CN104324135A - 一种治疗缺血性中风的中药组合物、其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种治疗缺血性中风的中药组合物及其制备方法和应用。所述治疗缺血性中风的中药组合物，由如下重量份的组分制得：熟地黄15-30份，山茱萸5-15份，黄芪25-40份，红景天10-30份，赤芍5-20份，当归10-20份，地龙5-15份。本发明所述中药组合物在临床试验中可以明显促进脑梗死患者神经功能缺损的恢复，改善患者的生活活动能力；在动物实验中可以促进缺血后神经细胞增殖、增加脑内神经营养因子表达、明显减少中风后脑内炎症损伤，并显著改善实验动物卒中后神经功能。临床及动物实验中，均未出现明显药物不良反应，证明本中药组合物安全、有效。

Description

一种治疗缺血性中风的中药组合物、其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种治疗缺血性中风的中药组合物、其制备方法和应用，属于中药制剂技术领域。
背景技术
缺血性中风，是各种原因所致的局部脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性病变坏死，进而产生临床上对应的神经功能缺损。中枢神经元无法再生，因此，对脑损伤研究的重点是神经元死亡机制以及抑制神经细胞死亡的措施，但是在众多有脑保护作用的措施中，除NINDS试验(N Engl J Med,1995,333:1581-7.)显示重组组织型纤溶酶原激活剂(rtPA)和尿激酶(UK)对早期缺血性中风有疗效外，其它药物或治疗措施尚未被广泛认可。但由于溶栓存在治疗时间窗的限制，且有引起颅内出血的风险，临床上大部分的脑缺血患者的治疗仍为对症保守治疗，效果难以令人满意。
《肾脑复原汤治疗脑梗死恢复期肾虚血瘀证30例疗效观察》，张忠伟、胡国恒，湖南中医杂志，第30卷第4期，P11)中公开了一种肾脑复原汤，其处方为：熟地黄15g，山茱萸10g，山药15g，黄芪30g，红景天20g，牡丹皮10g，当归尾10g，赤芍10g，川芎10g，地龙10g。然而，该处方存在药物种类多、治疗成本高等缺陷，基于此，本发明申请人根据中医药君臣佐使配伍原理及临床经验，寻找一种组分更为精简、治疗成本更低，能显著改善缺血性中风后神经功能恢复，并未发生药物毒副反应的中药组合物。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种中药组合物、其制备方法和应用，将所述中药组合物用于缺血性中风的治疗，效果显著、安全。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种治疗缺血性中风的中药组合物，由如下重量份的组分制得：熟地黄15-30份，山茱萸5-15份，黄芪25-40份，红景天10-30份，赤芍5-20份，当归10-20份，地龙5-15份。
本发明所述中药组合物利用六种中药，按特定比例配伍，使各组分产生协同作用，从而发挥最大功效，能够明显促进脑梗死患者神经功能缺损的恢复，改善患者的生活活动能力；且无明显药物不良反应。
优选地，所述中药组合物由如下重量份的组分制得：熟地黄20-30份，山茱萸10-15份，黄芪30-40份，红景天15-25份，赤芍10-15份，当归15-20份，地龙10-15份。
进一步优选，所述中药组合物由如下重量份的组分制得：熟地黄25份，山茱萸15份，黄芪35份，红景天20份，赤芍15份，当归15份，地龙12份。
本发明还提供一种中药组合物的制备方法，先将各组分按比例混合浸泡，经两次煎煮，合并煎煮液，过滤，浓缩而得。
在本发明所述的制备方法中，所述浸泡水温为25-35min。
在本发明所述的制备方法中，所述一次煎煮具体为：加4-6倍量的水，武火煎至沸腾5min后改为文火，至煎汁为加水量的1/3-1/2。
在本发明所述的制备方法中，所述二次煎煮具体为：加3-4倍量的水，武火煎至沸腾5分钟后改为文火，至煎汁为加水量的1/2-2/3。
作为本发明优选的实施方式，所述中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)将各组分混合于冷水中浸泡25-35min；
2)一煎：
加4-6倍量的水，武火煎至沸腾5min后改为文火，至煎汁为加水量的1/3-1/2；
3)二煎：
加3-4倍量的水，武火煎至沸腾5分钟后改为文火，至煎汁为加水量的1/2-2/3；
4)取2次煎汁混合，过滤，浓缩至含生药2-4g/mL。
本发明所述中药组合物中，君以熟地黄：补血养阴、填精益髓，脑髓充满则神明自清；臣以黄芪、山茱萸：重用黄芪能大补脾胃之元气，使气旺血行，合熟地黄，益精生髓，血行瘀去；山茱萸，有补益肝肾、收敛固涩之效，合熟地黄更增补养肝肾之功效，兼能涩精，取"肝肾同源"之意。佐以大队活血通络之品：赤芍，清热凉血、活血祛瘀，兼制山萸肉之温涩；红景天，健脾益气、活血化瘀；当归，补血通络，养血活血，有化瘀而不伤血之妙；使以地龙，虫类之体，擅入经络，引药入经，通经祛瘀，舒筋活血。全方以大剂量补气填精益肾药配伍活血通络行气药，精旺则气生，气旺则血行，瘀去而又不伤正，共奏益肾补气活血通络之功。如此，治疗缺血性中风，在活血化瘀的同时，补肾生髓，从肾治脑、肾脑同治，则可标本兼顾，使肾精髓旺，血活瘀祛，精盛、髓满、脑充、瘀散、络畅、窍通。
本发明还提供上述中药组合物在制备缺血性中风药物中的应用。本发明所述中药组合物可制备成药剂学上可接受的剂型，如为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明所述中药组合物在临床试验中可以明显促进脑梗死患者神经功能缺损的恢复，改善患者的生活活动能力；在动物实验中可以促进缺血后神经细胞增殖、增加脑内神经营养因子表达、明显减少中风后脑内炎症损伤，并显著改善实验动物卒中后神经功能。临床及动物实验中，均未出现明显药物不良反应，证明本中药组合物安全、有效。
附图说明
图1为实验例2中BDNF在7天各组海马神经元细胞中的表达结果(X400倍)；图中：A假手术组，B为模型组，C为中药组合物组。
图2为实验例2中bFGF在各组海马神经元细胞中表达结果(X400倍)；图中：A假手术组，B为模型组，C为中药组合物组。
图3为实验例3中各组脑组织中Nestin表达(X400倍)；图中：A假手术组，B为模型组，C为中药组合物组。
图4为实验例3中各组脑组织中BrdU表达(X400倍)；图中：A假手术组，B为模型组，C为中药组合物组。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1  中药组合物
一种中药组合物，由如下重量份的组分制备：熟地黄25份，山茱萸15份，黄芪35份，红景天20份，赤芍15份，当归15份，地龙12份。
实施例2  中药组合物
一种中药组合物，由如下重量份的组分制备：熟地黄15份，山茱萸5份，黄芪25份，红景天10份，赤芍5份，当归10份，地龙5份。
实施例3  中药组合物
一种中药组合物，由如下重量份的组分制备：熟地黄30份，山茱萸15份，黄芪40份，红景天30份，赤芍20份，当归20份，地龙15份。
实施例4  中药组合物的制备方法
实施例1所述中药组合物的制备方法，具体如下：
1)将实施例1各组分混合，于冷水中浸泡30min；
2)一煎：
加5倍量的水，武火煎至沸腾5min后改为文火，至煎汁为加水量的1/3；
3)二煎：
加4倍量的水，武火煎至沸腾5分钟后改为文火，至煎汁为加水量的1/2；
4)取2次煎汁混合，过滤，浓缩至含生药3g/mL。
采用实施例4所述方法可以得到实施例2、实施例3所述的中药组合物。
药效试验
实验例1临床实验
(1)一般资料：选取2013年9月至2014年6月湖南中医药大学第一附属医院神经内科确诊为缺血性中风肾虚血瘀证患者60例，随机分为2组。
治疗组口服实施例1所得中药组合物，对照组选用《肾脑复原汤治疗脑梗死恢复期肾虚血瘀证30例疗效观察》，张忠伟、胡国恒，湖南中医杂志，第30卷第4期，P11)中所述的肾脑复原汤处方。两组性别、年龄、病程、神经功能缺损评分和生活能力评分比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。
(2)治疗方法
①一般治疗：两组均给予脑梗死二级预防和康复训练基础治疗。
②治疗组：在一般治疗基础上口服实施例1所得中药组合物，分早晚2次口服。
③对照组：在一般治疗基础上口服肾脑复原汤，分早晚2次口服。
(3)治疗结果
①观察指标  观察两组患者治疗前后的日常生活活动能力Barthel指数评分，和NIHSS神经功能缺损评分。详细评分指标见表1、表2。
表1  Barthel指数评定标准
Barthel计分法将患者(日常生活活动)ADL能力分为良、中、差3级：大于60分为良；60-41分为中，有功能障碍，稍依赖；小于40分为差，依赖较明显或完全依赖。
表2  美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)
②疗效比较  本试验研究过程中均未见因试验用药引起的生命体征或者实验室检测结果异常，两组患者均未出现用药所致不良反应。治疗前后对比，两组患者的Barthel指数评分均有升高，NIHSS评分降低；两组组间比较，两项积分差异有统计学意义。(见表3)
表3  两组治疗前后Barthel指数评分和NIHSS评分对比(x±s，分)
注：vs.治疗前，★P<0.05；vs.对照组，▲P<0.05.
以上试验证明：实施例1所述中药组合物相比肾脑复原汤更能促进脑梗死患者神经功能的康复，改善其生活自理能力。按照上述方法对实施例2、实施例3所述中药组合物进行效果监测，结果同实施例1基本一致。
实验例2动物实验：中药组合物对MCAO大鼠模型bFGF及BDNF表达的影响
(1)实验材料与方法
①实验材料
实验动物：SPF级雄性、健康SD大鼠，体重量为280±20g；
药物：实施例2所制得的中药组合物。
②动物分组  采用随机数字表法，将实验用大鼠先分为假手术组、模型组、实施例2所制得的中药组合物组，每组8只大鼠。假手术组行MCAO手术，但不插线，不予手术阻断血流，每日灌胃蒸馏水；模型组行MCAO术，每日灌胃蒸馏水；中药组合物组行MCAO术，每日灌胃中药组合物(60kg体重的成人每日剂量为18g，按照大鼠与人体药物剂量换算法换算成大鼠的剂量，并溶于等体积蒸馏水)。
③动物造模  采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注(MCAO)大鼠模型，并于缺血后2h拔出栓线形成局灶性缺血后再灌注。
④取材与染色  手术后7天，大鼠采用断头剥离取脑，常规脱水、浸蜡、包埋脑组织并制成厚约5微米的组织冠状切片，免疫组织化学进行BDNF(脑源性神经营养因子)及bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)染色。
(2)实验结果
①实施例2所制得的中药组合物对BDNF表达的影响(表4，图1)
将染色后脑组织玻片在光学显微镜下观察，胞浆内出现棕黄色颗粒者为BDNF阳性表达细胞，采用motic医学图像分析软件检测平均光密度值以评价BDNF阳性表达的高低。
表4  各组大鼠海马神经元细胞内BDNF表达
注：vs.假手术组，★P<0.05；vs.模型组，▲P<0.05.
②实施例2所制得的中药组合物对bFGF表达的影响(图2，表5)
将染色后脑组织玻片在光学显微镜下观察，胞核周围出现棕黄色颗粒者为bFGF阳性表达细胞，采用motic医学图像分析软件检测平均光密度值以评价BDNF阳性表达的高低。
表5  各组大鼠不同时间点海马神经元细胞内bFGF的平均光密度值
注：vs.假手术组，★P<0.05；vs.模型组，▲P<0.05.
以上实验证明，实施例2所制得的中药组合物可以通过提高脑缺血大鼠脑组织神经营养因子bFGF、BDNF的表达，来发挥神经保护和治疗作用。按照上述方法对实施例1、实施例3所述中药组合物进行效果监测，结果同实施例2基本一致。
实验例3动物实验：中药组合物对缺血性脑损伤大鼠Brdu、Nestin的影响
(1)实验材料与方法
①实验材料
实验动物：SPF级雄性、健康SD大鼠,体重量为280±20g；
药物：实施例3所制得的中药组合物。
②动物分组  采用随机数字表法，将实验用大鼠先分为假手术组、模型组、中药组合物组每组8只大鼠。假手术组行MCAO手术，但不插线，不予手术阻断血流，每日灌胃蒸馏水；模型组行MCAO术，每日灌胃蒸馏水；中药组合物组行MCAO术，每日灌胃中药组合物(60kg体重的成人每日剂量为18g，按照大鼠与人体药物剂量换算法换算成大鼠的剂量，并溶于等体积蒸馏水)。
③动物造模  采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注(MCAO)大鼠模型，并于缺血后2h拔出栓线形成局灶性缺血后再灌注。
④取材与染色  手术后7天，大鼠采用断头剥离取脑，常规脱水、浸蜡、包埋脑组织并制成厚约5微米的组织冠状切片，免疫组织化学进行Brdu、Nestin(新生神经元特异性表面抗原)染色。
(2)实验结果
①实施例3所制得的中药组合物对MCAO大鼠脑组织Nestin表达的影响(表6，图3)
将染色后脑组织玻片在光学显微镜下观察，在高倍镜下(×400倍)可见CA2区Nestin阳性表达细胞胞浆呈黄褐色，细胞呈纤维状，胞体较小，可见明显的锥状突起。采用motic医学图像分析软件检测平均光密度值以评价Nestin阳性表达的高低。
表6  各组大鼠脑组织Nestin表达
注：vs.假手术组，★P<0.01；vs.模型组，▲P<0.01.
②实施例3所制得的中药组合物对MCAO大鼠脑组织BrdU表达的影响(表7，图4)
将染色后脑组织玻片在光学显微镜下观察，高倍镜下(×400倍)可见CA1区BrdU阳性表达细胞的细胞核呈棕黄色的圆形小颗粒。采用motic医学图像分析软件检测平均光密度值以评价Nestin阳性表达的高低。
表7  各组大鼠脑组织BrdU表达
注：vs.假手术组，★P<0.01；vs.模型组，▲P<0.01.
以上实验证明，中药组合物通过促进缺血后神经细胞增殖，对缺血性脑损伤大鼠产生神经保护作用。按照上述方法对实施例1、实施例2所述中药组合物进行效果监测，结果同实施例3基本一致。
实验例4动物实验：中药组合物对缺血性脑损伤大鼠神经功能及炎症损伤的影响
(1)实验材料与方法
①实验材料
实验动物：SPF级雄性、健康SD大鼠,体重量为280±20g；
药物：实施例1所制得的中药组合物。
②动物分组  采用随机数字表法，将实验用大鼠先分为分为模型组、蒸馏水组和中药组合物组，每组8只大鼠。假手术组行MCAO手术，但不插线，不予手术阻断血流，每日灌胃蒸馏水；蒸馏水组行MCAO术，每日灌胃蒸馏水；中药组合物组行MCAO术，每日灌胃中药组合物(60kg体重的成人每日剂量为18g，按照大鼠与人体药物剂量换算法换算成大鼠的剂量，并溶于等体积蒸馏水)。造模成功后2h开始灌胃给药，此后于每天上午8点、晚上8点各灌胃一次，末次灌胃后1h处死实验动物(第一次灌胃时间根据造模时间而定)。
③采用改良大鼠神经功能缺损严重程度评分量表(m-NSS)，于各相应时间点独立观察记录，各指标评分三次取均值纳入结果，以检测大鼠各项神经功能变化；Western-Blot法检测炎症因子mRNA表达，见表8、9。
表8  实验动物模型神经功能评分分值比较
Note：vs.control group.★P<0.01；vs.distilled water group,△P<0.01，▲P<0.05.
表9  造模后3天各组动物炎症相关因子mRNA表达
Note：vs.control group.★P<0.05,☆P<0.05；vs.distilled water group,△P<0.01，▲P<0.05。
以上动物实验证明，中药组合物可以明显改善实验动物卒中后神经功能，并明显减少中风后脑内炎症损伤。按照上述方法对实施例2、实施例3所述中药组合物进行效果监测，结果同实施例1基本一致。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种治疗缺血性中风的中药组合物，其特征在于，由如下重量份的组分制得：熟地黄15-30份，山茱萸5-15份，黄芪25-40份，红景天10-30份，赤芍5-20份，当归10-20份，地龙5-15份。
2.根据权利要求1所述的治疗缺血性中风的中药组合物，其特征在于，由如下重量份的组分制得：熟地黄20-30份，山茱萸10-15份，黄芪30-40份，红景天15-25份，赤芍10-15份，当归15-20份，地龙10-15份。
3.根据权利要求1所述的治疗缺血性中风的中药组合物，其特征在于，由如下重量份的组分制得：熟地黄25份，山茱萸15份，黄芪35份，红景天20份，赤芍15份，当归15份，地龙12份。
4.一种权利要求1-3任一所述治疗缺血性中风的中药组合物的制备方法，其特征在于，先将各组分按比例混合浸泡，经两次煎煮，合并煎煮液，过滤，浓缩而得。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述浸泡水温为25-35min。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述一次煎煮具体为：加4-6倍量的水，武火煎至沸腾5min后改为文火，至煎汁为加水量的1/3-1/2。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述二次煎煮具体为：加3-4倍量的水，武火煎至沸腾5分钟后改为文火，至煎汁为加水量的1/2-2/3。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将各组分混合于冷水中浸泡25-35min；
2)一煎：加4-6倍量的水，武火煎至沸腾5min后改为文火，至煎汁为加水量的1/3-1/2；
3)二煎：加3-4倍量的水，武火煎至沸腾5分钟后改为文火，至煎汁为加水量的1/2-2/3；
4)取2次煎汁混合，过滤，浓缩至含生药2-4g/mL。
9.权利要求1-3任一所述中药组合物在制备缺血性中风药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述中药组合物可制备成药剂学上可接受的剂型，优选为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
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