CN107509745A - 夹竹桃天蛾病毒杀虫剂及其制备方法、人工饲料及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂及其制备方法、人工饲料及其用途，本申请所提供的杀虫剂降低了对造林的影响，解决了在杀灭夹竹桃天蛾的同时对夹竹桃天蛾天敌进行杀灭的问题；而所提供的人工饲料与天然饲料相当，利用该饲料所饲养的夹竹桃天蛾的各龄期幼虫及蛹的体重较重，幼虫发育历期较短以及存活率较高。
Description
技术领域
本发明涉及一种杀虫剂以及该杀虫剂的制备方法，还涉及一种人工饲料以及该饲料的用途，尤其是涉及了一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂及其制备方法、夹竹桃天蛾人工饲料以及该饲料的用途。
背景技术
夹竹桃天蛾(Daphnis nerii(Linnaeus))，又名粉绿白腰天蛾、鹰纹天蛾、夹竹桃白腰天蛾，属鳞翅目(Lepidoptera)，天蛾科(Sphingidae)，是一种世界性害虫，国内分布于广东、广西、台湾、福建、江西、云南、湖南和四川等省。夹竹桃天蛾主要危害夹竹桃，同时还危害萝芙木属(Rauvdfiasp.)的药用植物催吐萝芙木(RauvdfiavomitoriaAfzel.ExSpreng)以及科内其他树种及软枝黄蝉、黄花夹竹桃、长春花等夹竹桃科的植物。
目前研究较多的天蛾科的昆虫病毒是豆天蛾核型多角体病毒。Zhu等对豆天蛾分离到的新型核型多角体病毒进行了全基因组测序，分析显示该病毒是Ⅱ类杆状病毒(GroupIIAlphabaculoviruses)，并且含有一系列的DNA光解酶。孙发仁等通过对豆天蛾核型多角体病毒与苏云金杆菌或银纹夜蛾核型多角体病毒混用，防治豆天蛾害虫的总效果明显提高，虫口下降率可达90％左右。
2015年10月，我们在江西省科学院附近的艾溪湖湿地公园夹竹桃林里发现夹竹桃天蛾幼虫自然死亡的虫尸。通过研磨虫尸、离心纯化，再次感染夹竹桃天蛾，得到了更多病毒样死亡症状的虫尸。经过再次样品纯化，电镜切片观察，初步判定该病原物是一种多角体病毒。将分离纯化的样品提取基因组并通过电泳鉴定，发现其电泳图谱符合质型多角体的特征，但是其基因组条带与目前发现的22种电泳型的质型多角体病毒均不相同；采用FLAC(Full Length Amplification of cDNAs)技术克隆了该CPV的基因组cDNA，并完成了基因组S2片段和S10片段序列测定工作。测序结果显示，该CPV基因组S2片段编码RNA聚合酶，S10片段编码多角体蛋白。两者末端保守序列相同，正链5’和3’端分别存在末端保守序列5’AGUCAAA······AGC3’。基于RNA聚合酶和多角体蛋白的氨基酸序列的进化分析显示该质型多角体病毒与19型和5型质型多角体病毒有较近的亲缘关系，但是电泳型上存在明显差异。因此推测该病毒是一种目前还未报道的CPV新类型，暂命名为夹竹桃质型多角体病毒南昌株(Daphnis nerii Cypovirus-NanChang，简称DnCPV-NC)。
目前，我国防治天蛾类害虫还是以马拉硫磷、溴氰菊酯类和有机磷类化学农药为主，但化学农药的大量使用，不仅造成林区的农药残留超标，而且在杀灭害虫的同时也伤害了害虫的天敌，破坏了生态平衡，同时还容易引起害虫的抗药性，不利于有害生物的可持续控制。
但是，目前还未有关于夹竹桃天蛾病毒的相关研究以及有效防控夹竹桃天蛾病毒杀虫剂的产品。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂，该杀虫剂能够有效杀灭夹竹桃天蛾，且该杀虫剂不会对造林产生影响。此外，本发明的目的还在于提供一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂的制备方法，该方法简单，可用于工厂化生产。
此外，本发明的第三个目的在于提供一种夹竹桃天蛾人工饲料，该饲料与天然饲料相当，利用该饲料所饲养的夹竹桃天蛾及蛹体重较重，幼虫发育历期较短，且存活率高。将该人工饲料饲养的夹竹桃天蛾用于夹竹桃天蛾病毒杀虫剂中，能够提高杀虫剂的效果。
为了实现本发明的第一个目的，在此所提供的夹竹桃天蛾病毒杀虫剂包括虫粉、甘油、二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水；所述虫粉是被夹竹桃天蛾病毒感染的幼虫粉碎而得；其中夹竹桃天娥病毒保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号：V201730。
该杀虫剂所含组分不含化学农药成分，因此降低了对造林的影响；此外，该杀虫剂以虫粉作为主料，故对夹竹桃天蛾具有很好的针对性，有效地解决了在杀灭夹竹桃天蛾的同时对夹竹桃天蛾天敌进行杀灭的问题，维持了生态平衡；且该杀虫剂不易引起夹竹桃天蛾的抗药性，有利于有害生物的可持续控制。
具体的，所述虫粉、甘油、二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水的重量配比为：虫粉5-15％，甘油1.0-5.0％，纳米二氧化硅0.1-0.5％，荧光增白剂0.5-1％，芳香族氨基酸0.1-0.15％，木质素磺酸钠0.1-1％，聚乙烯醇0.1-1.8％，氟啶脲0.01-0.1％，无菌水余量。
在此，本申请还提供了一种制备上述夹竹桃天蛾病毒杀虫剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
步骤一：幼虫饲养，用人夹竹桃天蛾人工饲料对夹竹桃天蛾幼虫进行饲养；
步骤二：病毒感染，将夹竹桃天蛾病毒放入经步骤一饲养后的幼虫中；
步骤三：饲养被夹竹桃天蛾病毒感染后的幼虫；
步骤四：将经步骤三饲养后的幼虫粉碎，制成液体并过滤，收集沉淀；
步骤五：向步骤四中所收集的沉淀中加水，制成悬液，然后加入甘油、二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。
该制备方法简单，且可用于杀虫剂加工生产厂家进行规模化生产。
本发明的第三个目的是通过以下技术方案实现的：
一种夹竹桃天蛾人工饲料，该饲料包括麦胚、干酪素、韦氏盐、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、以及夹竹桃叶粉。利用该人工饲料所饲料的夹竹桃天蛾的各龄期幼虫及蛹的体重、幼虫发育历期以及存活率等与天然饲料相当；而与传统的人工饲料相比，该饲料所饲养的夹竹桃天蛾的各龄期幼虫及蛹的体重较重，幼虫发育历期较短以及存活率较高。
进一步的，该人工饲料还包括琼脂和水。加入琼脂和水利于形成固体培养基，便于存储和饲养幼虫。
具体的，所述琼脂和水的重量百分比为：琼脂1.2-1.8，水70-85。
进一步的，该人工饲料还包括山梨酸。对酵母、霉菌和许多真菌都具有抑制作用。
具体的，所述山梨酸的重量比为0.2-0.6。
具体的，本发明所提供的人工饲料中麦胚、干酪素、韦氏盐、山梨酸、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、以及夹竹桃叶粉的重量百分比为：麦胚6-10、干酪素2-5、韦氏盐0.3-1.2、尼泊尔金0.1-0.5、抗坏血酸0.5-1、维生素B 0.2-0.8重量份、维生素E0.02-0.1、肌醇0.03-0.6、夹竹桃粉5-10。
本发明所提供的夹竹桃天蛾人工饲料可以用于饲养任何一种夹竹桃天蛾，在此主要用于生产夹竹桃天蛾病毒杀虫剂中饲养夹竹桃天蛾。
本发明的有益效果是：所提供的杀虫剂降低了对造林的影响，对夹竹桃天蛾具有很好的针对性，有效地解决了在杀灭夹竹桃天蛾的同时对夹竹桃天蛾天敌进行杀灭的问题，维持了生态平衡；且该杀虫剂不易引起夹竹桃天蛾的抗药性，有利于有害生物的可持续控制。
而本发明所提供的制备方法简单，且可用于杀虫剂加工生产厂家进行规模化生产。
本发明所提供的人工饲料与天然饲料相当，利用该饲料所饲养的夹竹桃天蛾的各龄期幼虫及蛹的体重较重，幼虫发育历期较短以及存活率较高。
具体实施方式
在此结合实施例对本发明所提供的技术方案作进一步的详细的说明。
首先，本实施方式中提供的是一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂，该杀虫剂包括了虫粉、甘油、60nm的纳米级二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水，其中的虫粉是被夹竹桃天蛾病毒感染的幼虫粉碎而得；以上组分可以按照以下三种重量配比方案进行配比：
1、虫粉5％，甘油2％，纳米级二氧化硅0.3％，精制荧光增白剂1％，芳香族氨基酸0.12％，木质素磺酸钠0.2％，聚乙烯醇1％，氟啶脲0.05％，无菌水余量。
2、虫粉10％，甘油1.5％，纳米级二氧化硅0.2％，精制荧光增白剂0.8％，芳香族氨基酸0.14％，木质素磺酸钠0.3％，聚乙烯醇1％，氟啶脲0.06％，无菌水余量。
3、虫粉15％，甘油5％，纳米级二氧化硅0.5％，荧光增白剂1％，芳香族氨基酸0.15％，木质素磺酸钠1％，聚乙烯醇1.8％，氟啶脲0.1％，无菌水余量。
此以上三种配比方案外，还可以采用其余的配比方案进行。
本实施方式中所提供的夹竹桃天蛾病毒杀虫剂可以采用任何一种生产方式进行制备，在此本申请提供一种简单的制备方法，该方法主要包括以下步骤：
步骤一：幼虫饲养，将幼虫接入装有夹竹桃天蛾人工饲料的饲养板内，放入饲养室进行饲养；该饲养可以在任何环境下进行，在此饲养环境如下：
饲养室(可控温、控湿、控光)要达到千级洁净水平，优选的是≧0.5μm的灰尘≦35粒/L；通风效果，光照强度要达到3000LX以上，并安装有紫外灯。
步骤二：病毒感染，重新准备一块饲养板，在步骤一种的环境下将夹竹桃天蛾幼虫饲养到4龄，将上述的夹竹桃天蛾扔饲料装入新饲养板中，，并在饲料表面接上经常规技术纯化后的夹竹桃天蛾核型多角体病毒，并将4龄的幼虫接入饲养板中；
步骤三：将步骤二中的饲养板放入复制养虫间进行饲养，饲养过程中发现有感染病毒的毒虫或死亡虫，要随时加以收集；
步骤四：将步骤三中所收集的毒虫或死亡虫的虫尸，将其置于容器中，加水稀释，加入的水最好为虫粉的2～3倍；将容器置于高速组织捣碎机上进行间断均浆2～3min后取出，用纱布进行过滤；滤液再用筛子过滤(优选80目)并加水稀释(优选2-3倍)，此滤液用16000r/min的离心机离心，将滤液离心后收集沉淀；
步骤五：向步骤四中所收集的沉淀中加水重悬，制成悬液，并在悬液中加入甘油、纳米级二氧化硅、精致荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、甘油、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。
在以上制备方法中，步骤一中的幼虫可以通过以下方法获得：
将夹竹桃天蛾的蛹装入容器中，室温下羽化成虫并解除滞育；然后将羽化后的成虫进行雌雄配对放入成虫产卵件进行交配产卵，最后将上述虫卵经常规消毒后孵出幼虫。其中，夹竹桃天蛾的蛹是在野外采集得到，所采集到的蛹需要经过以下处理：
夹竹桃天蛾卵块用塑料纱(优选40目)包好放在次氯酸钠溶液(优选2％)浸渍，优选5分钟，取出后用无菌水洗涤(优选3次)，阴干后放入的冰箱内(优选4℃)备用，但储存期超过3个月的虫卵不能再用。
此外，孵化虫蛹是在温度为22℃～25℃，湿度为40％～70％，光照16小时的环境下进行的，当1龄幼虫破壳而出时，要即使将1龄幼虫用毛笔接入已经装好人工饲料的饲养板中；每块饲养板最好放置20头幼虫，当然也可以根据具体情况选择方式幼虫的数量。
在以上制备方法中用于饲养夹竹桃天蛾幼虫的人工饲料可以采用任何一种人工饲料，在此，本申请所采用的人工饲料有以下几种配方：
1、麦胚、干酪素、韦氏盐、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、以及夹竹桃叶粉，其中各组分的重量配比为：麦胚6、干酪素2、韦氏盐0.3、尼泊尔金0.1、抗坏血酸0.5、维生素B 0.2重量份、维生素E 0.02、肌醇0.03、夹竹桃粉5；
2、麦胚、干酪素、韦氏盐、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、、夹竹桃叶粉、琼脂、以及水，其中各组分的重量配比为：麦胚8、干酪素5、韦氏盐1、尼泊尔金0.3、抗坏血酸0.8、维生素B0.6、维生素E 0.05、肌醇0.04、夹竹桃粉8，琼脂1.2，水70；
3、麦胚、干酪素、韦氏盐、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、夹竹桃叶粉、琼脂、水以及山梨酸，其中各组分的重量配比为：麦胚10、干酪素5、韦氏盐1.2、尼泊尔金0.5、抗坏血酸1、维生素B 0.8、维生素E 0.1、肌醇0.6、夹竹桃粉10、琼脂1.8、水85、山梨酸0.2～0.6。
除以上三种人工饲料配方外，还可以采用其余的配方。
为了更好的说明杀虫剂的制备方法，在提供以下几种实施例：
实施例1
本实施例中的杀虫剂制备方法为：
1、将100头夹竹桃天蛾蛹置于24℃的容器(培养箱)中进行羽化，将羽化后的成虫放入容器中使其进行交配产卵，每个容器中放入2对成虫；最后将上述虫卵经常规消毒后孵出幼虫；
2、预先将加热均匀的夹竹桃天蛾人工饲料装入饲养板内，并接入1龄幼虫，放入饲养室进行饲养，饲养温度为24℃；其中所用的人工饲料的配方为表1中的配方1；
3、将幼虫饲养至4龄，将夹竹桃天蛾扔饲料装入另一饲养板中，在其表面接入悬液维200万PIB/ml病毒悬液(该病毒悬液是将毒株，优选核型多角体病毒，加入适量蒸馏水配置而成)，待饲料表面干燥污水滴后将4龄的幼虫接入该饲养板中，任其自由取食；
4、将步骤3中的饲养板放入复制养虫间进行饲养，饲养过程中发现有感染病毒的毒虫或死亡虫，要随时加以收集；
5、对步骤4中的死虫尸体按照上述制备方法中步骤四进行处理，加工成200亿PIB/lm的病毒悬液；按照重量配比为：甘油2％，纳米级二氧化硅0.3％，精制荧光增白剂1％，芳香族氨基酸0.12％，木质素磺酸钠0.2％，聚乙烯醇1％，氟啶脲0.05％，无菌水余量依次加入15％的200亿PIB/lm的病毒悬液中，进行搅拌后获得一乳白色的悬浮剂产品，即本申请所提供的杀虫剂。
实施例2
本实施例与实施例1的步骤相同，所存在区别在于：
1、夹竹桃天蛾蛹的数量为500头；
2、所用于饲养夹竹桃天蛾幼虫的人工饲料的配方为表1中的配方2；
3、步骤3中所接入的病毒悬液为100万PIB/ml；
4、步骤5中所加入的组分的重量配比不同，本实施例所采用的重量配比为：甘油1.5％，纳米级二氧化硅0.2％，精制荧光增白剂0.8％，芳香族氨基酸0.14％，木质素磺酸钠0.3％，聚乙烯醇1％，氟啶脲0.06％，无菌水余量。
实施例3
本实施例所提供的制备方法与实施例1的步骤相同，所存在的区别在于：
1、夹竹桃天蛾蛹的数量为15000头；
2、所用于饲养夹竹桃天蛾幼虫的人工饲料的配方为表1中的配方3；
3、步骤3中所接入的病毒悬液为100万PIB/ml；
4、步骤5中所加入的组分的重量配比不同，本实施例所采用的重量配比为：甘油2％，纳米级二氧化硅0.15％，精制荧光增白剂0.8％，芳香族氨基酸0.14％，木质素磺酸钠0.3％，聚乙烯醇1％，氟啶脲0.08％，无菌水余量。
实施例4
本实施例所提供的制备方法与实施例1的步骤相同，所存在的区别在于：
1、夹竹桃天蛾蛹的数量为1000头；
2、所用于饲养夹竹桃天蛾幼虫的人工饲料的配方为表1中的配方4；
3、步骤3中所接入的病毒悬液为100万PIB/ml；
4、甘油2％，纳米级二氧化硅0.15％，精制荧光增白剂0.8％，芳香族氨基酸0.14％，木质素磺酸钠0.3％，聚乙烯醇1％，氟啶脲0.05％，无菌水余量。
为了说明本发明所提供的人工饲料具有与天然饲料相当的效果，在此分别以表1中的人工饲料和天然饲料分别饲养夹竹桃天蛾幼虫，分别获得表2和表3中的数据。
表1夹竹桃天蛾幼虫人工饲料不同配方各物质的重量百分比
| 元素(％) | 配方1 | 配方2 | 配方3 | 配方4 |
| 麦胚 | 6.0 | 8.0 | 9.0 | 10.0 |
| 干酪素 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 5.0 |
| 韦氏盐 | 0.3 | 0.6 | 0.9 | 1.2 |
| 山梨酸 | 0.2 | 0.4 | 0.5 | 0.6 |
| 尼泊尔金 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
| 抗坏血酸 | 0.5 | 0.7 | 0.9 | 1.0 |
| 维生素B | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 |
| 维生素E | 0.02 | 0.04 | 0.06 | 0.1 |
| 肌醇 | 0.03 | 0.2 | 0.4 | 0.6 |
| 琼脂 | 1.2 | 1.4 | 1.6 | 1.8 |
| 夹竹桃叶粉 | 5 | 7 | 8 | 10 |
| 水 | 85 | 82 | 78 | 72 |
表2：人工饲料与天然饲料对夹竹桃天蛾幼虫及蛹体质量的影响
| 虫态 | 人工饲料饲养(g) | 天然饲料饲养(g) |
| 4龄 | 7.0 | 6.15 |
| 5龄 | 8.5 | 7.5 |
| 6龄 | 9.5 | 8.0 |
| 蛹 | 11 | 9.5 |
表3：人工饲料与天然饲料饲养夹竹桃天蛾幼虫龄期与历期比较
由上述各表2和3中可以看出：选用表1各个配方饲养夹竹桃天蛾幼虫，幼虫历期缩短2-3天；成蛹率高于75％；6龄幼虫体质量增加18.75％，蛹重增加15.78％。
采用表1中每种配方的人工饲料所饲养的夹竹桃天蛾幼虫的生长情况均不同，具体效果如表4所示：
表4不同饲料配方饲养夹竹桃天蛾幼虫的效果
本申请在此所提供的夹竹桃天蛾人工饲料可以用于饲养任何夹竹桃天蛾幼虫，在此只是提供其用于夹竹桃天蛾病毒杀虫剂的制备方法中的应用，但并不表示该人工饲料不能用于其它领域饲养夹竹桃天蛾幼虫。
Claims (10)
1.一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂，其特征在于：包括虫粉、甘油、二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水；所述虫粉是被夹竹桃天蛾病毒感染的幼虫粉碎而得，其中夹竹桃天娥病毒保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号：V201730。
2.如权利要求1所述的夹竹桃天蛾病毒杀虫剂，其特征在于：所述虫粉、甘油、二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水的重量配比为：虫粉5-15％，甘油1.0-5.0％，纳米二氧化硅0.1-0.5％，荧光增白剂0.5-1％，芳香族氨基酸0.1-0.15％，木质素磺酸钠0.1-1％，聚乙烯醇0.1-1.8％，氟啶脲0.01-0.1％，无菌水余量。
3.一种夹竹桃天蛾病毒杀虫剂的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：
步骤一：幼虫饲养，用人工夹竹桃天蛾人工饲料对夹竹桃天蛾幼虫进行饲养；
步骤二：病毒感染，将夹竹桃天蛾病毒放入经步骤一饲养后的幼虫中；
步骤三：饲养被夹竹桃天蛾病毒感染后的幼虫；
步骤四：将经步骤三饲养后的幼虫粉碎，制成液体并过滤，收集沉淀；
步骤五：向步骤四中所收集的沉淀中加水，制成悬液，然后加入甘油、二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、聚乙烯醇、氟啶脲和无菌水，搅拌均匀后得到产品。
4.一种夹竹桃天蛾人工饲料，其特征在于：该饲料包括麦胚、干酪素、韦氏盐、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、以及夹竹桃叶粉。
5.如权利要求4所述的一种夹竹桃天蛾人工饲料，其特征在于：还包括琼脂和水。
6.如权利要求5所述的一种夹竹桃天蛾人工饲料，其特征在于：所述琼脂和水的重量百分比为：琼脂1.2-1.8，水70-85。
7.如权利要求4或5或6所述的一种夹竹桃天蛾人工饲料，其特征在于：还包括山梨酸。
8.如权利要求7所述的一种夹竹桃天蛾人工饲料，其特征在于：所述山梨酸的重量比为0.2-0.6。
9.如权利要求4或5或6或7或8所述的一种夹竹桃天蛾人工饲料，其特征在于：所述麦胚、干酪素、韦氏盐、山梨酸、尼泊尔金、抗坏血酸、维生素B、维生素E、肌醇、以及夹竹桃叶粉的重量百分比为：麦胚6-10、干酪素2-5、韦氏盐0.3-1.2、尼泊尔金0.1-0.5、抗坏血酸0.5-1、维生素B 0.2-0.8重量份、维生素E 0.02-0.1、肌醇0.03-0.6、夹竹桃粉5-10。
10.权利要求4-9任意一项所述的夹竹桃天蛾人工饲料用于生产夹竹桃天蛾病毒杀虫剂的用途。
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