CN104382964A - 一种由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法，所述方法是首先用乙醇水溶液对骆驼蓬草进行回流提取，制备骆驼蓬草总提取物；然后用水溶解制备骆驼蓬草总提取物水溶液，上样至大孔树脂柱后，先用蒸馏水洗脱1～5个柱体积以去除极性杂质；再用5～40v％的乙醇水溶液进行洗脱5～20个柱体积，收集洗脱液，浓缩，得到骆驼蓬草总生物碱提取物；再用45～80v％的乙醇水溶液对大孔树脂柱继续洗脱10～30个柱体积，收集洗脱液，浓缩，即得到骆驼蓬草总黄酮提取物。本发明可为研究和开发利用骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物提供便捷途径。

Description

一种由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法
技术领域
本发明是涉及一种由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法，属于中药提取技术领域。
背景技术
骆驼蓬为蒺藜科(Zygophyllaceae)骆驼蓬属(Peganum)的植物骆驼蓬(Peganum harn1alaLinn)。该属在我国有三个种，即骆驼蓬(P.harmala L.)、骆驼蒿(P.nigellastrum Bge)和多裂骆驼蓬(P.multisectum(maxim.)Bobr.)，骆驼蓬草为骆驼蓬的干燥地上部分，具有祛除粘液质，消肿止痛、通血调经的作用，用于关节骨痛、月经闭阻等症。
现有技术中，对于骆驼蓬的研究主要集中在骆驼蓬子的化学成分和药理活性方面，也涉及骆驼蓬子总生物碱衍生制剂的研究，而对于骆驼蓬草的研究相对较少，主要集中于全草提取物抗肿瘤、抗菌方面的研究。
本发明人前期的研究发现，骆驼蓬草的主要化学成分为喹唑啉类生物碱和黄酮类化合物，其中喹唑啉类生物碱以鸭嘴花碱和脱氧鸭嘴花碱(deoxyvasicine，简称：DVAS)为主，黄酮类以骆驼蓬苷(peganetin，简称：PEG)和脱乙酰基骆驼蓬苷(deacetylpeganetin，简称：DEA)为主。但至今还没有从骆驼蓬草中制备骆驼蓬草总生物碱提取物及骆驼蓬草总黄酮提取物的方法，以致影响了对骆驼蓬草的药用价值的研究和开发利用。
发明内容
本发明的目的是提供一种由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法，为研究和开发利用骆驼蓬草提供途径。
本发明所述的由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法，包括如下步骤：
a)用体积百分比浓度为50％～90％的乙醇水溶液对骆驼蓬草进行回流提取，得骆驼蓬草提取液；浓缩，得骆驼蓬草总提取物；
b)将步骤a)制得的骆驼蓬草总提取物粉碎后，用水溶解、过滤，得到骆驼蓬草总提取物水溶液；
c)将步骤b)得到的骆驼蓬草总提取物水溶液上至大孔树脂层析柱中，然后用蒸馏水洗脱1～5个柱体积以去除极性杂质；
d)再用体积百分比浓度为5～40％的乙醇水溶液对经步骤c)处理后的大孔树脂层析柱进行洗脱5～20个柱体积，收集洗脱液，浓缩，即得到骆驼蓬草总生物碱提取物；
e)再用体积百分比浓度为45～80％的乙醇水溶液对经步骤d)处理后的大孔树脂层析柱进行洗脱10～30个柱体积，收集洗脱液，浓缩，即得到骆驼蓬草总黄酮提取物。
作为优选方案，步骤a)中的回流提取次数为1～3次，每次回流时间为1～2小时；每次乙醇水溶液与骆驼蓬草药材的质量之比为1:(8～20)。
作为优选方案，步骤b)按骆驼蓬草总提取物与水的质量之比为1:(2～50)进行溶解。
作为优选方案，步骤c)中所述的大孔树脂选用D101、LSA-5B、LSA-21或HPD600型树脂，以D101大孔树脂最佳。
经检测分析得知：本发明方法中得到的骆驼蓬草总提取物中，骆驼蓬草总生物碱的质量含量以鸭嘴花碱与脱氧鸭嘴花碱的质量含量之和计为0.82％～5.24％，其中鸭嘴花碱的质量含量为0.46％～3.72％；骆驼蓬草总黄酮的质量含量以骆驼蓬苷与脱乙酰基骆驼蓬苷的质量含量之和计为0.43％～3.76％，其中骆驼蓬苷的质量含量为0.19％～1.68％。但经本发明方法分离制备的骆驼蓬草总生物碱提取物中，总生物碱的质量含量以鸭嘴花碱与脱氧鸭嘴花碱的质量含量之和计大于50％，其中鸭嘴花碱的质量含量为25％～45％；经本发明方法分离制备的骆驼蓬草总黄酮提取物中，总黄酮的质量含量以骆驼蓬苷与脱乙酰基骆驼蓬苷含量之和计大于50％，其中骆驼蓬苷的质量含量为24％～30％。可见，通过本发明方法，可分离制得高含量的骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物，为研究和开发利用骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物提供了便捷途径。
另外，实验证明：本发明获得的骆驼蓬草总生物碱提取物，在体内既可显著地抑制由氨水或辣椒素所致实验性咳嗽模型小鼠的咳嗽次数和咳嗽潜伏期，也可显著抑制由枸橼酸所致实验性咳嗽模型豚鼠的咳嗽次数和咳嗽潜伏期，还能显著地增加小鼠酚红排泄模型中酚红在气管中的排泄量；本发明获得的骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物，在体内均可显著地抑制由乙酰胆碱-组胺所致的实验性哮喘模型豚鼠发生哮喘的潜伏期；总之，由本发明方法制备的骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物可望用于制备治疗呼吸系统疾病的药物，如制成丸剂、片剂、胶囊剂、喷雾剂及口服液等药物剂型，具有药用开发价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细、完整地说明；下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例：制备骆驼蓬草总生物碱提取物及骆驼蓬草总黄酮提取物
取100g干燥的骆驼蓬草药材，剪成2～4cm长的小段，粉碎成粗粉，使用20倍量(即：2000mL)的体积百分比浓度为50％的乙醇水溶液浸泡2.5小时，然后进行回流提取1.5小时，共提取3次；合并提取液，过滤，浓缩滤液中的溶剂，得骆驼蓬草总提取物；
将上述骆驼蓬草总提取物溶解于蒸馏水中，配制成浓度为0.25g/mL的水溶液；称取D101大孔树脂10g，湿法上柱，以2倍大孔树脂柱体积/小时的流速上样，用5倍大孔树脂柱体积的蒸馏水以洗脱流速为2倍大孔树脂柱体积/小时洗脱，以去除极性杂质；随后用20倍大孔树脂柱体积的体积百分比浓度为20％的乙醇水溶液，以洗脱流速为2倍大孔树脂柱体积/小时进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，即得骆驼蓬草总生物碱提取物；
再用20倍大孔树脂柱体积的体积百分比浓度为80％的乙醇水溶液、以洗脱流速为2倍大孔树脂柱体积/小时对经上步处理后的大孔树脂柱进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，即得骆驼蓬草总黄酮提取物。
所得骆驼蓬草总生物碱提取物及骆驼蓬草总黄酮提取物的得率结果见表1所示，其中：n＝3，X±SD。
表1
经薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)法定性分析，并通过电喷雾电离液相色谱质谱(ESI-MS)、氢核磁共振(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-NMR)波谱数据验证，可确定本发明方法中得到的骆驼蓬草总提取物中，骆驼蓬草总生物碱的质量含量以鸭嘴花碱与脱氧鸭嘴花碱的质量含量之和计为0.82％～5.24％，其中鸭嘴花碱的质量含量为0.46％～3.72％；骆驼蓬草总黄酮的质量含量以骆驼蓬苷与脱乙酰基骆驼蓬苷的质量含量之和计为0.43％～3.76％，其中骆驼蓬苷的质量含量为0.19％～1.68％。但经本发明方法分离制备的骆驼蓬草总生物碱提取物中含有鸭嘴花碱、脱氧鸭嘴花碱及其它生物碱，总生物碱的含量以鸭嘴花碱(VAS)与脱氧鸭嘴花碱(DVAS)的质量含量之和计大于50％，其中鸭嘴花碱的质量含量为25％～45％；制备的骆驼蓬草总黄酮提取物中含骆驼蓬苷、脱乙酰基骆驼蓬苷及其它黄酮类化合物，总黄酮的质量含量以骆驼蓬苷(PEG)与脱乙酰基骆驼蓬苷(DEA)含量之和计大于50％，其中骆驼蓬苷的质量含量为24％～30％。详见表2所示。
表2.含量测定结果(n＝3；X±SD)
效果实施例：
1、对氨水所致的小鼠咳嗽模型的影响
1)试药与仪器：磷酸可待因片(国药集团化学试剂公司，批号：20130401)；骆驼蓬草总提取物、骆驼蓬草总生物碱提取物、骆驼蓬草总黄酮提取物，由上述实施例制得。
2)实验动物：ICR小鼠，个体重20±2g，清洁级，上海中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(沪)2009-0069。
3)实验方法：取110只健康ICR小鼠，雌雄各半，随机分为11个小组，在倒置的500mL烧杯中放一棉球，吸取质量体积比浓度为25％的氨水0.1mL注入棉球上，45秒后放入小鼠，开始记时，分别记录小鼠的咳嗽潜伏期和2分钟内咳嗽次数，24小时后，口服给药，分别在给药60分钟后测定各组小鼠的咳嗽潜伏期和2分钟内咳嗽次数，其中，对照组给药为质量体积比为0.3％羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na溶液)；阳性组给药为磷酸可待因，给药量为每千克鼠重给药30mg；实验组每千克鼠重给药：骆驼蓬草总提取物低剂量为183.3mg、中剂量为550mg、高剂量为1650mg，骆驼蓬草总生物碱提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg，骆驼蓬草总黄酮提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg，采用SPSS18.0对数据进行统计分析，实验结果见表3所示。
表3.提取物对氨水导致的小鼠咳嗽模型的影响
4)实验结果：表3中，抑咳率(Inhibition％)表示药物镇咳效应，Inhibition％＝(Cbefore－Cafter)/Cbefore×100％，Cbefore为给药前小鼠的咳嗽次数，Cafter为给药之后小鼠的咳嗽次数；延迟率(Inhibition％)表示药物延长咳嗽的能力，Inhibition％＝(Cbefore－Cafter)/Cbefore×100％，Cbefore为给药前小鼠的潜伏期，Cafter为给药之后小鼠的潜伏期；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001表示与对照组比较；#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001表示与给药前比较；X±SD。
5)实验结论：与给药前比较，骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能显著延长小鼠咳嗽的潜伏期(P<0.05)，其中总提取物及总生物碱高剂量组的延迟率均高于阳性药磷酸可待因的作用；总提取物及总生物碱低剂量组的延迟率均相当于阳性药磷酸可待因的作用；骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能显著减少小鼠咳嗽次数(P<0.05)。与对照组比较，骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能显著的延长小鼠咳嗽的潜伏期(P<0.05)，骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组能够显著的减少小鼠咳嗽次数(P<0.05)，其中总提取物及总生物碱高剂量的组抑咳率均高于阳性药磷酸可待因。据此，可以认为：骆驼蓬草总提取物，总生物碱提取物表现出较明显的止咳作用，表明骆驼蓬草总提取物，总生物碱提取物具有开发成止咳药的潜能。
2、对辣椒素所致的小鼠咳嗽模型的影响
1)试药与仪器：辣椒素(Sigma公司，批号：2069698)，磷酸可待因片(国药集团化学试剂公司，批号：20130401)，402AI型超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)，骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物、总黄酮提取物由上述实施例制得。
2)实验动物：ICR小鼠，个体重20±2g，清洁级，上海中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(沪)2009-0069。
3)实验方法：取110只健康ICR小鼠，雌雄各半，随机分为11个小组，其中，对照组给药为质量体积比浓度为0.3％的羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na溶液)；阳性组给药为磷酸可待因，给药量为每千克鼠重给药30mg；实验组每千克鼠重给药：骆驼蓬草总提取物低剂量为183.3mg、中剂量为550mg、高剂量为1650mg，骆驼蓬草总生物碱提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg，骆驼蓬草总黄酮提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg。用超声雾化器向倒置的500mL烧杯中喷雾摩尔体积比浓度为100μmol/L的辣椒素水溶液，放入小鼠后开始记录时间，记录小鼠的咳嗽潜伏期和2分钟内咳嗽次数。24小时后，口服给药，分别在给药60分钟后测定各组小鼠的咳嗽潜伏期和2分钟内咳嗽次数。比较各给药组对于小鼠镇咳效应的大小，采用SPSS 18.0对数据进行统计分析。
4)实验结果：表4中，抑咳率(Inhibition％)表示药物镇咳效应，Inhibition％＝(Cbefore－Cafter)/Cbefore×100％，Cbefore为给药前小鼠的咳嗽次数，Cafter为给药之后小鼠的咳嗽次数；延迟率(Inhibition％)表示药物延长咳嗽的能力，Inhibition％＝(Cbefore－Cafter)/Cbefore×100％，Cbefore为给药前小鼠的潜伏期，Cafter为给药之后小鼠的潜伏期；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001表示与对照组比较；#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001表示与给药前比较；X±SD。
表4.提取物对辣椒素导致的小鼠咳嗽模型的影响
5)实验结论：与给药前比较，骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量均能显著延长小鼠咳嗽的潜伏期(P<0.05)，其中总提取物及总生物碱高剂量组的延迟率均相当或高于阳性药磷酸可待因的作用；骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能显著减少小鼠咳嗽次数(P<0.05)。与对照组比较，骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能显著的延长小鼠咳嗽的潜伏期(P<0.05)骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能够显著的减少小鼠咳嗽次数(P<0.05)，其中总提取物和总生物碱高剂量组抑咳率均高于阳性药磷酸可待因。据此，可以认为：不同剂量的骆驼蓬草总提取物，总生物碱提取物均表现出明显的止咳作用，表明骆驼蓬草总提取物，总生物碱提取物具有开发成止咳药的潜能。
3、对枸橼酸所致的豚鼠咳嗽模型的影响
1)试药与仪器：枸橼酸(国药集团化学试剂公司，批号：20011105)，磷酸可待因片(国药集团化学试剂公司，批号：20130401)，402AI型超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)，骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物、总黄酮提取物由上述实施例制得。
2)实验动物：豚鼠，200±50g，清洁级，上海中医药大学实验动物中心提供(合格证号：SYXK(沪)2009-0069)。
3)实验方法：取110只健康豚鼠，雌雄各半，随机分为11个小组，其中，对照组给药为质量体积比为0.3％的羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na溶液)；阳性组给药为磷酸可待因，给药量为每千克鼠重给药30mg；实验组每千克鼠重给药：骆驼蓬草总提取物低剂量为183.3mg、中剂量为550mg、高剂量为1650mg，骆驼蓬草总生物碱提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg，骆驼蓬草总黄酮提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg。将豚鼠放入3L玻璃容器中，向内喷雾质量体积比浓度为33％的枸橼酸水溶液，持续45秒，记录豚鼠的咳嗽潜伏期和5分钟内咳嗽次数。24小时后，分别在给药60分钟后测定各组豚鼠的咳嗽潜伏期和5分钟内咳嗽次数。24小时后，口服给药，分别在给药60分钟后测定各组豚鼠的咳嗽潜伏期和2分钟内咳嗽次数。比较各给药组对于豚鼠镇咳效应的大小，采用SPSS 18.0对数据进行统计分析，实验结果见表5所示。
表5.提取物对枸橼酸导致的豚鼠咳嗽模型的影响
4)实验结果：表5中，抑咳率(Inhibition％)表示药物镇咳效应，Inhibition％＝(Cbefore－Cafter)/Cbefore×100％，Cbefore为给药前豚鼠的咳嗽次数，Cafter为给药之后豚鼠的咳嗽次数；延迟率(Inhibition％)表示药物延长咳嗽的能力，Inhibition％＝(Cbefore－Cafter)/Cbefore×100％，Cbefore为给药前豚鼠的潜伏期，Cafter为给药之后豚鼠的潜伏期；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001表示与对照组比较；#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001表示与给药前比较；X±SD。
5)实验结论：与给药前比较，骆驼蓬草总提取物高剂量、总生物碱提取物中、高剂量组能够显著的延长豚鼠咳嗽的潜伏期(P<0.05)，其中总提取物高剂量及总生物碱高剂量的延迟率高于阳性药磷酸可待因的作用；骆驼蓬草总提取物高剂量、总生物碱提取物高、中、低3个剂量组能够显著的减少豚鼠咳嗽次数(P<0.05)；与对照组比较，骆驼蓬草总提取物中高剂量、总生物碱提取物低中高剂量组能够显著的延长豚鼠咳嗽的潜伏期(P<0.05)，骆驼蓬草总提取物高剂量、总生物碱提取物低中高剂量组能够显著的减少豚鼠咳嗽次数(P<0.05)，其中总提取物高剂量及总生物碱高剂量的抑咳率相当或高于阳性药磷酸可待因的作用。据此，可以认为：骆驼蓬草总提取物，总生物碱提取物表现出较明显的止咳作用，表明骆驼蓬草总提取物，总生物碱提取物具有开发成止咳药的潜能。
4、对小鼠气管酚红排泄的影响
1)试药与仪器：酚红(国药集团化学试剂公司，批号：20120929)，NH4Cl(国药集团化学试剂公司，批号：20121129)，骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物、总黄酮提取物由上述实施例制得。
2)实验动物：ICR小鼠，个体重20±2g，清洁级，(上海中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(沪)2009-0069。
3)实验方法：取110只健康ICR小鼠，雌雄各半，随机分为11个小组，口服给药，其中，对照组给药为质量体积比为0.3％的羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na溶液)；阳性组给药为NH4Cl，给药量为每千克鼠重给药1500mg；实验组每千克鼠重给药：骆驼蓬草总提取物低剂量为183.3mg、中剂量为550mg、高剂量为1650mg，骆驼蓬草总生物碱提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg，骆驼蓬草总黄酮提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg。实验前小鼠禁食不禁水12小时，给药30分钟后，腹腔注射5％酚红生理盐水溶液500mg/kg，30分钟后脱颈椎处死，剪取自甲状软骨处至气管分叉处的气管段，将其浸泡于1.5mL的NaOH溶液中，超声3小时，于波长540nm处比色测定吸光度，计算酚红排泄量。
4)实验结果：见表6，其中，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001表示与对照组比较；X±SD。
表6.提取物对小鼠气管酚红排泄的影响
5)实验结论：与对照组比较，总提取物与总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能够显著的增加支气管中酚红的排泄量(P<0.001)，其中总生物碱及总提取物高剂量组酚红排泄量均大于阳性组的酚红排泄量，表明总提取物和总生物碱均具有很强的祛痰作用，且该作用具有剂量依赖性。据此，可以认为：骆驼蓬草总提取物和总生物碱提取物高、中、低3个剂量组均能增加支气管中酚红的排泄量，该作用具有明显的剂量依赖性，且高剂量的作用强于阳性药，表明骆驼蓬草总提取物，骆驼蓬草总生物碱提取物具有开发成祛痰药物的潜能。
5、对乙酰胆碱－组胺所致豚鼠哮喘模型的影响
1)试药与仪器：氯化乙酰胆碱(Sigma公司，批号：0001433126)，磷酸组胺(Sigma公司，批号：BCBC2083V)，氨茶碱(Sigma公司，批号：SLBG0677V)，402AI型超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)，骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物、总黄酮提取物由上述实施例制得。
2)实验动物：豚鼠，个体重200±50g，清洁级，(上海中医药大学实验动物中心提供，合格证：SYXK(沪)2009-0069)。
3)实验方法：取110只健康豚鼠，雌雄各半，随机分为11个小组，口服给药，其中，对照组给药为质量体积比为0.3％的羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na溶液)；阳性组给药为氨茶碱，给药量为每千克鼠重给药50mg；实验组每千克鼠重给药：骆驼蓬草总提取物低剂量为183.3mg、中剂量为550mg、高剂量为1650mg，骆驼蓬草总生物碱提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg，骆驼蓬草总黄酮提取物低剂量为10mg、中剂量为30mg、高剂量为90mg。将豚鼠放入3L玻璃容器中，向内喷雾质量体积比浓度为2％的乙酰胆碱－0.1％的组胺水溶液，持续30秒，记录豚鼠发生喘息性抽搐或摔倒的时间，即潜伏期。在24小时后，分别测定给药60分钟后各组豚鼠的潜伏期。比较各给药组对于豚鼠平喘效应的大小，采用SPSS 18.0对数据进行统计分析。
4)实验结果：见表7，其中，延迟率(Inhibition％)来表示药物平喘效应。Inhibition％＝(Tafter－Tbefore)/Tbefore×100％，Tbefore为给药前豚鼠的潜伏期，Tafter为给药之后豚鼠的潜伏期，X±SD。
表7.提取物对乙酰胆碱－组胺所致豚鼠哮喘模型的影响
5)实验结论：与给药前比较，骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物和总黄酮提取物高、中、低3个剂量组均能显著的延长豚鼠发生喘息性抽搐或摔倒的潜伏期(P<0.05)；与对照组比较，总提取物高剂量组、总黄酮提取物中剂量和高剂量组、总生物碱提取物中剂量和高剂量组均能显著延迟豚鼠发生喘息性抽搐或摔倒的潜伏期(P<0.05)。据此，可以认为：骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物和总黄酮提取物组都表现出不同程度的平喘作用，该作用具有明显的剂量依赖性，且高剂量的作用接近于阳性药，表明骆驼蓬草总提取物、总生物碱提取物和总黄酮提取物组均具有开发平喘药潜能。
综上实验结果说明：骆驼蓬草总提取物和骆驼蓬草总生物碱提取物，在体内均可显著地抑制由氨水或辣椒素所致实验性咳嗽模型小鼠的咳嗽次数和咳嗽潜伏期，显著抑制由枸橼酸所致实验性咳嗽模型豚鼠的咳嗽次数和咳嗽潜伏期，还能显著地增加小鼠酚红排泄模型中酚红在气管中的排泄量；驼蓬草总提取物、总生物碱提取物和总黄酮提取物，在体内均可显著地抑制由乙酰胆碱－组胺所致的实验性哮喘模型豚鼠发生哮喘的潜伏期。
应用例：
1)骆驼蓬草总生物碱提取物片剂的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总生物碱提取物30.0g，加淀粉107.0g，均过5号(80目)筛，按内外加法加入羧甲基淀粉钠7.5g，混合均匀，加入含2.5g聚维酮K30的体积比浓度为10％的乙醇水溶液制备软材，20目筛制颗粒，湿颗粒于60～80℃干燥后，加入滑石粉3.0g，混合均匀，过16目筛整粒，压成1000片，即得。
2)骆驼蓬草总生物碱提取物颗粒剂的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总生物碱提取物50.0g，加淀粉850.0g，均过5号(80目)筛，加入质量体积比浓度为10％的淀粉浆适量制成颗粒，于60～80℃干燥后分装。
3)骆驼蓬草总生物碱提取物胶囊剂的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总生物碱提取物50.0g，加淀粉135.0g，均过5号(80目)筛，加入微晶纤维10g，混合均匀，再加入体积比浓度为10％的乙醇水溶液制备软材，20目筛制颗粒，湿颗粒于60～80℃干燥后，过16目筛整粒，加入硬脂酸镁5g，混合均匀，采用胶囊板灌装即得胶囊1000粒。
4)骆驼蓬草总生物碱提取物口服液的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总生物碱提取物50.0g，加蒸馏水溶解，乙醇和蒸馏水调节体积至1000mL，醇体积比浓度为20％，使用NaCO3调节pH值为6.0～7.0，搅拌，过滤，灌装，每支10mL，灭菌，即得。
5)骆驼蓬草总黄酮提取物片剂的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总黄酮提取物30.0g，加淀粉107.0g，均过5号(80目)筛，按内外加法加入羧甲基淀粉钠7.5g，混合均匀，加入含2.5g聚维酮K30的体积比浓度为10％的乙醇水溶液制备软材，20目筛制颗粒，湿颗粒于60～80℃干燥后，加入滑石粉3.0g，混合均匀，过16目筛整粒，压成1000片，即得。
6)骆驼蓬草总黄酮提取物颗粒剂的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总黄酮提取物50.0g，加淀粉850.0g，均过5号(80目)筛，加入10％淀粉浆适量制成颗粒，于60～80℃干燥后分装。
7)骆驼蓬草总黄酮提取物胶囊剂的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总黄酮提取物50.0g，加淀粉135.0g，均过5号(80目)筛，加入微晶纤维10g，混合均匀，再加入体积比浓度为10％的乙醇水溶液制备软材，20目筛制颗粒，湿颗粒于60～80℃干燥后，过16目筛整粒，加入硬脂酸镁5g，混合均匀，采用胶囊板灌装即得胶囊1000粒。
8)骆驼蓬草总黄酮提取物口服液的制备：取实施例制备的骆驼蓬草总黄酮提取物50.0g，加蒸馏水溶解，乙醇和蒸馏水调节体积至1000mL，醇体积比浓度为20％，使用NaCO3调节pH值为6.0～7.0，搅拌，过滤，灌装，每支10mL，灭菌，即得。
综上实验可见：本发明只需一次上柱就可同时获得骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物，制备工艺简便、经济，且活性成分含量高，可望用于制备治疗呼吸系统疾病的药物，如制成丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂及口服液等药物剂型，具有药用开发价值，为研究和开发利用骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物提供了便捷途径。
最后有必要在此说明的是：以上内容只用于对本发明技术方案做进一步详细说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种由骆驼蓬草制备骆驼蓬草总生物碱提取物和骆驼蓬草总黄酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)用体积百分比浓度为50％～90％的乙醇水溶液对骆驼蓬草进行回流提取，得骆驼蓬草提取液；浓缩，得骆驼蓬草总提取物；
b)将步骤a)制得的骆驼蓬草总提取物粉碎后，用水溶解、过滤，得到骆驼蓬草总提取物水溶液；
c)将步骤b)得到的骆驼蓬草总提取物水溶液上至大孔树脂层析柱中，然后用蒸馏水洗脱1～5个柱体积以去除极性杂质；
d)再用体积百分比浓度为5～40％的乙醇水溶液对经步骤c)处理后的大孔树脂层析柱进行洗脱5～20个柱体积，收集洗脱液，浓缩，即得到骆驼蓬草总生物碱提取物；
e)再用体积百分比浓度为45～80％的乙醇水溶液对经步骤d)处理后的大孔树脂层析柱进行洗脱10～30个柱体积，收集洗脱液，浓缩，即得到骆驼蓬草总黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a)中的回流提取次数为1～3次，每次回流时间为1～2小时；每次乙醇水溶液与骆驼蓬草药材的质量之比为1:(8～20)。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b)按骆驼蓬草总提取物与水的质量之比为1:(2～50)进行溶解。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c)中所述的大孔树脂选用D101、LSA-5B、LSA-21或HPD600型树脂。
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