CN104406834B - 一种海水鱼类精子染色的方法 - Google Patents

一种海水鱼类精子染色的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104406834B
CN104406834B CN201410612064.7A CN201410612064A CN104406834B CN 104406834 B CN104406834 B CN 104406834B CN 201410612064 A CN201410612064 A CN 201410612064A CN 104406834 B CN104406834 B CN 104406834B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sperm
slide
seawater
seawater fish
formalin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201410612064.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104406834A (zh
Inventor
黄晓荣
章龙珍
庄平
赵峰
刘鉴毅
张涛
宋超
王妤
杨刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
East China Sea Fishery Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Original Assignee
East China Sea Fishery Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by East China Sea Fishery Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences filed Critical East China Sea Fishery Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority to CN201410612064.7A priority Critical patent/CN104406834B/zh
Publication of CN104406834A publication Critical patent/CN104406834A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104406834B publication Critical patent/CN104406834B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一种海水鱼类精子染色的方法，包括：(1)采集海水鱼类新鲜且活力高的精子，测量精子的pH值，配制甲醛溶液并调节甲醛溶液的pH值；将精子稀释，涂布在载玻片上；(2)待载玻片自然干燥后，先用吉姆萨染料平铺在载玻片上染色，海水冲洗自然干燥后再复染，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平铺在载玻片上染色，海水冲洗自然干燥后复染，自然干燥后即可。本发明运用此方法染色后精子头部无破裂，形态完整，背景清晰，效果明显，精子染色率高达99％。

Description

一种海水鱼类精子染色的方法
技术领域
本发明属于水产养殖领域，涉及到一种海水鱼类精子染色的方法。
背景技术
我国是一个海水养殖大国，在养殖生产中常常需要对海水鱼类进行催产繁育，而鱼类精子质量的好坏是繁育中非常重要的一个环节，直接影响胚胎受精率、孵化率和成活率等。为了解海水鱼类精子的质量，提高繁殖过程中的受精率、孵化率等指标，需要对其精子的生物学特性进行观察，记录精子形态，计算精子头径、鞭毛长度等数据。在对海水鱼类精子进行形态观察时，一般有两种方法，一种方法是对精子进行染色后显微镜下拍照，相关软件测量相应数据，但目前所用的染色方法为单一染料染色，且海水鱼和淡水鱼精子都采用相同的方法，缺少针对性，导致染色效果不佳，图片背景混杂，精子形态不清晰甚至变形；第二种方法是直接通过扫描电镜进行观察，但这种方法只能观察精子的外部形态，不能测量基本数据，且仪器价格昂贵，操作较为繁琐。
发明内容
本发明提供了一种海水鱼类精子染色的方法，该方法针对海水鱼类精子生物学特性，采用改进后的方法固定精子后用两种不同的染料分别染色一定的时间，海水冲洗后自然干燥，染色后的精子形态清晰，易于观察，背景无杂色，染色效果好。
本发明的一种海水鱼类精子染色的方法，包括：
(1)采集海水鱼类新鲜且活力高的精子，测量精子的pH值，配制甲醛溶液并调节甲醛溶液的pH值；将精子稀释，涂布在载玻片上；
(2)待载玻片自然干燥后，先用吉姆萨染料平铺在载玻片上染色10～20min，海水冲洗自然干燥后再复染5～10min，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平铺在载玻片上染色15～25min，海水冲洗自然干燥后复染5～10min，自然干燥后即可。
所述步骤(1)中精子活力高于90％。
所述步骤(1)中甲醛溶液浓度为4％，用天然海水配制。
所述步骤(1)中用1％HCl或NaOH溶液调节甲醛溶液的pH值。
所述步骤(1)中将精子稀释100倍。
所述步骤(1)中涂布载玻片的方法具体为：用吸管蘸取少量精子，滴一滴到载玻片的一端，再用胶头滴管滴一滴甲醛溶液到精子上，用注射器针头搅拌精子和甲醛的混合溶液，充分混匀；用另一块干净、边缘光滑的载玻片沿着30°角将精子与甲醛的混合液向前轻推，使精子均匀涂布在载玻片的表面。
有益效果
本发明采用改进后的方法固定精子后用两种不同的染料分别染色一定的时间，海水冲洗后自然干燥，染色后精子头部无破裂，形态完整，背景清晰，易于观察，效果明显，精子染色率高达99％。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
在海水鱼类的繁殖季节，采集新鲜且活力高于90％的精子，用pH试纸测量精子的PH值，用天然海水配制4％的甲醛溶液，根据所测精子的pH值，用1％HCL或NaOH溶液调节甲醛的pH值，使甲醛溶液的pH值接近海水鱼类精子的pH值，避免用甲醛溶液固定精子时由于渗透压或pH的差异导致精子形态发生变化。用海水将精子稀释100倍，用吸管蘸取少量稀释后的精子，滴一滴到载玻片的一端，再用胶头滴管滴一滴用海水调配过pH的4％甲醛溶液到精子上，用注射器针头搅拌精子和甲醛的混合溶液，使其充分混匀。用另一块干净、边缘光滑的载玻片沿着30°角将精子与甲醛的混合液向前轻推，使精子均匀涂布在载玻片的表面。
先配好吉姆萨母液(0.5g吉姆萨、33ml甘油、33ml甲醇)，将NaH2PO4和K2HPO4按1:1配成混合溶液，再将混合液与吉姆萨母液按6:1配成吉姆萨染料。待载玻片自然干燥后，滴加染料平铺在载玻片上染色10min，海水冲洗自然干燥后再复染5min，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次置于室内自然干燥。等到完全干燥后，再用配好的瑞氏染料(1g瑞氏染料、500ml甲醇)平铺在载玻片上染色15min，海水冲洗自然干燥后复染5min，自然干燥后置显微镜下观察拍照。
运用此方法染色后精子头部无破裂，形态完整，背景清晰，效果明显，精子染色率高达99％。

Claims (6)

1.一种海水鱼类精子染色的方法，包括：
(1)采集海水鱼类新鲜且活力高的精子，测量精子的pH值，配制甲醛溶液并调节甲醛溶液的pH值；将精子稀释，涂布在载玻片上；
(2)待载玻片自然干燥后，先用吉姆萨染料平铺在载玻片上染色10～20min，海水冲洗自然干燥后再复染5～10min，染好后海水再次冲洗，冲洗完后将载玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平铺在载玻片上染色15～25min，海水冲洗自然干燥后复染5～10min，自然干燥后即可。
2.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于：所述步骤(1)中精子活力高于90％。
3.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于：所述步骤(1)中甲醛溶液浓度为4％，用天然海水配制。
4.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于：所述步骤(1)中用1％HCl或NaOH溶液调节甲醛溶液的pH值。
5.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于：所述步骤(1)中将精子稀释100倍。
6.如权利要求1所述的一种海水鱼类精子染色的方法，其特征在于：所述步骤(1)中涂布载玻片的方法具体为：用吸管蘸取少量精子，滴一滴到载玻片的一端，再用胶头滴管滴一滴甲醛溶液到精子上，用注射器针头搅拌精子和甲醛的混合溶液，充分混匀；用另一块干净、边缘光滑的载玻片沿着30°角将精子与甲醛的混合液向前轻推，使精子均匀涂布在载玻片的表面。
CN201410612064.7A 2014-11-04 2014-11-04 一种海水鱼类精子染色的方法 Expired - Fee Related CN104406834B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410612064.7A CN104406834B (zh) 2014-11-04 2014-11-04 一种海水鱼类精子染色的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410612064.7A CN104406834B (zh) 2014-11-04 2014-11-04 一种海水鱼类精子染色的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104406834A CN104406834A (zh) 2015-03-11
CN104406834B true CN104406834B (zh) 2017-09-22

Family

ID=52644481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410612064.7A Expired - Fee Related CN104406834B (zh) 2014-11-04 2014-11-04 一种海水鱼类精子染色的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104406834B (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107576682A (zh) * 2017-09-09 2018-01-12 中国农业科学院植物保护研究所 在扫描电镜下观察捕食螨精包的方法
CN107515314A (zh) * 2017-09-09 2017-12-26 合肥天敌之家生物技术有限公司 一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨精包的方法
CN107568167A (zh) * 2017-09-09 2018-01-12 首伯农(北京)生物技术有限公司 智利小植绥螨雄螨精包扫描电镜观察方法
CN107389710A (zh) * 2017-09-09 2017-11-24 合肥天敌之家生物技术有限公司 一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法
CN107655912A (zh) * 2017-09-09 2018-02-02 合肥中保汇农生物科技有限公司 津川钝绥螨生殖系统的获得及其在扫描电镜下的制作观察方法
CN107632031A (zh) * 2017-09-09 2018-01-26 合肥中保汇农生物科技有限公司 津川钝绥螨精包的获得及其在透射电镜下的观察方法
CN107515315A (zh) * 2017-09-09 2017-12-26 首伯农(北京)生物技术有限公司 智利小植绥螨雄螨精包透射电镜观察方法
CN107632032A (zh) * 2017-09-09 2018-01-26 首伯农(北京)生物技术有限公司 智利小植绥螨生殖系统扫描电镜观察方法
CN107421793A (zh) * 2017-09-09 2017-12-01 中国农业科学院植物保护研究所 在扫描电镜下观察捕食螨生殖系统的方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1584545B (zh) * 2004-06-16 2010-09-15 深圳华康生物医学工程有限公司 精子形态学快速染色试剂及快速染色精子的方法
CN100504352C (zh) * 2004-09-08 2009-06-24 深圳华康生物医学工程有限公司 一种精子核蛋白组型转换半定量检测试剂及检测方法
CN101793641B (zh) * 2010-04-14 2011-09-28 内蒙古蒙牛繁育生物技术股份有限公司 一种用于奶牛精子分离的荧光染色方法
US10620213B2 (en) * 2012-10-05 2020-04-14 Inguran, Llc High pressure sperm sorting and flow cytometer methods
EP2717034A1 (en) * 2012-10-08 2014-04-09 Roumen Parapanov Methods and kits for sperm quality assessment and uses thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中华倒刺鲃、白甲鱼和岩原鲤精子的生理特性比较;谭娟等;《淡水渔业》;20061130;第36卷(第6期);2-6页 *
养猪场污水对泥鳅红细胞微核和核异常的影响;蔡燕燕等;《福建农业学报》;20070331;第22卷(第3期);第1.5节 *
日本鳗鲡精子形成过程中的形态结构特点;章龙珍等;《分子细胞生物学报》;20090430;第42卷(第2期);正文第1段，第1.1节 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104406834A (zh) 2015-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104406834B (zh) 一种海水鱼类精子染色的方法
CN107490511B (zh) 一种苏木素染色液和he染色方法
CN103525119B (zh) 一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法
CN104374601A (zh) 一种谷物成熟种子的树脂切片制作方法
CN106012667A (zh) 一种全纤维素透明纸及其制备方法
CN103694739B (zh) 一种液体复合活性红染料
CN103884560A (zh) 一种中国大鲵趾骨切片的制备方法及应用
CN103808550A (zh) 一种便于形态学观察的粘孢子虫染色封存方法
CN105241698A (zh) 一种黄石爬鮡皮肤石蜡切片的制作方法
CN106118120A (zh) 一种红色有机颜料的制备方法
CN104502619B (zh) 一种亲水性粘附载玻片的制备方法及其使用方法
CN104264280B (zh) 一种采用色淀染料对海藻纤维原液着色的方法
CN103397539A (zh) 一种活性染料促进剂及其制备方法
CN109187127A (zh) 观察木质部薄壁组织的切片混合染色液和切片的制备方法
CN110412203A (zh) 一种模拟油润湿碳酸盐胶结物对石油运聚影响的可视化方法
CN208187823U (zh) 一种染色装置
CN108148448B (zh) 一种橙色喷墨印花染料混合物、其制备方法及应用
CN107604697A (zh) 一种提高窗帘布日晒牢度的染色方法
CN103033401B (zh) 一种大型海藻离体染色表皮片层的快速制片方法
CN102428885B (zh) 中华鳖良种选育中家系个体荧光标记的方法
CN109252416A (zh) 彩色纸的制备方法
CN103583512B (zh) 植物标本保存凝胶及其制作方法和用途
CN204579652U (zh) 鸭胚胎骨骼标本制作试剂盒
CN109142008A (zh) 一种使病理组织标本着色的固定液
CN204255727U (zh) 一种染色液量可调节的超薄切片的染色辅助装置

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20170922

Termination date: 20201104