CN104324025A - Hdac抑制剂在治疗骨髓瘤中的用途 - Google Patents

Hdac抑制剂在治疗骨髓瘤中的用途 Download PDF

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CN104324025A CN201410610419.9A CN201410610419A CN104324025A CN 104324025 A CN104324025 A CN 104324025A CN 201410610419 A CN201410610419 A CN 201410610419A CN 104324025 A CN104324025 A CN 104324025A
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Abstract

本发明涉及HDAC抑制剂、尤其是式(I)的HDAC抑制剂(其中基团和符号具有如在说明书中定义的含义)在制备用于治疗骨髓瘤、特别是多发性骨髓瘤、尤其是对常规化学治疗有抗性的骨髓瘤的药物中的用途；同时、分别或依次使用的组合，该组合包含HDAC抑制剂和引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物、优选硼替佐米；治疗骨髓瘤的方法；以及包含所述组合的药物组合物。

Description

HDAC抑制剂在治疗骨髓瘤中的用途
本申请为2006年8月1日提交的、发明名称为“HDAC抑制剂在治疗骨髓瘤中的用途”的PCT申请PCT/US2006/029801的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2008年1月31日，申请号为200680028124.4。
发明领域
本发明涉及HDAC抑制剂在制备用于治疗骨髓瘤的药物中的用途；治疗患有骨髓瘤的恒温动物、尤其是人的方法，该方法包括给所述的动物施用治疗有效量的HDAC抑制剂、尤其是如本文定义的式(I)化合物；用于同时、分别或依次使用的组合，该组合包含HDAC抑制剂和引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物、优选硼替佐米(bortezomib)以及任选的至少一种可药用载体；包含所述组合的药物组合物和市售包装。
如本文所用的术语“骨髓瘤”涉及由通常在骨髓中所发现类型的细胞构成的肿瘤。如本文所用的术语“多发性骨髓瘤”指浆细胞的弥散性恶性肿瘤，其以多发性骨髓肿瘤病灶和分泌M成分(一种单克隆免疫球蛋白片段)为特征，伴有导致骨痛的散在性溶骨性病变、病理性骨折、高血钙症和正色素性正常红细胞性贫血(normochromic normocytic anaemia)。通过使用常规的和高剂量的化学疗法不能治愈多发性骨髓瘤。
如本文定义的式(I)化合物是组蛋白脱乙酰酶抑制剂(“HDAC抑制剂”)。可逆的组蛋白乙酰化是基因表达的主要调节剂，其通过改变转录因子对DNA的接近而起作用。在正常细胞中，组蛋白脱乙酰酶(HDA)和组蛋白乙酰转移酶一起控制组蛋白的乙酰化水平，以维持平衡。HDA的抑制可引起高乙酰化组蛋白的积累，从而产生多种细胞响应。
出人意料的是，现在发现HDAC抑制剂、尤其是如本文定义的式(I)化合物可直接抑制表达Flt-1的骨髓瘤细胞系和患者骨髓瘤细胞的增殖。此外，这类化合物还可抑制骨髓瘤细胞迁移，这可通过跨孔(transwell)细胞迁移试验来测定。此外，这类化合物既可以抑制与骨髓基质细胞(BMSC)粘附的骨髓瘤细胞的增殖，又可以抑制由骨髓瘤细胞与BMSC结合而引起的IL-6的分泌。
因此，本发明涉及HDAC抑制剂在制备用于治疗骨髓瘤的药物中的用途。
HDAC抑制剂化合物
用于本发明的组合的特别感兴趣的HDAC抑制剂化合物是由式(I)描述的异羟肟酸化合物或其可药用盐：
其中
R1是H、卤代基或直链C1-C6烷基、尤其是甲基、乙基或正丙基，所述的甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或者被一个或多个以下对烷基取代基所述的取代基取代；
R2选自H；C1-C10烷基，优选C1-C6烷基,例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH；C4-C9环烷基；C4-C9杂环烷基；C4-C9杂环烷基烷基；环烷基烷基，例如环丙基甲基；芳基；杂芳基；芳基烷基，例如苄基；杂芳基烷基，例如吡啶基甲基；-(CH2)nC(O)R6；-(CH2)nOC(O)R6；氨基酰基；HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；
R3和R4相同或不同并且独立地是H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者
R3和R4与它们结合的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者
R2与其结合的氮一起以及R3与其结合的碳一起可以形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多杂芳基、非芳香族多杂环或混合的芳基和非芳基多杂环；
R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、芳香族多环、非芳香族多环、混合的芳基和非芳基多环、多杂芳基、非芳香族多杂环以及混合的芳基和非芳基多杂环；
n、n1、n2和n3相同或不同并且独立地选自0-6，当n1是1-6时，碳原子各自可以任选和独立地被R3和/或R4取代；
X和Y相同或不同并且独立地选自H、卤代基、C1-C4烷基如CH3和CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；
R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基如环丙基甲基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基和2-苯基乙烯基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、OR12和NR13R14；
R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；
R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基和杂芳基烷基如吡啶基甲基；
R9选自C1-C4烷基如CH3和CF3、C(O)-烷基如C(O)CH3和C(O)CF3；
R10和R11相同或不同并且独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；
R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基如苄基和杂芳基烷基如吡啶基甲基；
R13和R14相同或不同并且独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、氨基酰基；或者
R13和R14与它们结合的氮一起是C4-C9杂环烷基、杂芳基、多杂芳基、非芳香族多杂环或混合的芳基和非芳基多杂环；
R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳香族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多杂芳基和NR13R14；
m是选自0-6的整数；并且
Z选自O、NR13、S和S(O)。
“未取代的”适当时表示没有取代基或者取代基只有氢。
卤代基取代基选自氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。
烷基取代基包括直链和支链C1-C6烷基，另有说明除外。适宜的直链和支链C1-C6烷基取代基的实例包括甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。除非另有说明，烷基取代基既包括未取代的烷基，又包括被一个或多个适宜的取代基取代的烷基，所述的取代基包括不饱和(即有一条或多条C-C双键或三键)、酰基、环烷基、卤代基、氧基烷基、烷基氨基、氨基烷基、酰基氨基和OR15如烷氧基。烷基的优选的取代基包括卤代基、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
环烷基取代基包括C3-C9环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，另有说明除外。除非另有说明，环烷基取代基既包括未取代的环烷基，又包括被一个或多个适宜的取代基取代的环烷基，所述的取代基包括C1-C6烷基、卤代基、羟基、氨基烷基、氧基烷基、烷基氨基和OR15如烷氧基。环烷基的优选的取代基包括卤代基、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
烷基和环烷基取代基的以上讨论还应用于其它取代基的烷基部分，所述的其它取代基例如但不限于烷氧基、烷基胺、烷基酮、芳基烷基、杂芳基烷基、烷基磺酰基和烷基酯取代基等。
杂环烷基取代基包括含有1-3个选自氮、硫、氧的杂原子的3至9元脂肪族环，例如4至7元脂肪族环。适宜的杂环烷基取代基的实例包括吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吗啉基或吗啉代基、1,3-二氮杂环庚烷、1,4-二氮杂环庚烷、1,4-氧杂氮杂环庚烷和1,4-氧杂硫杂环庚烷。除非另有说明，环是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的取代基包括C1-C6烷基、C4-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、卤代基、氨基、烷基氨基和OR15如烷氧基。除非另有说明，氮杂原子是未取代的或者被H、C1-C4烷基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、酰基、氨基酰基、烷基磺酰基和芳基磺酰基取代。
环烷基烷基取代基包括式-(CH2)n5-环烷基的化合物，其中n5是1-6的数。适宜的烷基环烷基取代基包括环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基等。这类取代基是未取代的或者在烷基部分或环烷基部分中被适宜的取代基取代，所述的取代基包括以上对烷基和环烷基所列的那些。
芳基取代基包括未取代的苯基和被一个或多个适宜的取代基取代的苯基，所述的取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基如环丙基甲基、O(CO)烷基、氧基烷基、卤代基、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基和OR15如烷氧基。优选的取代基包括C1-C6烷基、环烷基如环丙基甲基、烷氧基、氧基烷基、卤代基、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基和氨基磺酰基。适宜的芳基的实例包括C1-C4烷基苯基、C1-C4烷氧基苯基、三氟甲基苯基、甲氧基苯基、羟基乙基苯基、二甲基氨基苯基、氨基丙基苯基、乙氧甲酰基苯基、甲磺酰基苯基和甲苯基磺酰基苯基。
芳香族多环包括萘基和被一个或多个适宜的取代基取代的萘基，所述的取代基包括C1-C6烷基、烷基环烷基如环丙基甲基、氧基烷基、卤代基、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基和OR15如烷氧基。
杂芳基取代基包括具有含有一个或多个杂原子、例如1-4个杂原子的5至7元芳香族环的化合物，所述的杂原子选自N、O和S。典型的杂芳基取代基包括呋喃基、噻吩基、吡咯、吡唑、三唑、噻唑、唑、吡啶、嘧啶、异唑基、吡嗪等。除非另有说明，杂芳基取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的取代基包括烷基、以上确定的烷基取代基和另一个杂芳基取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代，尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
芳基烷基取代基包括式-(CH2)n5-芳基、-(CH2)n5-1-(CH-芳基)-(CH2)n5-芳基或-(CH2)n5-1CH(芳基)(芳基)的基团，其中芳基和n5如上所定义。这类芳基烷基取代基包括苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、甲苯基-3-丙基、2-苯基丙基、二苯基甲基、2-二苯基乙基、5,5-二甲基-3-苯基戊基等。芳基烷基取代基是未取代的或者如上对烷基和芳基取代基所述在烷基部分或芳基部分或这两部分中被取代。
杂芳基烷基取代基包括式-(CH2)n5-杂芳基的基团，其中杂芳基和n5如上所定义，并且桥连基与杂芳基部分的碳或氮连接，例如2-、3-或4-吡啶基甲基、咪唑基甲基、喹啉基乙基和吡咯基丁基。杂芳基取代基是未取代的或者如上对杂芳基和烷基取代基所讨论被取代。
氨基酰基取代基包括式-C(O)-(CH2)n-C(H)(NR13R14)-(CH2)n-R5的基团，其中n、R13、R14和R5如上所述。适宜的氨基酰基取代基包括天然和非天然氨基酸，例如甘氨酰基、D-色氨酰基、L-赖氨酰基、D-或L-高丝氨酰基、4-氨基丁酰基和±-3-氨基-4-己烯酰基。
非芳香族多环取代基包括二环和三环稠环系统，其中环各自可以是4至9元环并且环各自可以含有零条、一条或多条双键和/或三键。适宜的非芳香族多环的实例包括萘烷、八氢茚、全氢苯并环庚烯和全氢苯并-[f]-薁。这类取代基是未取代的或者如上对环烷基所述被取代。
混合的芳基和非芳基多环取代基包括二环和三环稠环系统，其中环各自可以是4至9元环并且至少一个环是芳香族环。适宜的混合的芳基和非芳基多环的实例包括亚甲二氧基苯基、双-亚甲二氧基苯基、1,2,3,4-四氢萘、二苯并环庚烷(dibenzosuberane)、二氢蒽和9H-芴。这类取代基是未取代的或者被硝基取代或如上对环烷基所述被取代。
多杂芳基取代基包括二环和三环稠环系统，其中环各自可以独立地是5或6元环并且含有一个或多个杂原子、例如1、2、3或4个杂原子，所述的杂原子选自O、N或S，以使稠环系统是芳香族的。适宜的多杂芳基环系统的实例包括喹啉、异喹啉、吡啶并吡嗪、吡咯并吡啶、呋喃并吡啶、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吲哚、苯并唑、吡咯并喹啉等。除非另有说明，多杂芳基取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的取代基包括烷基、以上确定的烷基取代基和式-O-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H的取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代，尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
非芳香族多杂环取代基包括二环和三环稠环系统，其中环各自可以是4至9元环、含有一个或多个杂原子、例如1、2、3或4个杂原子(所述的杂原子选自O、N或S)并且含有零条或者一条或多条C-C双键或三键。适宜的非芳香族多杂环的实例包括己糖醇、顺式-全氢-环庚三烯并[b]吡啶基、十氢-苯并[f][1,4]氧杂氮杂基、2,8-二氧杂二环[3.3.0]辛烷、六氢-噻吩并[3,2-b]噻吩、全氢吡咯并[3,2-b]吡咯、全氢萘啶、全氢-1H-二环戊二烯并[b,e]吡喃。除非另有说明，非芳香族多杂环取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个取代基取代，所述的取代基包括烷基和以上确定的烷基取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代，尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
混合的芳基和非芳基多杂环取代基包括二环和三环稠环系统，其中环各自可以是4至9元环、含有一个或多个选自O、N或S的杂原子并且至少一个环必须是芳香族环。适宜的混合的芳基和非芳基多杂环的实例包括2,3-二氢吲哚、1,2,3,4-四氢喹啉、5,11-二氢-10H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂、5H-二苯并[b,e][1,4]二氮杂、1,2-二氢吡咯并[3,4-b][1,5]苯并二氮杂、1,5-二氢-吡啶并[2,3-b][1,4]二氮杂-4-酮、1,2,3,4,6,11-六氢-苯并[b]吡啶并[2,3-e][1,4]二氮杂-5-酮。除非另有说明，混合的芳基和非芳基多杂环取代基是未取代的或者在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的取代基包括-N-OH、＝N-OH、烷基和以上确定的烷基取代基。氮原子是未取代的或者是被取代的，例如被R13取代，尤其有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
氨基取代基包括伯、仲和叔胺以及盐形式的季胺。氨基取代基的实例包括单和二烷基氨基、单和二芳基氨基、单和二芳基烷基氨基、芳基-芳基烷基氨基、烷基-芳基氨基、烷基-芳基烷基氨基等。
磺酰基取代基包括烷基磺酰基和芳基磺酰基，例如甲磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基等。
酰基取代基包括式-C(O)-W、-OC(O)-W、-C(O)-O-W或-C(O)NR13R14的基团，其中W是R16、H或环烷基烷基。
酰基氨基取代基包括式-N(R12)C(O)-W、-N(R12)C(O)-O-W和-N(R12)C(O)-NHOH的取代基，并且R12和W如上所定义。
R2取代基HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-是下式基团：
对各取代基的优选项包括如下定义：
R1是H、卤代基或直链C1-C4烷基；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；
R3和R4相同或不同并且独立地选自H和C1-C6烷基，或者
R3和R4与它们结合的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8；
R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳香族多环、非芳香族多环、混合的芳基和非芳基多环、多杂芳基、非芳香族多杂环以及混合的芳基和非芳基多杂环；
n、n1、n2和n3相同或不同并且独立地选自0-6，当n1是1-6时，碳原子各自是未取代的或者独立地被R3和/或R4取代；
X和Y相同或不同并且独立地选自H、卤代基、C1-C4烷基、CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；
R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、烷基环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；
R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；
R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；
R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；
R10和R11相同或不同并且独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；
R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；
R13和R14相同或不同并且独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基酰基；
R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；
R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和NR13R14；
m是选自0-6的整数；并且
Z选自O、NR13、S和S(O)；
或其可药用盐。
有用的式(I)化合物包括其中R1、X、Y、R3和R4各自是H的那些，包括其中n2和n3中之一是0且另一个是1的那些，尤其是其中R2是H或-CH2-CH2-OH的那些。
适宜的一类异羟肟酸化合物是式(Ia)的那些或其可药用盐：
其中
n4是0-3；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；并且
R5是杂芳基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、芳香族多环、非芳香族多环、混合的芳基和非芳基多环、多杂芳基或混合的芳基和非芳基多杂环。
适宜的另一类异羟肟酸化合物是式(Ia)的那些或其可药用盐：
其中
n4是0-3；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；
R5是芳基、芳基烷基、芳香族多环、非芳香族多环以及混合的芳基和非芳基多环，尤其是芳基，例如对氟苯基、对氯苯基、对-O-C1-C4烷基苯基如对甲氧基苯基和对-C1-C4烷基苯基，以及芳基烷基，例如苄基、邻-、间-或对-氟苄基、邻-、间-或对-氯苄基、邻-、间-或对-单、二或三-O-C1-C4烷基苄基如邻-、间-或对-甲氧基苄基、间,对-二乙氧基苄基、邻,间,对三甲氧基苄基和邻-、间-或对-单、二或三-C1-C4烷基苯基如对甲基、间,间-二乙基苯基。
另一类感兴趣的是式(Ib)化合物或其可药用盐：
其中
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C6环烷基、环烷基烷基如环丙基甲基、(CH2)2-4OR21，其中R21是H、甲基、乙基、丙基和异丙基；并且
R5是未取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基或者取代的1H-吲哚-3-基(如5-氟-1H-吲哚-3-基或5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基。
另一类感兴趣的异羟肟酸化合物是式(Ic)化合物或其可药用盐：
其中
含有Z1的环是芳香族或非芳香族环，其中非芳香族环是饱和或不饱和的，
Z1是O、S或N-R20；
R18是H、卤代基、C1-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)、C3-C7环烷基、芳基如未取代的苯基或者被4-OCH3或4-CF3取代的苯基或者杂芳基如2-呋喃基、2-噻吩基或者2-、3-或4-吡啶基；
R20是H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基如环丙基甲基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、酰基如乙酰基、丙酰基和苯甲酰基或者磺酰基如甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基和甲苯磺酰基；
A1是1、2或3个独立地是H、C1-C6烷基、-OR19、卤代基、烷基氨基、氨基烷基、卤代基或杂芳基烷基如吡啶基甲基的取代基；
R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基和-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H；
R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；
v是0、1或2；
p是0-3；并且
q是1-5且r是0；或者
q是0且r是1-5。
其它可变的取代基如上所定义。
尤其有用的式(Ic)化合物是其中R2是H或-(CH2)pCH2OH(其中p是1-3)的那些，尤其是其中R1是H的那些；例如其中R1是H且X和Y各自是H和其中q是1-3且r是0或者其中q是0且r是1-3的那些，尤其是其中Z1是N-R20的那些。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH，并且q和r的总数优选是1。
另一类感兴趣的异羟肟酸化合物是式(Id)化合物或其可药用盐：
其中
Z1是O、S或N-R20；
R18是H、卤代基、C1-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)、C3-C7环烷基、芳基如未取代的苯基或者被4-OCH3或4-CF3取代的苯基或者杂芳基；
R20是H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基如环丙基甲基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基、杂芳基烷基如吡啶基甲基、酰基如乙酰基、丙酰基和苯甲酰基或者磺酰基如甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基；
A1是1、2或3个独立地是H、C1-C6烷基、-OR19或卤代基的取代基；
R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基如苄基和杂芳基烷基如吡啶基甲基；
p是0-3；并且
q是1-5且r是0；或者
q是0且r是1-5。
其它可变的取代基如上所定义。
尤其有用的式(Id)化合物是其中R2是H或-(CH2)pCH2OH(其中p是1-3)的那些，尤其是其中R1是H的那些；例如其中R1是H且X和Y各自是H和其中q是1-3且r是0或者其中q是0且r是1-3的那些。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH，并且q和r的总数优选是1。
本发明还涉及式(Ie)化合物或其可药用盐：
可变的取代基如上所定义。
尤其有用的式(Ie)化合物是其中R18是H、氟、氯、溴、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基、C3-C7环烷基、未取代的苯基、在对位被取代的苯基或者杂芳基环如吡啶基环的那些。
另一组有用的式(Ie)化合物是其中R2是H或-(CH2)pCH2OH(其中p是1-3)的那些，尤其是其中R1是H的那些；例如其中R1是H且X和Y各自是H和其中q是1-3且r是0或者其中q是0且r是1-3的那些。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH，并且q和r的总数优选是1。在这些化合物中，p优选是1，并且R3和R4优选是H。
另一组有用的式(Ie)化合物是其中R18是H、甲基、乙基、叔丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基或者2-、3-或4-吡啶基(其中2-呋喃基、2-噻吩基和2-、3-或4-吡啶基取代基是未取代的或者如上对杂芳基环所述被取代)和R2是H或-(CH2)pCH2OH(其中p是1-3)的那些；尤其是其中R1是H且X和Y各自是H和其中q是1-3且r是0或者其中q是0且r是1-3的那些。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH，并且q和r的总数优选是1。
其中R20是H或C1-C6烷基、尤其是H的那些式(Ie)化合物是上述式(Ie)化合物的各亚类的重要成员。
N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐是重要的式(Ie)化合物。
本发明还涉及式(If)化合物或其可药用盐：
可变的取代基如上所定义。
有用的式(If)化合物包括其中R2是H或-(CH2)pCH2OH(其中p是1-3)的那些，尤其是其中R1是H的那些；例如其中R1是H且X和Y各自是H和其中q是1-3且r是0或者其中q是0且r是1-3的那些。在这些化合物中，R2优选是H或-CH2-CH2-OH，并且q和r的总数优选是1。
N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐是重要的式(If)化合物。
上述的化合物通常以可药用盐的形式使用。可药用盐适宜时包括可药用的碱加成盐和酸加成盐，例如金属盐如碱和碱土金属盐、铵盐、有机胺加成盐和氨基酸加成盐以及磺酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐，例如盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐；以及有机酸加成盐，例如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、枸橼酸盐和乳酸盐。金属盐的实例有碱金属盐，例如锂盐、钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如镁盐和钙盐，铝盐和锌盐。铵盐的实例有铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐的实例有与吗啉和哌啶形成的盐。氨基酸加成盐的实例有与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸形成的盐。磺酸盐包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。
于2002年3月21日公开的WO 02/22577中公开了在式(I)范围内的另外的HDAI化合物及其合成，该文献整体被引入本文作为参考。在WO02/22577范围内的两种优选的化合物是
N-羟基-3-[4-[(2-羟基乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐；和
N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
本发明特别涉及HDAC抑制剂在制备用于治疗对常规化学治疗有抗性的骨髓瘤的药物中的用途。
如用于本发明的HDAC抑制剂在上述试验中显示出的IC50值优选在50和2,500nM之间，更优选在250和2,000nM之间，最优选在500和1,250nM之间。
此外，本发明还涉及治疗骨髓瘤、尤其是对常规化学治疗有抗性的骨髓瘤的方法，该方法包括将治疗有效量的HDAC抑制剂施用于需要其的恒温动物、特别是人，优选将治疗有效量的如上定义的式(I)化合物或具有至少一个成盐基团的该化合物的盐施用于需要其的恒温动物、优选人。
在本说明书和权利要求通篇中，骨髓瘤优选表示多发性骨髓瘤(MM)。
如本文所用的术语“治疗”包括治疗患有骨髓瘤或正处于所述疾病前期的患者，该治疗可在所述患者中延缓疾病的发展。
硼替佐米是引起骨髓瘤细胞凋亡的治疗MM的基本物质。出人意料地是，发现了本发明的HDAC抑制剂可加强硼替佐米对MM细胞的作用。
因此，本发明还涉及用于同时、分别或依次使用、尤其是用于治疗骨髓瘤的方法的组合，该组合包含HDAC抑制剂、优选如上定义的式(I)化合物和引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物(其中活性成分各自以游离形式或以可药用盐的形式存在)以及任选的至少一种可药用载体。优选在该组合中引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物是硼替佐米。
包含HDAC抑制剂和引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物(其中活性成分各自以游离形式或以可药用盐的形式存在)以及任选的至少一种可药用载体的组合将在下文称为本发明的组合。
本发明的组合可以是组合制剂或药物组合物。
如本文所用的术语“组合制剂”尤其定义了“成套药盒”，成套药盒意指如上定义的活性成分可以单独或通过使用含有不同量的成分的不同固定组合来给药，即同时或在不同时间点给药。该药盒的各部分则可以例如同时或按时间顺序交错施用，即对成套药盒的任何部分而言，在不同时间点以相同或不同时间间隔施用。非常优选选择时间间隔以使组合使用各部分对所治疗疾病的作用大于通过仅使用任何一种活性成分得到的作用。在组合制剂中施用的活性成分1与活性成分2的总量的比例可以改变，例如为了应对所治疗的患者亚群的需要或单个患者的需要，这些不同的需要可以由患者的年龄、性别、体重等引起。优选有至少一种有益作用，例如第一种和第二种活性成分的作用相互增强、特别是协同作用，例如大于累加作用、另外的有利作用、较少的副作用、第一种和第二种活性成分之一或两者的非有效剂量下的组合治疗作用以及尤其是第一种和第二种活性成分的强协同作用。
此外，本发明还提供了治疗骨髓瘤的方法，该方法包括以联合地治疗学上有效地对抗骨髓瘤的量将本发明的组合施用于需要其的恒温动物。
相关领域的技术人员完全能够选择有关的试验模型来证明上下文所提到的抑制HDAC活性的化合物或本发明的组合对骨髓瘤的有益作用。抑制HDAC活性的化合物或本发明的组合的药理学活性例如可以在适宜的临床研究中或通过下述的实施例来证明。适宜的临床研究例如是在患有晚期骨髓瘤的患者中的开放标记的非随机剂量递增研究。这类研究特别证明了用本发明的组合观察到的协同作用。对骨髓瘤的有益作用可以通过这类研究的结果或者通过本身对本领域技术人员已知的研究设计中的变化来直接测定。例如，一种组合组分可以以固定剂量施用，而递增第二种组合组分的剂量直至达到最大耐受剂量(MTD)。或者，可以进行安慰剂对照的双盲研究来证明本文提到的本发明的组合的益处。
实施例
HDAC抑制剂
对于细胞培养实验，将N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，化合物(III)(Novartis Pharma,Basel,瑞士)溶于去离子水中，于-20℃保存，然后融化，用培养基稀释。对于动物实验，在腹膜内注射前将药物溶于无菌水中。
MM-衍生的细胞系和患者细胞
将对硼替佐米敏感(MM.1S)和对硼替佐米耐药(MM.1R)的人MM细胞系以及对多柔比星(Dox 40)、米托蒽醌(MR20)和美法仑(LR5)耐药的RPMI-8226细胞在含有10％胎牛血清、2mmol/L L-谷氨酰胺(GIBCO,Grand Island,NY)、100U/mL青霉素和100mg/mL链霉素(GIBCO)的RPMI-1640培养基(Cellgro,Mediatech,VA)中培养。将耐药的细胞系与多柔比星、米托蒽醌、美法仑或硼替佐米一起培养，以证实它们没有药物敏感性。通过用抗CD138 MACS微珠(Miltenyi,SanDiego,CA)进行阳性选择而纯化了MM患者细胞(>95％CD138+)。通过聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hipaque)密度沉降法得到了骨髓单核细胞(BMMC)和外周血单核细胞(PBMC)样本，将其在含或不含化合物(III)的96孔板中孵育。
BMSC培养
骨髓样本从患有MM的患者中获得。使用通过聚蔗糖-泛影葡胺密度沉降法分离的单核细胞建立了长期BM培养。当已经发展粘附细胞单层时，在含有0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA的HBSS中收集细胞，将其洗涤，通过离心收集。然后将BMSC铺在平底96孔板上过夜，然后加入3×104个MM.1S细胞，培养48小时。在48小时培养的后8小时过程中，移去150μL上层液，将细胞用[3H]胸苷(0.5μCi/孔)脉冲。使用Duoset ELISA(R&DSystem)测定了在有或无化合物(III)存在下的含或不含MM.1S细胞的BMSC的48小时培养物的上层液中的IL-6。
DNA合成
于37℃在培养基、化合物(III)和/或硼替佐米或重组IL-6(GeneticsInstitute,Cambridge,MA)的存在下，将MM细胞(3×104个细胞/孔)在96孔培养板(Costar,Cambridge,MA)中孵育48小时。通过3H-胸苷(NENProducts,Boston,MA)摄取测定了DNA合成。在48小时培养的后8小时过程中，将细胞用3H-胸苷(0.5μCi/孔)脉冲。所有实验均以一式三份进行。
生长抑制试验
通过测定细胞的MTS(Promega,Madison,WI)染料吸光度而评价了化合物(III)对MM和BMSC生长的抑制作用。对于培养的后4小时，将在200μL培养基加药物中培养24、48或72小时的细胞用每孔40μL 5mg/mL MTS脉冲。使用分光光度计(Molecular Devices公司,Sunnyvale,CA)在490nm处测定了吸光度。
细胞周期分析
收集在化合物(III)(1μM)、化合物(III)加全胱天蛋白酶(pan-caspase)抑制剂ZVAD-FMK(20μM)(Calbiochem,San Diego,CA)或对照培养基中培养0、8、12、18、36和42小时的MM细胞系和患者MM细胞，将其用PBS洗涤，用70％乙醇固定，用10mg/mL RNA酶(罗氏诊断公司,Indianapolis,IN)处理。然后将细胞用5mg/mL碘化丙啶(Sigma)染色，在Epics流式细胞仪(Coulter Immunology,Hialeah,FL)上使用程序M软件测定了细胞周期图。使用Phoenix流动系统分析了数据。
细胞凋亡的检测
除了使用如上所述的细胞周期分析鉴别了亚-G1细胞外，还通过使用膜联蛋白V染色证实了细胞凋亡。于37℃将MM细胞在单独的培养基中或者用培养基加1μM化合物(III)进行培养24小时。然后将细胞用冰冷的PBS洗涤2次，重新混悬(1×106个细胞/mL)于结合缓冲液(10mmol/L HEPES,pH7.4,140mmol/L NaCl,2.5mmol/L CaCl2)中。于室温将MM细胞(1×105个)与膜联蛋白V-FITC(5μL；Pharmingen,San Diego,CA)和PI(5mg/mL)孵育15分钟。通过使用Epics细胞分类器(Coulter)计数了膜联蛋白V+PI-凋亡的细胞。
免疫印迹
将患者MM细胞和MM.1S细胞与0.01、0.1或1μM化合物(III)一起培养，收集，洗涤，使用如下溶解缓冲液溶解：RIPA缓冲液、2mmol/L Na3VO4、5mmol/L NaF、1mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)、5mg/mL亮抑酶肽和5mg/mL抑肽酶。将细胞溶解物进行SDS-PAGE，转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，用抗乙酰化组蛋白(Upstate Biotechnology,Lake Placid,NY)、抗p21抗体(Santa Cruz Biotech,Santa Cruz,CA)、抗PARP、抗胱天蛋白酶-8、抗胱天蛋白酶-9和抗胱天蛋白酶3(Cell Signaling,MA)以及抗多聚遍在蛋白结合物、抗LMP7、抗β5(Affiniti,Mamhead,Exeter,Devon,UK)进行免疫印迹。将膜剥下，用抗微管蛋白或抗β-肌动蛋白(Sigma,St Louis,MO)再次探测，以确保等同的蛋白负载。
蛋白酶体活性试验
使用产生荧光的蛋白酶体底物Suc-LLVYAMC(Calbiochem,SanDiego,CA)定量了胞质提取物中蛋白酶体的活性。简言之，于室温将胞质提取物(5μL中有100μg蛋白质)在200μL含有20mM Tris-HCl(pH7.8)、0.5mM EDTA和100μM Suc-LLVY-AMC的反应物中孵育90分钟。在微量滴定板荧光计(激发,360nm；发射,460nm)中测定了荧光。
EMSA
对核提取物进行了EMSA。用[γ-32P]ATP(50μCi,222TBq/mM；NEN,Boston,MA)对双链NF-κB共有区寡核苷酸探针(5'-GGGGACTTTCCC-3',Santa Cruz Biotechnology)进行了末端标记。含有1ng寡核苷酸和5μg核蛋白的结合反应于室温在总体积为10mL的结合缓冲液[10mM Tris-HCl(pH7.5)、50mM NaCl、1mM MgCl2、0.5mM EDTA、0.5mM DTT、4％甘油(v/v)和0.5mg聚(dI.dC)(Pharmacia,Peapack,NJ)]中进行了20分钟。
异种移植物鼠模型
将在100μL RPMI 1640中的3×107个MM细胞以及100μL如前所述的基质胶(Matrigel)基底膜基质(Becton Dickinson,Bedford,MA)皮下接种到5至6周龄Beige-裸-Xid小鼠的右胁腹中。当肿瘤可测量时，将小鼠分入每天通过腹腔内接受25mg/kg化合物(III)的一组，或者分入按照相同方案接受单独的载体(0.9％氯化钠)的对照组。用化合物(III)进行的治疗以25mg/kg提供。隔日用测径器测量最长的垂直肿瘤直径，以使用下式估计肿瘤体积：
4π/3×(宽度/2)2×(长度/2)，
该式表示椭圆的三维体积。当动物的肿瘤达到2cm时，将它们处死。从治疗的第一天直至死亡评价了存活。从治疗的第一天直至第一次处死的那天(第9天)评价了肿瘤生长。
统计分析
使用Student氏t检验测定了在药物治疗对比于对照培养中观察到的差异的统计学显著性。显著性的最低水平为p<0.05。使用中位剂量效应分析联合可市售得到的软件程序Calcusyn(Biosoft,Ferguson,MO,USA)进行了化合物(III)和地塞米松的协同作用和拮抗作用的分析。使用Kaplan-Meier法计算了小鼠的存活曲线。使用指数系列检定比较了对照和治疗组之间生存时间的差异。使用Fisher精确检验比较了中位存活时间。为了比较两组中肿瘤生长的速度，拟合了线性混合效应模型(随机系数模型)。
此外，实施例还表明，化合物(III)在对常规治疗有抗性的MM细胞系以及MM患者细胞中以小于10nM的中位抑制浓度在48小时抑制骨髓瘤细胞的生长，如通过MTS试验和氚标记胸苷摄取所测定的。当与骨髓基质细胞共同培养时，MM.1S骨髓瘤细胞增殖也被抑制了，表明具有克服骨髓微环境的刺激作用的能力。通过蛋白质印迹证实了促细胞凋亡(pro-apoptotic)作用。在MM.1S细胞中用20nM化合物(III)观察到了胱天蛋白酶8、胱天蛋白酶9、胱天蛋白酶3和PARP的显著切割，表明内在和外在细胞凋亡途径均在化合物(III)介导的细胞凋亡中有牵涉。存在联合的p21的向上调节和c-myc的向下调节。在与蛋白酶体抑制剂硼替佐米的组合中观察到了协同活性。化合物(III)诱导的HDAC抑制在低纳摩尔浓度时使组蛋白高乙酰化。α-微管蛋白的乙酰化是包括将乙酰基加入到赖氨酸40中的翻译后修饰，其可被HDAC6或微管蛋白脱乙酰酶(TDAC)逆转。微管蛋白乙酰化在微管结构和功能的分化中起着重要的作用。此外，TDAC还组成性地结合多遍在蛋白化的错折叠蛋白和动力蛋白，将错折叠蛋白募集到动力蛋白马达上，用于转运至沿着微管的聚集体(aggresomes)，这作为对抗MM细胞中细胞凋亡的重要防御机制起作用。重要的是，在低纳摩尔浓度的化合物(III)时观察到了在MM.1S细胞中剂量依赖性地抑制TDAC。
本发明的一个目的是提供包含联合地治疗学上有效地对抗骨髓瘤的量的本发明组合的药物组合物。在该组合物中，组合组分可以在一个组合的单位剂型中或在两个单独的单位剂型中一起、依次或分别施用。单位剂型还可以是固定组合。
用于单独施用组合组分或者用于以固定组合(即包含至少两种组合组分的单一盖仑组合物)施用的本发明的药物组合物可以按本身已知的方法来制备，它们是适于经肠内(例如口服或直肠)和胃肠道外施用于哺乳动物(恒温动物)、包括人的那些，它们仅包含治疗有效量的至少一种具有药理活性的组合组分，或者还包含一种或多种可药用载体、尤其是适于经肠内或胃肠道外应用的载体。
新的药物组合物例如含有约10％至约100％、优选约20％至约60％的活性成分。用于组合治疗的经肠内或胃肠道外施用的药物制剂例如是单位剂型的那些，例如糖包衣片剂、片剂、胶囊剂或栓剂，此外还有安瓿剂。如果没有另外说明，这些药物制剂则按本身已知的方法来制备，例如通过常规的混合、制粒、糖包衣、溶解或冷冻干燥方法来制备。应当理解，包含在各剂型的独立剂量中的组合组分的单位含量本身不需要构成有效量，因为可以通过施用多个剂量单位来达到必需有效量。
具体而言，本发明的组合中治疗有效量的各组合组分可以同时或以任何顺序依次施用，并且组分可以分别或作为固定组合施用。例如，本发明的治疗骨髓瘤的方法可以包括：以联合治疗有效量、优选协同有效量、例如以相应于本文所述的量的日剂量同时或以任意顺序依次(i)施用游离或可药用盐形式的组合组分(a)；和(ii)施用游离或可药用盐形式的组合组分(b)。
本发明的组合的各组合组分可以在治疗过程中的不同时间分别施用或者以分开或单一的组合形式同时施用。此外，术语施用还涵盖使用在体内可转化为组合组分本身的组合组分的前药。因此，本发明应当理解为涵盖所有这类同时或交替治疗的方案，并且术语“施用”也相应地被解释。
用于抑制HDAC活性的化合物的有效剂量和在本发明的组合中所用的组合组分的有效剂量可以根据所用的具体化合物或药物组合物、施用模式、所治疗的骨髓瘤类型、所治疗的骨髓瘤的严重性而改变。因此，本发明的组合的剂量方案可以根据多种因素、包括施用途径以及患者的肝肾功能来选择。具有普通技能的医师、临床医师或兽医可以容易地确定并开出抑制HDAC活性的化合物或者本发明的组合的单一活性成分预防、抵抗或阻止病症发展所需的有效量。获得在产生效能而没有毒性的范围内的活性成分浓度方面的最佳精度需要基于活性成分到达靶位有效性的动力学的方案。
此外，本发明还提供了市售包装，包含作为活性成分的本发明的组合以及其同时、分别或依次在治疗骨髓瘤中使用的说明书。
本发明还提供了如本文定义的式(I)化合物在制备用于治疗骨髓瘤的药物中的用途和本发明的组合在制备用于治疗骨髓瘤的药物中的用途。

Claims (12)

1.HDAC抑制剂在制备用于治疗骨髓瘤的药物中的用途，其中所述的HDAC抑制剂是具有式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐：
2.根据权利要求1的用途，其中骨髓瘤对常规化学治疗有抗性。
3.根据权利要求1的用途，其中恒温动物是人。
4.根据权利要求1的用途，其中疾病是多发性骨髓瘤。
5.治疗骨髓瘤的方法，该方法包括将治疗有效量的HDAC抑制剂施用于需要其的恒温动物，其中所述的HDAC抑制剂是具有式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐：
6.根据权利要求5的方法，其中骨髓瘤是多发性骨髓瘤。
7.同时、分别或依次使用的组合，该组合包含HDAC抑制剂和引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物以及任选的至少一种可药用载体，其中活性成分各自以游离形式或以可药用盐的形式存在，其中所述的HDAC抑制剂是具有式(III)的N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐：
8.根据权利要求7的组合，其中引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物是硼替佐米。
9.根据权利要求7任一项的组合，用于同时、分别或依次在治疗骨髓瘤中使用。
10.治疗骨髓瘤的方法，该方法包括以联合地治疗学上有效地对抗骨髓瘤的量将如权利要求7中定义的组合施用于需要其的恒温动物。
11.药物组合物，包含联合地治疗学上有效地对抗骨髓瘤的量的权利要求7的组合以及至少一种可药用载体。
12.市售包装，包含HDAC抑制剂和引起骨髓瘤细胞凋亡的化合物以及其同时、分别或依次在治疗骨髓瘤中使用的说明书。
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