CN103053813A - 舞毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种舞毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产工艺。本发明提供一种价格低廉的舞毒蛾人工饲料，其喂饲的舞毒蛾的体重、发育历期、存活率等均与天然饲料相当，由此可以提高舞毒蛾病毒的产量、降低生产成本、扩大野外应用面积。由该人工饲料生产舞毒蛾病毒杀虫剂的工艺不受外界环境制约，可大规模生产，制备出的杀虫剂安全高效。

Description

舞毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产工艺

技术领域

本发明涉及一种价格低廉的舞毒蛾人工饲料，其用于生产舞毒蛾病毒杀虫剂，属于林木害虫——舞毒蛾生物防治领域。

背景技术

舞毒蛾(Lymantria dispar L.)，又名秋千毛虫、苹果毒蛾、柿毛虫，隶属于鳞翅目Lepidoptera，毒蛾科Lymantriidae，毒蛾属Lymantria，是世界性食叶害虫，具有分布广、食性杂、危害重、幼虫随风迁移等特点。

由于舞毒蛾对农林业的危害严重，近百年来，人们采用了多种方法对舞毒蛾进行防治。化学农药防治是应用最早也是迄今为止应用最为广泛的防治手段。因其具有经济、有效、方法简便、不受地形限制等特点，当森林虫害发生时，能在短期内取得满意的防治效果，减少经济损失。但大量采用化学制剂防治，产生了严重的“3R”问题，即抗药性(Resistance)、再猖獗(Resurgence)和残留(Residue)。

近年来，随着人们生活水平的提高和环保意识的增强，使用和开发高效、低毒、无公害的农药已成为发展的必然趋势。昆虫病毒不仅具有寄主专一性、防治效果好、不污染环境、对其它生物安全、不使害虫产生抗药性等优点，而且病毒还能在环境中积累，通过外界因子的刺激或诱发等多种途径在害虫种群中形成流行病而长期控制虫口密度，在害虫的可持续控制中发挥重要的作用。

在舞毒蛾防治中，核型多角体病毒(NPV)是最常用的一种。利用舞毒蛾核型多角体病毒(LdNPV)防治舞毒蛾已有几十年的历史。国外对LdNPV的应用研究较早，60年代初就开始利用舞毒蛾核型多角体病毒进行林间防治，并取得了较为理想的效果。实验证明，舞毒蛾核型多角体病毒是影响舞毒蛾种群动态的主要因子之一，常引起舞毒蛾种群数量的急剧下降，是有效防治舞毒蛾、降低其危害的有效方法。应用舞毒蛾核型多角体病毒(LdNPV)防治舞毒蛾在世界各地均取得了良好效果，特别是在各种化学合成杀虫剂严重污染环境以及害虫对化学合成杀虫剂抗性日益增强的情况下，应用舞毒蛾核型多角体病毒防治舞毒蛾显得尤为重要和迫切。

目前，舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)以在舞毒蛾幼虫体内复制最为经济，虽然舞毒蛾人工饲养技术已成功解决，但由于饲养成本较高，严重抑制了舞毒蛾病毒在野外的大量推广应用。

发明内容

为了克服上述技术问题，本发明提供一种价格低廉的舞毒蛾人工饲料，其喂饲的舞毒蛾的体重、发育历期、存活率等均与天然饲料相当，由此可以提高舞毒蛾病毒的产量、降低生产成本、扩大野外应用面积。由该人工饲料生产舞毒蛾病毒杀虫剂的工艺不受外界环境制约，可大规模生产，制备出的杀虫剂安全高效。

本发明通过如下技术方案实现：

一种人工饲料，其包括如下组分：韦氏盐、麦胚、干酪素、蔗糖、抗坏血酸、氯化胆碱、肌醇和胆固醇。

优选地，所述饲料进一步包括琼脂和水。

根据本发明的优选技术方案，所述饲料进一步包括山梨酸。

根据本发明，所述人工饲料包括：韦氏盐4-15重量份、麦胚80-180重量份、干酪素30-90重量份、蔗糖5-15重量份、抗坏血酸4-15重量份、氯化胆碱0.3-6重量份、肌醇0.3-6重量份、胆固醇0.5-6重量份。优选地，进一步包括琼脂8-25重量份、水适量。更优选地，所述饲料还包括山梨酸0.3-6重量份。

更优选的，本发明的人工饲料包括：韦氏盐6-10重量份、麦胚100-140重量份、干酪素35-70重量份、蔗糖8-13重量份、抗坏血酸6-10重量份、氯化胆碱0.5-4重量份、肌醇0.5-4重量份、胆固醇1-5重量份。优选地，进一步包括琼脂10-20重量份、水适量。更优选地，所述饲料还包括山梨酸0.5-4重量份。

特别优选的，本发明的人工饲料中的组分及其重量份为：韦氏盐8重量份、麦胚120重量份、干酪素50重量份、蔗糖10重量份、抗坏血酸8重量份、氯化胆碱2重量份、肌醇2重量份、胆固醇3重量份。优选地，进一步包括琼脂15重量份、水780重量份。更优选地，所述饲料还包括山梨酸2重量份。

根据本发明，其中麦胚是饲料主体，为昆虫提供蛋白质、糖、脂肪酸、维生素、无机盐等物质。干酪素，提供蛋白质。韦氏盐，提供无机盐。蔗糖，提供营养，并用于合成昆虫脂肪。抗坏血酸、氯化胆碱、胆固醇、肌醇，为昆虫提供维生素；而琼脂和水，用于保持饲料的物理性状。

本发明还涉及一种人工饲料的制备方法，其特征在于，将前述任一方案的上述组分按一定重量比进行混合。

本发明还涉及人工饲料在制备舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫剂中的应用。

本发明还涉及一种由人工饲料生产舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫剂的工艺，包括以下步骤：采自野外的卵经消毒后孵出幼虫，接入装有舞毒蛾幼虫人工饲料的舞毒蛾幼虫饲养容器内，放入健康养虫间内饲养到4龄初；舞毒蛾幼虫人工饲料装入舞毒蛾幼虫饲养容器中，饲料表面接上舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)，每容器中接入健康养虫间饲养的幼虫，放入复制养虫间饲养感染病毒后幼虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀。

特别优选的，舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫剂的生产工艺包括：

一、饲养室

昆虫饲养室(可控温、控湿、控光)要达到千级洁净水平，优选≥0.5μm的灰尘≤35粒/L。室顶和四壁使用隔热彩钢板建造，顶部进风口安装空气净化装置及送风机组，功率优选达循环60次/小时，加温采用空调机，顶及四壁安装日光灯，光照强度优选要达到3000LX以上，顶部安装紫外灯，洁净室入口安装风淋机。

二、卵的消毒

将野外采集到的舞毒蛾卵块用塑料纱(优选40目)包好放在次氯酸钠溶液(优选2％)浸渍，优选5分钟，取出后用无菌水洗涤(优选3次)，阴干后放入的冰箱内(优选4℃)备用，但储存期超过6个月的虫卵不能再用。

三、健康虫的饲养

将卵放入健康虫饲养室(优选温度25℃-28℃；湿度40％-70％；光照16小时)，优选4-5天后1龄幼虫破壳而出，要及时将1龄幼虫用毛笔接入已装好人工饲料的养虫瓶中，每瓶优选20头。将接入幼虫的养虫瓶倒立放入养虫筐，再将养虫筐放在养虫架上。幼虫发育到4初时，送病毒增殖室用于复制病毒。

四、舞毒蛾病毒的复制增殖

将毒株(优选核型多角体病毒)加入适量蒸馏水配制成一定浓度的接毒水，倒入人工饲料表面，待其表面干燥无水滴便可以放入4龄初虫(优选6条)任其自由取食。

五、感毒虫的收集、保存

发现感毒虫或死亡虫，要随时加以回收。将收集的病死虫尸加水稀释(优选2～3倍)，在高速组织捣碎机上，做间断匀浆(优选2-3分钟)后取出，用纱布过滤；滤液再用筛子过滤(优选80目)并加水稀释(优选2-3倍)，此滤液用离心机离心(优选16000r/min)，弃上清液，得沉淀，兑入等量甘油，零下10度保存。

本发明的有益效果：相对于传统的人工饲料，用本发明的饲料喂饲的舞毒蛾各龄期幼虫以及蛹的体重较高，幼虫发育历期较短，存活率较高，用本发明的饲料喂饲的舞毒蛾各龄期幼虫以及蛹的体重、幼虫发育历期、存活率等均与天然饲料(如108杨)相当。并且，本发明的饲料成本以及饲养的舞毒蛾幼虫单头成本均显著降低。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于实施例。

一、人工饲料的制备及其对舞毒蛾生长发育和存活的影响

1、人工饲料的制备

本发明人工饲料由以下组分混合配制而成：韦氏盐8g、麦胚120g、干酪素50g、蔗糖10g、山梨酸2g、抗坏血酸8g、氯化胆碱2g、肌醇2g、胆固醇3g、琼脂15g、水780ml；

采用以下饲料作为对比例：

饲料①：干酪素35g、韦氏盐10g、蔗糖12g、果糖23g、麦胚60g、氯化胆碱1g、对羟1.5g、琼脂25g、金霉素0.3g、抗坏血酸4g、4M KOH 5ml、38％甲醛0.5ml、55％亚麻酸4.3ml、混合维生素10ml(烟酸100g、泛酸钙100g、核黄素50g、盐酸硫胺素25g、盐酸吡哆醇25g、叶酸25g、生物素2g、B120.2g)、水860ml(王延年等，1982)；

饲料②：干酪素40g、蔗糖30g、韦氏盐10g、山梨酸2g、麦胚100g、琼脂16g、对羟1g、混合维生素10g(抗坏血酸280g、氯化胆碱55g、叶酸250ml、肌醇20g、烟酸1g、吡哆辛230mg、胆固醇50g、B121.5g)、水800ml；

CK：108杨Populus euramericana Guariento。

2、不同人工饲料对舞毒蛾(2010年4月采自内蒙古赤峰市乌兰察布林区)生长发育和存活的影响

选取刚孵化的舞毒蛾1龄幼虫，单头放于盛有新鲜不同人工饲料的带盖透明塑料养虫杯(底Φ＝3.5cm，顶Φ＝5.0cm，高(H)＝5cm)内，每3天更新一次人工饲料。将养虫杯倒置于T＝25±1℃，RH＝70％，L∶T＝8∶16的人工气候箱(SANYO MLR-351H)内，每24小时记录一次体重、蜕皮、死亡情况，直至完全化蛹，以108杨喂饲的为CK，不同处理重复100次。统计分析不同人工饲料对舞毒蛾生长发育、存活的影响。应用SAS8.0对上述数据进行单因素方差分析。

2.1不同饲料对舞毒蛾体重的影响

通过表1可以看出，利用人工饲料喂饲舞毒蛾，对不同龄期幼虫和蛹重存在不同程度的影响。四种饲料喂饲的1龄幼虫，彼此间体重无显著差异。自2龄幼虫至蛹期，本发明饲料喂饲的舞毒蛾体重同CK无显著差异，但自4龄开始至蛹期，其体重同饲料①和②喂饲的舞毒蛾存在显著差异。饲料②喂饲的舞毒蛾幼虫体重略高于饲料①，但相同龄期和蛹间体重无显著差异。因此，本发明饲料为最适人工饲料，其次为饲料②，饲料①最差。

表1  不同饲料对舞毒蛾体重的影响(单位：头/g)

注：表中同列字母相同，表示5％水平上无显著差异，下表同。

2.2不同饲料对舞毒蛾发育历期的影响

利用不同饲料喂饲舞毒蛾，对其发育历期也存在不同程度的影响(见表2)。其中，取食108杨(CK)和本发明饲料的舞毒蛾各龄期幼虫发育历期最短，且幼虫期仅为17.52和17.89d，明显低于其它人工饲料喂饲的结果，差异显著。以饲料①和②喂饲的舞毒蛾各龄期幼虫以及幼虫期之间均无显著差异，幼虫期分别为24.48和22.63d。就幼虫发育历期而言，本发明饲料喂饲结果最佳。

表2  不同饲料对舞毒蛾发育历期的影响(单位：d)

2.3不同饲料对舞毒蛾存活的影响

通过表3可知，不同饲料对舞毒蛾各龄期幼虫的存活率也存在一定影响。同一种饲料喂饲的舞毒蛾，1龄幼虫存活率受其影响最大，存活率最低。根据舞毒蛾幼虫总存活率，不同饲料由高到低排列为CK＞本发明饲料＞饲料②＞饲料①。综合3种人工饲料，本发明饲料对舞毒蛾各龄期幼虫以及总存活率的影响最小。

表3  不同饲料对舞毒蛾存活的影响(单位：％)

3、不同人工饲料的成本分析

从表4可以看出，本发明饲料成本最低，为130元/1000g，比饲料①和②分别低11.54％和6.15％；而用本发明饲料饲养的舞毒蛾幼虫单头饲养成本为0.10元/头，分别比饲料①和②饲养的舞毒蛾低30％和40％，大大节约了幼虫的饲养成本，因此，以本发明饲料饲养的舞毒蛾价格最为低廉。

表4  不同人工饲料成本分析(单位：元)

综上所述，通过分析不同饲料对舞毒蛾幼虫和蛹体重、发育历期以及存活率的影响，可以看出，本发明饲料为最适人工饲料，因为利用其饲养的舞毒蛾各龄期幼虫以及蛹的体重均最高，且幼虫发育历期最短、存活率最高，同以108杨饲养的舞毒蛾无显著差异。而以饲料①和②饲养的舞毒蛾幼虫和蛹体重、发育历期和存活率均明显低于本发明饲料，彼此差异显著。其次，本发明饲料的成本以及饲养的舞毒蛾幼虫单头成本均显著低于饲料①和②，可见，本发明饲料为最佳饲养舞毒蛾的人工饲料。

Claims (10)

1.一种舞毒蛾人工饲料，包括韦氏盐、麦胚、干酪素、蔗糖、抗坏血酸、氯化胆碱、肌醇、胆固醇。

2.根据权利要求1所述的人工饲料，其特征在于，所述人工饲料还包括琼脂和水。

3.根据权利要求1-2任一项所述的人工饲料，其特征在于，所述人工饲料还包括山梨酸。

4.根据权利要求1所述的人工饲料，其特征在于，所述人工饲料包括：韦氏盐4-15重量份、麦胚80-180重量份、干酪素30-90重量份、蔗糖5-15重量份、抗坏血酸4-15重量份、氯化胆碱0.3-6重量份、肌醇0.3-6重量份、胆固醇0.5-6重量份。

5.根据权利要求4所述的人工饲料，其特征在于，所述人工饲料包括：韦氏盐8重量份、麦胚120重量份、干酪素50重量份、蔗糖10重量份、山梨酸2重量份、抗坏血酸8重量份、氯化胆碱2重量份、肌醇2重量份、胆固醇3重量份、琼脂15重量份、水780重量份。

6.一种制备如权利要求1-5任一项所述的舞毒蛾人工饲料的方法，其特征在于，将各组分按一定重量份进行混合。

7.如权利要求1-5任一项所述的人工饲料用于生产舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫剂的用途。

8.一种舞毒蛾病毒杀虫剂的制备方法，其特征在于：使用如权利要求1-5任一项所述的人工饲料来喂饲舞毒蛾。

9.一种如权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

将舞毒蛾幼虫人工饲料装入舞毒蛾幼虫饲养容器中，饲料表面接上舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)，每容器中接入健康养虫间饲养的幼虫，放入复制养虫间饲养感染病毒后幼虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀。

10.根据权利要求8的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

采自野外的卵经消毒后孵出幼虫，接入装有舞毒蛾幼虫人工饲料的舞毒蛾幼虫饲养容器内，放入健康养虫间内饲养到4龄初；舞毒蛾幼虫人工饲料装入舞毒蛾幼虫饲养容器中，饲料表面接上舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)，每容器中接入健康养虫间饲养的幼虫，放入复制养虫间饲养感染病毒后幼虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀。