CN1043896C - 胺类在水体系中直接磷酰化合成氨基磷酸盐及其混合物的方法 - Google Patents

胺类在水体系中直接磷酰化合成氨基磷酸盐及其混合物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种胺类在水体系中直接磷酰化合成氨基磷酸盐及其混合物的方法，该方法是将一定量的氨基酸或氨基酸酯、肽、肽酯或胺类溶于水～极性溶剂～碱～四氯化碳的混合溶液中，加入含有等当量或稍过量的磷酰氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃下搅拌，使其反应0.5～20小时，溶剂，用无机酸酯化至pH值为1～3，或用有机酸水溶液洗涤，最后用有机溶剂或混合溶剂萃取、洗涤、干燥。

Description

胺类在水体系中直接磷酰化合成氨基磷酸盐混合物的方法
本发明涉及含氨基的伯仲胺类或氨基酸、肽类及其酯在含水体系中直接磷酰化合成N-磷酰化物的方法，属有机化合物的制备技术领域。
氨基酸、肽类和蛋白质是最基本的生化物质，许多活性小肽是沟通细胞与器官间信息的重要化学信使。磷是生命的中心元素，它参与了生命体的能量转化，信息传递以及新陈代谢过程。磷酰化氨基酸及肽类是一类具有较高生物活性的化合物，己广泛应用于农药、医药、保健、免疫等许多领域，在医药、化妆品、保健品、食品及饲料添加剂领域将会开拓出广泛的用途。这类化合物在酶的抑制剂研究中作为酶过渡态类似物，在免疫催化抗体的研究中作为半抗原是其它物质难以取代的。某些氨基(酸)磷酸盐已应用于治疗磷钙缺乏症、神经衰弱及皮肤病，许多磷酰小肽是很有用的镇痛、降压药。因此，发明更简单、方便、收率高、产物纯度好的合成方法是有意义的。
己有技术曾有过用二烃基磷酰氯进行氨基酸的N-磷酰化或O-磷酰化的报道。如欧洲专利EP0085488A，日本专利特开昭58-297921，但都是在非水体系中进行的。为了增加其溶解性，前者需将羧基酯化，后者需氨基、羧基同时保护。再进行N-或O-磷酰化，最后需皂化、酸化才能获得N-二烷氧基磷酰氨基酸。此法不但步骤繁杂，而且收率低，产物纯度差。皂化时容易发生严重的消旋，磷酰基上的烃氧基也易水解。此外，以往所选用的二烃基磷酰氯大多是苯基和苄基的，实验表明，它们的N-磷酰产物稳定性较差。虽然如此，许多磷酰化小肽仍采用此法，也有在水体系中获得磷酰化氨基酸或肽的方法。如用二烷基硫代磷酰氯(R2P(S)Cl)在水体系中直接N-磷酰化氨基酸或小肽。但后者产物与天然磷酰氨基酸结构差异甚大，失去了研究的意义。
单烃氧基磷酰化氨基酸合成也有报道，如苯基磷酰二氯在Ba(OH)2水溶液中可与少数侧链无官能基的氨基酸反应，得到磷酰胺单苯基酸酯的钡盐，但大多数氨基酸和肽并不适用，烷基磷酰二氯在水中的磷酰化反应尚末见报道。
用三氯氧磷在水体系中在MgO或NaOH存在下直接N-磷酰化氨基酸或小肽也有报道，但都未能解决收率低，反应难以控制、产物复杂不易提纯的问题。产物的鉴定缺乏足够的依据。但三氯氧磷直接法不失为一条简捷的合成方法，故其最佳合成工艺值得探索。
本发明的目的就是要寻找一种简便而又易于实现的用磷的单酰氯、双酰氯、三酰氯均可直接在水溶液中高选择性地N-磷酰化合成0各种氨基酸、小肽及其酯、伯仲胺类的通用合成方法。使合成方法大为简化，并且产物收率高、纯度好。
本发明的内容是：
胺类在水体系中直接磷酰化合成氨基磷酸盐及其混合物的方法分别依据下列四个化学反应式实现：
(A)N-二烃基磷酰胺类化合物的合成反应式为：
Figure C9312124800051
其合成方法为：将一定量的氨基酸或氨基酸酯或胺类溶于水～醇～碱～四氯化碳的混合溶液中，加入含有等当量或稍过量的磷酰氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃下搅拌，使其反应0.5～20小时，溶剂，用无机酸酸化至PH值为1～3，或用有机酸水溶液洗涤，最后用有机溶剂或混合溶剂萃取、洗涤、干燥、；
(B)氨基磷酸单脂化合物的合成反应式为：
其中的极性有机溶剂为二氧六环或四氢呋喃；
其合成方法为：将一定量的氨基酸、肽类、氨基酸酯、肽、肽酯或胺类化合物溶于水～极性有机溶剂～碱～四氯化碳溶液中，如四氢呋喃或二氧六环～水～三乙胺(过量)中滴入含等当量或稍过量的烃基磷酰二氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃搅拌反应0.5～20小时，最好是5～6小时，用一般的有机溶剂(如1,2-二氯乙烷、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、环已烷、叔丁醇、二氯甲烷、异丁醇、丁醇、异戊醇、叔戊醇、二甲苯、乙醚和甲苯)，萃洗除去杂质，加入等当量的Na2CO3或NaOH，以中和萃取除去三乙胺，加入CaCl2或NaCl，必要时滤去不溶物或加入异丙醇或加丙酮冷冻结晶，即可获得钠盐或钙盐。
(C)氨基磷酸盐类化合物的合成反应式为：
Figure C9312124800053
其中的极性有机溶剂为二氧六环、四氢呋喃、异丙醇、仲叔醇中的任何一种；
其合成方法为：将一定量的氨基酸、肽类、氨基酸酯、肽、肽酯或胺类化合物溶于水～极性有机溶剂～碱～四氯化碳溶液中，如四氢呋喃或异丙醇或二氧六环～水～三乙胺(过量)中滴入含等当量或稍过量的烃基磷酰二氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃下搅拌反应0.5～20小时，最好是5～6小时，用一般的有机溶剂(如1，2-二氯乙烷、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、环已烷、叔丁醇、二氯甲烷、异丁醇、丁醇、异戊醇、叔戊醇、二甲苯、乙醚和甲苯)，萃洗除去杂质，加入等当量的Na2CO3或NaOH，以中和萃取除去三乙胺，加入CaCl2或NaCl，必要时滤去不溶物或加入异丙醇或丙酮冷冻结晶，即可获得钠盐或钙盐；
(D)氨基磷酸盐、氨基磷酸单酯N-二烷基磷酰胺化合物的混合物的合成的反应式为：
其中所述的极性有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇或丁醇；
其合成方法为：将一定量的氨基酸、肽类、氨基酸酯、肽、肽酯或胺类化合物溶于水～极性有机溶剂～碱～四氯化碳溶液中，滴入含等当量或稍过量的烃基磷酰二氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃下搅拌反应0.5～20小时，最好是5～6小时，用一般的有机溶剂(如1,2-二氯乙烷、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、环已烷、叔丁醇、二氯甲烷、异丁醇、丁醇、异戊醇、叔戊醇、二甲苯、乙醚和甲苯)，萃洗除去杂质，加入等当量的Na2CO3或NaOH，以中和萃取除去三乙胺，反应完后用等当量氢氧化钠或
碳酸钠或其它碱如(Ca(OH)2、Ba(OH)2、Mg(OH)2、Fe(OH)2、Zn(OH)2、调节PH为10～11，用上述有机溶剂萃洗后，浓缩或加入对应的醇冷冻，即可析出混合产物的钠盐或其它金属盐；也可以先用氢氧化钠或碳酸钠调节PH为10～11，萃洗浓缩后加入对应其它金属的无机酸水溶性盐如(CaCl2、BaCl2、FeCl2、ZnCl2、MgCl2)热过滤除去不溶物，并用少量热水洗涤。再加入丙酮、异丙醇或对应的醇、冷冻、结晶即可获得混合产品等其它金属盐混合物；
上述四个反应式中，R、R1和R2分别是碳原子数为0-18的烃基或带有羟基、芳基、卤素、糖基、烷氧基、酯基保护氨基的咪唑基中的任何一种官能基的烃基，R1和R2可以是环状、直链或支链，可以相互连接成环；R3和R4分别是烃基或带有羟基、芳基、卤素、糖基、烷氧基、酯基、保护氨基、咪唑基中的任何一种官能团的烃基，或者(b)是天然氨基酸、合成氨基酸、氨基酸衍生物和小肽中的任何一种M为碱金属(K、Na)、碱土金属(Ca,Mg,Ba,Zn,Fe)的离子或季胺盐。
反应物的醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等伯醇或乙二醇、丙二醇、1,4-丁二醇，1,5-戊二醇、丙三醇等水溶性多元醇，ROH为仲醇或酚类是类主要为氨基磷酸盐。
磷试剂的用量可为1～2.5个当量，合成碱性氨基酸或小肽时，可获得单或双磷酰化物，但用磷过多将增加水解和成肽成酯付产物，不足量可提高反应选择性。
溶剂水是为了改善氨基酸或肽的溶解性以利于其顺利N-磷酰化而加入的，对于其酯类或伯、仲氨类，可以不必加水、醇、极性溶剂。不过含水或醇的体系反应照样顺利。
醇、极性有机溶剂是为了增加油水互溶性而加入的，C1～C5的任何醇均可，极性溶剂二氧六环效果好。如不加醇、极性溶剂收率将显著降低。且反应不完全，付产物多。对水溶性较大的氨基酸加入相转移催化剂对反应是有利的。
碱性试剂可以是任何无机碱如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠或有机碱如三甲胺、三乙胺、二甲苯胺、N-甲吗啉、二乙苯胺、六次甲基四胺等缚酸剂，它们的作用是维持体系碱性，中和产生的盐酸，以利于氨基的游离。用量可以为(1～20当量)加入等量碱也可以获得较高收率，强碱可能导致氨基酸或小肽的严重消旋，所以有机碱较好。几个反应的碱以三乙胺效果较佳。
反应温度在室温即可，必要时可降温或升温。低温反应对主产物的生成是有利的。反应时间根据反应物不同，可以从半小时到24小时，短时间反应将减少氨基酸或肽的消旋。氨基酸酯类时间延长并无好处。
有机溶剂萃取剂是1,2-二氯乙烷、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、环己烷、叔丁醇、二氯甲烷、异丁醇、丁醇、异戊醇、叔戊醇、二甲苯、乙醚和甲苯中任何一种，或有任何二种前所述溶剂混合液如石油醚～叔丁醇、环已烷～丁醇、乙酸乙酯～叔丁醇中的任何一种。用混合溶剂萃取(c1、c2)时，获得了非常满意的效果。萃取剂溶剂之一可以是乙醚、氯仿、四氯化碳、乙酸乙酯，另一种是极性较强而又沸点和水溶性适中的C4～C5的任何伯仲叔醇。二者的比例可根据产物特性任意调节。叔丁醇～乙酸乙酯是更为经济和通用的混合萃取剂。并可用无水Na2SO4或MgSO4干燥。因此上述混合溶剂体系可望在极性物质萃取方面获得广泛应用制备各类化合物的方法如下：
N-二烃基磷酰胺类化合物：(C1)
将10mmol的氨基酸(或肽)溶于5ml水～5ml乙醇～5ml NEt3的混合体系中，置于冰浴中搅拌下加入等当量的指定的磷酰氯和5ml的CCl4的混合液搅拌6～8h。然后加入20～50ml水分除去有机相，用乙醚洗二遍(2×15ml)，用盐酸酸化至PH值为2，再用混合溶剂叔丁醇～乙酸乙酯(1∶1.5)萃取三次(3×40ml)，用饱和食盐水洗涤二次(2×20ml)最后用无水Na2SO4或MgSO4干燥，即得纯品，收率为70～95％。控制适当的滴加速度，增加体系的混溶性，强烈搅拌和极性溶剂的加入以及较长的反应时间是获得较好收率的关键。
或将10ml氨基酸酯或胺类其盐酸盐，5ml水～5ml乙醇～5mlNEt3的混合体系中，置于冰浴中搅拌下加入等当量的指定的磷酰氯和5ml的CCl4的混合液搅拌反应2小时后，用乙酸乙酯萃取三次(3×20ml)，合并，再用酸洗去碱性杂质，饱和食盐水洗二次，干燥，旋于即得纯品，收率85～95％。
氨基磷酸单酯类化合物：(C2)
将一定量的氨基酸、肽类、氨基酸酯、肽、肽酯或胺类化合物溶于水～极性有机溶剂～碱～四氯化碳溶液，如二氧六环～水～三乙胺(过量)中滴入含等当量或稍过量的烃基磷酰二氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃下搅拌反应0.5～20小时，最好是5～6小时。用一般的有机溶剂(如1,2-二氯乙烷、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、环乙烷、叔丁醇、二氯甲烷、异丁醇、丁醇、异戊醇、二甲苯、乙醚和甲苯)，萃洗除去杂质，加入等当量的Na2CO3或NaOH，以中和萃取除去三乙胺。加入CaCl2或NaCl，必要时滤去不溶物或加入异丙醇或丙酮冷冻结晶，即可获得钠盐或钙盐，纯品收率70～85％。
氨基磷酸盐类化合物：(C3)
将一定量的氨基酸，肽，及其酯或胺类化合物溶于水～极性有机溶剂～碱～四氯化碳中，如四氢呋喃或二氧六环～水～三乙胺中，滴入含等量的三氯氧磷的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃搅拌0.5～20小时，最好是5～6小时，用一般有机溶剂(如1,2-二氯乙烷，三氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯，环已烷，叔丁醇，二氯甲烷，乙醚)萃洗除去杂质，加入等当量的NaOH或Na2CO3或其它碱如Ca(OH)2,Ba(OH)2,Fe(OH)2,Zn(OH)2等，调节PH为10～11，用上述溶剂萃洗后，浓缩或加入对应的醇冷冻，即可析出产物的金属盐。
C1、C2、C3类混合物(添加剂)的合成方法与c3类相同，只是极性溶剂应选用对应的醇(ROH)，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等伯醇或乙二醇、丙二醇、1,4-丁二醇，1,5-戊二醇、丙三醇等水溶性多元醇等。
C1、C2类混合物的合成方法与C2类相同，只是极性溶剂应选用对应的醇(ROH)，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等伯醇或乙二醇、丙二醇、1,4-丁二醇，1,5-戊二醇、丙三醇等水溶性多元醇等；磷试剂应换用烃基磷酰二氯。
反应完后用等当量氢氧化钠或碳酸钠或其它碱如Ca(OH)2、Ba(OH)2、Mg(OH)2、Fe(OH)2、Zn(OH)2调节PH为10～11，用上述有机溶剂萃洗后，浓缩或加入对应的醇冷冻，即可析出混合产物的钠盐或其它金属盐；也可以先用氢氧化钠或碳酸钠调节PH为10～11，萃洗浓缩后加入对应其它金属的无机酸水溶性盐如(CaCl2、BaCl2、FeCl2、ZnCl2、MgCl2)热过滤除去不溶物，并用少量热水洗涤。再加入丙酮、异丙醇或对应的醇、冷冻、结晶即可获得混合产品等其它金属盐混合物的含量可用31PNMR或HPLC确定。
方法A：二烷基磷酰化胺类(C1类)
实施例1.O-异丙基，O-正丁基磷酰化L-丝氨酸：(方法A)
将L-丝氨酸(1.05g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及5ml三乙胺中，冰浴冷至0℃慢慢滴加O-异丙基，O-正丁基磷酰氯(2.14g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应6小时，加入20ml水，分出有机层，水层用乙醚(2×15ml)洗，剩余水层用1N盐酸酸化至PH值为2，用叔丁醇-乙酸乙酯(1∶1.5)萃取三次(3×40ml)，有机层用饱和食盐水洗两次，无水硫酸镁干燥，除去有机溶剂，得到油状物即为产物，重2.4g产率85％。
结构测定结果： i-Pro(BuO)P(O)NHCH(CH2OH)COOH
               31P NMR δ=6.9ppm
               13C NMR 173.8(8.8),56.0,64.1(2.9)
                               13.5,18.6 32.1(7.3)65.8(5.9)
实施例2. O,O-二异丙基磷酰化L-丙氨酸
将L-丙氨酸(0.89g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及5ml三乙胺中，冰浴冷却至0℃，滴加O,O-二异丙基磷酰氯(2.0g,10mmol)的5ml，四氯化碳溶液反应8小时，同前操作，得到白色固体，重2.4g，产率90％。
结构测定结果：(i-PrO)2P(O)-NHCH(CH3)COOH
            31P NMR 5.5ppm
            31C NMR 175.2(4.9)  49.3  20.4(2.9)
                         23.6(5.5)  72.1(5.9)
实施例3. O,O-二正丁基磷酰化L-丝氨酸甲酯(方法A)
L-丝氨酸甲酯的盐酸盐(1.56g,10mmol)溶于5ml,5ml乙醇及5ml三乙胺中，冰浴冷却下，滴加二正丁基磷酰氯(2.3g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应2小时，用乙酸乙酯萃取三次(3×20ml)，合并，加0.1N盐酸洗一次(20ml)，饱和食盐水洗两次(2×20ml)，无水硫酸镁干燥，减压除去有机溶剂即得到无色油状物重2.7g．产率90％。
结构测定：    (n-BuO)2P(O)-NHCH(CH2OH)-COOMe
              31PNMR 7.6 ppm13P NMR 171.5(4.4),56.0,63.7(5.9),51.4(OMe),
         12.9,18.0,31.6(5.9),65.6(5.9)
实施例4.  O,O-二异丙基磷酰咪唑(方法A)
将咪唑(0.68g,10mmol)溶于5ml水,5ml乙醇及5ml三乙胺中,0℃下滴加二异丙基磷酰氯(2.0g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应2小时，用乙酸乙酯萃取三次(3×20ml)，合并用0.1N盐酸洗一次(20ml)，饱和食盐水洗两次(2×20ml)，无水硫酸镁干燥，减压除去溶剂，得到白色固体，重量约2.0g产率85％。
结构测定：
    31P  NMR  -7.9ppm
    13C  NMR  138.7(5.8),130.3(13.2),118.3(7.3)
               22.4(4.4),73.3(4.4)
实施例5.  O,O-乙基磷酰化L-丙氨酸(方法D)
L-丙氨酸(0.89g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及10ml三乙胺中，冰盐冷却下(-10～0℃)下慢慢滴加三氯氧磷(1.53g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应5小时，减压除去有机溶剂，水层用乙醚萃取两次(2×20ml)，水层在冰水中酸化至PH=3，用乙酸乙酯-叔丁醇(1∶1.5)萃取3次(3×20ml)，合并，用饱和食盐水洗2次(2×20ml)用无水硫酸镁干燥，减压除去有机溶剂，得到色固体重1.0g，产率44％。
结构测定：    (EtO)2P(O)-NHCH(CH3)COOH,    31P 7.6ppm
              13C NMR,ppm(H2)177.2(8.8),50.8,22.0(2.9)
                             17.3(7.3),64.0(4.4)
方法B．氨基磷酸单酯类(C2类)
实施例6.  O-乙基，磷酰化丝氨酸二钠盐(方法B)
L-丝氨酸(1.05g,10mmol)溶于5ml水，5ml二氧六环和6ml三乙胺中，冰浴冷却下，滴加O-乙基磷酰二氯(1.63g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液反应12小时，减压除去有机溶剂，水层加入氢氧化钠(0.8g,20mmol),PH=11，反应4小时，减压除去有机碱，冷冻干燥，得到白色固体重1.9g，产率73％。
结构测定：    EtOPO2(Na)NHCH(CH2OH)COONa
              31P NMR 5.8ppm
              13C NMR 177.6,57.7,63.6
                      55.6，14.8
方法C．氨基磷酸盐类(C3)类
实施例7．磷酰化L-丙氨酸三钠盐(方法C)
L-丙氨酸(0.89g,10mmol)溶于5ml水，5ml二氧六环及10ml三乙胺中，冰盐冷却下(-10～0℃)慢慢滴加三氯氧磷(1.53g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应6小时，减压除去有机溶剂，水层加氢氧化钠调至PH=11，反应4小时，减压除去有机胺类，冷冻干燥得到白色固体，重1.4g，产率60％。
结构测定：PO3Na2NHCH(CH3)COONa
        ‘HNMR(D2O)
         31PNMR  7.67ppm
         3.65～3.75ppm(M,1H,-CH)
         1.40～1.43ppm(d,3H,-CH3)
方法D：二烷基磷酰胺盐，单烷基磷酰胺二盐，磷酰胺三盐混合物(C1,C2,C3)
实施例8．磷酰化甘甘二肽的混合物(方法D)
将甘甘二肽(1.32g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及10ml三乙胺中，盐冷却(-10～0℃)下慢慢滴加三氯氧磷(1.53g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液反应12小时，减压除去有机溶剂，水层加入氢氧化钠(1.2g,30mml)反应6小时，碱压除去有机碱，加丙酮，冷冻，得到白色固体，重1.2g，产率50％。
结构测定：(EtO)2PC(O)NHCH2CONHCH2COONa
                       含量50％,31PNMR,13.6ppm
          EtO(NaO)P(O)NHCH2CONHCH2COONa
                       含量28％,31PNMR,9.5ppm
          (NaO)2P(O)NHCH2CONHChCOONa
                       含量22％,31PNMR,6.1ppm
实施例9．磷酰化丝氨酸盐混合物(方法C)
L-丝氨酸(1.05g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及6ml三乙胺中冰浴冷却(0℃)下慢慢滴加O-乙基磷酸氯(1.65g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液反应6小时，减压除去有机溶剂，水层用乙醚萃取两次(2×20ml)，加入NaOH调至PH=11，反应6小时，减压除去有机碱，用叔丁醇-乙酸乙酯萃取(1.5∶1)，干燥，除溶剂，得到白色固体，重2.1g，产率82％。
结构测定．(EtO)2P(O)NHCH(CH2OH)COONa
                      含量40％，31PNMR,8.1ppm
          EtO(NaO)P(O)NHCH(CH2OH)COONa
                      含量40％,31PNMR,5.8ppm实施例2. O,O-二异丙基磷酰化L-丙氨酸
将L-丙氨酸(0.89g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及5ml三乙胺中，冰浴冷却至0℃，滴加O,O-二异丙基磷酰氯(2.0g,10mmol)的5ml，四氯化碳溶液反应8小时，同前操作，得到白色固体，重2.4g，产率90％。结构测定结果：    (i-PrO)2P-NHCH(CH)aCOOH
        31P  NMR  5.5ppm
        31C  NMR  175.2(4.9)  4 9.3  20.4(2.9)
                        23.6(5.5)    72.1(5.9)实施例3. O,O-二正丁基磷酰化L-丝氨酸甲酯(方法A)
L-丝氨酸甲酯的盐酸盐(1.56g,10mmol)溶于5ml,5ml乙醇及5ml三乙胺中，冰浴冷却下，滴加二正丁基磷酰氯(2.3g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应2小时，用乙酸乙酯萃取三次(3×20ml)，合并，加0.1N盐酸洗一次(20ml)，饱和食盐水洗两次(2×20ml)，无水硫酸镁干燥，减压除去有机溶剂即得到无色油状物重2.7g，产率90％。
结构测定：    (n-BuO)2PNHCH(CH2OH)-COOMe
               31P  NMR  7.6ppm
               13P  NMR  171.5(4.4),56.0,63.7(5.9),51.4(OMe),
                               12.9,18.0,31.6(5.9),65.6(5.9)实施例4. O,O-二异丙基磷酰咪唑(方法A)
将咪唑(0.68g,10mmo1)溶于5ml水，5ml乙醇及5ml三乙胺中，0℃下滴加二异丙基磷酰氯(2.0g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应2小时，用乙酸乙酯萃取三次(3×20ml)，合并用0.1N盐酸洗一次(20ml)，饱和食盐水洗两次(2×20ml)，无水硫酸镁干燥，减压除去溶剂，得到白色固体，重盐约2.0g产率85％。
结构测定：
         31P NMR -7.9ppm
         13C NMR 138.7(5.8),130.3(13.2),118.3(7.3)
                    22.4(4,4),73.3(4,4)实施例5. O,O-乙基磷酰化L-丙氨酸(方法D)
L-丙氨酸(0.89g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及10ml三乙胺中，冰盐冷却下(-10～0℃)下慢慢滴加三氯氧磷(1.53g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应5小时，减压除去有机溶剂，水层用乙醚萃取两次(2×20ml)，水层在冰水中酸化至PH=3，用乙酸乙酯-叔丁醇(1∶1.5)萃取3次(3×20ml)，合并，用饱和食盐水洗2次(2×20ml)用无水硫酸镁干燥，减压除去有机溶剂，得到色固体重1.0g，产率44％。
结构测定：(EtO)2P-NCH(CHa)COOH,31P  7.6ppm
           13C NMR,ppm(H2) 177.2(8.8),50.8,22.0(2.9)
                           17.3(7.3),64.0(4.4)
方法B.氨基磷酸单酯类(C2类)实施例6.  O-乙基，磷酰化丝氨酸二钠盐(方法B)
L-丝氨酸(1.05g,10mmol)溶于5ml水，5ml二氧六环和6ml三乙胺中，冰浴冷却下，滴加O-乙基磷酰二氯(1.63g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液反应12小时，减压除去有机溶剂，水层加入氢氧化钠(0.8g,20mmol),PH=11,反应4小时，减压除去有机碱，冷冻干燥，得到白色固体重1.9g，产率73％。
结构测定：EOPO2NaNHCH(CH2OH)COONa
          31P  NMR  5.8ppm
          13C  NMR  177.6,57.7,63.8
                    55.6,14.8
方法C．氨基磷酸盐类(C3)类
实施例7．磷酰化L-丙氨酸三钠盐(方法C)
L-丙氨酸(0.89g,10mmol)溶于5ml水，5ml二氧六环及10ml三乙胺中，冰盐冷却下(-10～0℃)慢慢滴加三氨氧磷(1.53g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液，反应6小时，减压除去有机溶剂，水层加氢氧化钠调至PH=11，反应4小时，减压除去有机胺类，冷冻干燥得到白色固体，重1.4g，产率60％。
结构测定：PO3Na2NHCH(CHa)COONa
         ‘HNMR(D2O)
          31PNMR 7.67ppm
          3.65～3.75ppm(M,1H,-CH)
          1.40～1.43ppm(d,3H,-CH3)方法D：二烷基磷酰胺盐，单烷基磷酰胺二盐，磷酰胺三盐混合物(C1,C2,C3)实施例8，磷酰化甘甘二肽的混合物(方法D)
将甘甘二肽(1.32g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及10ml三乙胺中，冰盐冷却(-10～0℃)下慢慢滴加三氯氧磷(1.53g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液反应12小时，减压除去有机溶剂，水层加入氢氧化钠(1.2g,30mml)反应6小时，减压除去有机碱，加丙酮，冷冻，得到白色固体，重1.2g，产率50％
结构测定：(EtO)2PCONHCH2CONHCH2COONa
                        含量50％,31PNMR,13.6ppm
          EtO(NaO)P(O)NHCH2CONHCH2COONa
                        含量28％,31PNMR,9.5ppm
          (NaO)2P(O)NHCH2COHChCOONa
                        含量22％,31PNMR,6.1ppm
实施例9．磷酰化丝氨酸盐混合物(方法C)
L-丝氨酸(1.05g,10mmol)溶于5ml水，5ml乙醇及6ml三乙胺中冰浴冷却(0℃)下慢慢滴加O-乙基磷酸氯(1.65g,10mmol)的5ml四氯化碳溶液反应6小时，减压除去有机溶剂，水层用乙醚萃取两次(2×20ml)，加入NaOH调至PH=11，反应6小时，减压除去有机碱，用叔丁醇-乙酸乙酯萃取(1.5∶1)干燥，除溶剂，得到白色固体，重2.1g，产率82％。
结构测定：(EtO)2P(O)NHEH(CH2OH)COONa
                      含量40％,31PNMR,8.1ppm
          EO(NaO)P(O)NHCH(CH2OH)COONa
                      含量40％,31PNMR,5.8ppm

Claims (4)

1、一种胺类在水体系中直接磷酰化合成氨基磷酸盐混合物的方法，其特征在于该合成方法为合成氨基磷酸盐、氨基磷酸单酯N-二烷基磷酰胺化合物的混合物，其反应式为：
Figure C9312124800021
其中所述的极性有机溶剂为醇类；
其合成方法为：将一定量的氨基酸、肽类、氨基酸酯、肽酯或胺类化合物溶于水～极性有机溶剂～碱～四氯化碳溶液中，滴入含等当量或稍过量的烃基磷酰二氯的四氯化碳溶液，在-10℃～30℃下搅拌反应5～15小时，有机溶剂为乙酸乙酯或叔丁醇：萃洗除去杂质，加入等当量的Na2CO3或NaOH，以中和萃取三乙胺，反应完后用等当量氢氧化钠、碳酸钠或Ca(OH)2，调节PH为10～11，用上述有机溶剂萃洗后，浓缩或加入对应的醇冷冻，即可析出混合产物的钠盐或其它金属盐；或先用氢氧化钠或碳酸钠调节PH为10～11，萃洗浓缩后热过滤除去不溶物，并用少量热水洗涤，再加入丙酮、异丙醇或对应的醇、冷冻、结晶即可获得混合产品等其它金属盐混合物；
上述反应式中，所述的R是碳原子数为1-4的烃基，R3和R4分别是烃基或带有羟基、糖基、烷氧基、保护氨基、咪唑基中的任何一种官能团的烃基，或者b是天然氨基酸、合成氨基酸、氨基酸衍生物和小肽中的任何一种；M为碱金属K,Na或碱土金属Ca的离子或季胺盐。
2、如权利要求1所述的合成方法，其特征在于其中的R3和R4是同一种烃基类，所述的b是天然氨基酸、合成氨基酸、氨基酸衍生物或小肽中的任何一种。
3、如权利要求1所述的合成方法，其特征在于其中的反应物的ROH为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇。
4、如权利要求1所述的合成方法，其特征在于其中所述的水～醇～碱～四氯化碳混合溶液中的碱是无机碱氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钙和有机碱三甲胺、三乙胺中的任何一种；所述的用以酸化的无机酸是盐酸或硫酸；所述的用以萃取的有机溶剂是乙酸乙酯、环己烷或两者的混合液。
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