CN104430539A

CN104430539A - 茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂及其生产方法

Info

Publication number: CN104430539A
Application number: CN201410659052.XA
Authority: CN
Inventors: 靳亮; 王洪秀; 王金昌; 张莉莉; 关丽梅; 郑国华; 黄朝
Original assignee: INSTITUTE OF MICROBIOLOGY JIANGXI ACADEMY OF SCIENCES
Current assignee: INSTITUTE OF MICROBIOLOGY JIANGXI ACADEMY OF SCIENCES
Priority date: 2014-11-18
Filing date: 2014-11-18
Publication date: 2015-03-25

Abstract

本发明的主要目的在于提供一种茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂及其生产方法，杀虫剂由病毒悬液，二氧化硅，芳香族氨基酸，精制荧光增白剂，木质素磺酸钠，聚乙烯醇，氟啶脲，甘油以及无菌水组成。生产步骤为将蛹经羽化成虫进行配对产卵，卵经消毒后孵出幼虫，幼虫用人工饲料饲养，然后在饲料表面接上茶尺蠖病毒进行饲养，感染病毒后的幼虫经粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀并制成相应杀虫剂。利用该杀虫剂可有效控制茶尺蠖病虫害，而且防治成本低，对环境友好，避免了大量使用化学农药致使害虫抗药性增强、天敌数目减少、茶叶中农药残留增加的问题。

Description

茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂及其生产方法

技术领域

本发明涉及生物杀虫剂，具体涉及一种茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂及该病毒杀虫悬浮剂的生产方法。

背景技术

茶尺蠖(Ectropis oblique Warren)，又称拱拱虫、量寸虫、吊丝虫，主要分布于安徽、江苏、浙江、江西、湖北、湖南、四川、广东和福建等省。是茶树的主要害虫，该虫属鳞翅目(Lepidoptera)尺蛾科(Geometridae)。幼虫食叶，暴发时可将成片茶园食成光杆，致茶叶减产60％以上，严重影响成茶品质。

以往防治茶尺蠖的基本方法为加强预测预报和农业防治，人工捕杀，科学使用化学农药。但是长期大量使用化学农药，致使害虫抗药性增强，天敌数目减少，造成害虫的再猖獗和爆发危害，而且污染环境，农药残留增加，品质下降。为解决这个问题，许多专家开始研究用生物农药来防治茶树害虫，其中昆虫病毒是其中比较常用的一种。

茶尺蠖核型多角体病毒，是茶尺蠖的天然病原体。利用茶尺蠖核型多角体病毒防治茶尺蠖，是一种环保，专一性很强的生物防治方法。茶尺蠖NPV在茶尺蠖体内进行自我复制增殖，破坏茶尺蠖幼虫内部结构致其死亡。这种防治方法具有持续性，能很好的控制茶尺蠖病虫害，而且防治成本低，对环境友好。

昆虫病毒杀虫剂的特异性强，只能在活的宿主细胞内增殖，目前多采用野外病毒感染收集的方式生产病毒杀虫剂。其缺点容易受季节和气候的原因，从而使生产病毒杀虫剂的产量极不稳定，不能实现茶尺蠖核型多角体病毒杀虫剂的大规模化生产。

信阳市农业科学研究所发明了茶尺蠖室内鲜叶继代饲养方法，该方法具有成本低廉、取材容易、幼虫成活率高、幼虫成长发育良好优点，但是受容易受到季节的影响。中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所发明了不含茶叶粉成分的茶尺蠖幼虫的人工饲料，该发明提供的茶尺蠖幼虫人工饲料，其不含寄主植物的任何枝、叶、干、花、果实及提取物，可大量生产，保证供应。浙江省农科院发明的一种茶尺蠖的人工饲料以及茶尺蠖的饲养方法，克服了以往在冬季与早春因饲料短缺导致茶尺蠖不能全年继代饲养的难题，实现了药剂筛选要求周年、大批量供应茶尺蠖标准虫源的目的。湖北省农科院果树茶叶研究所发明了接骨草饲养茶尺蠖及其扩繁EcobNPV的方法，该发明用接骨草替代茶叶饲养茶尺蠖，并配合各种饲养操作与扩繁操作以提高养虫效果与产毒效果。

以上发明均是重点解决茶尺蠖幼虫的人工饲料及茶尺蠖幼虫的人工饲养和传代，但是对茶尺蠖核型多角体病毒室内人工规模化扩繁、茶尺蠖病毒杀虫剂加工工艺并未涉及。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种茶尺蠖的人工饲料，还提供一种茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂的生产方法，该发明克服了以往病毒杀虫剂生产过程中的问题，使利用该发明的人工饲料饲养生产茶尺蠖幼虫制备茶尺蠖病毒杀虫剂的工业化生产变为可能，保证了该病毒杀虫剂生产的质量和产量。

一种茶尺蠖病毒杀虫剂，其组分及重量配比为：200亿PIB/mL病毒悬液5％-15％，60nm二氧化硅0.1％-0.5％，芳香族氨基酸0.1％-0.15％，精制荧光增白剂0.5％-1％，木质素磺酸钠0.1-1％，聚乙烯醇0.1％-1.8％，氟啶脲0.01％-0.1％，甘油1.0％-5.0％，无菌水为余量。

茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，包括以下步骤：将茶尺蠖的蛹装入容器中，室温24℃下羽化成虫并解除滞育；将上述羽化后的成虫雌雄搭配成对，放入成虫产卵间进行交配产卵；将上述交配产生的卵经消毒后孵出幼虫，接入装有茶尺蠖幼虫人工饲料的茶尺蠖幼虫饲养板内，放入健康养虫间内饲养到4龄；将上述的茶尺蠖幼虫人工饲料表面接上经过纯化后的茶尺蠖核型多角体病毒，将上述接有病毒的人工饲料装入病毒饲养板中，在病毒饲养板中接入上述的经过健康养虫间饲养的幼虫，然后放入复制养虫间饲养；经过复制养虫间饲养的感染茶尺蠖核型多角体病毒的幼虫经粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀，在该沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、甘油、灭幼脲类似物氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。

进一步的，成虫产卵间内悬挂有供成虫产卵用纸条，并为成虫提供充足的飞行空间。

进一步的，消毒为将茶尺蠖卵块用40目塑料纱包好放在2％次氯酸钠溶液中浸渍5分钟，取出后用无菌水洗涤3次，阴干后放入的冰箱内保持4℃备用。

进一步的，人工饲料的组成包含有质量百分比如下的原料：麦胚6％～10％，干酪素2％～5％，韦氏盐0.3％～1.2％，山梨酸0.2％～0.6％，尼泊尔金0.1％～0.5％，抗坏血酸0.5％～1％，维生素B0.2％～0.8％，维生素E0.02％～0.1％，肌醇0.03％～0.6％，琼脂1.2％～1.8％，茶叶粉:5％～10％，水65％～85％。

进一步的，健康养虫间的洁净度为千级，具有控温、控光照时间及空气循环功能，保持室温20～25℃。

进一步的，健康养虫间温度为22℃～25℃，湿度40％～70％，光照16小时。

进一步的，千级洁净为不小于0.5μm的灰尘应不高于35粒/L。

进一步的，将收集的病死虫尸加水稀释2～3倍，用高速组织捣碎机做间断匀浆2-3分钟后取出，用纱布过滤；滤液再用80目筛子过滤并加水稀释2-3倍，此滤液用离心机在16000r/min下离心，收集沉淀，在该沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、甘油、聚乙烯醇、灭幼脲类似物氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。

本发明的有益效果在于提供的一种茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂的生产方法，利用该方法可工业化生产该病毒杀虫剂，利用该杀虫剂可有效控制茶尺蠖病虫害，而且防治成本低，对环境友好，避免了大量使用化学农药致使害虫抗药性增强、天敌数目减少、茶叶中农药残留增加的诸多问题。

具体实施方式

下文将结合实施例详细描述本发明。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合和相互结合从而达到更好的技术效果。

本发明涉及一种由人工饲料生产茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂的生产方法，包括以下步骤：采自野外的蛹装入容器中，室温24℃下羽化成虫并解除滞育；将上述羽化后的成虫雌雄搭配成对，放入成虫产卵间进行交配产卵；将上述交配产生的卵经消毒后孵出幼虫，消毒用40目塑料纱包好放在2％次氯酸钠溶液中浸渍5分钟，取出后用无菌水洗涤3次，阴干后放入的冰箱内4℃保存备用，但储存期超过3个月的虫卵不能再用。接入装有茶尺蠖幼虫人工饲料的茶尺蠖幼虫饲养板内，优选4-5天后1龄幼虫破壳而出，要及时将1龄幼虫用毛笔接入已装好人工饲料的养虫板中，每板优选20头。将接入幼虫的养虫板放在养虫架上。放入健康养虫间内饲养到4龄初；其中，健康养虫间可控温、控湿、控光并达到千级洁净水平，优选温度22℃-25℃；湿度40％-70％；光照16小时，同时≥0.5μm的灰尘≤35粒/L。养虫间空气经净化后循环60次/小时，加温采用空调机，顶及四壁安装日光灯，光照强度优选要达到3000LX以上，顶部安装紫外灯。将毒株(优选核型多角体病毒)加入适量蒸馏水配制成一定浓度的接毒水，均匀接入人工饲料表面，待其表面干燥无水滴便可以放入4龄初虫(优选6条)任其自由取食。茶尺蠖幼虫感染病毒后随时将感毒虫和死亡虫进行回收，幼虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀。在该沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、甘油、聚乙烯醇、灭幼脲类似物氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。

表1：茶尺蠖幼虫人工饲料不同配方各物质的重量百分比

原料	配方1(％)	配方2(％)	配方3(％)	配方4(％)
					麦胚	6.0	8.0	9.0	10.0
干酪素	2.0	3.0	4.0	5.0
					韦氏盐	0.3	0.6	0.9	1.2
山梨酸	0.2	0.4	0.5	0.6
					尼泊尔金	0.1	0.2	0.3	0.5
抗坏血酸	0.5	0.7	0.9	1.0
					维生素B	0.2	0.4	0.6	0.8
维生素E	0.02	0.04	0.06	0.1
					肌醇	0.03	0.2	0.4	0.6
琼脂	1.2	1.4	1.6	1.8
					茶叶粉	5	7	8	10
水	84.5	78.1	73.7	68.4

表2：不同饲料配方培养茶尺蠖幼虫后生长情况

表3：人工饲料与天然饲料对茶尺蠖幼虫及蛹体质量的影响

虫态	人工饲料饲养(mg)	天然饲料饲养(mg)
			4龄	12.5	11.5
5龄	24.6	16.5
			6龄	55	50.6
蛹	150	135.5

表4：人工饲料与天然饲料饲养茶尺蠖幼虫龄期与历期比较

龄期	人工饲料饲养(天)	天然饲料饲养(天)
			1龄-2龄	2	2
2龄-3龄	2	3
			3龄-4龄	2	3
4龄-5龄	2	2
			5龄-6龄	3	2
6龄-7龄	2	3

下述实施例中以表1中各组配方对茶尺蠖幼虫进行饲养，表2、表3和表4分别从幼虫成活率、幼虫历期、幼虫体重和成蛹率方面与传统饲料进行了比较。从表中可以看出：选用表1中各个配方饲养茶尺蠖幼虫，幼虫历期缩短2-3天；成蛹率高于75％；5龄幼虫体质量增加49％，蛹重增加11.1％。故选定本发明茶尺蠖幼虫人工饲料用表1中配方含量范围。

实施例1、茶尺蠖蛹5000头，置于24℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。茶尺蠖幼虫人工饲料按照表1的配方1加热均匀，分装到茶尺蠖幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为24℃。将饲料分装置茶尺蠖幼虫饲养板中，在表面接上浓度为200万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒悬液。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒悬液15％、60nm二氧化硅0.2％、芳香族氨基酸0.1％、精制荧光增白剂0.5％、木质素磺酸钠0.2％、聚乙烯醇0.5％、氟啶脲0.03％、甘油2.0％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

实施例2、茶尺蠖蛹10000头，置于24℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。茶尺蠖幼虫人工饲料按照表1的配方2加热均匀，分装到茶尺蠖幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为24℃。将饲料分装置茶尺蠖幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒悬液。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒悬液15％、60nm二氧化硅0.3％、芳香族氨基酸0.13％、精制荧光增白剂0.8％、木质素磺酸钠0.4％、聚乙烯醇1％、氟啶脲0.06％、甘油1.5％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

实施例3、茶尺蠖蛹15000头，置于24℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。茶尺蠖幼虫人工饲料按照表1的配方3加热均匀，分装到茶尺蠖幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为24℃。将饲料分装置茶尺蠖幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒悬液。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒悬液15％、60nm二氧化硅0.4％、芳香族氨基酸0.14％、精制荧光增白剂0.8％、木质素磺酸钠0.6％、聚乙烯醇1.4％、氟啶脲0.08％、甘油3.0％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

实施例4、茶尺蠖蛹15000头，置于24℃培养箱中，10天后开始羽化，每产卵容器中放入2对成虫。茶尺蠖幼虫人工饲料按照表1的配方4加热均匀，分装到茶尺蠖幼虫饲养板中，将初孵幼虫接入，放入健康养虫间内饲养至4龄，室温为24℃。将饲料分装置茶尺蠖幼虫饲养板中，在表面接上浓度为100万PIB/ml病毒悬液。10天后采集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/ml的病毒悬液。

然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/ml病毒悬液15％、60nm二氧化硅0.5％、芳香族氨基酸0.15％、精制荧光增白剂1％、木质素磺酸钠1％、聚乙烯醇1.8％、氟啶脲0.1％、甘油5.0％和无菌水余量，再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的悬浮剂产品。

本发明客服了现有技术的缺点，不受外界环境制约，可为大规模连续生产出安全高效的生物杀虫剂提供充足的虫源。

本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。

Claims

1.一种茶尺蠖病毒杀虫剂，其特征在于：所述病毒杀虫剂的组分及其重量配比是：200亿PIB/mL病毒悬液5％-15％，60nm二氧化硅0.1％-0.5％，芳香族氨基酸0.1％-0.15％，精制荧光增白剂0.5％-1％，木质素磺酸钠0.1％-1％，聚乙烯醇0.1％-1.8％，氟啶脲0.01％-0.1％，甘油1.0％-5.0％，以及无菌水。

2.一种茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

将茶尺蠖的蛹装入容器中，室温24度下羽化成虫并解除滞育；

将上述羽化后的成虫雌雄搭配成对，放入成虫产卵间进行交配产卵；

将上述交配产生的卵经消毒后孵出幼虫，接入装有茶尺蠖幼虫人工饲料的茶尺蠖幼虫饲养板内，放入健康养虫间内饲养到4龄；

将上述的茶尺蠖幼虫人工饲料表面接上经过纯化后的茶尺蠖核型多角体病毒，将上述接有病毒的人工饲料装入病毒饲养板中，在病毒饲养板中接入上述的经过健康养虫间饲养的幼虫，然后放入复制养虫间饲养；

经过复制养虫间饲养的感染茶尺蠖核型多角体病毒的幼虫经粉碎、过滤，离心收集沉淀，在该沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、甘油、灭幼脲类似物氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。

3.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述成虫产卵间内悬挂有供成虫产卵用纸条，并为成虫提供充足的飞行空间。

4.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述消毒为将茶尺蠖卵块用40目塑料纱包好放在2％次氯酸钠溶液中浸渍5分钟，取出后用无菌水洗涤3次，阴干后放入的冰箱内保持4℃备用。

5.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述健康养虫间的洁净度为千级，具有控温、控光照时间及空气循环功能，保持室温20～25℃。

6.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述人工饲料的组成包含有质量百分比如下的原料：麦胚6％～10％，干酪素2％～5％，韦氏盐0.3％～1.2％，山梨酸0.2％～0.6％，尼泊尔金0.1％～0.5％，抗坏血酸0.5％～1％，维生素B0.2％～0.8％，维生素E0.02％～0.1％，肌醇0.03％～0.6％，琼脂1.2％～1.8％，茶叶粉:5％～10％，水65％～85％。

7.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述健康养虫间温度为22℃～25℃，湿度40％～70％，光照16小时。

8.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述千级洁净为不小于0.5μm的灰尘应不高于35粒/L。

9.根据权利要求2所述的茶尺蠖病毒杀虫剂生产方法，其特征在于：所述粉碎、过滤，离心收集沉淀为将收集的病死虫尸加水稀释2～3倍，用高速组织捣碎机做间断匀浆2-3分钟后取出，用纱布过滤；滤液再用80目筛子过滤并加水稀释2-3倍，此滤液用离心机在16000r/min下离心，收集沉淀，在该沉淀中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、甘油、聚乙烯醇、灭幼脲类似物氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。