CN104434819B - 注射用乙酰谷酰胺粉针剂药物组合物和制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及注射用乙酰谷酰胺粉针剂药物组合物和制法。具体地说，本发明属于医药技术领域，涉及一种可用于脑外伤性昏迷、神经外科手术等引起的昏迷、肝昏迷及偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、神经性头痛和腰痛等治疗的药物，特别是涉及一种以乙酰谷酰胺为活性成分制成的药物组合物例如冷冻干燥粉针剂。本发明还涉及该药物组合物的制备方法。在一个实施方案中，本发明注射用乙酰谷酰胺粉针剂的药物组合物，其包括乙酰谷酰胺、冻干赋形剂和酸碱调节剂。所述的冻干赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、乳糖、蔗糖、葡萄糖等或其组合。本发明注射用乙酰谷酰胺粉针剂具有优异的药学性质。

Description

注射用乙酰谷酰胺粉针剂药物组合物和制法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种可用于脑外伤性昏迷、神经外科手术等引起的昏迷、肝昏迷及偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、神经性头痛和腰痛等治疗的药物，特别是涉及一种以乙酰谷酰胺为活性成分制成的药物组合物例如冷冻干燥粉针剂。本发明还涉及该药物组合物的制备方法。

背景技术

乙酰谷酰胺(Aceglutamide)

化学名N²-乙酰-L-谷氨酰胺，为谷氨酰胺的乙酰化物，是一种经典的精神振奋药，有改善神经细胞代谢，维持神经应激功能及降低血胺的作用，并能通过血脑屏障。主要用于脑外伤昏迷、肝昏迷、偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、脑外伤后遗症、智力减退、神经性头痛等。同时，乙酰谷酰胺也可救治氟乙酰胺中毒，治疗氟化物中毒的作用机制，是因为乙酰谷酰胺与氟乙酰胺类毒物的结构相似，乙酰谷酰胺在体内生成的酰胺基因或氟乙酸钠产生的氟乙酸竞争达到解毒的效果，同时它具有改善神经细胞代谢，维持神经应激机能等作用，故可以减少神经系统后遗症的发生。

乙酰谷酰胺临床应用极少出现毒副作用。输注乙酰谷酰胺偶可致血压下降。偶有发现乙酰谷酰胺引起过敏性休克的报道。乙酰谷酰胺是有机物，具有半抗原性，长期或间断输注时，药物进入体内后与红细胞膜的蛋白质相结合，形成药物红细胞复合物，具有抗原性，抗原可以刺激抗体，再次输入时，体内的抗体群与具有抗原性的药物红细胞复合物发生反应，导致抗原抗体结合，并激活血清中的补体，产生溶血反应。乙酰谷酰胺致溶血反应临床较少见。经过敏性、溶血性和局部刺激性等试验，自制品无过敏性、无溶血现象，也未见产生局部的刺激性。

乙酰谷酰胺临床适应症：

(1)眩晕症：文献报道用乙酰谷酰胺和胞二磷胆碱联用治疗眩晕症可取得良好效果。胞二磷胆碱与乙酰谷酰胺联用治疗眩晕症一般1～7d即可痊愈，复发率低。乙酰谷酰胺能直接通过血脑屏障进入中枢神经系统，可改善神经细胞代谢反应功能，使脑功能得到恢复。对治疗脑性眩晕和外伤后遗症具有很好疗效。另有报道用乙酰谷酰胺治疗美尼尔病，结果显示治疗组和对照组在治疗过程中均未发现明显副作用，治疗组疗效明显优于对照组。

(2)脑发育不全：李嗣娴等用乙酰谷酰胺及呋喃硫胺头部穴位注射治疗脑发育不全50例，疗效较好。还有报道用头针配合穴位注射治疗脑血管病并发智力障碍，结果显示头针配合穴位注射治疗有醒脑开窍、健脑益髓、提高脑细胞活力、改善脑功能的作用，治疗脑血管病并发智力障碍疗效确切。

(3)氟化物中毒：用乙酰谷酰胺抢救氟化物中毒30例，全部病例中治逾20例，失望8例，后遗症2例，表现为痉挛性及脑性瘫痪伴智力低下：死亡或存活有严重后遗症者为误服量大、年幼儿及未能即时使用乙酰谷酰胺患儿。治疗氟化物中毒的作用机制，是因为乙酰谷酰胺与本类毒物的结构相似，乙酰谷酰胺在体内生成的酰胺基因或氟乙酸钠产生的氟乙酸竞争达到解毒的效果，同时它具有改善神经细胞代谢，维持神经应激机能等作用，故可以减少神经系统后遗症的发生。另有文献结果说明，乙酰谷酰胺救治氟乙酰胺中毒，是即予乙酰谷酰胺的化学结构中含有乙酰胺基团(-CH2CONH2)与乙酰胺的化学结构相似。临床应用，证实疗效确切。由于基层医院大都不备有乙酰胺药品，因此当遇有氟乙酰胺中毒时，不妨以乙酰谷酰胺代替治疗。

(4)流行性乙型脑炎：朱孝武等对病毒唑联合乙酰谷酰胺治疗乙脑的疗效进行了观察，结果表明：乙脑早期联合应用病毒哗和乙酰谷酰肢治疗，能控制病情进一步加重，改善脑功能，促进退热，神志转清，降低中枢性呼衰的发生率与病死率，提高治愈率。

(5)脑卒中后遗症：用胞二磷胆碱和乙酰谷酰胺治疗脑卒中后遗症，药物或能量合剂分别作为治疗组和对照组，结果表明，两组疗效差异非常显著。近年的研究表明：神经功能不全的生化病理是病人大脑皮质和海马中神经递质乙酰胆碱浓度的明显降低，即乙酰胆碱缺乏是神经功能衰退的原因。在神经细胞修复的过程中，卵磷脂和脑磷脂起重要的作用，其含量增加则脑组织的修复加速，而胞二磷胆碱和乙酰谷酰胺均是神经细胞的活化剂，胞二磷胆碱能增强胆碱能神经的功能，并能促进磷脂的生物合成。乙酰谷酰胺能提高高密度脂蛋白的浓度，因此，合用能起相辅相成的作用，加速脑组织的修复。

现有技术中已有诸多制备乙酰谷酰胺的方法。例如，CN102276496A(201110214372.0，周晓东)公开了一种乙酰谷酰胺化合物，其中，该乙酰谷酰胺化合物为晶体，使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射图中特征峰在2θ为9.3、11.2、14.6、17.0、20.9显示，该乙酰谷酰胺化合物，具有粒度均匀、并且性质稳定，不易被水解和氧化的优点，从而可用于制备药物组合物。本发明还公开了一种药物组合物，该药物组合物包含上述的乙酰谷酰胺化合物以及药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂；优选剂型为冻干粉针剂或注射液。据信该药物组合物具有质量稳定，制备工艺简单、收率高的优点，从而延长了药品有效期，保证了产品质量。

CN102358721A(201110248974.8，贺金凤)公开了一种更为稳定的乙酰谷酰胺化合物及药物组合物，所述包括将粗品乙酰谷酰胺用甲醇∶丙酮＝2∶1的混合溶剂重结晶1-3次，同时用活性炭脱色得白色结晶；其中粗品乙酰谷酰胺和混合溶剂的比例为1∶10，活性炭用量为溶液体积的5％。

CN103724222A(201310576861.X，华中)涉及乙酰谷酰胺的合成方法改进，本发明采用溶剂萃取的方法减少产品中的杂质，省去粗品精制的过程。据信该发明方法简便，产品收率高，质量好，各项指标完全符合现有质量标准。

CN101434559A(200810204470.4，朝晖)公开了一种乙酰谷酰胺制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：一、配方原料名称投料量kg L-谷氨酰胺50纯化水300醋酐36NaOH(工业用)30盐酸(工业用)70乙醇(药用)80二、制备(1)酰化中和反应在酰化锅内投入纯化水；投入L-谷氨酰胺并在此常温下搅拌溶解；慢慢滴加25％NaOH溶液至反应液pH8～9，进行醋酐和NaOH溶液同时双滴加；双滴加时，控制反应液pH8～9，整个滴加时间控制在2-3hr，滴加温度控制在5～15℃；滴毕，复测pH在8～9；在5～15℃加药用炭搅拌15min；反应液经钛棒过滤器抽入中和锅，开冷却控制中和温度为0～10℃，慢慢滴加盐酸，时间2～3hr，控制终点pH为1～3；滴毕10min后复测pH为1～3，停搅拌0～10℃结晶30-60min；将中和锅内的物料放入离心机内甩滤得乙酰谷酰胺粗品；(2)精制乙酰谷酰胺粗品投入结晶锅，抽入1.5～2倍乙酰谷酰胺粗品重量的乙醇进行搅拌溶解20～30min；将结晶锅内的物料放入离心机内甩滤得乙酰谷酰胺精制的潮品；(3)干燥精制的潮品投入回转干燥器，冷抽0.5小时，控制真空≥0.060MPa，开启恒温水泵，控制水温在35～45℃，干燥2小时，将水温升至50～70℃，继续干燥2小时；(4)包装。

此外，现有技术中已有诸多制备乙酰谷酰胺溶液型注射液的方法。例如，CN1830425A(200510051466.5，巴里莫尔)公开了一种脑功能改善药物乙酰谷酰胺注射液的制备方法。本方法将乙酰谷酰胺与磷酸盐缓冲液共同配制，经超声、冷藏、超滤等技术处理，得到乙酰谷酰胺超滤液，在避光条件下与乙二胺四醋酸二钠溶液共同配制、灌装，再经灭菌、灯检、包装后制成乙酰谷酰胺小容量注射剂。据信该工艺过程中乙酰谷酰胺与磷酸盐缓冲液共同配制并经冷藏、超声、超滤技术处理，同时严格控制pH值、温度、浓度、离子强度等工艺参数，确保了无效成份被完全去除，有效避免了乙酰谷酰胺的水解，减少了制剂中的有关物质，使制成的制剂稳定性好、刺激性小、澄明度改善、临床疗效确切。主要用于肝昏迷、偏瘫、神经外科手术等引起的昏迷、瘫痪及智力减退、记忆力障碍等。

CN102204885A(201110144445.3，华中)涉及乙酰谷酰胺葡萄糖注射液的一种配制方法。乙酰谷酰胺葡萄糖注射液的一种配制方法，(1)制备葡萄糖浓配液，并调节其pH为4.5—5.5；(2)制备乙酰谷酰胺浓配液；并调节其pH为4.5—5.5；(3)取上述(1)和(2)两种浓配液合并，加活性炭脱色，补加注射用水至全量。先将葡萄糖浓配液和乙酰谷酰胺浓配液的pH调整到所需的值，再把两种浓配液合并。这样就减小了葡萄糖与乙酰谷酰胺的反应速度以及二者在酸性较强条件下的反应时间。据信该发明制得的乙酰谷酰胺葡萄糖注射液有关物质少、稳定性好。

CN102018668A(201010578234.6，朝晖)公开一种乙酰谷酰胺注射液的制备方法。据信该发明采用新的方法，克服了现有方法导致乙酰谷酰胺注射液有关物质的不足，据信该发明将配制的注射用水(水温70-80℃)改进为(水温35-42℃)，产品经检测以及加速试验和长期稳定性试验等，数据结果表明采用该发明新方法后，乙酰谷酰胺注射液有关物质、含量等各项指标均达到《中国药典》2010年版标准。本发明方法简单易行，宜于规模型工业化生产。

此外，现有技术中已有诸多制备乙酰谷酰胺冷冻干燥粉针剂的方法。例如，CN1535678A(200410030881.8，绿叶)公开了稳定的乙酰谷酰胺冻干粉针制剂及其制备工艺，涉及谷氨酰胺酰化物的新制剂及其制备工艺，据信该发明乙酰谷酰胺冻干粉针制剂由乙酰谷酰胺、冻干支撑剂和pH调节剂组成，解决了现有制剂存在的不足，具有工艺简单，稳定性高，有效期延长，保证了产品质量。

CN102670640A(201210172178.5，卫康)公开了一种注射用乙酰谷酰胺冻干粉组合物及其制备方法，涉及医药领域，该组合物的主药为：乙酰谷酰胺和胞二磷胆碱，制备冻干粉组合物的具体步骤为：将质量百分比为0.1％～99.9％的乙酰谷酰胺、99.9％～0.1％胞二磷胆碱，和主药5～10倍的甘露醇加到注射用水中；搅拌溶解后加入NaOH溶液调节pH值5.5；加入总体积0.1％的活性炭搅拌30分钟；滤除活性炭，药液再经0.45μm和0.22μm微孔滤膜过滤；过滤后罐装，送入冷冻干燥机中；降温至-40℃，保温2小时后，缓慢升温至-5℃～0℃升华干燥，再升温至35℃后，保温3小时；冷冻干燥结束，出箱，即得注射用乙酰谷酰胺冻干粉组合物。据信该发明的优点：液体加工方便，简化了无菌作业过程；提高了制剂的稳定性；无需经过热处理就能去除产品中的水分；增强了制剂的复水(溶解)性。

CN102688226A(201210186506.7，海悦)公开了提供了一种含有乙酰谷酰胺的药物组合物及其制剂。据信该发明所述组合物制得的注射剂有关物质少；由该组合物制得的注射剂稳定性好；由该组合物制得的冻干粉针剂稳定，复溶性好；方便临床用药与药品的贮存和运输。

CN103012192A(201310009376.4，黄明芳)公开一种新型乙酰谷酰胺化合物，所述化合物的纯度大于99.6％。同时，该发明还公开了所述新型乙酰谷酰胺化合物的药物组合物，所述组合物包括以下重量份的组分：乙酰谷酰胺90～600份、蒜氨酸6～40份、甘露醇1～8份、磷酸氢二钠0.8～5份、磷酸二氢钠0.5～3份。据信该发明所述乙酰谷酰胺化合物的药物组合物，其中含有的甘露醇、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠三者之间产生协同作用，有效提高了组合物在高温、高湿和强光下的稳定性；其中的乙酰谷酰胺和蒜氨酸相互协同作用，能够起到显著降低血氨的效果。

CN1868467A(200510072272.3，曾列丹)公开了一种注射用乙酰谷酰胺制剂及其制备方法，其制剂处方如下:乙酰谷酰胺:125-250g，甘露醇:800g，注射用水至4000ml制成1000瓶。

CN103550175A(201310481884.2，卫康)公开了一种注射用乙酰谷酰胺组合物冻干粉针，涉及药品及药品制造技术领域，包含以下重量份原料成分：乙酰谷酰胺2.35～6.35份，壳聚糖纳米粒6.70～10.70份，注射用水84.96～88.96份。据信该发明的优点是：(1)此组合物可显著增强乙酰谷酰胺的修复效果，在临床上可减少乙酰谷酰胺用量，减轻乙酰谷酰胺不良反应；(2)壳聚糖纳米粒靶向治疗的作用，作为药物载体，可提高乙酰谷酰胺的生物利用度，有利于临床应用；(3)壳聚糖纳米粒可替代甘露醇作为冻干粉针的冻干骨架剂，消除了甘露醇对人体的活性作用。

然而，众所周知的，乙酰谷酰胺存在显著的化学稳定性问题，例如2010年版中国药典二部收载的乙酰谷酰胺原料药和水针剂，对其有关物质进行了严格的控制。因此，提供一种新的乙酰谷酰胺制剂例如其粉针剂，其例如具有优良的药学性质例如但不限于具有优良的化学稳定性，仍然是本领域技术人员极其期待的。

发明内容

本发明的在于提供一种新的乙酰谷酰胺制剂例如其粉针剂，期待其例如具有优良的药学性质，例如但不限于具有优良的化学稳定性。本发明人出人意料地发现，采用本发明的技术方案可以容易地实现上述目的。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面的提供了一种注射用乙酰谷酰胺粉针剂的药物组合物，其包括乙酰谷酰胺、冻干赋形剂和酸碱调节剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中所述的冻干赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、乳糖、蔗糖、葡萄糖等或其组合。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中100重量份的乙酰谷酰胺，和20～2000重量份的冻干赋形剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中100重量份的乙酰谷酰胺，和50～1000重量份的冻干赋形剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中100重量份的乙酰谷酰胺，和100～500重量份的冻干赋形剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中所述酸碱调节剂的种类不受特别限制，只要其可以将所述冻干粉针剂(和/或在配制该冻干粉针剂过程中将配制中间物)的pH值调节至期望的范围即可。在一个实施方案中，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中所述酸碱调节剂的用量是，使得所述药物组合物用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2010年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为4.5～7.0；例如，pH值为5.0～6.5；例如，pH值为5.5～6.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中所述酸碱调节剂的用量是，使得所述药物组合物用注射用水溶解制成每1ml中含乙酰谷酰胺100mg的溶液并根据中国药典2010年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为4.5～7.0；例如，pH值为5.0～6.5；例如，pH值为5.5～6.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中乙酰谷酰胺和甘露醇的重量之和占冷冻干燥前溶液体积的5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，其中乙酰谷酰胺和甘露醇的重量之和占复溶溶液体积的5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中水分含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其基本上是按包括如下的步骤制备的：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量2～3倍重量的注射用水中，加入丙二醇适量(例如丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1～0.5倍，例如0.1～0.3倍)，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(例如无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1～0.5倍，例如0.3～0.5倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(例如无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2～5倍，例如2～3倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂(例如酸溶液或碱溶液)调节至pH值5.0～6.5，例如pH值为5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(d)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(b)所述适量注射用水是注射用水处方量的约70～90％。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(c)所述补加注射用水至其处方量是指加水至使得溶液中活性成分的浓度达80～120mg/ml的浓度。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(b)所述活性炭用量是溶液重量的0.05％～1％，优选0.05％～0.5％。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(c)中所述酸溶液和碱溶液是使用选自下列的pH调节剂配制成的水溶液：氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。这些水溶液的浓度是本领域技术人员公知的，例如1～10％，例如2％～5％。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(d)中除去水份后所得冷冻干燥物料中水分含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

进一步地，本发明第二方面提供了制备注射用乙酰谷酰胺粉针剂的药物组合物(例如本发明第一方面任一实施方案所述药物组合物)的方法，所述药物组合物包括乙酰谷酰胺、冻干赋形剂和酸碱调节剂；该方法包括以下步骤：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量2～3倍重量的注射用水中，加入丙二醇适量(例如丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1～0.5倍，例如0.1～0.3倍)，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(例如无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1～0.5倍，例如0.3～0.5倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(例如无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2～5倍，例如2～3倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂(例如酸溶液或碱溶液)调节至pH值5.0～6.5，例如pH值为5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的冻干赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、乳糖、蔗糖、葡萄糖等或其组合。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物中包括100重量份的乙酰谷酰胺，和20～2000重量份的冻干赋形剂。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物中包括100重量份的乙酰谷酰胺，和50～1000重量份的冻干赋形剂。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述药物组合物中包括100重量份的乙酰谷酰胺，和100～500重量份的冻干赋形剂。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述酸碱调节剂的用量是，使得所述药物组合物用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2010年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为4.5～7.0；例如，pH值为5.0～6.5；例如，pH值为5.5～6.0。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述酸碱调节剂的用量是，使得所述药物组合物用注射用水溶解制成每1ml中含乙酰谷酰胺100mg的溶液并根据中国药典2010年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为4.5～7.0；例如，pH值为5.0～6.5；例如，pH值为5.5～6.0。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得药物组合物在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得药物组合物中乙酰谷酰胺和甘露醇的重量之和占冷冻干燥前溶液体积的5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得药物组合物用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得药物组合物用注射用水复溶到基本上与冷冻干燥前溶液相同的体积，其中乙酰谷酰胺和甘露醇的重量之和占复溶溶液体积的5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得药物组合物中水分含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(d)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(b)所述适量注射用水是注射用水处方量的约70～90％。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(c)所述补加注射用水至其处方量是指加水至使得溶液中活性成分的浓度达80～120mg/ml的浓度。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(b)所述活性炭用量是溶液重量的0.05％～1％，优选0.05％～0.5％。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(c)中所述酸溶液和碱溶液是使用选自下列的pH调节剂配制成的水溶液：氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。这些水溶液的浓度是本领域技术人员公知的，例如1～10％，例如2％～5％。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(d)中除去水分后所得冷冻干燥物料中水分含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

下面对本发明的各个方面作进一步描述。

本发明所述方法步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上本发明所述方法步骤。

在本发明中，如未另外说明，测定各种物料中的有关物质的量时，均是照2010年版中国药典6页收载的乙酰谷酰胺原料药中的有关物质检查方法中所述方法进行。在本发明中，如未另外说明，在测定各种组合物的物料中乙酰谷酰胺的含量时，均是照2010年版中国药典6页收载的乙酰谷酰胺原料药中的含量测定方法中所述方法进行。

冷冻干燥粉针剂的制备过程是本领域技术人员公知的制药工艺，例如如下冻干曲线A和冻干曲线B所示的两种示意性的冻干曲线：

在下文制备冷冻干燥粉针剂中的具体实例中，如未另外特别说明，所用的冻干曲线是冻干曲线A。

冷冻干燥粉针剂中的水分含量是一般在8％以下，优选低于5％，更优选低于4％。水分控制可通过适当调整冷冻干燥程序来控制。该冷冻干燥粉针剂中的水分含量可根据许多已知方法来测定，例如干燥失重法。

在制备本发明冻干粉针剂时，所配制的药液中，固形物含量是5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。由于冻干粉针剂通常是在管状西林瓶中进行冷冻干燥得到，本领域技术人员理解这种产品在获得成品甚至在供医生使用之前，通常均呈现一个圆饼状，尽管该圆饼的体积理论上讲会比原有水溶液的体积少(稍有缩小)，然而通常这种缩小通常不会缩小到原水溶液体积50％，通常会在原水溶液体积的80-120％之间，更通常在原水溶液体积的90-100％之间，而从终产品西林瓶内可观察到原水溶液液面痕迹(主体饼状物因冻干缩小后残留在瓶壁上的液面痕迹，即便西林瓶中的冻干品因各种原因例如碰撞等原因而呈粉末状，通常仍然可以保留原有的液面痕迹)，据此痕迹亦可估计出该冷冻干燥组合物在冷冻干燥之前的水溶液体积。因此，虽然本发明提供的是一种基本无水的冷冻干燥粉针剂，然而根据该粉针剂仍然可以大致估计出其在配制时，至少在冷冻干燥开始之前的药液体积，根据该估计出的体积以及西林瓶中的干燥终产物的重量，亦可计算到在制备本发明冻干粉针剂时，所配制的药液中的固形物的含量。因此，根据本发明第一方面的冻干粉针剂，其在配制时的药液的固形物含量为5～35％(w/v)，例如10～30％(w/v)，例如15～30％(w/v)，例如20～30％(w/v)。

术语“固形物含量”是指固体物质(例如本发明活性化合物及所用的全部赋形剂，重量/克)加入到溶剂(例如注射用水)中，溶解后得到一个溶液，所述固体物质的重量除以终溶液体积的百分数(重量/体积百分数，例如g/100ml)。例如在本发明中，以1mg活性化合物和总计约24mg的其它固形物加适量注射用水溶液，配制成终体积为1ml的溶液，其固形物含量即为2.5％。

在本发明中，符号％，根据其所使用的语境，可以具有本领域技术人员容易理解的含义。例如在提及固形物含量时，该符号表示重量/体积的百分数(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷冻干燥粉针剂中的“水含量”时，例如水含量在8％以下，此时该符号％表示重量/重量的百分数(w/w，g/100g)。一般而言，在固体分散在液体中时，％表示重量/体积百分数；在固体分散在固体中或者液体分散在固体中(例如粉针的含水量)时，％表示重量/重量百分数。在其它情况下，如无另外说明，符号％表示重量/重量百分数。

在配制本发明的药液时，本领域技术人员公知，可使用例如约0.45um的微孔滤膜进行粗滤过滤，在将药液灌装到西林瓶中之前，可以使用例如约0.22um的微孔滤膜进行精滤过滤以除菌，必要时可以过滤多次。

根据本发明的粉针剂，其用注射用水复溶，通常而言复溶时间在30秒内，优选在20秒内，更优选在15秒内。

根据本发明的冻干粉针剂，其用水制成每1ml中含活性化合物100mg的溶液并根据中国药典2010年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为5.0～6.5；例如，pH值为5.5～6.0。

本发明提供的冻干粉针剂可以在凉暗处保存至少24个月，可以满足一般的冷冻干燥粉针剂的贮藏要求。

已经发现，本发明冷冻干燥粉针剂具有良好的药学性质例如具有优良的化学稳定性。

乙酰谷酰胺为谷胺酰胺的乙酰化合物，通过血-脑脊液屏障后分解为谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)。谷氨酸参与中枢神经系统的信息传递。γ-氨基丁酸能拮抗谷氨酸的兴奋性，改善神经细胞代谢，维持神经应激能力及降低血氨的作用，改善脑功能。

乙酰谷酰胺在体内分布广泛。在脑、肝和肾中浓度较高，能透过血-脑脊液屏障。在肾小管细胞内分解出氨而变成乙酰谷氨酸。氨经肾小管分泌排出，乙酰谷氨酸被吸收，参与体内代谢。本发明制备得到的乙酰谷酰胺制剂特别是其冷冻干燥粉针剂可在临床上用于脑外伤性昏迷、神经外科手术等引起的昏迷、肝昏迷及偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、神经性头痛和腰痛等。例如可以采用静脉滴注，每次100～600mg，用5％或10％葡萄糖溶液250ml稀释后缓慢滴注。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。

下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备冻干粉针剂的方法。在下面配液制备各种组合物中，如未另外说明，每批的总配液量为1000ml。但是列明配方和制备过程时，对于粉针剂，以每300mg份乙酰谷酰胺以及相应重量份的其它物料的组成阐明配方和制法。无论是水针还是粉针，在分装时，每瓶含活性成分乙酰谷酰胺均为300mg。在配液时，当使用到酸碱调节剂(即pH调节剂)时，为2M盐酸溶液或者2M氢氧化钠溶液，在使用了所述助剂的基础上，该酸碱调节剂的量是使冷冻干燥前的药液的pH值在5.5～6.0范围内。

在以下试验中，如未另外说明，使用活性炭吸附时，用量均为生产上常用的量，即0.1％(即每100ml药液中添加活性炭0.1g)。在以下试验中，制备冻干粉针剂时，使用的乙酰谷酰胺是同一批原料药(其照2010年版中国药典二部6页收载的乙酰谷酰胺原料药“有关物质”检查方法，最大单一杂质含量0.32％，总杂质含量0.51％)，除非另有说明。

实施例1：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇166mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量2.5倍重量的注射用水中，加入丙二醇适量(丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.2倍)，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.4倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2.5倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.8ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例2：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺300mg，

甘露醇200mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量2倍重量的注射用水中，加入丙二醇适量(丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.3倍)，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.5倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的3倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.9ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例3：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇130mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量3倍重量的注射用水中，加入丙二醇适量(丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1倍)，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.3倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.7ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥(冻干曲线B)除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例4：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇100mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例1进行。

实施例5：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇500mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水2ml；

制法照实施例2进行。

实施例6：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘氨酸150mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例2进行。

实施例7：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

乳糖120mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例2进行。

实施例8：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

蔗糖120mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例2进行。

实施例11：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇166mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量2.5倍重量的注射用水中，向其中添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.4倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2.5倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.8ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例12：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺300mg，

甘露醇200mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量2倍重量的注射用水中，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.5倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的3倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.9ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例13：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇130mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于适量3倍重量的注射用水中，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.3倍)，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇(无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2倍)，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.7ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥(冻干曲线B)除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例14：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇100mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例11进行。

实施例15：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇500mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水2ml；

制法照实施例12进行。

实施例16：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘氨酸150mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例12进行。

实施例17：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

乳糖120mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例12进行。

实施例18：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

蔗糖120mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例12进行。

实施例21：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇166mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取处方量的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.8ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例22：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺300mg，

甘露醇200mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取处方量的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.9ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例23：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇130mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法：

(a)取处方量的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂甘露醇，加入0.7ml注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(b)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.5～6.0；

(c)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥(冻干曲线B)除去水分(使水分含量低于3％)，压塞，即得。

实施例24：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇100mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例21进行。

实施例25：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘露醇500mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水2ml；

制法照实施例22进行。

实施例26：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

甘氨酸150mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例22进行。

实施例27：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

乳糖120mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例22进行。

实施例28：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

配方：

乙酰谷酰胺100mg，

蔗糖120mg，

酸碱调节剂适量，

配液用注射用水1ml；

制法照实施例22进行。

实施例31：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

1、处方：

乙酰谷酰胺 100g

壳聚糖纳米粒 200g

注射用水 2000ml

2、制备工艺：

1)称取200g的壳聚糖纳米粒缓慢加入2000ml的注射用水中(边加入边搅拌至溶解。

2)继续加入100g的乙酰谷酰胺并搅拌溶解至澄清。

3)用氢氧化钠调pH至5.5～6.0，加入注射用水体积0.1％的活性炭搅拌30分钟；再通过钛棒进行脱碳循环过滤，时间30分钟；然后再通过0.45μm、0.22μm进行除菌循环过滤，时间30分钟；检测中间体含量，按乙酰谷酰胺计每瓶100mg计算装量。

4)根据检测要求灌装，半压塞后送入冷冻干燥机中，降温至-40℃，保温2小时候，缓慢升温至-5℃～0℃升华干燥，再升温至35℃后，保温3小时，冷冻干燥结束，出箱。

实施例32：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

制法：

(1)将乙酰谷酰胺6g、蒜氨酸400mg、甘露醇45mg、磷酸氢二钠27mg和磷酸二氢钠18mg溶于注射用水中，加水至1000ml，搅拌均匀；

(2)在步骤(1)搅拌均匀后的溶液中加入活性炭搅拌，用氢氧化钠调节pH＝5.5，脱碳过滤后经膜精滤，灌装(10ml/瓶)；

(3)将步骤(2)中灌装好的溶液在冷冻干燥机内迅速降温至冻结，在﹣40℃至-30℃维持冷冻3-5小时，抽真空，冷冻真空干燥24小时，真空压胶盖，轧盖，即得乙酰谷酰胺冻干粉针剂。

实施例33：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

制法：在洁净的条件下，将100g乙酰谷酰胺投入配液器具中，加入50℃注射用水800ml中搅拌溶解，冷却至室温，投入100g甘露醇和50g赤藓糖醇溶解，加入0.3％针用碳搅拌均匀吸附热源，过滤脱碳，加水至足量，经0.22μm微孔滤膜过滤，得到50mg/ml乙酰谷酰胺溶液。分装4ml于安培瓶中，冷冻干燥72小时制成无菌冻干粉针剂。规格200mg/瓶。

实施例34：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

制法：

1.取注射级甘露醇800g，用1000ml注射用水溶解。

2.称取乙酰谷酰胺250g置于以上溶液中，搅拌溶解。

3.取针剂用活性炭0.5g加至以上溶液中，加热至60℃-80℃，搅拌20分钟。

4.以上溶液用0.8um微孔滤膜粗滤脱炭，补加注射用水至约3900ml，测定pH值，必要时用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节，使pH值为5.5-6.0，补加注射用水至全量。

5.测定“4”项溶液中乙酰谷酰胺的含量和溶液的pH值。

6.在无菌条件下用0.22um微孔滤膜过滤除菌。

7.根据以上“5”项测定的药液浓度调整装量，在无菌条件下将上述溶液分装于满口容积约10ml的西林瓶中，每瓶中约装4ml药液，相当于含乙酰谷酰胺0.25g，加通气胶塞，得1000瓶。

8.将上述药液置于冷冻干燥机中，预冻至-35℃后，保持2小时，按下述程序抽真空，升华干燥。

9.将上述冷冻干燥制品压塞，加铝盖，即得，检验合格后即得成品。

10.冷冻干燥程序：冷冻箱预置-40℃，再将样品置于冷冻箱中，待样品冷至-35℃后，冷冻2小时，然后抽真空并按预设程序逐渐升温。

实施例35：制备乙酰谷酰胺冻干粉针剂药物组合物

处方：

乙酰谷酰胺100g

甘露醇200g

氢氧化钠适量

注射用水加至2000ml

分装制成1000瓶。

制法：取处方量的乙酰谷酰胺，加水适量，搅匀后，用10％氢氧化钠调至溶解，并调pH值至5.5，然后加入200g甘露醇搅拌溶解，加入该体积0.1％量的针用活性炭常温搅拌吸附15分钟，过滤脱炭；滤液补注射用水至2000ml，过0.22um微孔滤膜，测定中间体含量，合格后，灌装于7ml西林瓶中，每支2ml。灌装好的样品半加丁基橡胶塞，装盘，置入冷冻干燥机中，冷冻干燥。

冻干工艺路线：将待冻干样品冻实，当制品达共熔点(约-20℃)时，继续将制品冻干-30℃左右，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度下降至-40℃左右时，开启真空泵，真空系统达40Pa时，开启罗茨泵进行二级真空，保持在常温条件下，然后抽真空，并按约2℃/小时升温，最后干燥温度为30℃左右，保持3小时，整个过程约需25小时，质检、包装，检测各项标准符合要求。

试验例1：测定各粉针剂的稳定性

1、本试验例中，测定各实施例所得的冷冻干燥粉针剂在42℃温度处放置5个月后，其中活性成分乙酰谷酰胺的含量[42℃，5月，可称为高温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20℃下处理相应时间时乙酰谷酰胺的含量[20℃，5月，可称为常温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]的百分数，即残余百分数(％)，即

其中，高温平均含量(mg/瓶)和常温平均含量(mg/瓶)是样品溶解后经HPLC法测定并经计算得到的每瓶中乙酰谷酰胺的含量(10瓶的均值)。

结果显示，实施例1-8、实施例11-18、实施例21-28、实施例31-35全部粉针剂试样的残余百分数(％)均在95.5％～100.5％之间，例如Ex1的残余百分数(％)为98.8％。这一结果表明，各种试样从活性成分含量变化的角度看是没有明显差异的。

2、另外，对于以上经42℃温度处放置5个月的全部实施例的粉针剂，测定它们在0月时的最大单一杂质含量以及总杂质含量，还测定它们在5月时的最大单一杂质含量以及总杂质含量；另外，对于每一试样，计算其在经历此高温处置前后最大单一杂质增加百分数和总杂质增加百分数，其中参数“最大单一杂质增加百分数”是指对于某一粉针试样其在5月时最大单一杂质含量减去0月时最大单一杂质含量所得差值，再除以0月时最大单一杂质含量，再乘以100％，所得的百分数。参数“总杂质增加百分数”亦有类似含义。

结果显示：

全部试样在高温处置前、后，最大单一杂质为同一杂质；

全部试样在0月时(相当于初始状态的粉针剂)的最大单一杂质含量在0.26％～0.41％范围内，总杂质含量在0.47％～0.62％范围内，显示全部试样在经制剂加工处理后，最大单一杂质含量和总杂质含量均无明显变化，即不同工艺处置所得粉针剂的质量无明显差异；

实施例11-18、实施例21-28、实施例31-35全部粉针剂试样的最大单一杂质增加百分数在148％～331％范围内，实施例1-8全部粉针剂试样的最大单一杂质增加百分数在31％～64％范围内；

实施例11-18、实施例21-28、实施例31-35全部粉针剂试样的总杂质增加百分数在163％～356％范围内，实施例1-8全部粉针剂试样的总杂质增加百分数在36％～62％范围内。以上结果显示，不同工艺制得的粉针剂尽管其初始品质基本相当，但是它们在稳定性特征方面呈现完全出人意料的效果，因为本发明所示工艺差异对于获得具有不同初始品质的粉针剂是本领域技术人员可以理解的，但是呈现出的稳定性差异却是没有任何理论能够解释的清楚的。

产业实用性

本发明的注射用乙酰谷酰胺粉针剂药物组合物具有优异的药学性质，在临床上可用于脑外伤性昏迷、神经外科手术等引起的昏迷、肝昏迷及偏瘫、高位截瘫、小儿麻痹后遗症、神经性头痛和腰痛等的治疗。

Claims (20)

1.注射用乙酰谷酰胺粉针剂的药物组合物，其包括100重量份的乙酰谷酰胺、50~1000重量份的冻干赋形剂和酸碱调节剂，所述的冻干赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、乳糖、蔗糖、葡萄糖或其组合；该药物组合物在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为15~30%(w/v)；该药物组合物是按包括如下的步骤制备的：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于2~3倍重量的注射用水中，加入丙二醇，该丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1~0.3倍，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇，该无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.3~0.5倍，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇，该无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2~3倍，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.0～6.5；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

2.根据权利要求1的药物组合物，其中以100重量份的乙酰谷酰胺计，包括100~500重量份的冻干赋形剂。

3.根据权利要求1的药物组合物，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

4.根据权利要求3的药物组合物，所述酸碱调节剂的用量是，使得所述药物组合物用注射用水复溶到与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液根据中国药典2010年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为5.0～6.5。

5.根据权利要求3的药物组合物，所述酸碱调节剂的用量是，使得所述药物组合物用注射用水溶解制成每1ml中含乙酰谷酰胺100mg的溶液并根据中国药典2010年版二部附录VIH项下的方法测定，该溶液的pH值为5.0～6.5。

6.根据权利要求1的药物组合物，其在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为20~30%(w/v)。

7.根据权利要求1的药物组合物，其用注射用水复溶到与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为15~30%(w/v)。

8.根据权利要求1的药物组合物，其用注射用水复溶到与冷冻干燥前溶液相同的体积，所得溶液中的固形物含量为20~30%(w/v)。

9.根据权利要求1的药物组合物，其水分含量低于5%。

10.根据权利要求1的药物组合物，其水分含量低于3%。

11.根据权利要求1的药物组合物，其中步骤(b)所述适量注射用水是注射用水处方量的70~90%。

12.根据权利要求1的药物组合物，其中步骤(c)所述补加注射用水至其处方量是指加水至使得溶液中活性成分的浓度达80~120mg/ml的浓度。

13.根据权利要求1的药物组合物，其中步骤(b)所述活性炭用量是溶液重量的0.05%~0.5%。

14.制备注射用乙酰谷酰胺粉针剂的药物组合物的方法，所述药物组合物包括100重量份的乙酰谷酰胺、50~1000重量份的冻干赋形剂和酸碱调节剂，所述的冻干赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、乳糖、蔗糖、葡萄糖或其组合；该药物组合物在冷冻干燥前溶液中的固形物含量为15~30%(w/v)；该方法包括以下步骤：

(a)取乙酰谷酰胺溶解于2~3倍重量的注射用水中，加入丙二醇，该丙二醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.1~0.3倍，搅拌均匀，再向其中添加无水乙醇，该无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的0.3~0.5倍，搅拌均匀，放置24小时；继续添加无水乙醇，该无水乙醇添加的重量是乙酰谷酰胺重量的2~3倍，使乙酰谷酰胺沉淀，滤取沉淀，真空干燥；

(b)取处方量的步骤(a)所得经干燥的乙酰谷酰胺和冻干赋形剂，加入适量注射用水，使溶解，再加入活性炭，搅拌，过滤脱炭；

(c)补加注射用水至其处方量，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节至pH值5.0～6.5；

(d)将药液除菌过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥除去水分，压塞，即得。

15.根据权利要求14的方法，酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

16.根据权利要求14的方法，步骤(d)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为20~30%(w/v)。

17.根据权利要求14的方法，步骤(b)所述适量注射用水是注射用水处方量的70~90%。

18.根据权利要求14的方法，步骤(c)所述补加注射用水至其处方量是指加水至使得溶液中活性成分的浓度达80~120mg/ml的浓度。

19.根据权利要求14的方法，步骤(b)所述活性炭用量是溶液重量的0.05%~0.5%。

20.根据权利要求14的方法，步骤(d)中除去水分后所得冷冻干燥物料中水分含量低于3%。