CN104459106A - 一种量子点-抗体溶液及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种量子点-抗体溶液，使用量子点代替传统胶体金或荧光基团进行标记，所述量子点-抗体溶液与原有提前干燥在玻璃纤维膜上的量子点-抗体交联物不同，其释放程度对反应结果影响小，无干扰，大大提高了灵敏度，适用于所有抗体与量子点的交联，甚至可用于检测一些微量或痕量物质，该类物质由于浓度或含量过低而无法使用现有免疫层析法进行检测。

Description

一种量子点-抗体溶液及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物技术分析检测领域，尤其是一种量子点-抗体溶液及其制备方法与应用。
背景技术
现阶段，快速检测试剂盒一般的标记物是胶体金或者荧光基团。例如，检测转铁蛋白(SF)的检测试纸，由含有胶体金标记的抗人SF抗体的胶体金-抗体垫。
胶体金标记的检测试剂盒虽然成本较量子点更低，但检测灵敏度不如量子点标记高，检测范围也较量子点更窄。荧光基团标记的检测试剂盒，灵敏度也低于量子点标记。
胶体金使用可见光吸光进行检测，结果为反应区上一条红色或紫色的条带。一般胶体金检测试剂盒均为肉眼观察该条带是否出现及颜色深浅。而量子点则是由紫外光激发，产生非常强的激发光，其信号强度要大于胶体金的反应信号，提高灵敏度。同时，当胶体金在反应区结合达到一定值时，再增加结合胶体金不会改变条带颜色。而量子点是进行发光强度测定，故而无此问题，从而增大检测范围。
和荧光基团相比，量子点的激发光和发射光距离较远，故而激发光对于发射光的干扰很小，从而减小检测的本底值，进而提高灵敏度。同时，量子点的激发光谱很窄，故而在峰值的光强非常强。若使用同样光栅进行测定时，量子点产生的激发光强度远远大于荧光基团的发光强度。故而量子点标记得到的激发光信号更强。同时，和荧光基团相比，量子点具有相似或者更高的吸光系数和光量子产率。故而使用量子点标记，其检测灵敏度较荧光基团更高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种量子点-抗体溶液。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述量子点-抗体溶液的制备方法。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述量子点-抗体溶液的应用。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种量子点-抗体溶液，是由下述方法得到的：
(1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反应60-180分钟并持续搅拌；
(2)所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000×g下离心15分钟，重复5次；
(3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物；
(4)在该溶液中加入2％BSA后，存于4℃冰箱中备用。
优选的，上述量子点-抗体溶液，所述抗体可以是所有单克隆或多克隆抗体。
优选的，上述量子点-抗体溶液，所述量子点是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复合粒子。
上述量子点使用化学方法进行链接，即使用EDC和NHS，以连接-NH2和-COOH基团。
上述量子点-抗体溶液的制备方法，具体步骤为：
(1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反应60-180分钟并持续搅拌；
(2)所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000×g下离心15分钟，重复5次；
(3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物；
(4)在该溶液中加入2％BSA后，存于4℃冰箱中备用。
优选的，上述量子点-抗体溶液的制备方法，所述量子点是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复合粒子。
上述量子点-抗体溶液在制备检测试纸和/或试剂盒方面的应用。
优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，将样品加入所述量子点-抗体溶液中，然后再将混合物加到检测试纸和/或试剂盒上进行反应。
优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸由NC膜、样品垫、吸样垫和底板组成，所述样品垫、NC膜和吸样垫依次从底板一端排列至另一端，所述NC膜是由下述方法制备得到的：以0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将配对的待测物抗体配制成0.1-5mg/mL溶液，在喷膜仪在NC膜上以1.2-1.5μL/cm的参数进行划线，包被T线，同时在NC膜上部包被1-2mg/mL的抗鼠IgG作为C线，干燥，备用。
优选的，上述量子点-抗体溶液的应用，所述检测试纸的NC膜是一种由硝酸纤维素、尼龙膜、或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜构成的多孔结构的膜，孔径为8-12μm。
本发明的有益效果是：
本发明提供了量子点-抗体溶液使用量子点代替传统胶体金或荧光基团进行标记，所述量子点-抗体溶液与原有提前干燥在玻璃纤维膜上的量子点-抗体交联物不同，其释放程度对反应结果影响小，无干扰，大大提高了灵敏度，适用于所有抗体与量子点的交联，甚至可用于检测一些微量或痕量物质，该类物质由于浓度或含量过低而无法使用现有免疫层析法进行检测。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
实施例1
一种量子点-抗体溶液，是由下述方法得到的：
(1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反应60-180分钟并持续搅拌；
(2)所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000×g下离心15分钟，重复5次；
(3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物；
(4)在该溶液中加入2％BSA后，存于4℃冰箱中备用。
所述抗体可以是所有单克隆或多克隆抗体。
所述量子点是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复合粒子。
上述参照实施例对该一种量子点-抗体溶液及其制备方法与应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种量子点-抗体溶液，其特征在于：是由下述方法得到的：
(1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反应60-180分钟并持续搅拌；
(2)所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000×g下离心15分钟，重复5次；
(3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物；
(4)在该溶液中加入2％BSA后，存于4℃冰箱中备用。
2.根据权利要求1所述的量子点-抗体溶液，其特征在于：所述量子点是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳型纳米复合粒子。
3.权利要求1所述的量子点-抗体溶液的制备方法，其特征在于：具体步骤为：
(1)每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反应60-180分钟并持续搅拌；
(2)所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000×g下离心15分钟，重复5次；
(3)收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物；
(4)在该溶液中加入2％BSA后，存于4℃冰箱中备用。
4.权利要求1所述的量子点-抗体溶液在制备检测试纸和/或试剂盒方面的应用。
5.根据权利要求4所述的量子点-抗体溶液的应用，其特征在于：将样品加入所述量子点-抗体溶液中，然后再将混合物加到检测试纸和/或试剂盒上进行反应。
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