CN104403997A

CN104403997A - 一种具有顺铂耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用

Info

Publication number: CN104403997A
Application number: CN201410499358.3A
Authority: CN
Inventors: 强福林; 汤旭蓁; 胡刚; 张一心; 杨雪艳; 方后顺; 谢付波; 秦宵然
Original assignee: SHANGHAI RUIZHI CHEMICAL STUDY CO Ltd; Nantong Tumor Hospital
Current assignee: SHANGHAI RUIZHI CHEMICAL STUDY CO Ltd; Shanghai Chempartner Co Ltd; Nantong Tumor Hospital
Priority date: 2014-09-25
Filing date: 2014-09-25
Publication date: 2015-03-11
Anticipated expiration: 2034-09-25
Also published as: CN104403997B

Abstract

本发明公开了一种具有顺铂耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用，所述人胃癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2013152。该人胃癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，成瘤率高，潜伏期短，均一性好，为胃癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料。该人胃癌细胞系具有成瘤性，而且产生的肿瘤具有顺铂耐药性，与传代亲本肿瘤相比较，可用来分析体外、体内药物敏感性及耐药性的相关性，进而建立体外、体内两个相关联的药物筛选平台，是胃癌基础研究和临床前期应用的理想细胞系。

Description

一种具有顺铂耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种具有顺铂耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用。

背景技术

胃癌是全球发病率最高的癌症之一，也是世界上第2位癌症死亡原因,仅次于肺癌。同时，胃癌是亚洲最常见的恶性肿瘤之一,在东亚国家如中国和日本由于其高致死率一直受到重视。根据中国抗癌协会临床肿瘤协作中心(CSCO)列举的数据，目前中国的胃癌发病已占全世界的42％。我国每年死于胃癌约30万人，占全部恶性肿瘤死亡的23.2％，已为恶性肿瘤死亡的第一位。因此，亟待新的治疗策略来解决这个问题。

在胃癌治疗当中，铂类联合氟尿嘧啶类化疗一直是一线且唯一的临床推荐方案，然而在最初显示疗效之后，耐药现象的发生和高复发率仍然是胃癌化疗中存在的最大问题。其中存在的主要问题即是顺铂耐药的发生。顺铂耐药的产生有多个方面的因素，如肿瘤细胞发生对顺铂导致凋亡的不敏感，或发生细胞内顺铂蓄积程度的降低。此外，近年的研究还集中在巯基分子例如谷胱甘肽的钝化，c-fos基因过度表达等方面，DNA修复状态也和顺铂的敏感程度息息相关。但到目前为止，顺铂耐药的确切分子机制还不明确。考虑到顺铂在胃癌临床化疗中的唯一性，无论是细胞的内在性或是获得性的顺铂耐药性，都使这种药物在肿瘤化疗中的使用受到巨大限制。因此，取得合适的研究材料以加深对顺铂耐药机制的了解，有助于解决肿瘤化疗中顺铂耐药性的问题，从而大大提高顺铂肿瘤化疗的疗效，对临床治疗肿瘤具有非常重大的意义。鉴于此，建立顺铂耐药特性的胃癌细胞系，对于有效指导临床研究具有必不可少的重要作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是针对现有的人胃癌细胞系生物多样性低，与临床胃癌的生物学性状相差较大等不足，提供一种新的具有顺铂耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种人胃癌细胞系，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2013152。

本发明所述人胃癌细胞系较佳地还包括如上所述的人胃癌细胞系的子代细胞。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：如上所述的人胃癌细胞系在制备使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂中的用途。

本发明所述的使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂为本领域常规的试剂，该试剂的制备方法较佳地为将本发明所述人胃癌细胞系混悬于各种溶剂中即得。其中所述溶剂为本领域常规溶剂，较佳地为HBSS缓冲液，所述HBSS缓冲液的配方为：含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸链霉素和1.25μg/ml两性霉素B。

本发明所述试剂较佳地用于制备胃癌动物模型。其中所述胃癌动物模型的制备方法为本领域常规方法，较佳地包括以下步骤：将所述使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂接种于免疫缺陷小鼠进行饲养，获得胃癌动物模型。其中所述免疫缺陷小鼠较佳地为裸小鼠或严重联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)，优选地为严重联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)，其中所述裸小鼠较佳地为NU/NU品系的裸小鼠。利用本发明所述细胞系制备的胃癌动物模型具有顺铂耐药性。

其中所述的接种的方式为本领域常规使用的接种方式。所述接种方式较佳地包括皮下穿刺接种，原位接种或者肾囊膜内接种，优选地为皮下穿刺接种。所述接种的细胞量较佳地为1.0～2×10⁷个细胞，优选地为5.0×10⁶个细胞。

本发明所述胃癌动物模型的应用方法较佳地为，利用所得胃癌动物模型检测待测化合物的抑制胃癌活性，将待测化合物施用于胃癌动物模型，观察和测量动物的体重与肿瘤生长情况；施用后导致胃癌动物模型胃癌症状改善或治愈的待测化合物具有抑制胃癌活性。

其中所述的待测化合物施用的方法为本领域常规的施用方法，较佳地包括：尾静脉注射、腹腔注射、灌胃、口服和肿瘤局部用药中的一种或几种方式施用于胃癌的荷瘤动物。所述实验中的对照例较佳地为：同时使用不含待测化合物的溶剂施用于胃癌的荷瘤动物作为对照实验组。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之三是：一种待测化合物抑制胃癌细胞活性的体外检测方法，该体外检测方法包括以下步骤：将待测化合物施用于细胞模型中，施用后抑制细胞增殖或导致细胞凋亡的待测化合物为具有抑制胃癌细胞活性的化合物，其中所述的细胞模型是如上所述的人胃癌细胞系。

其中所述体外检测方法为本领域常规使用的方法，所体外检测方法较佳地包括以下步骤：

(1)将本发明所述人胃癌细胞系或其子代细胞接种于96孔细胞培养板孔中，培养24小时；

(2)将测试化合物稀释成不同浓度施用于细胞，化合物作用72小时后通过测定细胞的活力，计算不同浓度的化合物对细胞的增殖抑制能力，计算化合物半数抑制浓度，用以判断测试化合物的抗肿瘤能力。

其中步骤(1)所述人胃癌细胞系或其子代细胞的接种量较佳地为5000/孔。其中步骤(2)所述半数抑制浓度检测方法较佳地包括ATP生物发光法或MTT法，本发明所述检测方法优选地为ATP生物发光法。所述的ATP生物发光法是通过对细胞中的ATP进行定量测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法，其中所述的ATP是活细胞新陈代谢的一个重要指标，所述ATP生物发光法可以利用市售检测试剂盒进行。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之四是：一种如上所述人胃癌细胞系的建立方法，该建立方法包括以下步骤：

(1)获得新鲜的临床人胃癌手术切除标本，剪切成小块，皮下穿刺接种免疫缺陷小鼠；

(2)穿刺接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。

其中步骤(1)所述的新鲜的临床人胃癌手术切除标本剪切而成的小块的质量较佳地为20～50mg。其中所述的免疫缺陷小鼠较佳地为严重联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)或裸小鼠。其中所述的新鲜的临床人胃癌切除标本更佳的处理方式为：用新鲜的HBSS缓冲液(所述HBSS缓冲液较佳地包含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸链霉素和1.25μg/ml两性霉素B)漂洗。

其中步骤(2)所述的原代培养方法是常规的哺乳动物细胞的原代培养方法；所述的原代培养方法较佳地包括以下步骤：

将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱5％CO₂条件下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入RPMI-1640培养液(含5％胎牛血清，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B)，静置培养。

其中步骤(2)所述的传代培养方法是常规的哺乳动物细胞的传代培养方法；所述的传代培养方法较佳地包括以下步骤：待原代培养的细胞铺展到70％满时进行传代培养和纯化，吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，终止消化，加入新鲜的RPMI-1640培养液，吹打使之脱离瓶壁形成细胞悬液；离心接种于新的培养瓶继续培养。

所述传代培养方法中较佳地还包括细胞纯化的步骤，所述细胞纯化的方法较佳地包括以下步骤：利用肿瘤细胞和成纤维细胞贴壁速率的不同，在传代接种于新的培养瓶20分钟后吸取上清转移到新的培养瓶，多次重复，利用差速贴壁去除成纤维细胞。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

1、本发明建立的人胃癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，为胃癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料；

2、本发明建立的人胃癌细胞系在保留主要临床生物学特征的前提下，具有成瘤率高，潜伏期短，均一性好等特点，可以成功制备胃癌动物模型，所制得的动物模型可以用于基础研究及药物筛选，为基于中国人群遗传背景开展的研究提供了有力的科研资料，也为新药临床前研究体内实验针对临床抗癌药物敏感性及耐药性的测试提供新的试验材料。

3、本发明建立的人胃癌细胞系通过与裸小鼠体内传代亲本肿瘤相比较，可用来分析体外、体内药物敏感性及耐药性的相关性，进而可以建立体外、体内两个相关联的药物筛选平台，是人胃癌基础研究和临床前期应用的理想细胞系。

4、本发明建立的人胃癌细胞系所成的裸鼠肿瘤还具有对胃癌临床一线药物顺铂的耐药性，是研究胃癌耐药机制的良好试验材料，具有很高的科研价值和开发意义。

5、本发明建立的细胞系具高成瘤率，高均一性，又保持有临床胃癌分子背景，同时来源于中国人群，符合中国人的遗传特征，对研发适合国人的抗胃癌新药具有十分重要的理论和临床意义。

生物材料保藏信息

本发明的人胃癌细胞系，于2013年11月20日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学邮编：430072，培养物名称为人胃癌细胞GAXC023，保藏编号为CCTCC NO：C2013152。

附图说明

图1为GAXC023细胞的形态学观察(100倍视野)。

图2为GAXC023细胞的染色体分析(1000倍视野)。

图3为细胞免疫组化染色结果图(DAB法，200倍视野)。其中图3(A)为阴性对照，图3(B)为细胞角蛋白(Cytokeratin)，图3(C)为波形蛋白(Vimentin)，图3(D)为糖类抗原19-9(CA19-9)，图3(E)为癌胚抗原(CEA)。

图4为GAXC023细胞倍增时间曲线。

图5为GAXC023细胞周期分析结果图。

图6为体外测试多个抗癌药物对GAXC023细胞增殖的抑制作用。其中图6(A)为氟尿嘧啶，图6(B)为顺铂，图6(C)为奥沙利铂，图6(D)为紫杉醇，图6(E)为多西紫杉醇，图6(F)为伊立替康。

图7为GAXC023细胞的成瘤性检测结果图。

图8为GAXC023细胞在裸小鼠体内成瘤的病理组织切片图(100倍视野图)。

图9为体内测试顺铂对细胞裸小鼠模型的肿瘤生长抑制作用。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

顺铂购买自江苏豪森药业，生理盐水购买自浙江天瑞药业有限公司，细胞培养试剂均购买自美国Invitrogen公司。

实施例1GAXC023细胞的制备

从南通肿瘤医院获得新鲜的临床胃癌切除标本(患者性别：女，年龄：73岁，民族：汉，籍贯：江苏省南通市。)，临床诊断结果为低分化胃腺癌。

用新鲜的HBSS缓冲液(含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸链霉素和1.25μg/ml两性霉素B)漂洗后，切成20～50mg的小块，皮下穿刺接种于免疫缺陷动物SCID鼠(SCID鼠购买自北京维通利华实验动物技术有限公司)；穿刺接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。

原代培养步骤为：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱5％CO₂条件下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入RPMI-1640培养液(含5％胎牛血清，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B)，静置培养；待细胞铺展到70％满时进行传代培养和纯化。所述传代培养包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，终止消化，加入新鲜的RPMI-1640培养液，吹打使之脱离瓶壁形成细胞悬液；离心接种于新的培养瓶继续培养。

所述纯化的方法是利用差速贴壁法纯化肿瘤细胞，即利用肿瘤细胞和成纤维细胞贴壁速率的不同来进行的。纯化方法包括以下步骤：将所得细胞悬液接种于新的培养瓶，20分钟后，吸取上清转移到新的培养瓶，由于成纤维贴壁速率较快，在新的培养基中培养20分钟后，细胞悬液中的成纤维细胞大部分贴壁生长，所以细胞悬液中的肿瘤细胞得到了纯化，将上述步骤重复多次，即达到了纯化肿瘤细胞的目的。

本发明将来源于人胃癌组织的细胞系命名为人胃癌细胞GAXC023，于2013年11月20日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：C2013152。提交保藏的细胞系是传代30代后的细胞系。

实施例2GAXC023细胞的生物学特性及应用

本发明采用RPMI1640培养并用差速贴壁法纯化GAXC023细胞，使其能体外长期生长和稳定传代。当细胞传至20代以上，细胞性状逐渐稳定，进行相关的生物学、遗传学和组织来源鉴定，直至第50代都具有相同的稳定的性状。经实验观察与验证，体外生长的GAXC023具有典型的上皮样形态，主体为铺路石样，呈覆层生长，密度较大时可表现粘附性聚集。遗传学研究证实该细胞为异倍体，染色体数目和结构畸变严重，符合恶性肿瘤的遗传学特征。该细胞能在裸小鼠体内可形成肿瘤，具有致瘤性。该细胞和其来源的临床肿瘤标本、裸小鼠体内传代亲本肿瘤形成对应关系，可为研究体外、体内和临床抗癌药物敏感性及耐药性的相关性提供新的试验材料。具体如下：

a.形态学观察

将培养GAXC023细胞的培养瓶置于倒置显微镜下，在明视野下进行观察，结果见图1(图1为GAXC023细胞的形态学观察结果图，100倍视野)，可见GAXC023细胞主体呈铺路石样，覆层生长，密度较大时可表现粘附性聚集。

b.染色体的鉴定

将培养的GAXC023细胞置于4℃孵育12小时后，加入秋水仙素，使其终浓度为0.25μg/ml，再于37℃孵箱中继续培养4小时。采集分裂中期的细胞，用固定液进行固定，然后将细胞悬液滴于预冷的载物片上，用Giemsa染色液染色，于显微镜下计数染色体数。结果见图2，可见GAXC023细胞连续传代后，染色体仍保持人源性肿瘤细胞染色体的特征，染色体众数(M)集中在37～42之间，占70.59％，表现为类二倍体，存在多数中央及亚中央着丝粒染色体(图2为GAXC023细胞的染色体分析图，1000×)；而裸小鼠的染色体数2n＝40，且均为顶端着丝粒，据此可与人类染色体相区别。

c.短片段重复序列(STR)鉴定

短串联重复序列(short tandem repeat，STR)又称为微卫星DNA，是指染色体上，由数个碱基对作为核心单位(2-6个碱基对)，串联重复形成的一类DNA序列(重复次数为10～60多次，基因片段在400碱基对以下)；每个核心单位重复的次数会出现个体差异，从而形成片段长度不同的等位基因。因此，一组STR序列的重复次数在不同个体中几乎是唯一的，是个体的基因身份特征，也是细胞生物学对细胞身份和来源进行鉴定的主要方法。

收集新鲜培养的GAXC023细胞，用AxyPrep基因组DNA小量试剂盒(购自Axygen公司的AxyPrep^TM Multisource Genomic DNA Miniprep Kit，货号为AP-MN-MS-GDNA)提取细胞基因组DNA，用5’端荧光标记的引物进行PCR扩增，对所得产物进行测序，计算各个短片段重复序列的重复数。结果：

提取细胞的基因组DNA，对STR位点进行特异性扩增，通过测序分析包括Amelogenin，THO1，TPOX，D13S317，vWA，D16S539，D5S818，CSF1PO以及D7S820等各个STR位点的序列重复数，并和ATCC，DSMZ等细胞保存库的数据库进行查询对比，未返回相同的遗传图谱，可证明其独一无二性，且在原代培养过程中未发生和其他细胞的交叉污染，STR位点的引物序列如序列表中SEQ ID NO:1-SEQ ID NO.18所示，具体请参见表1和表2：

表1STR位点的引物序列

表2STR位点的引物序列及拷贝数

d.组织来源鉴定

将GAXC023细胞接种在盖玻片上培养，待细胞伸展后，用4％甲醛固定，进行免疫组化染色(DAB显色法)，结果如图3所示，其中图3为细胞免疫组化染色结果图(DAB法，200倍视野)。其中图3(A)为阴性对照，图3(B)为细胞角蛋白(Cytokeratin)，图3(C)为波形蛋白(Vimentin)，图3(D)为糖类抗原19-9(CA19-9)，图3(E)为癌胚抗原(CEA)。结果显示，细胞角蛋白(Cytokeratin，图3(B)，200×)为强阳性，波形蛋白(Vimentin，图3(C)，200×)为阴性，提示其为外胚层上皮细胞来源；糖类抗原19-9(图3(D)，200×)为阳性；癌胚抗原CEA(图3(E)，200×)为强阳性，提示其具有相当的恶性程度；最后，结合来源组织的临床信息和病理诊断结果，判断该细胞组织来源为胃腺癌。

e.细胞动力学

将GAXC023细胞以2000/孔的密度接种在96孔板中，进行培养，分别在12小时、24小时、36小时、48小时、72小时和96小时使用CellTiter Glo试剂盒测定每孔中的活细胞数。

倍增时间的计算公式为：倍增时间＝Log2/曲线斜率；图4中倍增时间(X)与Log荧光信号(Y)的曲线方程为：Y＝0.012X+4.8822；其中R²＝0.9796。

图4为GAXC023细胞倍增时间曲线，检测结果显示，GAXC023细胞的群体倍增时间为45.4小时。

f.细胞周期分布

收集约10⁶细胞于1.5ml离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用1毫升-20℃75％乙醇重悬，室温固定1个小时。离心弃上清，加入500微升PI染色液。混匀，室温孵育30分钟。用流式细胞仪(BD FACSCalibur)检测每孔细胞数和每个细胞的总DNA含量(每个细胞的总DNA含量和该细胞的总PI荧光强度呈正比)；并根据不同细胞周期，细胞总DNA含量的变化，计算各个细胞周期的细胞总数。图5为GAXC023细胞周期分析结果图，各周期分布比例如表3所示。

表3：GAXC023细胞周期分布比例

标记	周期	比例(％)
			M1	G₀/G₁	37.14
M2	S	58.03
			M3	G₂/M	4.83

g.体外细胞毒实验

体外测定胃癌临床常用化疗药物：氟尿嘧啶，顺铂，伊立替康的抗增殖作用。将受试细胞以3000/孔的密度接种在96孔板中，给不同浓度的药物三天后，用Promega公司的CellTiter Glo试剂盒测定各药物浓度下的细胞活力，经XLFit软件计算IC₅₀(半数抑制浓度)。

图6为体外测试多个抗癌药物对GAXC023细胞增殖的抑制作用。其中图6(A)为氟尿嘧啶，图6(B)为顺铂，图6(C)为奥沙利铂，图6(D)

为紫杉醇，图6(E)为多西紫杉醇，图6(F)为伊立替康。其结果如表4所示。

表4各种药物对GAXC023的半数抑制浓度(IC₅₀)

h.细胞成瘤性实验

体外培养和收集GAXC023细胞，皮下接种NU/NU裸小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，以细胞悬液和Matrigel基质胶以1:1混合，每只动物接种0.2ml，含2.0×10⁶个细胞，接种5只动物，双侧接种，N＝10，每周调查动物体重和肿瘤大小。接种约1周后，肿瘤开始形成并生长，成瘤率高达90％以上。绘制肿瘤生长曲线，其中公式肿瘤体积(mm³)＝长径(mm)×宽径(mm)²×0.5(GAXC023细胞的成瘤性检测结果见图7)。分析结果表明，GAXC023细胞能在免疫缺陷小鼠体内形成肿瘤并生长均一快速，具有高致瘤性。

i.细胞的病理学鉴定

GAXC023细胞小鼠皮下成瘤后，取出肿瘤固定后石蜡包埋，制备切片并进行H&E染色。图8为GAXC023细胞在裸小鼠体内成瘤的病理组织切片图(100×)，其病理诊断结果为胃低分化癌。

j.体内药效学实验

体外培养和收集GAXC023细胞，皮下接种NU/NU裸小鼠(细胞悬液和Matrigel以1:1混合，每只动物接种0.2ml，含2.0×10⁶个细胞)。每周调查动物体重和肿瘤大小。当肿瘤体积达到100-200mm³时进行随机分组，20只动物随机分为2组，一组给予5mg/kg的顺铂，给药量0.1ml/10g体重，腹腔给药，每周给药一次；剩下一组设为对照，给予生理盐水，给药量0.1ml/10g体重，腹腔注射，每周一次。根据公式肿瘤体积(mm³)＝长径(mm)×宽径(mm)²×0.5，计算肿瘤体积。用公式T/C％评价药物治疗效果：T/C％＝[(T-T₀)/(C-C₀)]×100％；如果给药组肿瘤消退，T/C％＝[(T-T₀)/C₀]×100％。其中，T为给药组肿瘤体积，T₀为D₀天给药组肿瘤体积；C为对照组肿瘤体积，C₀为D₀天对照组肿瘤体积。图9为体内测试顺铂对细胞裸小鼠模型的肿瘤生长抑制作用结果图，其显示了肿瘤体积检测结果。结果表明经过十四天给药后，体内用顺铂进行治疗，完全不能抑制GAXC023肿瘤的体内生长，给药后第14天的T/C值为104.39％，具有显著的耐药特性；据此可见，GAXC023细胞在体内表现出显著的顺铂耐药特性。

应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种人胃癌细胞系，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2013152。

2.如权利要求1所述的人胃癌细胞系的子代细胞。

3.如权利要求1所述的人胃癌细胞系在制备使免疫缺陷小鼠产生胃癌的试剂中的用途。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的免疫缺陷小鼠为SCID小鼠或裸小鼠。

5.一种待测化合物抑制胃癌细胞活性的体外检测方法，其特征在于，该体外检测方法包括以下步骤：将待测化合物施用于细胞模型中，施用后抑制细胞增殖或导致细胞凋亡的待测化合物为具有抑制胃癌细胞活性的化合物，其中所述的细胞模型是权利要求1所述的人胃癌细胞系。

6.一种如权利要求1所述人胃癌细胞系的建立方法，其特征在于，该建立方法包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述的小块的质量为20～50mg。

8.如权利要求6所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述的免疫缺陷小鼠为SCID小鼠或裸小鼠。

9.如权利要求6所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述的新鲜的临床人胃癌切除标本用HBSS缓冲液漂洗后，再进行皮下穿刺接种，所述的HBSS缓冲液包含500U/ml的青霉素G，500μg/ml的硫酸链霉素和1.25μg/ml的两性霉素B。

10.如权利要求6所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述的细胞的原代培养包括以下步骤：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱5％CO₂条件下培养；次日向瓶内加入RPMI-1640培养液，所述RPMI-1640培养液含5％胎牛血清，100U/ml青霉素G，100μg/ml硫酸链霉素和0.25μg/ml两性霉素B，静置培养；步骤(2)所述的细胞的传代培养包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，加入新鲜的DMEM/F12培养液，仔细吹打，使之脱离瓶壁形成细胞悬液；收集全部细胞，离心，分别接种于新的培养瓶继续培养，所述百分比为质量百分比。