CN104388366A - 一种鲍曼不动杆菌及其培养方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鲍曼不动杆菌及其培养方法和应用，所述鲍曼不动杆菌其将从印染废水取样后接入富集培养基培养，经过传代后分离获得的单株菌落，该鲍曼不动杆菌于2014年5月7日提交保藏，保藏号为：CCTCC NO：M201488。本发明所述的鲍曼不动杆菌具有较高的活性，生长速度快，稳定性好、不易变异。本发明所述的培养方法操作简单，培养周期短。所述鲍曼不动杆菌应用于偶氮染料脱色中，具有良好的脱色效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鲍曼不动杆菌及其培养方法和应用。
背景技术
鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)为非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界，属于条件致病菌。鲍曼不动杆菌有荚膜、菌毛，无芽孢和鞭毛；具有较强的粘附力，易于附着于物体表面。鲍曼不动杆菌具有复杂的抗原构造，包括菌体抗原以及荚膜抗原，根据不同的抗原可以将鲍曼不动杆菌分为34个血清型。
印染废水主要特征为带有色泽,主要由染料和纤维杂质造成。印染废水处理的突出问题是色度和难降解有机物的去除问题。带有色泽的水,排放至天然水源,不宜饮用,必须处理。因此,脱色处理一直是印染废水处理的主要任务。偶氮染料是一类含有一个或多个-N＝N-功能团的芳香类化合物，约占有机染料产品总量的80％以上，偶氮染料大多具有较好的水溶性，从而也导致了大量未附着在染色物上的染料以废水形式排出，造成水体污染。
近年来研究发现鲍曼不动杆菌可以降解废水中发染料污染物，具有很高的应用价值。目前，富集培养基和培养方法所获得的鲍曼不动杆菌活性低，容易出现变异；并且富集时间周期过长，成本高。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种鲍曼不动杆菌，具有较高的活性，生长速度快，稳定性好、不易变异。
本发明的另一目的在于提供一种鲍曼不动杆菌的培养方法，简化培养过程，缩短培养周期，获得稳定性好，活性高的鲍曼不动杆菌。
本发明还提供了鲍曼不动杆菌在废水染料脱色中的应用。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii LCY Jac)，其将从印染废水取样后接入富集培养基培养，经过传代后分离获得的单株菌落，该鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii LCY Jac)于2014年5月7日提交保藏，保藏号为：CCTCC NO：M201488；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地址：中国.武汉.武汉大学；邮编：430072。
具体地，所述鲍曼不动杆菌所述鲍曼不动杆菌的RNA基因序列为SEQ IDNO:1。
一种鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii LCY Jac)的培养方法，其包括如下步骤：
1)接种培养：从印染厂废水处理生化池中采集废水样品，调节废水的pH至6-7.5，然后将样品接入到富集培养基中，在恒温培养箱中培养；
2)菌种驯化：恒温培养箱中培养后于37℃摇床培养，每次接近全褪色时转至下一瓶，共筛选5代；
3)分离菌株：菌种驯化后在固体培养基平板上经多次划线分离出单株菌落；
4)筛选：将分离出的单株菌落对燃料进行脱色，选择脱色好、活性高的菌株；
5)鉴定：对步骤4)挑选出的菌株进行形态、生理生化特征采用BiologTM方法进行鉴定，挑选出鲍曼不动杆菌。
具体地，本发明所采用的富集培养基中，每1000ml富集培养基由含有蛋白胨1％，NaCl 0.5％，牛肉膏0.5％。
具体地，步骤1)中，恒温培养箱培养的温度为32-47℃。
具体地，步骤2)中，摇床转速为200n/min。
本发明所述的鲍曼不动杆菌在偶氮染料脱色中的应用；尤其对含有刚果红和孔雀绿等燃料的废水进行脱色处理，有着很好的脱色效果。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1.本发明所述的鲍曼不动杆菌具有较高的活性，生长速度快，稳定性好、不易变异，具有良好的脱色效果；
2.本发明所述的培养方法操作简单、培养周期短，
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
附图说明
图1为反应温度对本发明所述的鲍曼不动杆菌的影响结果图；
图2为pH值对本发明所述的鲍曼不动杆菌的影响结果图；
图3为摇床转速对本发明所述的鲍曼不动杆菌的影响结果图。
具体实施方式
实施例1
一种鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii LCY Jac)，其将从印染废水取样后接入富集培养基培养，经过传代后分离获得的单株菌落，该鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii LCY Jac)于2014年5月7日提交保藏，保藏号为：CCTCC NO：M201488，按照以下步骤培养：：
1)接种培养：从伟纶经编织造有限公司水处理生化池中采集废水样品，调节废水的pH值，然后将样品接入到富集培养基中，在恒温培养箱中培养；
2)菌种驯化：恒温培养箱中培养后于3728℃摇床培养，每次接近全褪色时转至下一瓶，共筛选5代；
3)分离菌株：菌种驯化后在固体培养基平板上经多次划线分离出单株菌落；
4)筛选：将分离出的单株菌落对燃料进行脱色，选择脱色好、活性高的菌株；
5)鉴定：对步骤4)挑选出的菌株进行形态、生理生化特征采用BiologTM方法进行鉴定，挑选出鲍曼不动杆菌。
设定pH值为7.2，考察不同温度培养箱中培养对菌株生长的影响，其中具体考察的温度值分别为22℃、27℃、32℃、37℃、42℃、47℃、52℃下菌株的生长速度，结果参见图1。
图1的结果表明：鲍曼不动杆菌在32℃-47℃温度范围培养，长势较好，生长速度较快。
该鲍曼不动杆菌的鉴定结果如下：
1)细菌学形态特征为：不动杆菌在37℃恒温培养箱中培养菌24h后，进行革兰染色、显微镜下进行观察，结果发现菌株为革兰阴性菌，短杆状。
2)生理生化特征为：将zk1菌种接种的LB培养基培养24h后，利用VITEK全自动细菌鉴定仪，采用革兰氏阴性鉴定卡，7h后读取鉴定结果，zk1菌种生化结果如表1所示。
表1
实施例2
按照以下步骤培养：
按照实施例1的步骤进行培养，其中设定培养温度为37℃，摇床转速为200n/min；考察不同pH值的样品对菌株生长的影响，其中具体考察的pH值分别为调节为4、5、6、6.5、7、7.5下菌株的生长速度，结果参见图2。
图2的结果表明：鲍曼不动杆菌在pH值为6-7.5之间长势较好，生长速度较快。
实施例3
按照实施例1的步骤进行培养，其中设定培养温度为37℃，pH值为7.2，考察不同摇床转速为对菌株生长的影响，其中具体考察的摇床转速为分别为调节为150n/min、200n/min、250n/min下菌株的生长速度，结果参见图3。
图3的结果表明：鲍曼不动杆菌在摇床转速为200n/min时长势较好，生长速度较快。
应用实施例1(染料脱色试验)
在富集培养基中接入本发明分离出来的鲍曼不动杆菌，于37℃的恒温培养箱中培养24小时，调整细菌浓度至540nm吸光度A＝1.0，去5ml菌液，加入浓度为60×10-6的刚果红染料，30℃恒温放置24小时，测染料浓度为21×10-6，脱色率为65％。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种鲍曼不动杆菌，其特征在于：其将从印染废水取样后接入富集培养基培养，经过传代后分离获得的单株菌落，该鲍曼不动杆菌于2014年5月7日提交保藏，保藏号为：CCTCC NO：M201488。
2.根据权利要求1所述的鲍曼不动杆菌，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌的RNA基因序列为SEQ ID NO:1。
3.一种如权利要求1所述的鲍曼不动杆菌的培养方法，其特征在于，其包括如下步骤：
1)接种培养：从印染厂废水处理生化池中采集废水样品，调节废水的pH至6-7.5，然后将样品接入到富集培养基中，在恒温培养箱中培养；
2)菌种驯化：恒温培养箱中培养后于36℃摇床培养，每次接近全褪色时转至下一瓶，共筛选5代；
3)分离菌株：菌种驯化后在固体培养基平板上经多次划线分离出单株菌落；
4)筛选：将分离出的单株菌落对燃料进行脱色，选择脱色好、活性高的菌株；
5)鉴定：对步骤4)挑选出的菌株进行形态、生理生化特征采用Vitek 2系统方法进行鉴定，鉴定为出鲍曼不动杆菌。
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，每1000ml富集培养基由含有蛋白胨1％，NaCl 0.5％，牛肉膏0.5％。
5.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，步骤1)中，恒温培养箱培养的温度为32-47℃。
6.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，步骤2)中，摇床转速为200n/min。
7.如权利要求1所述的鲍曼不动杆菌在偶氮染料脱色中的应用。
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