CN107197861A - 一种cpv与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，包括有效活性成分松毛虫质型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉，所述的松毛虫质型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1︰12～2︰1。本发明还公开了一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，本发明杀虫悬浮剂具有高效、广谱的特点，对人畜无害，不伤害天敌，可广泛应用于森林、蔬菜、棉花、茶叶、果树等害虫的防治。

Description

一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法
技术领域
本发明属于生物农药加工技术领域，具体地说，涉及一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法。
背景技术
马尾松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus Cypovirus，DPCPV)为我国重大森林害虫松毛虫的致病原，对松毛虫有良好的控制效果。1989年，Belloncik S研究发现质型多角体病毒(Cytoplasmic polyhedrosis virus，CPV)感染昆虫中肠上皮细胞，其突出特点是对环境无毒无害，持续感染效果非常好，容易造成害虫流行病。赵同海等人(2004)研究发现DpCPV宿主范围较广，可以使10科36种鳞翅目昆虫感染发病。防治原理：在林内释放松毛虫质型多角体病毒，通过松毛虫的取食，造成松毛虫大面积的流行病，最终导致大量死亡。一般当代感染率在70％以上，因而大大的降低虫口密度，促进生态的良性循环。此外，该病毒还具有水平和垂直传播的效果，不污染环境，不杀伤天敌，能够起到持续防控的作用，这不但大大降低防治成本，而且增加了木材的收益，同时减少化学农药的使用量，改善松林的生态环境。
球孢白僵菌(Beaueria bassaria(Balsamo)Vuillemin)是一种昆虫病原真菌，作为活体生物农药，在寄主虫体内大量繁殖，使体液机能发生变化，新陈代谢紊乱以致死亡。由于白僵菌无毒、无味、无污染，已广泛用于农林害虫防治中。白僵菌可以用来防治松毛虫、蛴螬、家蝇、茶小绿叶蝉、介壳虫、白粉虱、蚜虫、蓟马、马铃薯叶甲、玉米螟、天牛、金龟子等40多种农林害虫。但是不同地理种群或不同株系的球孢白僵菌对害虫的毒力存在较大的差异，即使同一株系的球孢白僵菌对不同种类害虫的毒理也不相同，因此在真菌的生物防治中针对不同种类的害虫经常要筛选高毒力菌株；另外，白僵菌防治效果受环境湿度较大，在相对湿度较低时，防治效果并不理想，且杀虫速度相对较慢，影响了其在农林害虫防治上的积极性。
昆虫病毒是一种良好的生物杀虫剂，是生物防治的重要手段之一。昆虫病毒杀虫剂具有特异性强、致病力高、稳定性好、安全和不污染环境，用后能引起害虫群体病毒性疾病流行传播，可自然控制害虫消长，并导致相继世代流行病的死亡。但是昆虫病毒杀虫剂仍存在诸多问题，解决病毒增殖技术和降低生产成本是病毒商品化生产的关键问题之一。
发明内容
有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法，该复配杀虫剂具有高效、广谱的特点，对人畜无害，不伤害天敌，可广泛应用于森林、蔬菜、棉花、茶叶、果树等害虫的防治。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，包括有效活性成分松毛虫质型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉，所述的松毛虫质型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1︰12～2︰1。
进一步地，该CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂按照质量百分比包括以下组分：
进一步地，松毛虫质型多角体病毒悬液通过以下方法制备得到：松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。按重量计，该棉铃虫幼虫的人工饲料配方是：黄豆粉5-15％，蔗糖0.4-0.8％，玉米粉5-10％，酵母粉2-6％，尼泊尔金0.1-0.5％，山梨酸0.05-0.1％，维生素C0.1-0.5％，琼脂1.5-2.0％；余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％；病毒感染替代宿主后4到10天收集病毒致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的松毛虫质型多角体病毒悬液。
进一步地，球孢白僵菌粉通过以下方法制备：取球孢白僵菌菌种在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终得到白僵菌球孢粉。
进一步地，松毛虫质型多角体病毒株已于2014年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO：V201607；球孢白僵菌已于2013年8月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO.7998。
进一步地，纳米级二氧化硅为60nm二氧化硅。
本发明还公开了一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
1)制备松毛虫质型多角体病毒悬液；
2)制备球孢白僵菌粉；
3)称量：按照质量百分比称量以下组分：松毛虫质型多角体病毒悬液5～20％；球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；芳香族氨基酸0.1～0.15％；精制荧光增白剂0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
4)依次加入松毛虫质型多角体病毒悬液、球孢白僵菌、二氧化硅、芳香族氨基酸、精制荧光增白剂、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水，再搅拌均匀分装，制备得到CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
进一步地，步骤1)中制备松毛虫质型多角体病毒悬液具体为：松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒；按重量计，该棉铃虫幼虫的人工饲料配方是：黄豆粉5-15％，蔗糖0.4-0.8％，玉米粉5-10％，酵母粉2-6％，尼泊尔金0.1-0.5％，山梨酸0.05-0.1％，维生素C0.1-0.5％，琼脂1.5-2.0％；余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％；病毒感染替代宿主后4到10天收集病毒致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的松毛虫质型多角体病毒悬液。
进一步地，步骤2)中制备球孢白僵菌粉具体为：取球孢白僵菌菌种在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终得到白僵菌球孢粉。
进一步地，松毛虫质型多角体病毒株已于2014年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO(V201607)；球孢白僵菌已于2013年8月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO.7998；所述纳米级二氧化硅为60nm二氧化硅。
与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：
1))松毛虫质型多角体病毒和球孢白僵菌杀虫悬浮剂是一种新型的生物农药，由专一性的病毒、广谱性的白僵菌和化学助剂筛选研究复配而成，显示出病毒与白僵菌协同作用防治松毛虫的优势，克服了单纯用病毒潜伏期长和单独用球孢白僵菌防效期短的的缺点。
2)增加剂型中的光保护剂，剂型组分更完善。本发明提供的松毛虫质型多角体病毒和球孢白僵菌杀虫悬浮剂，同时添加微量无机纳米材料、芳香族氨基酸和少量精制荧光增白剂，使昆虫病毒杀虫剂的组分更完善，悬浮性更好，货架寿命更长，田间应用是对紫外光有较好的防护作用，病毒持续作用时间延长，防治效果提高。
3)质型多角体病毒和球孢白僵菌杀虫悬浮剂，对人畜、家禽、鱼类、植物无毒无害，不伤害天敌，有利于维护森林的生态平衡，对环境无不良影响，是一种安全无毒，不使害虫产生抗药性的高效生物农药。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明首次用从江西省九江文山松毛虫中分离出一株CPV，该毒株已于2014年10月15日，保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO(V201607)。球孢白僵菌是由江西天人生态股份有限公司提供，球孢白僵菌已于2013年8月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO.7998。
该毒株杀虫谱广，毒力高，当把昆虫幼虫发病后，食欲剧减，行动迟缓。对甜菜夜蛾发病幼虫而言，产生身体肿胀、体色发白症状，急性瘫痪死亡症状。病毒产量可高达5×109～1×1010PIB/头幼虫。
本发明提供的松毛虫质型多角体病毒与球孢白僵菌进行复配制备得杀虫悬浮剂，包括松毛虫质型多角体病毒悬液、球孢白僵菌粉、纳米级二氧化硅、精制荧光增白剂、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、甘油、灭幼脲类似物氟啶脲和无菌水。所述病毒悬液由松毛虫质型多角体病毒感染替代宿主得到的，替代宿主为棉铃虫或者甜菜夜蛾，孢子粉是由江西天人生态股份有限公司提供。
CPV毒株的增殖：
以棉铃虫、甜菜夜蛾等作为替代宿主增殖该CPV。采用通用型人工饲料饲养宿主，再用该病毒感染幼虫，收集4-10天的患病死虫，然后分离、收集该病毒。具体说明如下：
1)利用通用型人工饲料配方增殖CPV，其配方为：
黄豆粉：5-15％
蔗糖：0.4-0.8％
玉米粉：5-10％
酵母粉：2-6％
尼泊尔金：0.1-0.5％
山梨酸：0.05-0.1％
维生素C：0.1-0.5％
琼脂：1.5-2.0％
蒸馏水：余量
2)甜菜夜蛾、棉铃虫的饲养：
(1)甜菜夜蛾的饲养
将配制的人工饲料分装于经消毒的孵化盒中，将经人工饲料继代同步化的甜菜夜蛾适量卵块条(约300粒)粘于养虫盒盖背面上；将孵化盒放入相对湿度为湿度、光照L:D＝12:12hr的养虫室，待幼虫孵化直至化蛹。收取健康蛹，在甲醛液中消毒、漂洗、凉干后放入养虫笼内，保持80％湿度。成虫羽化后，将5W白炽灯放在产卵笼的一端，引诱雌蛾产卵于白纸上。每天定时更换产卵纸，卵纸经甲醛消毒、漂洗、凉干，再根据卵纸上卵粒的密度，将卵纸剪成小片放入养虫盒中，进入下一次生活周期再循环。
(2)棉铃虫的饲养
面铃虫幼虫有自相残杀的生活习性，幼虫需要单头饲养，除此之外，其他饲养条件与甜菜夜蛾的饲养相同。
3)CPV感染棉铃虫、甜菜夜蛾技术
病毒粗品经两次差速离心(低速800rpm，离心5min，取上清；然后将上清高速：4000rpm，离心30min，取沉淀)，去掉杂质，再经过一次蔗糖梯度离心纯化，经计数后置于4℃冰箱备用。将1×106PIB/ml的病毒悬液均匀喷在养虫盒内的人工饲料上，感染4龄幼虫，从感染后的第4天至第10天收集患病死虫。
4)CPV病毒的分离、收集
将患病死虫匀浆捣碎，离心后过200目纱布去渣，计数后备用。
白僵菌球孢粉的制备：
取球孢白僵菌菌种(菌种保藏号:7998，有江西天人生态股份有限公司提供)，在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基(YPDCA，Y：酵母粉，P：蛋白胨，D:葡萄糖，C：玉米粉，A:琼脂)固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基(YPDC)进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终得到白僵菌球孢粉。
实施例1CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂
松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。按重量计，该棉铃虫幼虫的人工饲料配方是：黄豆粉：6％，蔗糖：0.5％，玉米粉：8％，酵母粉：2％，尼泊尔金：0.2％，山梨酸：0.05％，维生素C和复合Vb各0.1％，琼脂：1.5％，蒸馏水余量。病毒感染替代宿主后4到10天收集病毒致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。
取球孢白僵菌菌种在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终得到白僵菌球孢粉。
然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/mL病毒悬液10％，球孢白僵菌粉20％，60nm二氧化硅0.2％，芳香族氨基酸0.1％，精制荧光增白剂0.5％，木质素磺酸钠0.2％，氟啶脲0.01％，甘油1.0％和余量的无菌水，以上质量百分比总量为100％；再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
实施例2CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂
松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为甜菜夜蛾，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄甜菜夜蛾幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。该甜菜夜蛾幼虫的人工饲料配方与实施例1中的棉铃虫幼虫的人工饲料配方相同。病毒感染替代宿主后4-10天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。白僵菌球孢粉的制备工艺同实施例1。
然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/mL病毒悬液15％，球孢白僵菌粉30％，60nm二氧化硅0.3％，芳香族氨基酸0.12％，精制荧光增白剂0.7％，木质素磺酸钠0.4％，氟啶脲0.05％，甘油2.0％和余量的无菌水，以上质量百分比总量为100％；再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
实施例3CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂
松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。该棉铃虫幼虫的人工饲料配方与与实施例1中的棉铃虫幼虫的人工饲料配方相同。病毒感染替代宿主后4-10天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。白僵菌球孢粉的制备工艺同实施例1。
然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/mL病毒悬液20％，球孢白僵菌粉40％，60nm二氧化硅0.4％，芳香族氨基酸0.14％，精制荧光增白剂0.8％，木质素磺酸钠0.6％，氟啶脲0.08％，甘油3.0％和余量的无菌水，以上质量百分比总量为100％；再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
实施例4CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂
松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为甜菜夜蛾，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄甜菜夜蛾幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。该甜菜夜蛾幼虫的人工饲料配方与与实例1中的棉铃虫幼虫的人工饲料配方相同。病毒感染替代宿主后4-10天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。白僵菌球孢粉的制备工艺同实施例1。
然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/mL病毒悬液20％，球孢白僵菌粉40％，60nm二氧化硅0.5％、芳香族氨基酸0.15％、精制荧光增白剂1％、木质素磺酸钠1.0％、氟啶脲0.1％、甘油5.0％和余量的无菌水，以上质量百分比总量为100％；再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
实施例5CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂
松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为甜菜夜蛾，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄甜菜夜蛾幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。该甜菜夜蛾的人工饲料配方是：黄豆粉5％，蔗糖0.8％，玉米粉5％，酵母粉6％，尼泊尔金0.1％，山梨酸0.1％，维生素C0.1％，琼脂2.0％；余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％。病毒感染替代宿主后4-10天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。白僵菌球孢粉的制备工艺同实施例1。
然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/mL病毒悬液5％，球孢白僵菌粉60％，60nm二氧化硅0.1％、芳香族氨基酸0.15％、精制荧光增白剂0.5％、木质素磺酸钠1％、氟啶脲0.01％、甘油5.0％和余量的无菌水，以上质量百分比总量为100％；再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
实施例6
松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为甜菜夜蛾，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄甜菜夜蛾幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒。该甜菜夜蛾的人工饲料配方是：黄豆粉15％，蔗糖0.4％，玉米粉10％，酵母粉2％，尼泊尔金0.5％，山梨酸0.05％，维生素C0.5％，琼脂1.5％；余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％。病毒感染替代宿主后4-10天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。白僵菌球孢粉的制备工艺同实施例1。
然后，按重量配比，依次加入200亿PIB/mL病毒悬液20％，球孢白僵菌粉10％，60nm二氧化硅0.5％、芳香族氨基酸0.1％、精制荧光增白剂1％、木质素磺酸钠0.1％、氟啶脲0.1％、甘油1.0％和余量的无菌水，以上质量百分比总量为100％；再搅拌均匀分装，得到一种乳白色的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
本发明实施例是采用室内毒力测定和田间试验相结合的方法。先通过室内毒力测定，明确两种药剂按一定比例复配后的共毒系数(CTC)，CTC＜80为拮抗作用，80≤CTC≤120为相加作用，CTC＞120为增效作用，在此基础上，再进行田间试验。
试验方法：试验时分别将各混配剂的母液稀释成五个系列浓度，分别置于烧杯中备用。采用先浸叶后接虫的方法，将未接触任何药剂的大小一致的叶片在配置好的药液中浸泡5s后取出、自然晾干，放入养虫盒中，然后接上供试幼虫，在25℃条件下饲养，每处理3次重复，每重复所用试虫数为50头，同时设空白对照，于72h检查死虫数，计算死亡率和校正死亡率，求得毒力回归方程并计算LC50值。若对照死亡率大于10％，则视为无效试验。计算公式如下：
将害虫校正死亡率换算成机率值(y)，处理浓度(μg/ml)转换成对数值(x)，以最小二乘法得出毒力回归方程，并由此计算出每种药剂的值。按照孙云沛公式法计算出共毒系数CTC。计算公式如下(以CPV为标准药剂，其毒力指数为100)：
M的理论毒力指数(TTI)＝CPV的TI×PCPV+有效白僵菌粉的TI×P有效白僵菌粉
式中：M为不同配比的混合物；
P有效白僵菌粉为有效白僵菌粉在组合物中所占的比例；
PCPV为CPV在组合物中所占的比例；
B为白僵菌粉。
实施例7毒力测定实验
供试害虫：毛虫幼虫
试验药剂均由发明人提供。
试验设计：经过预备试验确定CPV与白僵菌及二者不同配比混剂的有效致死浓度范围。
毒力测定结果
表1CPV与白僵菌粉复配对马尾松毛虫幼虫的毒力测定结果分析表
由表1可知，CPV与白僵菌复配防治马尾松毛虫幼虫的配比在1︰12～2︰1时，共毒系数均大于180，说明两者在1︰12～2︰1范围内混配均表现出增效作用，当CPV与白僵菌的配比在1︰3～1︰1时，增效作用更为突出，共毒系数均大于220，其中当CPV与白僵菌重量比为1︰2时共毒系数最大，增效作用最为明显。
实施例8CPV与白僵菌及其复配防治马尾松毛虫幼虫药效试验
本试验安排在江西省九江市，药前调查马尾松毛虫幼虫虫害指数，在虫害发生初期施药，施药后3天、7天、15天、30天调查虫害指数并计算防效。试验结果如下所示。
表2CPV与白僵菌及其复配防治马尾松毛虫幼虫药效试验
由表2可知，对施药后3天、7天、15天、30天的防效，运用SPSS软件采用方差分析法进行差异显著性检验。
药剂评价：
(1)松毛虫质型多角体病毒和球孢白僵菌处理与CK相比均具有明显的防治效果；
(2)松毛虫质型多角体病毒和球孢白僵菌复配剂，要比质型多角体病毒或者球孢白僵菌单独使用效果要好；
(3)松毛虫质型多角体病毒与球孢白僵菌复配的不同剂量之间在致死率上有一定差异，在是施药30天后，剂型2和剂型3的死亡率差异不显著，死亡率均达97％以上，从杀虫速度和节约成本的综合考量，我们认为选择剂量3作为杀虫最佳剂量。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，包括有效活性成分松毛虫质型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉，所述的松毛虫质型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1︰12～2︰1。
2.根据权利要求1所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，该CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂按照质量百分比包括以下组分：
3.根据权利要求1或2所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，所述松毛虫质型多角体病毒悬液通过以下方法制备得到：松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒；按重量计，该棉铃虫幼虫的人工饲料配方是：黄豆粉5-15％，蔗糖0.4-0.8％，玉米粉5-10％，酵母粉2-6％，尼泊尔金0.1-0.5％，山梨酸0.05-0.1％，维生素C0.1-0.5％，琼脂1.5-2.0％；余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％；病毒感染替代宿主后4到10天收集病毒致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的松毛虫质型多角体病毒悬液。
4.根据权利要求1或2所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，所述的球孢白僵菌粉通过以下方法制备：取球孢白僵菌菌种在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终得到白僵菌球孢粉。
5.根据权利要求1或2所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，松毛虫质型多角体病毒株已于2014年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO(V201607)；球孢白僵菌已于2013年8月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO.7998。
6.根据权利要求2所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂，其特征在于，所述纳米级二氧化硅为60nm二氧化硅。
7.一种CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备松毛虫质型多角体病毒悬液；
2)制备球孢白僵菌粉；
3)称量：按照质量百分比称量以下组分：松毛虫质型多角体病毒悬液5～20％；球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；芳香族氨基酸0.1～0.15％；精制荧光增白剂0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
4)依次加入松毛虫质型多角体病毒悬液、球孢白僵菌、二氧化硅、芳香族氨基酸、精制荧光增白剂、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水，再搅拌均匀分装，制备得到CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂。
8.根据权利要求7所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中制备松毛虫质型多角体病毒悬液具体为：松毛虫质型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用100万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫，生产松毛虫质型多角体病毒；按重量计，该棉铃虫幼虫的人工饲料配方是：黄豆粉5-15％，蔗糖0.4-0.8％，玉米粉5-10％，酵母粉2-6％，尼泊尔金0.1-0.5％，山梨酸0.05-0.1％，维生素C0.1-0.5％，琼脂1.5-2.0％；余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％；病毒感染替代宿主后4到10天收集病毒致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的松毛虫质型多角体病毒悬液。
9.根据权利要求7所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中制备球孢白僵菌粉具体为：取球孢白僵菌菌种在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终得到白僵菌球孢粉。
10.根据权利要求7所述的CPV与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，其特征在于，松毛虫质型多角体病毒株已于2014年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO(V201607)；球孢白僵菌已于2013年8月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO.7998；所述纳米级二氧化硅为60nm二氧化硅。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107926986A (zh) * 2017-11-30 2018-04-20 江西省科学院微生物研究所 一种松毛虫质型多角体病毒和白僵菌杀虫悬浮剂及其制备方法和应用
CN108617695A (zh) * 2018-07-12 2018-10-09 江西省科学院微生物研究所 一种油桐尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法
CN108739865A (zh) * 2018-07-12 2018-11-06 江西省科学院微生物研究所 一种春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法
CN111549004A (zh) * 2020-06-03 2020-08-18 江南大学 马尾松毛虫质型多角体病毒DpCPV与白僵菌的复合生防菌的菌剂及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1130021A (zh) * 1994-05-06 1996-09-04 武汉大学 病毒—微生物复合生物杀虫剂
CN104430539A (zh) * 2014-11-18 2015-03-25 江西省科学院微生物研究所 茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂及其生产方法
CN104642393A (zh) * 2015-01-29 2015-05-27 江西省新龙生物科技有限公司 一种昆虫病毒和白僵菌混合的杀虫悬浮剂及其制备方法
CN105010028A (zh) * 2015-06-30 2015-11-04 李美琼 一种韭菜斜纹夜蛾的防治方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1130021A (zh) * 1994-05-06 1996-09-04 武汉大学 病毒—微生物复合生物杀虫剂
CN104430539A (zh) * 2014-11-18 2015-03-25 江西省科学院微生物研究所 茶尺蠖核型多角体病毒杀虫悬浮剂及其生产方法
CN104642393A (zh) * 2015-01-29 2015-05-27 江西省新龙生物科技有限公司 一种昆虫病毒和白僵菌混合的杀虫悬浮剂及其制备方法
CN105010028A (zh) * 2015-06-30 2015-11-04 李美琼 一种韭菜斜纹夜蛾的防治方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何益良: "DCPV一白僵菌一杀灭菊醋复合杀虫剂林间防治试验", 《福建林学院学报》 *
邓秀明: "复合生物杀虫剂防治思茅松毛虫的初步研究", 《福建林业科技》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107926986A (zh) * 2017-11-30 2018-04-20 江西省科学院微生物研究所 一种松毛虫质型多角体病毒和白僵菌杀虫悬浮剂及其制备方法和应用
CN108617695A (zh) * 2018-07-12 2018-10-09 江西省科学院微生物研究所 一种油桐尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法
CN108739865A (zh) * 2018-07-12 2018-11-06 江西省科学院微生物研究所 一种春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法
CN111549004A (zh) * 2020-06-03 2020-08-18 江南大学 马尾松毛虫质型多角体病毒DpCPV与白僵菌的复合生防菌的菌剂及其应用
CN111549004B (zh) * 2020-06-03 2022-05-10 江西省科学院微生物研究所 马尾松毛虫质型多角体病毒DpCPV与白僵菌的复合生防菌的菌剂及其应用

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