CN104221869A - 一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法 - Google Patents
一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104221869A CN104221869A CN201410540401.6A CN201410540401A CN104221869A CN 104221869 A CN104221869 A CN 104221869A CN 201410540401 A CN201410540401 A CN 201410540401A CN 104221869 A CN104221869 A CN 104221869A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- physochlaina
- infundibularis
- suspension cell
- callus
- cell culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明研究了一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养等步骤，本发明方法所制备的漏斗泡囊草愈伤组织稳定、均一、分散性好，悬浮细胞生长良好、增殖速率快，为其药用资源的开发和利用提供技术基础。
Description
技术领域
本发明涉及漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快繁方法，属于生物技术领域。
背景技术
漏斗泡囊草，PHysochlaina infundibularis Kuang，茄科，多年生草本，高20-60cm，根圆锥状，肉质，茎单一或分枝，被白色长柔毛，叶互生，草质，心形、戟形，长5-9cm，宽4-9cm，叶柄长4-11cm。顶生伞房或聚伞花序；花萼筒状钟形；花冠漏斗状，黄色。蒴果近球形，被漏斗状的宿萼包围；种子肾形，淡黄色，花期3-4月，果期4-6月。产陕西秦岭中部到东部、河南西部和南部、山西南部，生于山谷或林下。提取莨菪烷类生物碱的资源植物，地上部分含莨菪碱，根含莨菪碱、东莨菪碱和山莨菪碱，漏斗泡囊草目前尚无人工栽培的研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是漏斗泡囊草悬浮细胞培养的繁殖方法，本发明方法所制备的漏斗泡囊草愈伤组织稳定、均一、分散性好，悬浮细胞生长良好、增殖速率快，为其药用资源的开发和利用提供技术基础。
为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：
取漏斗泡囊草的幼嫩叶片，干净纱布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水冲洗20min，超净工作台上0.2%氯化汞处理8min，流水冲洗5次，2mg/L泰乐菌素中浸泡10min，消毒处理过的叶片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度25℃，诱导出来的愈伤组织高温50℃热处理5min，接入培养基TR+ZT0.1-0.15μmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25-0.3g/L中，附加45g/L蔗糖进行悬浮细胞的培养，接种量为1:4，振幅4cm，震动频率120r/min，光照4500lx，光照时间13h/d，温度25℃，悬浮培养出来的愈伤组织放于液氮-196℃中保存。
采用本发明制备的漏斗泡囊草细胞增殖率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
取漏斗泡囊草的幼嫩叶片，干净纱布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水冲洗20min，超净工作台上0.2%氯化汞处理8min，流水冲洗5次，2mg/L泰乐菌素中浸泡10min，消毒处理过的叶片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度25℃，诱导出来的愈伤组织高温50℃热处理5min，接入培养基TR+ZT0.1μmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25g/L中，附加45g/L蔗糖进行悬浮细胞的培养，接种量为1:4，振幅4cm，震动频率120r/min，光照4500lx，光照时间13h/d，温度25℃，悬浮培养出来的愈伤组织放于液氮-196℃中保存，悬浮细胞增长率55%。
实施例2
取漏斗泡囊草的幼嫩叶片，干净纱布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水冲洗20min，超净工作台上0.2%氯化汞处理8min，流水冲洗5次，2mg/L泰乐菌素中浸泡10min，消毒处理过的叶片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度25℃，诱导出来的愈伤组织高温50℃热处理5min，接入培养基TR+ZT0.15μmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.3g/L中，附加45g/L蔗糖进行悬浮细胞的培养，接种量为1:4，振幅4cm，震动频率120r/min，光照4500lx，光照时间13h/d，温度25℃，悬浮培养出来的愈伤组织放于液氮-196℃中保存，悬浮细胞增长率60%。
实施例3
取漏斗泡囊草的幼嫩叶片，干净纱布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水冲洗20min，超净工作台上0.2%氯化汞处理8min，流水冲洗5次，2mg/L泰乐菌素中浸泡10min，消毒处理过的叶片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度25℃，诱导出来的愈伤组织高温50℃热处理5min，接入培养基TR+ZT0.15μmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25g/L中，附加45g/L蔗糖进行悬浮细胞的培养，接种量为1:4，振幅4cm，震动频率120r/min，光照4500lx，光照时间13h/d，温度25℃，悬浮培养出来的愈伤组织放于液氮-196℃中保存，悬浮细胞增长率62%。
Claims (2)
1. 一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：
（1）取漏斗泡囊草的幼嫩叶片，进行消毒处理；
（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L蔗糖，温度25℃；
（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织高温50℃热处理5min，接入培养基TR+ZT0.1-0.15μmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25-0.3g/L中，附加45g/L蔗糖进行悬浮细胞的培养，接种量为1:4，振幅4cm，震动频率120r/min，光照4500lx，光照时间13h/d，温度25℃，悬浮培养出来的愈伤组织放于液氮-196℃中保存。
2. 按照权利要求1所述的一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中所述漏斗泡囊草无菌叶片的获得为，取漏斗泡囊草叶片，干净纱布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水冲洗20min，超净工作台上0.2%氯化汞处理8min，流水冲洗5次，2mg/L泰乐菌素中浸泡10min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410540401.6A CN104221869A (zh) | 2014-10-14 | 2014-10-14 | 一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410540401.6A CN104221869A (zh) | 2014-10-14 | 2014-10-14 | 一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104221869A true CN104221869A (zh) | 2014-12-24 |
Family
ID=52211491
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410540401.6A Pending CN104221869A (zh) | 2014-10-14 | 2014-10-14 | 一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104221869A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104666595A (zh) * | 2015-02-04 | 2015-06-03 | 新疆医科大学 | 泡囊草抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法 |
| CN105766646A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-07-20 | 内蒙古自治区农牧业科学院 | 一种泡囊草的组织培养方法 |
-
2014
- 2014-10-14 CN CN201410540401.6A patent/CN104221869A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104666595A (zh) * | 2015-02-04 | 2015-06-03 | 新疆医科大学 | 泡囊草抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法 |
| CN105766646A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-07-20 | 内蒙古自治区农牧业科学院 | 一种泡囊草的组织培养方法 |
| CN105766646B (zh) * | 2016-03-31 | 2018-04-10 | 内蒙古自治区农牧业科学院 | 一种泡囊草的组织培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103814821A (zh) | 一种高效快速生产白芨种苗的方法 | |
| CN104106468B (zh) | 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN104145816A (zh) | 白芨组培育苗方法 | |
| CN106171978A (zh) | 一种滇黄精的组培快繁方法 | |
| CN103598101B (zh) | 一种兜唇石斛组培快速繁殖的方法 | |
| CN103999776A (zh) | 一种兰科植物快速繁殖培养基配方 | |
| CN105230484A (zh) | 一种黄精的快速繁殖方法 | |
| CN103190343A (zh) | 一种有机添加物对金线莲产业化快速繁殖关键技术 | |
| CN105494098B (zh) | 一种快速繁殖金铁锁种苗的方法 | |
| CN103548694A (zh) | 一种剑叶龙血树的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103999773B (zh) | 一种樟叶越桔的组织培养方法 | |
| CN105850747A (zh) | 一种多肉植物虹之玉的组织快速繁殖方法及其培养的虹之玉 | |
| CN104026007A (zh) | 一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法 | |
| CN104885932A (zh) | 一种毛棉杜鹃的组培快繁方法 | |
| CN104221871A (zh) | 一种越南槐组织培养的快速繁殖方法 | |
| CN104221869A (zh) | 一种漏斗泡囊草悬浮细胞培养的快速繁殖方法 | |
| CN106069756A (zh) | 一种白花虎眼万年青的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103766039B (zh) | 一种打破青天葵球茎休眠的方法 | |
| CN102783420A (zh) | 一种鱼腥草快速增殖的方法 | |
| CN106258995B (zh) | 一种草莓培养基的制备方法 | |
| CN106106144B (zh) | 一种铁皮石斛无性系快速繁育方法 | |
| CN104094747B (zh) | 一种油茶组培苗瓶外生根方法 | |
| CN104067936B (zh) | 一种促使青天葵球茎多长叶芽的方法 | |
| CN103858764B (zh) | 鹅不食草组培快繁培养基及一次成苗组培快繁方法 | |
| CN102301954B (zh) | 一种黑水缬草愈伤组织再生植株的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20141224 |