CN105628841B - 一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对应异构体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对应异构体的方法，涉及分析化学技术领域，该方法采用表面共价键合有直链淀粉‑三(3‑氯苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，以甲基叔丁基醚‑乙醇‑二乙胺(91‑9‑0.1)为流动相，流速为1ml/min，波长为230nm，柱温为30℃。本发明阿普斯特及其对映异构体的高效液相色谱分离检测方法分离度高、专属性强，解决了阿普斯特及其对映异构体难分离的问题，从而保证了阿普斯特及其制剂的质量可控。

Description

一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对应异构体的方法
技术领域
本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对应异构体的方法。
背景技术
阿普斯特是一种磷酸二酯酶-4(PDE-4)的抑制剂，是由美国celgene公司开发，主要用于治疗银屑病引起的关节炎的小分子药物，其化学名为：N-{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基}乙酰胺，其分子式为C22H24N2O7S，化学结构式如下：
采用常规一般手性柱和常规流动相的高效液相色谱法的测定方法难以将阿普斯特及其对映异构体有效分离，柱效很低，峰形很差。对映异构体在常规的高效液相色谱法中无法得到分离，必须使用合适的方法才能达到分离。
中国专利20150253092.9公开了一种阿普斯特及其对映异构体的分离检测方法，该方法使用ChiralPakAD-H色谱柱，流动相为正己烷-无水乙醇-二乙胺＝50:50:0.1，流速1.0ml/min，柱温25℃，检测波长240nm，但该方法灵敏度低、分离度小。
为了保证阿普斯特药物的安全性，有必要找到一种能有效地将阿普斯特及其对映异构体分离的高效液相测定方法，对于实现阿普斯特及其对映异构体的分离在阿普斯特的合成和制剂的质量控制中具有重要的意义。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术中阿普斯特及其对映异构体的分离检测方法存在的问题，本发明提供一种阿普斯特及其对映异构体的高效液相色谱分离检测方法，该方法能将阿普斯特及其对映异构体的有效分离测定，实现阿普斯特的质量控制。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，所述液相色谱法的色谱条件为采用表面共价键合有直链淀粉-三(3-氯苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性柱，所述手性柱的柱温为25℃-35℃，以甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺为流动相，所述流动相中甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺溶液的体积比为91：9：0.1。
优选的，所述手性柱为ChiralPak ID。
优选的，所述流动相的流速为：0.8-1.2ml/min。
优选的，所述液相色谱的检测波长为：200nm-260nm。
优选的，所述手性柱的柱温为：30℃。
优选的，所述流动相的流速为：1ml/min。
优选的，所述液相色谱的检测波长为：230nm。
一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，包括以下步骤：
S1、对照溶液：取阿普斯特消旋体对照品5mg，精密称量，置于10ml容量瓶中，加适量无水乙醇，在45℃温度的水浴中加热适量的时间，使其溶解；稀释并定容成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，即得；
S2、供试品溶液：取阿普斯特10mg，精密称量，置于10ml容量瓶中，加适量无水乙醇，在45℃温度的水浴中加热适量的时间，使其溶解；稀释并定容成每1ml中含1mg的溶液，摇匀，即得；
S3、精密量取乙醇空白溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；
S4、精密量取对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；阿普斯特R异构体与阿普斯特依次流出，阿普斯特与其异构体的分离度应符合要求；
S5、精密量取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中，出峰顺序为对映R型异构体、阿普斯特主峰，两者的分离度大于1.5且阿普斯特R异构体的峰面积不得大于主峰面积的1.0％。
(三)有益效果
本发明提供了一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，本发明相对于现有技术的有益效果如下：
本发明采用ChiralPak ID手性色谱柱，能够有效分离检测阿普斯特对映异构体，选用无水乙醇溶解样品，避免样品在流动相中析出，流动相中加入一定比例的二乙胺，让阿普斯特及其对映异构体峰形较好，分离度达到最佳。本发明解决了分离测定阿普斯特及其对映异构体分离难的问题，从而实现了阿普斯特的质量控制，本发明分离测定方法简单、快速，能够准确地分离检测出阿普斯特的对映异构体。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明空白溶剂的液相色谱图。
图2为本发明阿普斯特消旋体液相色谱图。
图3为本发明阿普斯特与其对映异构体混合的液相色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其中液相色谱法的色谱条件为采用表面共价键合有直链淀粉-三(3-氯苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性柱，以甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺为流动相，而且所述手性柱为ChiralPak ID，流动相中甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺溶液的体积比为91：9：0.1，手性柱的柱温为25℃-35℃，流动相的流速为：0.8-1.2ml/min，液相色谱的检测波长为：200nm-260nm。
实施例：
1、仪器与条件
仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪
色谱柱：ChiralPakID(5um,250×4.6mm)
流动相：甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺＝91:9:0.1
检测波长：230nm
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：10ul
本发明进样为手动进样。
2、实验步骤
取阿普斯特消旋体对照品5mg，精密称量，置于10ml容量瓶中，加适量无水乙醇，在45℃温度的水浴中加热适量的时间，使其溶解；稀释并定容成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取阿普斯特10mg，精密称量，置于10ml容量瓶中，加适量无水乙醇，在45℃温度的水浴中加热适量的时间，使其溶解；稀释并定容成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。
分别精密量取10ul的乙醇空白溶剂、阿普斯特对照液、阿普斯特供试液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2、图3。
图1证明乙醇溶液对测定无干扰。由图2可知该条件下阿普斯特的出峰时间为14.471min，其对映R型异构体的出峰时间为10.786min，分离度达到7.988，且峰形好、柱效高，说明本方法可以有效的分离阿普斯特及其对映异构体，可以用于阿普斯特中对映异构体的测定。图3中保留时间为10.755min的色谱峰为阿普斯特对映R型异构体的色谱峰，保留时间为14.377min的色谱峰为阿普斯特色谱峰。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述液相色谱法的色谱条件为采用表面共价键合有直链淀粉-三(3-氯苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性柱，所述手性柱的柱温为25℃-35℃，以甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺为流动相，所述流动相中甲基叔丁基醚-乙醇-二乙胺溶液的体积比为91：9：0.1。
2.根据权利要求书1所述的用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述手性柱为ChiralPak ID。
3.根据权利要求书1所述的用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述流动相的流速为：0.8-1.2ml/min。
4.根据权利要求书1所述的用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测波长为：200nm-260nm。
5.根据权利要求书1所述的用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述手性柱的柱温为：30℃。
6.根据权利要求书3所述的用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述流动相的流速为：1ml/min。
7.根据权利要求书4所述的用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测波长为：230nm。
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