CN104316619A - 一种hplc法分析分离盐酸多佐胺对映异构体的方法 - Google Patents

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Abstract

发明公开了一种HPLC法分析分离盐酸多佐胺对映异构体的方法,本方法采用纤维素类手性柱，以正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分离，通过此方法可快速的分离分析盐酸多佐胺的对映异构体杂质。

Description

一种HPLC法分析分离盐酸多佐胺对映异构体的方法
技术领域
本发明属涉及一种高效液相色谱法分析分离药物的方法，具体涉及一种分析分离盐酸多佐胺及其光学异构体的高效液相色谱法。
背景技术
多佐胺是一种碳酸酐酶抑制剂。多佐胺盐酸盐是用于降低开角型青光眼和高眼压症增高的眼压。其分子式为C10H16N2O4S3HCl，化学名为(4S,6S)-6-甲基-4-乙氨基-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-b]噻喃-2-氨磺酰7,7-二氧化物盐酸盐，结构式为：
该分子中含有2个手性中心，4个光学异构体，本合成路线中作为杂质存在在多佐胺反式外消旋体中的非对映体多佐胺顺式外消旋体的量极少，主要考察反式多佐胺中的对映异构体(-)(4S,6S)-6-甲基-4-乙氨基-5,6-二氢-4H-噻吩并[2,3-b]噻喃-2-氨磺酰7,7-二氧化物，该杂质可通过后续反应，残留在药物中，影响药品质量。因此，控制盐酸多佐胺中光学异构体的含量，对提高碳酸酐酶抑制剂类药物的质量、保证广大患者用药的安全性具有重大意义。
对于盐酸多佐胺的光学异构体杂质，在药物合成过程当中是需要进行质量控制的。含手性碳原子的光学异构体的分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，经文献检索，未见(-)反式盐酸多佐胺光学异构体检测方法的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析分离盐酸多佐胺及其光学异构体杂质的高效液相色谱法，从而实现盐酸多佐胺与其光学异构体杂质的分离测定。
发明人发现，以纤维素类手性柱，以正相混合溶剂为流动相，可以将盐酸多佐胺及其光学异构体进行有效分离，从而可以准确控制盐酸多佐胺的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分离盐酸多佐胺及其光学异构体杂质。
进一步地，选用纤维素类手性柱AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)，可以获得更好的分析分离效果。
进一步地，本发明的正相溶剂选用正己烷、无水乙醇和二乙胺的混合溶剂。
本发明的方法中的流动相选用体积比例为80～90:20～10:0.02的正己烷、无水乙醇和二乙胺的混合溶剂。
优选正己烷、无水乙醇和二乙胺的体积比例为为84:16:0.02。
本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：
(1)取盐酸多佐胺样品适量，用甲醇溶解样品，配制成每1ml含盐酸多佐胺0.5～1.5mg的样品溶液。
(2)设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为254nm，色谱柱柱温箱为25～35℃，色谱柱柱温的最佳温度为30℃。
(3)取(1)的样品溶液5～10μl注入液相色谱仪，完成盐酸多佐胺及其光学异构体的分析与分离。
其中：
色谱柱：AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)纤维素手性色谱柱；
流动相：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝84:16:0.02；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
进样体积：10μl。
本发明采用纤维素类AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)手性色谱柱，能够有效的分析分离盐酸多佐胺及其光学异构体(杂质)；选择流动相溶解样品，确保了溶液的稳定性；选择进样体积10μl，柱温为30℃，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了含盐酸多佐胺及其光学异构体的原料的分析与分离问题，从而确保了盐酸多佐胺的质量可控。
附图说明
图1：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝84:16:0.02，柱温30℃的HPLC图：
图中1号峰为盐酸多佐胺，2号峰为异构体(+)盐酸多佐胺。
图2：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝80:20:0.02，柱温30℃的HPLC图：
图中1号峰为盐酸多佐胺，2号峰为异构体(+)盐酸多佐胺。
图3：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝86:14:0.02，柱温30℃的HPLC图：
图中1号峰为盐酸多佐胺，2号峰为异构体(+)盐酸多佐胺。
具体实施方式：
实施例1
仪器与条件
色谱柱：AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝84:16:0.02；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
进样体积：10μl；
检测波长：254nm；
实验步骤
称取盐酸多佐胺反式消旋体适量，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml中约含10μg的溶液，作为系统适用性溶液。取(-)反式盐酸多佐胺10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，用甲醇定量稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为对照溶液。量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，(-)反式盐酸多佐胺峰和(+)反式盐酸多佐胺峰的分离度应大于1.5。分别取供试品溶液和对照品溶液10μl，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有对映异构体峰，不得大于对照溶液主峰面积的1.0倍(0.5％)。
结果见附图1，图中1号峰为盐酸多佐胺，2号峰为异构体(+)盐酸多佐胺，可以看出在该条件下盐酸多佐胺主峰和异构体(+)盐酸多佐胺峰完全分离开来，且盐酸多佐胺主峰在16.4min左右。
实施例2
仪器与条件
色谱柱：AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝80:20:0.02；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
进样体积：10μl；
检测波长：254nm；
实验步骤
称取盐酸多佐胺反式消旋体适量，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml中约含10μg的溶液，作为系统适用性溶液。取(-)反式盐酸多佐胺10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，用甲醇定量稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为对照溶液。量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，(-)反式盐酸多佐胺峰和(+)反式盐酸多佐胺峰的分离度应大于1.5。分别取供试品溶液和对照品溶液10μl，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有对映异构体峰，不得大于对照溶液主峰面积的1.0倍(0.5％)。
结果见附图2，图中1号峰为盐酸多佐胺，2号峰为异构体(+)盐酸多佐胺，可以看出在该条件下盐酸多佐胺主峰和异构体(+)盐酸多佐胺峰完全分离开来，且盐酸多佐胺主峰在10.6min左右。
实施例3
仪器与条件
色谱柱：AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇-二乙胺＝86:14:0.02；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
进样体积：10μl；
检测波长：254nm；
实验步骤
称取盐酸多佐胺反式消旋体适量，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml中约含10μg的溶液，作为系统适用性溶液。取(-)反式盐酸多佐胺10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，用甲醇定量稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为对照溶液。量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，(-)反式盐酸多佐胺峰和(+)反式盐酸多佐胺峰的分离度应大于1.5。分别取供试品溶液和对照品溶液10μl，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有对映异构体峰，不得大于对照溶液主峰面积的1.0倍(0.5％)。
结果见附图3，图中1号峰为盐酸多佐胺，2号峰为异构体(+)盐酸多佐胺，可以看出在该条件下盐酸多佐胺主峰和异构体(+)盐酸多佐胺峰完全分离开来，且盐酸多佐胺主峰在19.6min左右。

Claims (6)

1.一种高效液相色谱法分析分离盐酸多佐胺及其对映异构体的方法，其特征在于采用以纤维素类手性柱，以正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分离。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素类手性柱为AD-H(Daicel，250mm×4.6mm，5μm)纤维素手性色谱柱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的正相混合溶剂为正己烷、无水乙醇和二乙胺的混合溶剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的正己烷、无水乙醇和二乙胺的体积比例为80～90:20～10:0.02。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的正己烷、无水乙醇和二乙胺的体积比例为为84:16:0.02。
6.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于分析分离盐酸多佐胺及其对映异构体包括以下步骤：
(1)取盐酸多佐胺样品适量，用甲醇溶解样品，得到1ml含盐酸多佐胺0.8～1.2mg的样品溶液。
(2)设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为254nm，色谱柱柱温箱为25～35℃。
(3)取步骤(1)的样品溶液5～10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
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