CN104232526A - 一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺.枯草芽孢杆菌经一、二级种子扩大培养后接入发酵培养基中培养，在发酵过程中通过补料流加碳源增加芽孢杆菌的数量和转化率，显著提高单位产量，降低了单位成本；结束发酵，使用真空薄膜浓缩器浓缩发酵液，发酵液中的可溶性增效物质、促生物质、抑菌活性物质能有效回收；浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备干燥造粒，分选颗粒，旋风分离器捕集细粉返回再造粒，得每克菌粉CFU不少于2.0×10¹¹个的枯草芽孢杆菌产品。尾气处理，达标排放。本发明能最大程度保留发酵液中有效物质，产品质量高、设备利用率高，生物活性保持的比较好，废气，废水达标排放，能大规模产业化生产。

Description

一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺。

背景技术

枯草芽孢杆菌((Bacillus subtilis)，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名枯草芽孢杆菌。

枯草芽孢杆菌无致病性，并可以分泌多种酶和抗生素，而且还具有良好的发酵基础，所以用途十分广泛。枯草芽孢杆菌能够分泌多种酶，其中能够应用到医药领域的酶主要有丝氨酸纤溶性蛋白酶和脂肪酶两种。我国的豆豉纤溶酶和韩国的大豆发酵食品中分离的纤溶酶都是枯草芽孢杆菌分泌的丝氨酸纤溶性蛋白酶的一种，只是发酵用的菌株有些细微差别。枯草芽孢杆菌也是微生态制剂中常用的菌种之一，在动物中常用来调节胃肠道的菌群平衡,使物料大分子分解，有利于吸收，从而增加产量。枯草芽孢杆菌在快速繁殖过程中，产生大量多种维生素、有机酸、氨基酸、蛋白酶(特别是碱性蛋白酶)、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，能降解植物性饲料中复杂的有机物，从而促进消化吸收，提高饲料利用率，防止动物消化不良，出现“饲料便”等状况发生。枯草芽孢杆菌对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害微生物有很强的抑制作用，有效预防水产动物肠炎，烂鳃等疾病。枯草芽孢杆菌具有分泌大量几丁质酶的功能，几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害，分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质；分解池中残饵、粪便、有机物等,具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用；枯草芽孢杆菌改善有害蓝藻泛溢造成的水质浑浊问题，水质由浑变清，具有很强的净化水质功能，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促进饲料中营养素降解，使水产类动物对饲料的吸收利用更加充分；枯草芽孢杆菌可以减少对虾病害发生，可以大大提高对虾产量，从而提高经济效益，生物环保，刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力；减少对虾病害发生，明显提高对虾产量，从而提高经济效益，净化水质，无污染，无残留。

目前枯草芽孢杆菌制剂常见的生产方法是采用相关的枯草芽孢杆菌生产菌种，分批发酵培养，至其大部分或者全部形成芽孢时，采用板框过滤或者离心的方式进行浓缩，添加助剂后烘干或者喷雾干燥得到枯草芽孢杆菌的活菌制剂。这些方法存在着以下不足：

1、发酵罐装料系数为60％-70％，设备利用率不高；

2、由于采用的分批发酵，导致发酵初始培养基浓度过高，接种后延滞期较长，

发酵过程中副产物形成较多，发酵产品浓度上不去，最终导致发酵成本较大；

3、发酵液的浓缩一般采用的絮凝/板框过滤或者离心技术，这两种技术一般都会产生大量的废水，后续处理成本较高；

4、采用絮凝/板框过滤或者离心技术还会造成发酵上清里面的有效成分丢失，造成产品效果的下降；

5、喷雾干燥一般设定的入口温度为180℃至200℃，出口温度为80℃到100℃，在这样较高的工作温度下，某些品种的菌数会有一定程度的下降，直接影响了产品的品质。

真空薄膜蒸发器是一类蒸发器的总称，特点是物料液体沿加热管壁呈膜状流动而进行传热和蒸发，优点是传热效率高，蒸发速度快，物料停留时间短，因此特别适合热敏性物质的蒸发。该类蒸发器包括MVR(机械式蒸汽再压缩)蒸发器，降膜式浓缩蒸发器和板式浓缩蒸发器等等。常常应用于中药活性物质浓缩，食品添加剂浓缩，抗生素浓缩，酶制剂浓缩等领域，但目前还没有用于活菌制剂浓缩方面。

多级低温喷雾流化干燥造粒相较于常规喷雾干燥塔，采用了多种先进的技术，比如塔内用了多个喷枪结构，喷枪采用的是高压喷嘴，喷出的雾滴分散效果好，且多个喷嘴喷出的雾滴相互碰撞，极易形成大颗粒；而没有形成颗粒的则被旋风分离器捕集，然后返回塔顶雾化区进行粉体的重新附聚和造粒；并且塔底有流化床可对形成的颗粒进行二次干燥，进一步降低颗粒的含水量；该系统要求进料有很高的固含量(10％-25％)，这样不需要粘合剂就能直接形成颗粒；由于是多级干燥系统，而且物料含水量不高，所以该设备的操作温度相比常规喷雾干燥塔要低，一般风温度控制在130℃-180℃，出口温度控制在60℃-80℃之间，这样该系统具备很好的干燥热敏性物料的能力，将该技术应用于活菌制剂的干燥上，可很好的保留产品中的生物活性，获得高质量的产品，以及环保，工序少等优点。

发酵和干燥造粒会产生大量的废气，里面常含有挥发性有机物(VOC)，硫化氢，氨气，硫醇类等各种污染物，同时伴有难闻的恶臭味，过去发酵企业一般将其直接排放或者简单的用水喷淋后排放，两种处理方式会造成对环境的严重污染。采用合适的化学试剂直接氧化废气中的相关污染物或者用物理方法分解其中的污染物是比较好的处理方法，能够解除废气中的恶臭味，减少环境污染。

发明内容

本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种设备利用率高，产品质量提高，生物活性保持的比较好，废气，废水达标排放，能够大规模产业化生产，产品质量更加稳定，产量更高，生产成本明显降低的枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺。

本发明目的的实现方式为，一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺，具体步骤如下：

1)一级种子培养：5000ml三角瓶中装有2000ml一级种子培养基，115℃-121℃湿热灭菌15-30min,取10ml枯草芽孢杆菌活菌冻干管菌种接种于一级种子培养基中，在30℃-35℃培养8～10h；一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％-3％，牛肉膏0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，氯化钠0.3-1％，培养基pH为6.5-7.5；

2)二级种子培养：在400L发酵罐中装有150L或300L二级种子培养基，115℃-121℃湿热灭菌15-30min,将3000ml一级种子接种于二级种子培养基中；在30℃-35℃培养8～10h；二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，磷酸氢二钾0.02％-0.05％，氯化钠0.5％-1％，硫酸镁0.02％-0.1％，培养基pH调为6.5-7.5；

3)发酵：在5m³或40m³发酵罐中装有或4000L或30m³枯草芽孢杆菌活菌发酵培养基，115℃-121℃湿热灭菌15-30min,将150L或300L二级种子接种于枯草芽孢杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.02Mpa-0.05Mpa，在28℃-35℃培养30-36h；发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％-3％，豆粕1％-4％，玉米浆1％-3％，酵母粉1％-3％，蛋白胨1％-3％，磷酸氢二钾0.01％-0.05％，硫酸镁0.1％-0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为6.5-7.5；

4)补料：当发酵至8-12h开始流加由葡萄糖20％-60％，水40％-80％配制成的葡萄糖补料培养基，发酵至24-28小时结束；

5)至芽孢形成率大于等于90％时，结束发酵；

6)将发酵液加热到35℃-60℃时进入浓缩器，在真空度为-70kpa～-95kpa下进行浓缩，浓缩至含固量达到10％-25％时，开始出料；

7)浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔，得CFU不少于2.0×10¹¹个的枯草芽孢杆菌产品；所述进风温度180℃，出口温度60℃；

8)尾气处理：采用化学氧化、等离子照射或紫外照射去味、脱氨氮或脱硫化氢处理后排放。

本发明有以下优点：

1、通过补料的方法，显著提高了单位产量，降低了单位成本，发酵罐装料系数由原先的60％-70％提高到80％-90％，设备利用率提高，单罐产量大大提升；通过补料发酵，达到高密度发酵，提高生物量，发酵液有效成分含量提高10-20％，高于分批发酵；

2、采用多级发酵技术，可使用于各种规模发酵罐上，缩短了芽孢杆菌的发酵周期，降低了发酵染菌风险；

3、采用低温真空薄膜浓缩器直接浓缩发酵液，相比采用传统的絮凝/板框过滤或者离心的浓缩方式，发酵液中可溶性的增效物质、促生物质、抑菌活性物质等得到有效回收；

4、采用低温多级干燥制粒新工艺，相比传统离心喷雾干燥生产工艺，进口风温和出口风温低，更好地保留了生物活性，而且一次性获得水分散颗粒剂产品而不是粉剂产品；

5、发酵后不用添加助剂即可烘干或者喷雾干燥：

6、低温浓缩过程中产生的冷凝水，生化需氧量(BOD值)极低，一般在80以下，达到达标排放标准；而传统的絮凝/板框过滤或者离心的浓缩方法，会产生大量生化需氧量(BOD值)很高的废水，需要进行复杂的处理后才可能达到排放标准；

7、发酵尾气、干燥制粒尾气均通过收集系统收集，经化学氧化、等离子照射、紫外照射等去味、脱氨氮、脱硫化氢尾气处理方式处理后能达标排放。

具体实施方式

本发明取枯草芽孢杆菌种子冻干管菌种，接种于115-121℃湿热灭菌15-30min的一级种子培养基中，进行一级种子培养。将一级种子接种于经115-121℃灭菌115-30min，二级种子培养基的发酵罐中进行二级种子培养。发酵，在发酵过程中补料，结束发酵。

一、二级种子培养基，发酵培养基，补料培养基经湿热灭菌后，培养基要迅速降至30℃左右。

使用真空薄膜浓缩器浓缩发酵液，浓缩器为MVR浓缩器、降膜蒸发器或板式蒸发浓缩器。采用MVR浓缩器，从蒸发室出来的二次蒸汽经压缩机压缩，压力温度升高至100℃-115℃，送至加热室当加热蒸汽使用，加热发酵液至进料温度，加热蒸汽本身冷凝成水。

多级低温喷雾流化干燥造粒：浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔，得CFU不少于2.0×10¹¹个的枯草芽孢杆菌产品；所述进风温度130℃-180℃，出口温度60℃-80℃；

下面用具体实施例详述本发明：

实施例1：(以5m³发酵罐为例)

1)一级种子培养：5000ml三角瓶中装有2000ml一级种子培养基，121℃湿热灭菌15min。取10ml枯草芽孢杆菌活菌冻干管菌种接种于一级种子培养基中，在30℃培养10h；一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％，牛肉膏0.5％，蛋白胨3％，氯化钠0.3％，培养基pH为7.5；

2)二级种子培养：在400L发酵罐中装有150L二级种子培养基，121℃湿热灭菌15min。将3000ml培养好的一级种子接种于二级种子培养基中；在30℃培养10h；二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％，酵母抽提物0.5％，蛋白胨3％，磷酸氢二钾0.02％，氯化钠0.5％，硫酸镁0.02％，培养基pH调为7.5；

3)发酵：在5m³发酵罐中装有4000L枯草芽孢杆菌活菌发酵培养基，121℃湿热灭菌15min。将150L培养好的二级种子接种于枯草芽孢杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.02Mpa-0.05Mpa，在28℃培养36h；发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％，豆粕1％，玉米浆1％，酵母粉3％，蛋白胨3％，磷酸氢二钾0.01％，硫酸镁0.1％，硫酸锰0.002％，培养基pH为7.5；

4)补料：当发酵至8h开始流加由葡萄糖60％，水40％配制成的葡萄糖补料培养基，发酵至24小时结束；

5)至芽孢形成率大于等于90％时，结束发酵；

6)使用MVR浓缩器浓缩发酵液：将发酵液加热到35℃时进入真空薄膜浓缩器，在真空度为-95kpa下进行浓缩，浓缩至含固量达到10％-20％时，开始出料；从蒸发室出来的二次蒸汽经压缩机压缩，压力温度升高至100℃-115℃，送至加热室当加热蒸汽使用，加热发酵液至35℃，加热蒸汽本身冷凝成水。

7)多级低温喷雾流化干燥造粒：浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔，得CFU不少于2.0×10¹¹个的枯草芽孢杆菌产品；所述进风温度130℃，出口温度60℃；

8)尾气处理：干燥制粒尾气通过收集系统收集，然后通过化学洗涤塔，与化学氧化剂如双氧水，次氯酸钠发生气-液接触，这个过程中气相中的臭味成分转移到液相，并被化学氧化剂氧化，从而达到去味、脱氨氮、脱硫化氢等目的，然后有组织达标排放。

实施例2、同实施例1，不同的是，

1)一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％，牛肉膏0.5％，蛋白胨3％，氯化钠1％，培养基pH为6.5；115℃湿热灭菌30min，35℃培养8h。

2)二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖3％，酵母抽提物1％，蛋白胨2.5％，磷酸氢二钾0.05％，氯化钠1％，硫酸镁0.1％，培养基pH调为6.5；115℃湿热灭菌30min，35℃培养8h。

3)发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖3％，豆粕4％，玉米浆2％，酵母粉3％，蛋白胨3％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为6.5；115℃湿热灭菌30min，28℃培养36h。

4)补料：当发酵至12h开始流加由葡萄糖50％，水50％配制成的葡萄糖补料培养基，发酵至28小时结束；

6)使用降膜蒸发器将发酵液加热到60℃时进入真空薄膜浓缩器，在真空度为-70kpa下进行蒸发，然后依次进入二效和三效蒸发器，浓缩至含固量达到15％-25％时，开始出料。

7)多级低温喷雾流化干燥造粒：浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔；所述进风温度180℃，出口温度80℃；

本实施例所制的枯草芽孢杆菌干粉活菌制剂，经检验每克菌粉CFU不少于2.0×10¹¹个。

实施例3、同实施例1，不同的是，

1)一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，牛肉膏1.5％，蛋白胨1.5％，氯化钠0.8％，培养基pH为7.0；115℃湿热灭菌30min，35℃培养8h。

2)二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，酵母抽提物1.5％，蛋白胨1.5％，磷酸氢二钾0.03％，氯化钠0.8％，硫酸镁0.08％，培养基pH调为7.0；115℃湿热灭菌30min，35℃培养8h。

3)发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，豆粕2％，玉米浆2％，酵母粉2.5％，蛋白胨2.5％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为7.0；

4)补料：当发酵至10h开始流加由葡萄糖30％，水70％配制成的葡萄糖补料培养基，发酵至26小时结束；

6)使用板式蒸发浓缩器浓缩发酵液：将发酵液加热到50℃时进入板式蒸发浓缩器进行浓缩，在真空度-86kp下进行蒸发浓缩。然后当发酵液浓缩至含固量达到15％-25％时，开始出料。

7)多级低温喷雾流化干燥造粒：浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔；所述进风温度150℃，出口温度70℃；

本实施例所制的枯草芽孢杆菌干粉活菌制剂，经检验每克菌粉CFU不少于2.0×10¹¹个。

实施例4：(以40m³发酵罐为例)，同实施例1，不同的是

1)一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖2％，牛肉膏2.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，培养基pH为7.5；

2)二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖2％，酵母抽提物2.5％，蛋白胨1％，磷酸氢二钾0.04％，氯化钠0.8％，硫酸镁0.08％，培养基pH调为7.5；

3)发酵：在40m³发酵罐中装有30m³枯草芽孢杆菌发酵培养基，接入300L二级种子。发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖3％，豆粕4％，玉米浆2％，酵母粉1％，蛋白胨2％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为7.5；

4)补料：当发酵至10h开始流加由葡萄糖20％，水80％配制成的葡萄糖补料培养基，发酵至25小时结束；

7)多级低温喷雾流化干燥造粒：浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔；所述进风温度160℃，出口温度75℃；

本实施例所制的枯草芽孢杆菌干粉活菌制剂，经检验每克菌粉CFU不少于2.0×10¹¹个。

9)尾气处理：干燥制粒尾气通过收集系统收集，然后通过等离子体反应区，该区富含极高化学活性的物质，如高能电子，离子，自由基和激发态分子等，废气中的污染物质与这些高能量物质产生反应，在极短时间内发生分解，从而达到去味、脱氨氮、脱硫化氢等目的，然后有组织达标排放。

实施例5：(以40m³发酵罐为例)同实施例1，不同的是，

1)一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，牛肉膏3％，蛋白胨0.5％，氯化钠0.5％，培养基pH为7.5；

2)在400L发酵罐中装有300L二级种子培养基，121℃湿热灭菌30min，将3000ml一级种子接种于二级种子培养基中；二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，酵母抽提物3％，蛋白胨0.5％，磷酸氢二钾0.02％，氯化钠0.5％，硫酸镁0.02％，培养基pH调为7.5。

3)发酵：在40m³发酵罐中装有30m³凝结芽孢杆菌发酵培养基，经121℃灭菌30min的枯草芽孢杆菌发酵培养基，接入300L二级种子，控制罐压0.02Mpa-0.05Mpa，在30℃培养32h；当芽孢形成有90％时放罐。发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖3％，豆粕3％，玉米浆3％，酵母粉1.5％，蛋白胨1.5％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为7.5。

6)使用降膜蒸发器将发酵液加热到45℃时进入真空薄膜浓缩器，在真空度为-90kpa下进行蒸发，然后依次进入二效和三效蒸发器，浓缩至含固量达到10％-20％时，开始出料。

本实施例所制的枯草芽孢杆菌干粉活菌制剂，经检验每克菌粉CFU不少于2.0×10¹¹个。

9)尾气处理：发酵尾气、干燥制粒尾气通过收集系统收集，然后通过高能UV紫外线反应区，该区的空气中的氧分子会被分解产生游离氧，游离氧不稳定与氧分子结合产生臭氧。臭氧对有机物有极强的氧化作用，能与废气中的有机污染物产生分解氧化反应，使其降解转化成低分子化合物、水和二氧化碳，从而达到去味、脱氨氮、脱硫化氢等目的，然后有组织达标排放。

实施例6：(以40m³发酵罐为例)

1)一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖3％，牛肉膏2.5％，蛋白胨1.5％，氯化钠0.5％，培养基pH为7.5；

2)在400L发酵罐中装有300L二级种子培养基，121℃湿热灭菌30min，将3000ml一级种子接种于二级种子培养基中；二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，酵母抽提物3％，蛋白胨1.5％，磷酸氢二钾0.02％，氯化钠0.5％，硫酸镁0.02％，培养基pH调为7.5。

3)发酵：在40m³发酵罐中装有30m³凝结芽孢杆菌发酵培养基，经121℃灭菌30min的枯草芽孢杆菌发酵培养基，接入300L二级种子，控制罐压0.02Mpa-0.05Mpa，在30℃培养32h；当芽孢形成有90％时放罐。发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖1％，豆粕3％，玉米浆3％，酵母粉1％，蛋白胨1％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为7.5。

5)结束发酵：至芽孢形成率大于等于90％时，结束发酵；

6)使用板式蒸发浓缩器浓缩发酵液：将发酵液加热到60℃时进入板式蒸发浓缩器进行浓缩，在真空度-70kp下进行蒸发。浓缩至含固量达到15％-25％时，开始出料。

本实施例所制的枯草芽孢杆菌干粉活菌制剂，经检验每克菌粉CFU不少于2.0×10¹¹个。

9)发酵尾气、干燥制粒尾气通过收集系统收集，然后通过高能UV紫外线反应区，该区的空气中的氧分子会被分解产生游离氧，游离氧不稳定与氧分子结合产生臭氧。臭氧对有机物有极强的氧化作用，能与废气中的有机污染物产生分解氧化反应，使其降解转化成低分子化合物、水和二氧化碳，从而达到去味、脱氨氮、脱硫化氢等目的，然后有组织达标排放。

Claims (4)

1.一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺，其特征在于具体步骤如下：

1)一级种子培养：5000ml三角瓶中装有2000ml一级种子培养基，115℃-121℃湿热灭菌15-30min,取10ml枯草芽孢杆菌活菌冻干管菌种接种于一级种子培养基中，在30℃-35℃培养8～10h；一级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％-3％，牛肉膏0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，氯化钠0.3-1％，培养基pH为6.5-7.5；

2)二级种子培养：在400L发酵罐中装有150L或300L二级种子培养基，115℃-121℃湿热灭菌15-30min,将3000ml一级种子接种于二级种子培养基中；在30℃-35℃培养8～10h；二级种子培养所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，磷酸氢二钾0.02％-0.05％，氯化钠0.5％-1％，硫酸镁0.02％-0.1％，培养基pH调为6.5-7.5；

3)发酵：在5m³或40m³发酵罐中装有或4000L或30m³枯草芽孢杆菌活菌发酵培养基，115℃-121℃湿热灭菌15-30min,将150L或300L二级种子接种于枯草芽孢杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.02Mpa-0.05Mpa，在28℃-35℃培养30-36h；发酵所用培养基的原料及用量为：葡萄糖0.5％-3％，豆粕1％-4％，玉米浆1％-3％，酵母粉1％-3％，蛋白胨1％-3％，磷酸氢二钾0.01％-0.05％，硫酸镁0.1％-0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为6.5-7.5；

4)补料：当发酵至8-12h开始流加由葡萄糖20％-60％，水40％-80％配制成的葡萄糖补料培养基，发酵至24-28小时结束；

5)至芽孢形成率大于等于90％时，结束发酵；

6)将发酵液加热到35℃-60℃时进入浓缩器，在真空度为-70kpa～-95kpa下进行浓缩，浓缩至含固量达到10％-25％时，开始出料；

7)浓缩发酵液用多级低温喷雾流化干燥设备进行干燥造粒，颗粒经过分选，符合颗粒要求直接出塔，得CFU不少于2.0×10¹¹个的枯草芽孢杆菌产品；所述进风温度130-180℃，出口温度60-80℃；

8)尾气处理：采用化学氧化、等离子照射或紫外照射去味、脱氨氮或脱硫化氢处理后排放。

2.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺，其特征在于一、二级种子培养基，发酵培养基，补料培养基经湿热灭菌后，培养基要迅速降至30℃。

3.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺，其特征在于浓缩器为MVR浓缩器、降膜蒸发器或板式蒸发浓缩器。

4.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺，其特征在于采用MVR浓缩器，从蒸发室出来的二次蒸汽经压缩机压缩，压力温度升高至100℃-115℃，送至加热室当加热蒸汽使用，加热发酵液至进料温度，加热蒸汽本身冷凝成水。