CN104212716B - 一种胶冻样类芽孢杆菌工业化保护剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，该保护剂由1％～3％的海藻糖、2％～3％的VC、10％～30％的甘油以及75％～85％的胶冻样类芽孢杆菌发酵液组成，以上百分比均为质量百分比。本发明的有益效果为：本产品组分简单，成本低廉，且适用于常温条件下保藏工业化生产的胶冻样类芽孢杆菌发酵液，延长菌种的保藏时间和保藏活性，另外操作方法简单、合理，便于大规模的生产，具有实用性和先进性特点。

Description

一种胶冻样类芽孢杆菌工业化保护剂
技术领域
本发明涉及芽孢杆菌发酵领域，尤其涉及一种适用于胶冻样类芽孢杆菌发酵液常温保藏的保护剂。
背景技术
胶冻样类芽孢杆菌的保藏方法常用的有斜面法、矿油保藏法、冷冻干燥法和液氮保藏法等。大多数的保藏方法均需要添加菌种保护剂来提高菌种的保藏效果，目前针对菌种保藏保护剂的研究较多，但是大多数保藏方法均需提供低温、干燥等保藏条件，不适用于菌种发酵生产企业发酵液的保藏。
发明内容
本发明的目的是提供一种适用于胶冻样类芽孢杆菌发酵液常温保藏的保护剂，以克服目前现有技术存在的上述不足。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现：
一种适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，该保护剂由1％～3％的海藻糖、2％～3％的VC、10％～30％的甘油以及75％～85％的胶冻样类芽孢杆菌发酵液组成，以上百分比均为质量百分比。
进一步的，所述该保护剂的制备方法包括以下步骤：
(1)制备胶冻样类芽孢杆菌发酵液，所述胶冻样类芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为30～60亿/mL；
(2)制备灭菌海藻糖：称取海藻糖500克，加入1000克去离子水，配置浓度为50％的海藻糖母液，在常温、压力为1.0MPa的条件下，母液经加压过滤板框设备，通过0.22μm的过滤膜过滤灭菌后得到灭菌海藻糖；
(3)制备灭菌甘油：用高温蒸汽灭菌锅将纯甘油在121℃、0.11MPa的条件下，灭菌30分钟后得到灭菌甘油；以及
(4)分别取质量百分比为1％～3％的海藻糖、2％～3％的VC、10％～30％的甘油以及75％～85％的胶冻样类芽孢杆菌发酵液均匀混合，然后放置阴凉处干燥保存。
本发明的有益效果为：本产品组分简单，成本低廉，且适用于常温条件下保藏工业化生产的胶冻样类芽孢杆菌发酵液，延长菌种的保藏时间和保藏活性，另外操作方法简单、合理，便于大规模的生产，具有实用性和先进性特点。
具体实施方式
本发明实施例所述的一种适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，该保护剂由1％～3％的海藻糖、2％～3％的VC、10％～30％的甘油以及75％～85％的胶冻样类芽孢杆菌发酵液组成，以上百分比均为质量百分比。
所述该保护剂的制备方法包括以下步骤：
(1)制备胶冻样类芽孢杆菌发酵液，所述胶冻样类芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为30～60亿/mL；
(2)制备灭菌海藻糖：称取海藻糖500克，加入1000克去离子水，配置浓度为50％的海藻糖母液，在常温、压力为1.0MPa的条件下，母液经加压过滤板框设备，通过0.22μm的过滤膜过滤灭菌后得到灭菌海藻糖；
(3)制备灭菌甘油：用高温蒸汽灭菌锅将纯甘油在121℃、0.11MPa的条件下，灭菌30分钟后得到灭菌甘油；以及
(4)分别取质量百分比为1％～3％的海藻糖、2％～3％的VC、10％～30％的甘油以及75％～85％的胶冻样类芽孢杆菌发酵液均匀混合，然后放置阴凉处干燥保存。
实施例1
(1)灭菌甘油制备：纯甘油121℃、0.11MPa灭菌30分钟；
(2)灭菌海藻糖制备：称取海藻糖500克，加去离子水1000克，配制浓度为50％的海藻糖母液，母液经1.0MPa压力下过022μm过滤膜灭菌。
(3)胶冻样类芽孢杆菌发酵液有效活菌数40亿/mL，总计50kg，添加灭菌甘油10kg，灭菌海藻糖母液3.0kg，Vc1.26kg，混合均匀，阴凉干燥保存，做3个重复处理。
上述发酵液在常温阴凉干燥保藏条件下于保藏3个月、6个月、9个月、12个月、18个月每个重复摇匀取样5mL，分别以无菌去离子水稀释到相应的平皿培养，测定其平均活菌数如下：
实施例2
(1)灭菌甘油制备：纯甘油121℃、0.11MPa灭菌30分钟；
(2)灭菌海藻糖制备：称取海藻糖500克，加去离子水1000克，配制浓度为50％的海藻糖母液，母液经1.0MPa压力下过022μm过滤膜灭菌；
(3)胶冻样类芽孢杆菌发酵液有效活菌数54亿/mL，总计100kg，添加灭菌甘油30kg，灭菌海藻糖母液3.5kg，Vc3.4kg，混合均匀，阴凉干燥保存，做3个重复处理。
上述发酵液在常温阴凉干燥保藏条件下于保藏3个月、6个月、9个月、12 个月、18个月每个重复摇匀取样5mL，分别以无菌去离子水稀释到相应的平皿培养，测定其平均活菌数如下：
实施例3
(1)灭菌甘油制备：纯甘油121℃、0.11MPa灭菌30分钟；
(2)灭菌海藻糖制备：称取海藻糖500克，加去离子水1000克，配制浓度为50％的海藻糖母液，母液经1.0MPa压力下过022μm过滤膜灭菌；
(3)胶冻样类芽孢杆菌发酵液有效活菌数35亿/mL，总计20kg，添加灭菌甘油6kg，灭菌海藻糖母液1.56kg，Vc0.52kg，混合均匀，阴凉干燥保存，做3个重复处理。
上述发酵液在常温阴凉干燥保藏条件下于保藏3个月、6个月、9个月、12个月、18个月每个重复摇匀取样5mL，分别以无菌去离子水稀释到相应的平皿培养，测定其平均活菌数如下：
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，其特征在于：每64.26kg该保护剂由3.0kg的海藻糖、1.26kg的Vc 、10kg的甘油以及50kg的胶冻样类芽孢杆菌发酵液组成。
2.根据权利要求1所述的适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，其特征在于，所述该保护剂的制备方法包括以下步骤：
(1)制备胶冻样类芽孢杆菌发酵液；
(2)制备灭菌海藻糖；
(3)制备灭菌甘油；以及
(4)每64.26kg分别取3.0kg的海藻糖、1.26kg的Vc 、10kg的甘油以及50kg的胶冻样类芽孢杆菌发酵液均匀混合，然后放置阴凉处干燥保存。
3.根据权利要求2所述的适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，其特征在于，步骤(1)中，所述胶冻样类芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为30-60亿/mL。
4.根据权利要求2所述的适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，其特征在于，步骤(2)中，所述灭菌海藻糖的制备包括：称取海藻糖500克，加入1000克去离子水，配置浓度为50％的海藻糖母液，在常温、压力为1.0MPa的条件下，母液经加压过滤板框设备，通过0.22μm的过滤膜过滤灭菌后得到灭菌海藻糖。
5.根据权利要求2所述的适用于胶冻样类芽孢杆菌常温保藏保护剂，其特征在于，步骤(3)中，所述灭菌甘油的制备包括：用高温蒸汽灭菌锅将纯甘油在121℃、0.11MPa的条件下，灭菌30分钟后得到灭菌甘油。
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