CN104359999A - 一种烟草中烟草特有n-亚硝胺的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，采用气相色谱三重四极杆串联质谱法（GC-QQQ-MS/MS）测定烟草中烟草特有N-亚硝胺的含量，具体包括以下步骤：1）标准溶液的配制；2）样品前处理；3）样品定性检测；4）样品定量检测。本发明的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，通过优化选择的混合溶剂进行萃取，优化了样品前处理方法，并利用了GC-QQQ-MS/MS强大的色谱分离能力、良好的选择性和灵敏度，进行简便快速的测定，具有较高的灵敏度、准确性和精密度，有效提高了烟草中4种烟草特有N-亚硝胺的检测效率。

Description

一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法

技术领域

本发明属于烟草中有害物质成分检测技术领域，特别是涉及一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法。

背景技术

烟草特有N-亚硝胺(TSNAs，Tobacco-Specific Nitrosamines)是发现仅存在于烟草和烟气中的非挥发性亚硝胺。一般认为，烟草特有N-亚硝胺是在烟草调制过程中通过烟草生物碱硝化作用形成的。其中烟草中主要含有4种，即N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)和N-亚硝基新烟草碱(NAT)。对以往的动物或人体毒理学研究的权重分析表明，TSNA是烟草中致癌作用最强的物质之一，它们一直都是烟草行业研究的热点问题。

目前，实际烟草样品通常指烟叶样品、烟草烘干后研磨得到的粉末、料液、烟丝、烟梗等。烟草样品未经燃烧，与烟草燃烧后获得的烟气样品差别很大。而且，实际烟草样品基质非常复杂，一般采用色谱分离与选择性检测器相结合来检测烟草和烟气中的TSNA。对于烟草中TSNA的测定，采用的分析技术包括：(1)GC-TEA,(2)GC/MS-SIM,(3)GC-NPD,(4)HPLC-MS/MS法，(5)GC/GC-MS。其中，由于热能分析仪(TEA)对亚硝胺类具有很高的选择性，所以GC-TEA是应用最广泛的检测方法，但是TEA的缺点是仪器价格昂贵且用途单一。而GC/MS和GC-NPD虽然十分普及，但是对亚硝胺的选择性比TEA差很多，背景干扰较为严重，需要繁琐的液-液萃取和固相萃取等净化步骤。HPLC-MS/MS价格昂贵，且对TSNA四种物质的色谱分离能力有一定局限性。GC/GC-MS(多维气相-色谱)虽然可以提高对复杂体系的分析能力，有效降低本底干扰，提高复杂体系中痕量组分的检测灵敏度，但仍需要纯化和浓缩，样品前处理较为复杂。因此，有必要对烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法进行进一步的探讨和研究。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，用于解决现有技术中缺乏处理过程简单、分离效果好、选择性和灵敏度高的烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，通过混合溶剂进行萃取，再采用气相色谱三重四极杆串联质谱法(GC-QQQ-MS/MS)测定烟草中烟草特有N-亚硝胺的含量，具体包括以下步骤：

较佳的，所述烟草特有N-亚硝胺包括有N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)和N-亚硝基新烟草碱(NAT)。

1)标准溶液的配制：

A、分别称取NAB、NAT、NNN、NNK的标准品，加入甲醇定容，配成混合标准储备溶液；

较佳的，所述NAB、NAT、NNN、NNK的标准品的浓度均为0.5mg/ml。

较佳的，所述混合标准储备溶液中NAB、NAT、NNN、NNK的浓度均为5μg/ml。

B、分别称取d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK，加入甲醇定容，配成内标溶液；

较佳的，所述内标溶液中d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK的浓度均为400ng/ml。

较佳的，所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK为氘代试剂。具体的，所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK分别为氘代N-亚硝基去甲基烟碱、氘代N-亚硝基新烟草碱、氘代N-亚硝基假木贼碱、氘代4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮。

所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK为商品化试剂，其化学性质稳定，适于作为内标。

C、分别移取不同体积的步骤A中混合标准储备溶液，再分别加入一定体积的步骤B中内标溶液，用甲醇定容配制为一系列不同浓度的混合标准溶液。

较佳的，所述标准溶液的浓度为0.5-50ng/ml。

2)样品前处理：称取烟草粉末样品，加入含有步骤1)中所述内标溶液的混合溶剂，超声萃取后离心，取上清液，待测；

较佳的，所述烟草粉末样品的重量为1-2g。

较佳的，所述混合溶剂为有机溶剂和氢氧化钠的混合溶剂。

进一步的，所述有机溶剂选自二氯甲烷和甲醇中的任意一种。优选的，所述有机溶剂为二氯甲烷。

进一步的，所述氢氧化钠的质量百分比浓度为5-15％。优选的，所述氢氧化钠的质量百分比浓度为10％。更优的，所述样品处理时所加入的10％NaOH体积为1ml。所述混合溶剂使用氢氧化钠能够调节萃取溶液pH值，提高提取效果。

较佳的，所述超声萃取时间为30±3分钟。

较佳的，所述烟草粉末样品在超声萃取后加入无水硫酸钠除水。所述无水硫酸钠除水，防止水分会损坏色谱柱，便于进行仪器检测。

进一步的，所述无水硫酸钠的重量为10±1g。

较佳的，所述离心条件为：离心转速：3000±300rpm；离心时间为3±1分钟。

3)样品定性检测：分别将步骤1)配制的混合标准溶液和步骤2)中待测液进行GC-QQQ-MS/MS检测，比较保留时间进行定性，确定待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分；

4)样品定量检测：分别将步骤1)配制的混合标准溶液和步骤2)中待测液进行GC-QQQ-MS/MS检测，采用内标标准曲线法进行定量，获得待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分的浓度含量。

较佳的，所述内标标准曲线法包括以下步骤：

所述内标标准曲线法是指在标准溶液中加入内标物质，进行仪器测定，获得标准工作曲线，进而测定含有内标物质的实际样品浓度的方法。

ⅰ、将步骤1)的C中一系列不同浓度的混合标准溶液分别进行GC-QQQ-MS/MS检测，分别获得4种烟草特有N-亚硝胺成分/相应内标物的二级选择离子峰面积比与4种烟草特有N-亚硝胺成分/相应内标物的质量浓度比的线性关系，绘制相应的标准工作曲线，分别计算得到4种烟草特有N-亚硝胺成分标准工作曲线的回归方程。

进一步的，所述标准曲线中，以4种烟草特有N-亚硝胺成分与相应内标物的二级选择离子峰面积比为纵坐标(Y轴)，其4种烟草特有N-亚硝胺成分与相应内标物的质量浓度比为横坐标(X轴)。

ⅱ、将步骤2)中待测液，进行GC-QQQ-MS/MS检测，将获得的待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分/相应内标物的二级选择离子峰面积比，代入步骤ⅰ中相应的4种烟草特有N-亚硝胺成分标准工作曲线的回归方程，并根据加入相应内标物的已知质量浓度，计算得到待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分的质量浓度。

较佳的，所述步骤3)或4)中GC-QQQ-MS/MS检测条件为：

气相色谱条件为：色谱柱：DB-35MS UI石英毛细管色谱柱(30m×0.25μm×0.25μm)；进样口温度：290℃；进样量：1μl；载气：高纯氦气，载气纯度≥99.999％；载气流速：1.2ml/min，恒流模式；不分流进样；升温程序：初始温度50℃保持1min，以30℃/min的速率升至200℃，再以5℃/min的速率升至230℃，再以30℃/min的速率升至280℃，保持3min，总运行时间为15min。

质谱条件为：传输线温度：290℃；离子源温度:250℃；Q2碰撞气：氮气，1mL/min；灯丝电流：225μA；溶剂延迟：5min；电离方式：PCI正电压化学电离模式；电离能：210eV；扫描方式：多反应监测(MRM)。

如上所述，本发明的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，利用混合溶剂萃取和GC-QQQ-MS/MS检测，建立了一种烟草中4种烟草特有N-亚硝胺的定量测定方法。本方法与现有技术相比，通过优化选择的混合溶剂进行萃取，优化了样品前处理方法，并利用了GC-QQQ-MS/MS强大的色谱分离能力、良好的选择性和灵敏度，进行简便快速的测定。本方法的标准工作曲线的相关系数r＝0.9998～0.9999，方法检出限(LOD)为0.09-0.13ng/ml，定量检出限(LOQ)为0.22-0.42ng/ml，具有较高的灵敏度。方法的回收率为96.12～114.21％，平均相对标准偏差(RSD％)小于5％，具有较好的准确性和精密度，有效提高了烟草样品中4种烟草特有N-亚硝胺的检测效率。

附图说明

图1显示为本发明的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法的流程示意图

图2显示为本发明中采用二氯甲烷提取的总离子流色谱图

图3显示为本发明中采用甲醇提取的总离子流色谱图

图4显示为本发明中采用二氯甲烷和10％氢氧化钠提取的总离子流色谱图

附图标记

1 N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)

2 N-亚硝基新烟草碱(NAT)

3 N-亚硝基假木贼碱(NAB)

4 4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮(NNK)

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

实施例1

1试剂与仪器

1.1试剂

目标物：NNN、NAT、NAB、NNK(0.5mg/ml，AccuStandard公司)；内标：d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK(100ug/mL，AccuStandard公司)；甲醇、二氯甲烷(色谱纯，Merck公司)；氢氧化钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；无水硫酸钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)

1.2仪器

AG104电子天平(感量：0.0001g，瑞士Mettler Toledo公司)；7000B型气相色谱-三重四极杆串联质谱仪(美国Agilent科技有限公司)；SW12H型超声波仪(瑞士SONO公司)；LDZ-4型离心机(北京原田离心机厂)

2测定方法

2.1标准溶液的配制

分别移取1ml浓度为0.5mg/ml的NAB、NAT、NNN、NNK的标准品，置于100mL容量瓶中，加入甲醇定容，配成混合标准储备溶液。混合标准储备溶液中NAB、NAT、NNN、NNK的浓度均为5μg/ml。同时，分别移取一定体积的d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK内标物，加入甲醇定容，配成内标溶液，内标溶液中d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK的浓度均为400ng/ml。

分别准确移取5μl、25μl、50μl、100μl、150μl、250μl、350μl、500μl混合标准储备溶液，置于50mL容量瓶中，再分别准确加入2.5ml内标溶液，用甲醇定容，配制为一系列混合标准溶液。配制的系列混合标准溶液浓度分别为：0.5ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、25ng/ml、35ng/ml、50ng/ml，内标物浓度为20ng/ml。

2.2样品前处理

准确称取1g烟草粉末样品，加入含有内标溶液的混合溶剂，其中，准确加入20mL二氯甲烷、1mL5-15％NaOH、1mL内标溶液，进行超声萃取，超声萃取30±3min后，加入10±1g无水硫酸钠除水，将萃取液置于离心管中，在离心转速3000±300rpm条件下离心3±1min，取上清液1mL收集在自动进样色谱小瓶中，待测。具体过程如图1所示。

2.3样品含量的测定

分别将2.1配制的混合标准溶液和2.2中待测液进行GC-QQQ-MS/MS检测，比较保留时间进行定性，确定待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分；同时采用内标标准曲线法进行定量，获得待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分的浓度含量。

具体来说，内标标准曲线法是先将上述2.1中一系列不同浓度的混合标准溶液分别进行GC-QQQ-MS/MS检测，别获得4种烟草特有N-亚硝胺成分/相应内标物的二级选择离子峰面积比与4种烟草特有N-亚硝胺成分/相应内标物的质量浓度比的线性关系，绘制相应的标准工作曲线，以4种烟草特有N-亚硝胺成分与相应内标物的二级选择离子峰面积比为纵坐标(Y轴)，其4种烟草特有N-亚硝胺成分与相应内标物的质量浓度比为横坐标(X轴)，分别计算得到4种烟草特有N-亚硝胺成分标准工作曲线的回归方程。再将上述2.2中待测液进行GC-QQQ-MS/MS检测，将获得的待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分/相应内标物的二级选择离子峰面积比，代入相应的4种烟草特有N-亚硝胺成分标准工作曲线的回归方程，并根据加入相应内标物的已知质量浓度，计算得到待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分的质量浓度。

其中，GC-QQQ-MS/MS检测条件为：

气相色谱条件为：色谱柱：DB-35MS UI石英毛细管色谱柱(30m×0.25μm×0.25μm)；进样口温度：290℃；进样量：1μl；载气：高纯氦气，载气纯度≥99.999％；载气流速：1.2ml/min，恒流模式；不分流进样；升温程序：初始温度50℃保持1min，以30℃/min的速率升至200℃，再以5℃/min的速率升至230℃，再以30℃/min的速率升至280℃，保持3min，总运行时间为15min。

质谱条件为：传输线温度：290℃；离子源温度:250℃；Q2碰撞气：氮气，1mL/min；灯丝电流：225μA；溶剂延迟：5min；电离方式：PCI正电压化学电离模式；电离能：210eV；扫描方式：多反应监测(MRM)。另外，目标物及内标物的保留时间和质谱参数见表1。

表1 目标物及内标物的保留时间和MRM参数

3结果与讨论

3.1萃取溶剂的选择

选取同一烟草粉末样品，分别选用二氯甲烷、甲醇、二氯甲烷和10％氢氧化钠三种溶剂作为萃取溶剂，按照上述2.2的前处理条件进行处理，最后用GC-QQQ-MS/MS进行检测，具体检测结果见图2-4。由图2-4对比可知，直接用二氯甲烷萃取，4种烟草特有N-亚硝胺成分的峰形较宽；直接用甲醇萃取，4种烟草特有N-亚硝胺成分的色谱峰会发生拖尾；二氯甲烷和10％氢氧化钠混合溶液萃取的4种烟草特有N-亚硝胺成分的峰形最好，故最终选用二氯甲烷和10％氢氧化钠混合溶液作为萃取液。

3.2不同萃取方法的比较

目前烟草行业标准中对烟草中TSNAs的提取所选用的溶剂为0.1M的酸酸铵溶液，选取一种烟草粉末样品，用20ml浓度为0.1M的酸酸铵溶液超声萃取30min，吸取1ml萃取液加入到20ml二氯甲烷中，震荡2min，再加入10g无水硫酸钠除水，接着将除水完毕后的溶液离心，取上清液，放进GC-QQQ-MS/MS检测。同时，选取同一烟草粉末样品，按照上述2.2的前处理条件，选用二氯甲烷和10％氢氧化钠作为萃取溶剂，超声萃取时间为30min，离心后采用GC-QQQ-MS/MS检测，检测结果见表2。

由表2中数据可知，用0.1mM的醋酸铵溶液萃取时数据重复性相对较差，主要是因为在使用GC-MS/MS作检测时，需要先用有机溶剂将醋酸铵溶液萃取出的TSNAs反萃出来，再进样检测，影响了实验结果的重复性，而二氯甲烷和10％氢氧化钠的混合溶剂萃取结果比较稳定，重复性好。

表2 不同萃取方法的的数据重复性比较

3.3氢氧化钠体积比的选择

按照上述2.2的前处理条件，分别选择不同质量百分比浓度的氢氧化钠，作为混合萃取溶剂的一部分，与二氯甲烷混合，进行超声萃取后离心，再采用GC-QQQ-MS/MS检测。经检测后发现，当氢氧化钠的质量百分比浓度大于15％时，溶剂中的PH值过高，当氢氧化钠的质量百分比浓度小于5％时，溶剂中的PH值过低，都会影响萃取溶液的提取效果。当氢氧化钠的质量百分比浓度在5-15％时，检测结果差异不大。其中特别是当氢氧化钠浓度为10％时，其与二氯甲烷的混合溶剂作为萃取溶剂时，萃取效果最佳。

3.4萃取时间的选择

按照上述2.2的前处理条件，分别对同一样品采取不同超声萃取时间进行比较，选用二氯甲烷和10％氢氧化钠作为萃取溶剂，其中超声萃取时间选取15min、30min、45min、60min、80min进行比较。30min以上，不同超声萃取时间对提取测定结果无明显差异，而超声萃取时间为15min时，时间不够，未能充分萃取。因此选择优选的超声萃取时间为30min。

3.5标准工作曲线、检出限和定量限

如上述2.1所示，分别准确移取5μl、25μl、50μl、100μl、150μl、250μl、350μl、500μl混合标准储备溶液，置于50mL容量瓶中，再分别准确加入2.5ml内标溶液，用甲醇定容，配制为一系列混合标准溶液。配制的系列混合标准溶液浓度分别为：0.5ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、25ng/ml、35ng/ml、50ng/ml，内标物浓度为20ng/ml。

将上述配制好的一系列不同浓度的混合标准溶液分别进行GC-QQQ-MS/MS检测，以4种烟草特有N-亚硝胺成分与相应内标物的二级选择离子峰面积比为纵坐标(Y轴)，其4种烟草特有N-亚硝胺成分与相应内标物的质量浓度比为横坐标(X轴)，进行回归分析，得到回归方程及其相关系数，如表3所示。

由表3可知，回归方程的线性关系良好，相关系数r＝0.9998-0.9999。对混合标准溶液中的目标物响应信号，采用最低浓度标样重复进样10次，进行GC-QQQ-MS/MS分析，以3倍信噪比为方法的检出限(LOD)，10倍信噪比为定量限(LOQ)，换算为样品含量后得出目标物的方法检出限为0.09-0.13ng/ml，定量限为0.22-0.42ng/ml，具有较高的灵敏度。

表3 工作曲线和检出限

Y：离子峰面积比；X：浓度比

3.5回收率和精密度

选取烟草粉末样品，称取1g样品，加入已知浓度的混合标准溶液，然后进行上述2.2的前处理，并进行GC-QQQ-MS/MS分析，按照加标量(低浓度50ng、中浓度200ng、高浓度500ng)和测定值计算其回收率。同时对同一待测样品溶液平行测定5次(n＝5)，得到4种烟草特有N-亚硝胺成分的精密度测定数据，结果见上述表4。由表4可以看出，目标物的平均回收率在96.12～114.21％之间，相对标准偏差(RSD)小于5％，说明本发明方法的回收率高、准确性和重复性好，可以满足定量需要。

表4 4种烟草特有N-亚硝胺成分的回收率和精密度

3.6实际样品的测定

采用本方法测定常规烟叶原料烘干后研磨得到的实际烟草样品中4种烟草特有N-亚硝胺的含量进行测定，具体见表5。由表5可知，针对不同的烟草样品，如样品1、2、3，该方法能有效测定其烟草样品中4种烟草特有N-亚硝胺的含量，方法操作简便、适用性好，结果准确、可靠。

表5 实际烟草样品中4种烟草特有N-亚硝胺的含量

序号	成分名称	样品1的含量(ng/g)	样品2的含量(ng/g)	样品3的含量(ng/g)
					1	NAB	25.88	28.732	20.35
2	NAT	498.57	561.19	274.68
					3	NNN	250.69	280.08	99.22
4	NNK	75.86	85.02	74.09

综上所述，本发明提供的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，通过优化选择的混合溶剂进行萃取，优化了样品前处理方法，并利用了GC-QQQ-MS/MS强大的色谱分离能力、良好的选择性和灵敏度，进行简便快速的测定，具有较高的灵敏度、准确性和精密度，有效提高了烟草中4种烟草特有N-亚硝胺的检测效率。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，通过混合溶剂进行萃取，再采用气相色谱三重四极杆串联质谱法测定烟草中烟草特有N-亚硝胺的含量，具体包括以下步骤：

1)标准溶液的配制：配制内标溶液和混合标准溶液；

2)样品前处理：称取烟草粉末样品，加入含有步骤1)中所述内标溶液的混合溶剂，超声萃取后离心，取上清液，待测；

3)样品定性检测：分别将步骤1)配制的混合标准溶液和步骤2)中待测液进行GC-QQQ-MS/MS检测，比较保留时间进行定性，确定待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分；

4)样品定量检测：分别将步骤1)配制的混合标准溶液和步骤2)中待测液进行GC-QQQ-MS/MS检测，采用内标标准曲线法进行定量，获得待测液中4种烟草特有N-亚硝胺成分的浓度含量。

2.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，所述烟草特有N-亚硝胺包括有N-亚硝基去甲基烟碱、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮、N-亚硝基假木贼碱和N-亚硝基新烟草碱。

3.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，所述步骤1)为：

A、分别称取NAB、NAT、NNN、NNK的标准品，加入甲醇定容，配成混合标准储备溶液；

B、分别称取d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK，加入甲醇定容，配成内标溶液；

C、分别移取不同体积的步骤A中混合标准储备溶液，再分别加入一定体积的步骤B中内标溶液，用甲醇定容配制为一系列不同浓度的混合标准溶液。

4.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述混合溶剂为有机溶剂和氢氧化钠的混合溶剂；所述有机溶剂选自二氯甲烷和甲醇中的任意一种。

5.根据权利要求4所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述有机溶剂为二氯甲烷。

6.根据权利要求4所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述氢氧化钠的质量百分比浓度为5-15％。

7.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述超声萃取时间为27-33分钟。

8.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述烟草粉末样品在超声萃取后加入无水硫酸钠除水。

9.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述离心条件为：离心转速：2700-3300rpm；离心时间为2-4分钟。

10.根据权利要求1所述的一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，其特征在于，所述步骤3)或4)中，GC-QQQ-MS/MS检测条件为：

气相色谱条件为：色谱柱：DB-35MS UI石英毛细管色谱柱30m×0.25μm×0.25μm；进样口温度：290℃；进样量：1μl；载气：高纯氦气，载气纯度≥99.999％；载气流速：1.2ml/min，恒流模式；不分流进样；升温程序：初始温度50℃保持1min，以30℃/min的速率升至200℃，再以5℃/min的速率升至230℃，再以30℃/min的速率升至280℃，保持3min，总运行时间为15min；

质谱条件为：传输线温度：290℃；离子源温度:250℃；Q2碰撞气：氮气，1mL/min；灯丝电流：225μA；溶剂延迟：5min；电离方式：PCI正电压化学电离模式；电离能：210eV；扫描方式：多反应监测。