CN107389710A - 一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法 - Google Patents

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杨静逸
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Abstract

本发明涉及一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法，其特征是先获得交配中的加州新小绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥、粘台、喷金处理，最后在扫描电镜下观察生殖系统的方法。本发明利用十分简易巧妙的方法首次获得加州新小绥螨生殖系统，并首次实现在扫描电镜下观察生殖系统细微外部结构的目的，生殖系统的获得能为扫描电镜下观察其结构提供原材料，而扫描电镜的结果又有利于对生殖系统的研究。

Description

一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法
技术领域
本发明涉及一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法，属于加州新小绥螨生物学基础研究领域。
背景技术
研究表明加州新小绥螨的性别决定时期是发生在卵产出前，甚至是卵细胞刚发育前后。因此，对加州新小绥螨受精卵的发育过程进行研究是弄清其生殖机理的一个关键点，要研究受精卵的发育过程，就需要将其生殖系统（植绥螨受精卵的发育结构）解剖出来进行研究。
对加州新小绥螨生殖系统进行扫描电镜观察，可以从超微水平观察生殖系统的结构组成，这能够为明确其雄螨精子进入雌螨体内后的运输途径以及与卵细胞的结合部位提供参考。
但由于加州新小绥螨的个体太小比较脆弱、体内被不透明的体液充满、很难对其生殖系统进行准确定位、稍不小心就会导致虫体破碎，现有资料又没有相关如何解剖及如何观察其生殖系统的报道，因此如何获得和进行扫描电镜观察加州新小绥螨生殖系统，有待解决。
发明内容
本发明的目的是提供一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法，应用本方法可以将加州新小绥螨生殖系统单独分离出来并在扫描电镜下进行超微观察。
本发明是先获得交配中的加州新小绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥、粘台、喷金处理，最后在扫描电镜下观察生殖系统的方法，具体操作步骤为：
（1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从加州新小绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；
（2）乳酸浸泡：取出交配中的加州新小绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；
（3）脱水：然后取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；
（4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；
（5）粘台：在显微镜下用0号昆虫针将干燥后的螨体背板轻轻揭掉，然后用细毛笔将橙色的生殖系统取出，直接进行粘台，如果需要观察生殖系统的内部结构需要利用昆虫针轻轻的将生殖系统剥开，用昆虫针轻轻按压，以确保虫体与导电胶能够紧密接触；
（6）喷金：利用离子溅射仪对螨全身镀金；
（7）电镜观察：将带螨样品台置于扫描电镜中依次进行观察。
本发明利用十分简易巧妙的方法首次获得加州新小绥螨生殖系统，并首次实现在扫描电镜下观察生殖系统细微外部结构的目的，生殖系统的获得能为扫描电镜下观察其结构提供原材料，而扫描电镜的结果又有利于对生殖系统的研究。
具体实施方式
实施例一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法
本方法是先获得交配中的加州新小绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥、粘台、喷金处理，最后在扫描电镜下观察生殖系统的方法，具体操作步骤为：
（1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从加州新小绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；
（2）乳酸浸泡：取出交配中的加州新小绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；
（3）脱水：然后取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；
（4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；
（5）粘台：在显微镜下用0号昆虫针将干燥后的螨体背板轻轻揭掉，然后用细毛笔将橙色的生殖系统取出，直接进行粘台，如果需要观察生殖系统的内部结构需要利用昆虫针轻轻的将生殖系统剥开，用昆虫针轻轻按压，以确保虫体与导电胶能够紧密接触；
（6）喷金：利用离子溅射仪对螨全身镀金；
（7）电镜观察：将带螨样本台置于扫描电镜中依次进行观察。

Claims (1)

1.一种获得并在扫描电镜下观察加州新小绥螨生殖系统的方法，其特征是先获得交配中的加州新小绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥、粘台、喷金处理，最后在扫描电镜下观察生殖系统的方法，具体操作步骤为：
（1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从加州新小绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；
（2）乳酸浸泡：取出交配中的加州新小绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；
（3）脱水：然后取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；
（4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；
（5）粘台：在显微镜下用0号昆虫针将干燥后的螨体背板轻轻揭掉，然后用细毛笔将橙色的生殖系统取出，直接进行粘台，如果需要观察生殖系统的内部结构需要利用昆虫针轻轻的将生殖系统剥开，用昆虫针轻轻按压，以确保虫体与导电胶能够紧密接触；
（6）喷金：利用离子溅射仪对螨全身镀金；
（7）电镜观察：将带螨样品台置于扫描电镜中依次进行观察。
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