CN104224732A - 一种口服骨架型环孢素a缓释微丸制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明的一种口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂，它由环孢素A固体分散体和亲水凝胶骨架材料经挤出滚圆制得。环孢素A固体分散体由环孢素A、聚维酮-K30、泊洛沙姆188、大豆磷脂组成；缓释微丸制剂由固体分散体、微晶纤维素、乳糖、羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠组成。本发明将固体分散技术与亲水凝胶骨架技术相结合，按照先速释后缓释的“双释药”原理，制备难溶药环孢素A缓释微丸制剂。结果显示，固体分散体显著提高了环孢素A的溶解度；缓释微丸在溶出介质中，2、6、12、24h累积释药率分别为27％、51％、76％、94％，具有明显的缓释特征；Beagle犬体内药动学结果显示，环孢素A缓释微丸相对于对照制剂，C_max明显降低，T_max、t_1/2、MRT明显延长，缓释效果明显。

Description

一种口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种难溶性药物口服缓释微丸制剂及其制备方法，特别涉及口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂及其制备方法。

背景技术

据相关机构统计显示，全球每年约有650亿美元的药品因生物利用度差而造成患者药物治疗的浪费。目前由高通量药物筛选而得的活性物质约有40％是水难溶性的，难溶性药物因其在水中溶解度小，药物难以被机体吸收，体内消除速度较快，血药浓度容易出现峰谷现象，口服制剂生物利用度低，且难以实现剂型的多样化。

固体分散体的研究非常多，常用的制备方法是溶剂法、熔融法、溶剂-熔融法、共研磨法。目前经FDA批准已上市的固体分散体药物大约有10种，包括瑞士诺华(Novartis)公司的抗真菌药灰黄霉素；美国礼莱(Lilly)公司的抗焦虑药大麻隆；瑞士罗氏(Roche)公司的抗病毒药沙奎那韦；日本藤泽药业(Fujisawa)的免疫抑制药他克莫司；西安杨森制药公司的抗真菌药伊曲康唑等。

第三代高效免疫抑制剂环孢素A(Cyclosporine A,CsA)是一种从丝状真菌培养液中分离出的的环肽。它是一种强效免疫抑制剂，已被广泛用于肾脏，肝脏，心脏，肺，胰腺等器官的移植以及自身免疫性疾病的治疗。

目前，市售的环孢素A的主要剂型包括注射剂、口服液和软胶囊剂。由于该药水溶性差，所以目前临床使用的环孢素A注射剂中加入了大量增溶剂——聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)，此辅料易导致胆汁淤积，过敏反应，肝肾毒性等。而口服环孢素A生物利用度是很低的，这主要由于以下原因：(1)环孢素A具有规则环状结构，分子量很大，以致其水溶性和肠道渗透性很差；(2)细胞膜上存在P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)，它能够能量依赖性的将环孢素A泵出细胞外；(3)肝的首过效应。因此，提高环孢素A的溶解度和生物利用度已成为环孢素A研究的热点。

目前，关于研究环孢素A的讨论很多，国内外专家提出了各种假想。(参见M.Rodriguez-Aller,B.Kaufmann,D.Guillarme,etal.In vivo characterisation of anovel water-soluble Cyclosporine A prodrug for the treatment of dry eye disease[J].European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics,2012(80):544–552.K.Mondon,M.Zeisser-Labouèbe,R.Gurny,M.Moller.Novel Cyclosporin Aformulations using MPEG–hexyl-substituted polylactide micelles:A suitabilitystudy[J].European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics,2011(77):56–65.杨志强,许洁,潘萍,等.环孢素A-pH敏感性纳米粒的制备工艺和体外释药特性[J].中国新药杂志,2008,17(20):1783-1786.)这些方法都增加了环孢素A的溶解度或是提高了环孢素A的体内相对生物利用度。但是，他们几乎都不太适合工业化生产。

近几年缓释微丸技术发展迅速，工艺成熟，操作简单。(参见徐希明，余江南，朱源，张正艮.盐酸坦索罗辛缓释微丸制剂及其制备方法[P].中国发明专利，CN200910233724.X.2010-4-21；朱家壁，杨燕，陈盛君.含硝苯地平和阿替洛尔的复方缓释微丸片及其制备方法[P].中国发明专利，CN200810025409.3.2008-9-10；何仲贵，孙英华，王永军，孙进.苦参素或苦参碱缓释微丸及其制备方法[P].中国发明专利，CN200710158669.3.2008-5-14.)上述方法显示，缓释微丸技术应用非常广泛。

发明内容

本发明选用水溶性载体材料聚维酮，采用溶剂法制备环孢素A速释固体分散体，利用固体分散体技术改善难溶性药物环孢素A的溶解度；再以环孢素A速释固体分散体为原料，选择具有缓释作用的骨架型材料羟丙甲纤维素，采用挤出滚圆法制备骨架型缓释微丸制剂。本发明基于先速释后缓释的“双释药”机理，提供了一种制备释药平稳、生物利用度高、给药次数少、患者顺应性好、稳定性好的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的方法。

本发明的技术方案如下：

一种口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂，其特征是：缓释微丸制剂包括以下质量份：环孢素A固体分散体1份、微晶纤维素(MCC)0.9-3份、乳糖0-1.5份、羟丙甲纤维素(HPMC)0.1-1份、交联羧甲基纤维素钠(CC-Na)0-0.45；所述的环孢素A固体分散体包括以下质量份：环孢素A1份、聚维酮(PVP)-K301-5份、泊洛沙姆1880-2.5份、大豆磷脂0.5-1.5份。

上述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂，所述的羟丙甲纤维素可以是HPMC k4M或HPMC k100LV。

一种制备上述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的方法，它包括如下步骤：

步骤1.按上述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的处方，准确称取环孢素A、聚维酮-K30、泊洛沙姆188和大豆磷脂，用无水乙醇或丙酮溶解后，旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用；

步骤2.按上述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的处方，称取步骤1所得固体分散体与羟丙甲纤维素、微晶纤维素、乳糖、交联羧甲基纤维素钠，混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得缓释微丸。

有益效果

1.将固体分散技术与亲水凝胶骨架技术相结合，按照先速释后缓释的“双释药”原理，制备难溶性药物环孢素A缓释微丸制剂，提高了环孢素A的溶解度，实现了缓释制剂口服先快速起效，再平稳缓慢释药的目的。实验结果如下：选用水，0.1mol·L^-1HCl溶液、pH6.8PBS溶液、0.1％SDS pH6.8PBS溶液为介质，考察环孢素A原料药及固体分散体在这些介质中的溶解度，结果见表1。由表1看出，环孢素A制成固体分散体后，显著提高了其在介质中的溶解度；环孢素A固体分散体在体外溶出介质中的溶出曲线见图3，由图3看出，固体分散体在60min内释放就达到了90％，具有明显的增溶效果；口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂体外释放曲线见图4，由图4看出，在溶出介质中，2、6、12、24h环孢素A累积释药率分别为27％、51％、76％、94％，具有明显的缓释特征。

表1

2.本发明所制环孢素A缓释微丸相对对照制剂，减少了血药浓度峰谷现象，提高了病人用药顺应性。环孢素A缓释微丸及对照制剂经犬口服给药，测定药时曲线，见图5，药动学参数见表2。结果表明环孢素A缓释微丸相对于对照制剂，C_max明显降低，T_max、t_1/2、MRT明显延长，缓释效果明显。

3.本发明所采用的制备方法简单，不需要特殊设备，辅料易得，价格便宜，制备过程影响因素少，重现性好，易于工业化生产。

附图、表说明

图1为环孢素A固体分散体制备过程示意图；

图2为环孢素A缓释微丸制备过程示意图；

图3为环孢素A固体分散体体外溶出曲线；

图4为口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂体外释药曲线；

图5为口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂及对照制剂犬口服给药的药时曲线。

具体实施方式

以下所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

以下实施例所用材料和仪器设备为：

实验材料：环孢素A(福建科瑞药业有限公司)、聚维酮-K30、羟丙甲纤维素HPMC k4M或HPMC k100LV(上海昌为药用材料有限公司)；大豆磷脂(上海太伟药业有限公司)；泊洛沙姆188(巴斯夫中国有限公司)；微晶纤维素(安徽山河药用辅料有限公司)；乳糖、交联羧甲基纤维素钠(山东聊城安信药用辅料有限公司)；无水乙醇(成都市科龙试剂化工厂)、丙酮(国药集团化学试剂有限公司)。

实验仪器：Mini250挤出滚圆流化包衣机(深圳信宜特制药设备有限公司)；ZRS-8G智能溶出仪(天津天大天发有限公司)。

实施例1.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 25g、泊洛沙姆188 10g、大豆磷脂5g，无水乙醇溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k4M 3g、微晶纤维素27g、乳糖15g、交联羧甲基纤维素钠2g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例2.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 50g、大豆磷脂5g，无水乙醇溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k100LV 30g、微晶纤维素75g、乳糖9g、交联羧甲基纤维素钠3g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例3.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 35g、泊洛沙姆188 25g、大豆磷脂6g，丙酮溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k4M 3g、微晶纤维素45g、乳糖45g、交联羧甲基纤维素钠7g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得缓释微丸。

实施例4.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 10g、泊洛沙姆188 10g、大豆磷脂8g，无水乙醇溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k4M 15g、微晶纤维素30g、乳糖15g、交联羧甲基纤维素钠3g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例5.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 30g、泊洛沙姆188 20g、大豆磷脂10g，丙酮溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k4M 9g、微晶纤维素60g、交联羧甲基纤维素钠6g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例6.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 40g、泊洛沙姆188 15g、大豆磷脂9g，无水乙醇溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k4M 15g、微晶纤维素45g、乳糖45g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例7.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 20g、泊洛沙姆188 5g、大豆磷脂5g，无水乙醇溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k100LV 3g、微晶纤维素30g、乳糖30g、交联羧甲基纤维素钠4g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例8.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 50g、泊洛沙姆188 25g、大豆磷脂15g，无水乙醇溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k100LV 30g、微晶纤维素30g、乳糖30g、交联羧甲基纤维素钠6g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例9.口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的制备

1.称取环孢素A 10g、聚维酮-K30 45g、泊洛沙姆188 20g、大豆磷脂12g，丙酮溶解后，60℃、90rmp旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用。

2.称取固体分散体30g与羟丙甲纤维素HPMC k4M 30g、微晶纤维素90g、交联羧甲基纤维素钠13g混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂。

实施例10.口服骨架型环孢素A缓释微丸体外释药实验

1.将环孢素A原料药、实施例7制得的环孢素A固体分散体以及该处方比例下的环孢素A与辅料的物理混合物分别装胶囊(每颗含环孢素A约10mg)，每个溶出杯放置1颗胶囊，采用中国药典2010年版二部附录X C第二法(桨法)，以pH6.8磷酸盐缓冲液900mL(含0.1％(w/v)十二烷基硫酸钠)为溶出介质，转速100r/min，温度37±0.5℃，测定开始后，分别于15，30，45，60min各取样5mL，同时向溶出杯中分别补充相同体积的溶出介质。将取出的5mL液体经0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液用HPLC法测定环孢素A累积释放率，结果见图3。

2.将实施例7制得的口服骨架型环孢素A缓释微丸装胶囊(每颗含环孢素A约10mg)，每个溶出杯放置1颗胶囊，体外释放条件同上，分别于1，2，3，4，6，8，10，12，24h各取样5mL，同时向溶出杯中分别补充相同体积的溶出介质。将取出的5mL液体经0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液用HPLC法测定环孢素A累积释放率，结果见图4。

实施例11.骨架型环孢素A缓释微丸体内药动学实验

1.1动物给药与血样处理

将6只成年雄性Beagle犬，体重13±1kg(南京亚东实验动物研究中心提供)随机分成两组，禁食12小时后，分别交叉单剂量口服相当于75mgCsA的新山地明、口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂胶囊(由实施例7制得)。给药后分别于0.5、l、2、3、4、6、8、10、12、24h前肢静脉取血3mL。精密吸取全血样品1mL置于10mL具塞离心管中，加入10μg·mL^-1内标(环孢素D)100μL，加入0.1mol·L^-1氢氧化钠2mL，涡旋振荡2min，再加入农残级乙醚4mL，涡旋振荡5min，3000rpm离心15min，移取上层乙醚层至10mL离心试管中，40℃恒温水浴下N₂吹干。加入500μL正己烷，200μL酸化甲醇溶液(甲醇：0.1mol·L^-1盐酸＝3:1)，涡旋30s，3000rpm离心10min，取下清液用HPLC法测定药物浓度。

1.2药时曲线与相对生物利用度

口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂及对照制剂犬口服给药的药时曲线见图5。血药浓度数据经BAPP软件(中国药科大学药代中心提供)拟合药动学参数，参数数据均以Mean±SD表示，结果见表2。相对生物利用度F＝(AUC_T/AUC_R)x100％。从结果可以看出，口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的T_max、t_1/2、MRT、AUC均高于新山地明，说明口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂口服给药后的药物体内滞留时间增加，生物利用度提高，相对口服生物利用度为109.12％。

表2

Claims (3)

1.一种口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂，其特征是：缓释微丸制剂包括以下质量份：环孢素A固体分散体1份、微晶纤维素(MCC)0.9-3份、乳糖0-1.5份、羟丙甲纤维素(HPMC)0.1-1份、交联羧甲基纤维素钠(CC-Na)0-0.45份；所述的环孢素A固体分散体包括以下质量份：环孢素A 1份、聚维酮(PVP)-K301-5份、泊洛沙姆1880-2.5份、大豆磷脂0.5-1.5份。

2.根据权利要求1所述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂，其特征是：所述的羟丙甲纤维素是HPMC k4M或HPMC k100LV。

3.一种制备权利要求1所述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的方法，其特征是它包括如下步骤：

步骤1.按权利要求1所述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的处方，称取环孢素A、聚维酮-K30、泊洛沙姆188和大豆磷脂，用无水乙醇或丙酮溶解后，旋转蒸发至近干，置于60℃真空干燥箱中除去残余溶剂后，于-20℃冰箱中冷冻4h，再次放置于60℃真空干燥箱中干燥12h，粉碎，过80目筛，得固体分散体，备用；

步骤2.按权利要求1所述的口服骨架型环孢素A缓释微丸制剂的处方，称取步骤1所得固体分散体与羟丙甲纤维素、微晶纤维素、乳糖、交联羧甲基纤维素钠，混匀后，加入双蒸水制软材，将其投入Mini250挤出滚圆流化包衣机中，挤出滚圆，50℃干燥，得缓释微丸。