消化系混合性细菌感染的防治，总有效数为11200，总有效率达93％，按每只育成鸡挽回生产性能和死亡损失平均10元计算，挽回经济损失112000元，效果十分显著。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种千里光注射液，其特征在于，所述的千里光注射液含有千里光提取物。
2.根据权利要求1所述的千里光注射液，其特征在于，所述的千里光提取物为千里光60％乙醇提取物。
3.根据权利要求2所述的千里光注射液，其特征在于，所述的千里光60％乙醇提取物采用如下方法进行制备：取千里光药材，加入纯净水进行回流提取，过滤，取滤渣晾干后，加入60％乙醇回流提取2-3次，过滤，合并滤液，浓缩，得到千里光60％乙醇提取物；每克千里光药材加入纯净水7-10毫升，每克千里光药材加入60％乙醇7-10毫升。
4.根据权利要求2所述的千里光注射液，其特征在于，所述的回流提取的次数为2-3次；所述的浓缩为于70-80℃浓缩2-3小时。
5.根据权利要求2所述的千里光注射液，其特征在于，所述的回流提取为90-100℃回流提取2-3小时。
6.权利要求1-5任一项所述的千里光注射液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将3-10％千里光60％乙醇提取物、0.1-0.5％黄胺增效剂TMP、8-20％多元醇、0.1-0.5％增溶剂、0.05-0.50％防腐剂、注射用水搅拌均匀形成悬浮液；另取0.2-0.6％稳定剂加入上述悬浮液中，边加边搅拌，最后加注射用水至处方量，搅拌均匀，精滤，得到千里光注射液；所述的百分比为质量体积百分比。
7.根据权利要求6所述的千里光注射液的制备方法，其特征在于，所述多元醇为乙二醇、丙二醇或丙三醇。
8.根据权利要求6所述的千里光注射液的制备方法，其特征在于，所述的增溶剂为聚山梨酯类、司盘类或甘油。
9.根据权利要求6所述的千里光注射液的制备方法，其特征在于，所述的防腐剂为苯甲醇、苯扎氯铵或柠檬酸；所述的稳定剂为柠檬酸盐、酒石酸盐或磷酸盐。
10.权利要求1-5任一项所述的千里光注射液应用于制备防治动物呼吸系和消化系混合性细菌感染的药物。
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