CN103875922A - 一种复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法，属于畜禽饲料领域，该制剂的主要技术特点是将开菲尔发酵剂、芽孢杆菌，啤酒酵母接种于培养基，经混合发酵，低温浓缩干燥制得，混合发酵是将开菲尔发酵剂，啤酒酵母和活化后的芽孢杆菌混合后进行接种，28～36℃条件下发酵18～24小时，混合菌种中开菲尔发酵剂与芽孢杆菌的比例为1～3:1，啤酒酵母的接种量为0.1%～0.5%，本发明制得的复合益生菌微生态添加剂富含多种活性益生菌，活菌含量高，储存稳定，可以提高饲料的利用率，促进动物生长，显著改善动物肠道的微生态平衡，维持动物肠道健康，增强动物的免疫力，降低动物的发病率，改善动物产品质量。

Description

一种复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种富含多种活性益生菌的复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法，属于畜禽饲料领域。

背景技术

随着经济发展水平的日益增长，我国的畜牧业也快速发展，人们对健康，安全的动物产品提出了更高的要求。然而，大量的抗生素在饲料中的使用使得饲料的安全性大大下降。

近年来，微生态制剂逐渐成为动物养殖中替代抗生素使用的重要饲料添加剂。与传统的饲料添加剂相比，益生菌微生态制剂能够有效抑制消化道中的致病菌与病原微生物的生长繁殖，并使益生菌在肠道中定植，调整动物肠道平衡，对动物疾病的防治具有一定的效果。目前，世界各国对微生态制剂的重视程度逐渐增加并大力推广。

目前国内外市场的主要益生菌微生态制剂以由枯草芽孢杆菌和乳酸菌构成，且大多数为多种单一菌粉混合而成。本发明将开菲尔发酵剂作为乳酸菌和酵母菌的来源，与啤酒酵母，枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，纳豆芽孢杆菌中的一种或多种，经混合发酵，低温浓缩干燥，制成复合益生菌微生态饲用添加剂。该微生态添加剂具有活菌含量高，风味独特，营养价值高等特点，对动物的生长繁殖，调整动物体内微生态平衡，增强动物免疫力和抗病力等均有一定的生理效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法，产品含有多种活性益生菌，具有调整动物肠道菌群，增强动物免疫力，降低动物发病率的生理功效，在提升动物保健功能的同时提升动物产品质量。

本发明是通过以下技术手段来实现的：

一种复合益生菌微生态饲用添加剂，是一种粉剂，由开菲尔发酵剂、芽孢杆菌、啤酒酵母经混合发酵，低温浓缩干燥制得。

上述添加剂中，按质量计开菲尔发酵剂：芽孢杆菌=1～3:1，啤酒酵母的接种量为0.1%～0.5%。

上述添加剂中，芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌中的1～3种组成。含2～3种芽孢杆菌时，各种芽孢杆菌的质量比可以随意，具体比例取决于制备中所用的各种活化芽孢杆菌混合的比例。

上述添加剂中，活菌浓度大于60亿cfu/g。

一种复合益生菌微生态饲用添加剂的制备方法，首先使用营养肉汤培养基将芽孢杆菌进行活化，使用脱脂乳接种开菲尔粒制备开菲尔发酵剂；其特征在于，再将上述二者与啤酒酵母经混合发酵、低温浓缩干燥制得；

所述的混合发酵，是按下述过程配制培养基，培养基按重量百分比计的组分有，浓缩乳清蛋白2%～10%，葡萄糖1%～10%，酵母粉0.5%～1%，碳酸钙0.4%～1%，硫酸镁0.01%～0.06%，硫酸锰0.001%～0.01%，乳清粉1%～10%，余量为蒸馏水；将各组分溶解于蒸馏水中，调节pH为6.5～7.5，在90～115℃条件下保温10～30min杀菌；冷却至20～30℃将开菲尔发酵剂、芽孢杆菌和啤酒酵母的混合菌种按培养基体积的3%～10%进行接种，在28～36℃条件下，发酵16～24小时，得到益生菌混合发酵液，其中开菲尔发酵剂与芽孢杆菌的接种比例为开菲尔发酵剂∶芽孢杆菌=1～3:1，啤酒酵母的接种量为0.1%～0.5%；

所述的低温浓缩干燥，是将益生菌混合发酵液在3000～6000r/min条件下，搅拌离心15～30min，收集浓缩菌体；再向浓缩菌体中加入保护剂，预冻后按现有的方法进行真空冷冻干燥或在进风温度为80～120℃，出风温度50～70℃的条件下，进行低温喷雾干燥，得到复合益生菌微生态饲用添加剂。

最终制成的成品，是单位活菌数大于60亿cfu/g的复合益生菌微生态饲用添加剂。

所述的将芽孢杆菌进行活化，可以按现有技术进行，也可以按下述过程进行，将冻存的芽孢杆菌进行划线培养，分离出典型菌落接种于液体培养基37℃，震荡培养18h，经镜检符合芽孢杆菌的标准形态，生长状态良好，按接种量3～6%接种于液体培养基进行活化，37℃，震荡培养18～24h保存备用。

上述的芽孢杆菌，可以是枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或/和纳豆芽孢杆菌；使用2～3种芽孢杆菌时，分别活化再按比例混合得到活化的芽孢杆菌，用于与开菲尔发酵剂混合发酵。

所述的制备开菲尔发酵剂，可以按现有技术进行，也可以按下述过程进行，使用脱脂乳粉配成10%的脱脂乳溶液，经过90～115℃，10～30min杀菌后，冷却至20～30℃，按照脱脂乳体积的0.1%～0.5%接种开菲尔粒，在23～28℃的条件下发酵14～18h。

在低温浓缩干燥过程中，所述的保护剂，是按益生菌混合发酵液重量为基数，由脱脂乳粉10%～20%、海藻糖1%～10%、谷氨酸钠1%～10%、甘油1%～5%组成。

本发明的有益效果在于：

1）本发明将开菲尔发酵剂和芽孢杆菌进行高密度混合发酵，菌种多样，活菌数可分别达到20亿cfu/g以上；

2）经本发明所述的菌种发酵后产生了多种益生菌活性代谢产物，使得动物对营养物质的吸收利用率显著提高。同时还可以促进动物生长，增强动物的免疫力，显著改善动物体内的微生态平衡，降低动物的发病率，显著改善动物产品质量。

具体实施方式

1）益生菌发酵剂的制备

①芽孢杆菌的制备

将冻存的芽孢杆菌进行划线培养，分离出典型菌落接种于液体培养基37℃，震荡培养18h，经镜检符合芽孢杆菌的标准形态，生长状态良好，按接种量3～6%接种于液体培养基进行活化，37℃，震荡培养18～24h保存备用。

②开菲尔发酵剂的制备

使用脱脂乳粉配成10%的脱脂乳溶液，经过90～115℃，10～30min杀菌后，冷却至20～30℃，按照脱脂乳体积的0.1%～0.5%接种开菲尔粒，在23～28℃的条件下发酵14～18h后保存备用。

2）混合发酵

取浓缩乳清蛋白10～20g，葡萄糖6～10g，酵母粉2.5～5g，碳酸钙2～5g，硫酸镁0.05～0.3g，硫酸锰0.01～0.05g，乳清粉5～15g，加入蒸馏水至总质量为500g。充分溶解后调节培养基pH为6.5～7.5，杀菌条件为90～115℃条件下保温10～30min，冷却至20～30℃备用。向冷却后的培养基接种，按3%～10%接种量，开菲尔发酵剂:芽孢杆菌=1～3:1，啤酒酵母的接种量为0.1%～0.5%，28～36℃，发酵18～24h，得到益生菌混合发酵液。

3）菌粉的制备

将制得的发酵液搅拌均匀，在10～20℃条件下，转速为3000～6000转∕分，时间为10～30min离心处理，收集浓缩菌体；离心收集的菌体，按发酵液体积比添加脱脂乳粉10%～15%、海藻糖1%～5%、谷氨酸钠1%～5%、甘油1%～3%，混合均匀，预冻后进行低温冷冻干燥或在进风温度为80～120℃，出风温度50～70℃的条件下，进行低温喷雾干燥，得到复合益生菌微生态饲用添加剂。

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1）益生菌发酵剂的制备

①芽孢杆菌的制备

将冻存的枯草芽孢杆菌进行划线培养，分离出典型菌落接种于液体培养基37℃，震荡培养18h，经镜检符合枯草芽孢杆菌的标准形态，生长状态良好，按接种量3%接种于液体培养基进行活化，37℃，震荡培养24h保存备用。

②开菲尔发酵剂的制备

使用脱脂乳粉配成10%的脱脂乳溶液，经过115℃，30min杀菌后，冷却至25℃，按照脱脂乳体积的0.1%接种开菲尔直投式发酵剂，在23℃的条件下发酵18h后保存备用。

2）混合发酵

取浓缩乳清蛋白10g，葡萄糖6.7g，酵母粉3.8g，碳酸钙3.4g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.015g，乳清粉14g，加入蒸馏水至500g，充分溶解后调节培养基pH为7.0，杀菌条件为115℃条件下保温10min，冷却至30℃备用。

向冷却后的培养基接种，按3%接种量，开菲尔发酵剂：枯草芽孢杆菌=3：1，添加0.5%的啤酒酵母，28℃，发酵24h。

3）菌粉的制备

将制得的发酵液搅拌均匀，在4℃，转速为6000转∕分，时间为15min的条件下，离心处理，收集浓缩菌体；离心收集的菌体，添加脱脂乳粉10%、海藻糖5%、谷氨酸钠1%、甘油3%，混合均匀，无菌水调整干物质浓度在30～40%，在进风温度为80～120℃，出风温度50～70℃的条件下，进行低温喷雾干燥，得到复合益生菌微生态添加剂。益生菌微生态饲用添加剂的技术指标为：乳酸菌数≥20亿cfu/g，酵母菌≥20亿cfu/g，芽孢杆菌≥20亿cfu/g。

实施例2

1）益生菌发酵剂的制备

①芽孢杆菌的制备

将冻存的枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌进行划线培养，分离出典型菌落后，分别接种于液体培养基37℃，震荡培养18h，经镜检符合枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌的标准形态，生长状态良好，分别按接种量6%接种于液体培养基进行活化，37℃，震荡培养20h。将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌按照体积比2:1混合，保存备用。

②开菲尔发酵剂的制备

使用脱脂乳粉配成10%的脱脂乳溶液，经过90℃，20min杀菌后，冷却至23℃，按照脱脂乳体积的0.3%接种开菲尔直投式发酵剂，在26℃的条件下发酵16h后保存备用。

2）混合发酵

取浓缩乳清蛋白18g，葡萄糖5g，酵母粉4.29g，碳酸钙4.0g，硫酸镁0.3g，硫酸锰0.027g，乳清粉10g，加入蒸馏水至500g，充分溶解后调节培养基pH为7.0，杀菌条件为105℃条件下保温20min，冷却至25℃备用。

向冷却后的培养基接种，按5%接种量，开菲尔发酵剂：芽孢杆菌=2:1，添加0.3%的啤酒酵母，30℃，发酵20h。

3）菌粉的制备

将制得的发酵液搅拌均匀，在5℃，转速为4000转∕分，时间为20min的条件下，离心处理，收集浓缩菌体；离心收集的菌体，添加脱脂乳粉15%、海藻糖1%、谷氨酸钠7%、甘油5%，混合均匀，无菌水调整干物质浓度在30～40%，在进风温度为80～120℃，出风温度50～70℃的条件下，进行低温喷雾干燥，得到复合益生菌微生态添加剂。益生菌微生态饲用添加剂的技术指标为：乳酸菌数≥20亿cfu/g，酵母菌≥20亿cfu/g，芽孢杆菌≥20亿cfu/g。

实施例3

1）益生菌发酵剂的制备

①芽孢杆菌的制备

将冻存的枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌进行划线培养，分离出典型菌落后，分别接种于液体培养基37℃，震荡培养18h，经镜检符合枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的标准形态，生长状态良好，分别按接种量6%接种于液体培养基进行活化，37℃，震荡培养18h。将枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌按照体积比2:1:1混合，保存备用。

②开菲尔发酵剂的制备

使用脱脂乳粉配成10%的脱脂乳溶液，经过115℃，20min杀菌后，冷却至20℃，按照脱脂乳体积的0.5%接种开菲尔直投式发酵剂，在28℃的条件下发酵14h后保存备用。

2）混合发酵

取浓缩乳清蛋白20g，葡萄糖8.0g，酵母粉5g，碳酸钙4g，硫酸镁0.1g，硫酸锰0.020g，乳清粉10g，加入蒸馏水至500g，充分溶解后调节培养基pH为7.0，杀菌条件为115℃条件下保温30min，冷却至25℃备用。

向冷却后的培养基接种，按6%接种量，开菲尔发酵剂：芽孢杆菌=1:1，添加0.1%的啤酒酵母，32℃，发酵18h。

3）菌粉的制备

将制得的发酵液搅拌均匀，在10℃条件下，转速为3000转∕分，时间为30min离心处理，收集浓缩菌体；离心收集的菌体，添加脱脂乳粉20%、海藻糖6%、谷氨酸钠5%、甘油1%，混合均匀，预冻后8h后，放入低温冷冻干燥机中干燥24h后，得到复合益生菌微生态饲用添加剂。益生菌微生态饲用添加剂的技术指标为：乳酸菌数≥20亿cfu/g，酵母菌≥20亿cfu/g，芽孢杆菌≥20亿cfu/g。

Claims (8)

1.一种复合益生菌微生态饲用添加剂，是一种粉剂，是由开菲尔发酵剂、芽孢杆菌、啤酒酵母经混合发酵，低温浓缩干燥制得。

2.根据权利要求1所述的复合益生菌微生态饲用添加剂，其特征在于，按质量计开菲尔发酵剂：芽孢杆菌=1～3:1，啤酒酵母的接种量为0.1%～0.5%。

3.根据权利要求1或2所述的复合益生菌微生态饲用添加剂，其特征在于，所述的芽孢杆菌，是由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌中的1～3种组成。

4.一种权利要求1所述的复合益生菌微生态饲用添加剂的制备方法，首先使用营养肉汤培养基将芽孢杆菌进行活化，使用脱脂乳接种开菲尔粒制备开菲尔发酵剂；其特征在于，再将上述二者与啤酒酵母经混合发酵、低温浓缩干燥制得；

所述的混合发酵，是按下述过程配制培养基，培养基按重量百分比计的组分有，浓缩乳清蛋白2%～10%，葡萄糖1%～10%，酵母粉0.5%～1%，碳酸钙0.4%～1%，硫酸镁0.01%～0.06%，硫酸锰0.001%～0.01%，乳清粉1%～10%，余量为蒸馏水；将各组分溶解于蒸馏水中，调节pH为6.5～7.5，在90～115℃条件下保温10～30min杀菌；冷却至20～30℃将开菲尔发酵剂、芽孢杆菌和啤酒酵母的混合菌种按培养基体积的3%～10%进行接种，在28～36℃条件下，发酵16～24小时，得到益生菌混合发酵液，其中开菲尔发酵剂与芽孢杆菌的接种比例为开菲尔发酵剂∶芽孢杆菌=1～3:1，啤酒酵母的接种量为0.1%～0.5%；

所述的低温浓缩干燥，是将益生菌混合发酵液在3000～6000r/min条件下，搅拌离心15～30min，收集浓缩菌体；再向浓缩菌体中加入保护剂，预冻后按现有的方法进行真空冷冻干燥或在进风温度为80～120℃，出风温度50～70℃的条件下，进行低温喷雾干燥，得到复合益生菌微生态饲用添加剂。

5.按照权利要求4所述的复合益生菌微生态饲用添加剂的制备方法，其特征在于，所述的芽孢杆菌活化，是将冻存的芽孢杆菌进行划线培养，分离出典型菌落接种于液体培养基37℃，震荡培养18h，经镜检符合芽孢杆菌的标准形态，生长状态良好，按接种量3～6%接种于液体培养基进行活化，37℃，震荡培养18～24h保存备用。

6.根据权利要求5所述的复合益生菌微生态饲用添加剂的制备方法，其特征在于，所述的芽孢杆菌可以是枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或/和纳豆芽孢杆菌；使用2～3种芽孢杆菌时，分别活化再按比例混合得到活化的芽孢杆菌，用于与开菲尔发酵剂混合发酵。

7.根据权利要求4所述的复合益生菌微生态饲用添加剂的制备方法，其特征在于，所述的制备开菲尔发酵剂，是使用脱脂乳粉配成10%的脱脂乳溶液，经过90～115℃、10～30min杀菌后，冷却至20～30℃，按照脱脂乳体积的0.1%～0.5%接种开菲尔粒，在23～28℃的条件下发酵14～18h。

8.按照权利要求4所述的益生菌微生态片剂的制备方法，其特征在于，在低温浓缩干燥过程中，所述的保护剂，是按益生菌混合发酵液质量为基数，由脱脂乳粉10%～20%、海藻糖1%～10%、谷氨酸钠1%～10%、甘油1%～5%组成。