CN104207991A - 用于刺激magp-1以改善皮肤外观的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于处理、预防和改善皮肤情况和外观美感，特别是处理、预防、改善、减轻和/或消除皮肤细纹和/或皱纹的方法，通过施用天然化合物或提取物之一或其组合来进行，所述天然化合物或提取物刺激MAGP-1表达并且改善老化和/或光损伤皮肤的外观。将本发明的组合物局部施用在皮肤上，或通过定向方式递送至有此需要的部位，其用量是可有效改善皮肤情况和外观美感的量。

Description

用于刺激MAGP-1以改善皮肤外观的组合物和方法

本申请是申请号为201180031240.2(PCT/US2011/040157)、申请日为2011年6月13日、发明名称为“用于刺激MAGP-1以改善皮肤外观的组合物和方法”的中国专利申请的分案申请。

相关申请

本国际申请要求2010年6月30日提交的美国临时专利申请顺序号US61/360,083的优先权，将该文献完整地引入本文参考。

技术领域

本发明一般性地涉及改善人皮肤外观美感和/或改善老化和/或光损伤皮肤外观的方法，通过将化合物施用于皮肤来进行，所述化合物刺激胞外基质蛋白MAGP-1的表达并且对皮肤提供有益性。

背景技术

在化妆品工业中对研发可以局部施用于皮肤以改善皮肤情况和外观的产品的需求正在增加。消费者关注的是减轻或延缓自然老化或激素老化皮肤和因环境应激导致的皮肤老化的皮肤学征兆，例如细纹、皱纹、松垂的皮肤以及其他因表皮和真皮层中细胞生长、增殖和功能性进行性丧失导致的情况。在老化过程中，皮肤的表象，即皮肤的颜色和外观因老化和/或暴露于环境应激例如日光下而缓慢变差。

因此，在化妆品工业中仍然存在对延缓或对抗皮肤的老化效应的产品的普遍需求，并且更具体地说是对产生这类效应而无不需要的副作用的产品的普遍需求。特别地，对具有抗老化和皮肤肌理有益性的使用天然植物材料作为活性成分的局部施用的化妆品组合物仍然存在需求。

通常将衍生或提取自植物和植物种子的活性组分或成分用于各种药用、治疗和化妆品目的。这种活性成分可以获自完整的植物或植物的不同部位，例如种子、针叶、叶、花、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体和分生组织。将活性组分或成分以不同形式掺入组合物。这种形式包括纯或半纯的成分、固体或液体的提取物或衍生物或固体天然植物材料。可以将植物材料以各种亚形式掺入组合物，例如完整、切碎、磨碎或破碎的形式，否则就是为掺入组合物的改变的物理形式。

MAGP-1(微纤维缔合性糖蛋白1)是胞外基质(ECM)中小的富含甘氨酸的酸性蛋白。MAGP-1是微纤维缔合性糖蛋白家族蛋白质中的30-33kDa成员。发现它是皮肤中微纤维和弹性纤维的关键成分。MAGP-1与其他微纤维蛋白例如原纤蛋白(fibrillin)形成复合物。基于动物研究，除为皮肤弹性纤维形成提供结构支持外，MAGP-1还是血管完整性、伤口愈合和适合的身体脂肪沉积所必不可少的，可能通过调节TGF-β信号传导进行。MAGP-1显然介导Notch胞外域释放并且还能够结合IV型胶原蛋白且促使弹性纤维形成。

本发明鉴定了发现在胞外基质蛋白MAGP-1模拟表达中具有活性的大量化合物和/或植物材料和提取物。在优选是提取物形式的植物材料中有木田菁、五月茶、盒果藤、龙船花、尖齿臭茉莉、臭魔芋、Tiliacoratriandra和桂叶山牵牛。适合的化合物是四肽赖氨酸-苏氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(Lys-Thr-Phe-Lys)(本文的KTFK)、硫代二丙酸(TDPA)及其低级烷基一-和二酯类、具有如下结构的取代的2-(2-苄基-1-苯并咪唑基)乙酰胺类似物：

和具有如下结构的N-取代的磺酰氧基苄胺：

预先并不了解一些具有MAGP-1活性的植物种类即五月茶、盒果藤、龙船花和尖齿臭茉莉(包括这些植物种类的提取物)可局部施用于皮肤以改善皮肤外观美感。类似地，预先并不了解上述公开的取代的2-(2-苄基-1-苯并咪唑基)乙酰胺类似物和如上述所公开的N-取代的磺酰氧基苄胺可局部施用于皮肤以改善皮肤外观美感。

五月茶(Antidesma bunius)是大戟科中的果树种类。它天然产自东南亚、菲律宾和北澳大利亚。其常见的菲律宾名称和其他名称包括bignay、bugnay或bignai和无核小葡萄干树。这是可变植物，其可以是矮和灌木状或高和竖直的，接近30米高。它具有约达20厘米长和7厘米宽的大卵形皮质常绿叶。在亚洲，其叶可促使发汗并且用于治疗蛇咬伤(Morton,J.1987.Bignay.p.210–212.:Fruits of warmclimates.Julia F.Morton,Miami,FL.)。

盒果藤(Operculina turpethum)是牵牛科中的植物(同义词印度牵牛子，Ipomoea turpethum)且通常称作印度牵牛、fue vao和St.Thomaslidpod。它是文献中举出的具有抗肝病活性的主张的许多植物之一。Vasudesan,N,V.,Indian Medicinal Plants,Vol.IV,Orient LongmanLtd,Chennai,1995,172。它还具有驱肠虫、祛痰、解热、抗炎和催泻特性。文献同上。

龙船花(Ixora chinensis)是相当小的茂密灌木，通常仅5-10英尺高。存在非常小的矮小的植物变种。仅当几英寸高时龙船花就开花。通常用作树篱或小花园植物。该植物主要作为观赏植物生长，而认为其花具有一些药物用途，包括治疗高血压和治疗风湿病、脓肿、挫伤和伤口。该植物天然生长在印度和斯里兰卡。

尖齿臭茉莉(Clerodendron lindleyi)是灌木、藤本植物和小树，通常生长至1-12m高，其具有对生或轮生叶。该属天然生长在世界热带和温带地区，其中大部分种类出现在热带非洲和南亚，但少量出现在热带美洲和北大洋洲，且少量从北部扩展至东亚的温带区域。Clerodendrum来自希腊，含义是"运气树"。Dendros含义是树。运气是指来自该属的一些植物的药用价值存在未知的可能性。

木田菁(Sesbania grandiflora)(也称作agati，同义词大花田菁，Aeschynomene grandiflora)或巨峰鸟树/scarlet wisteria是田菁属中的小树。它是具有3－5m典型成年高度的正在快速生长的树。叶是规则和圆形的，并且花是白色和大的，极具特征性。果实看起来是扁平、长和薄绿色的豆。树木在完全接触日光下茂盛并且极具霜冻敏感性。认为它来源于印度或东南亚并且主要生长在世界的热和潮湿的热带区域。认为树皮、叶、树胶和花具有药用。收敛性的树皮用于治疗天花和其他发疹热(James A.Duke.1983.Handbook of Energy Crops.未发表)。木田菁先前公开在美国专利US7,618,662中，将该文献的公开内容引入本文参考。

桂叶山牵牛(Thunbergia laurifolia)或蓝色喇叭形攀爬植物是侵袭性种类，它当作观赏植物使用。这种植物在巴西的Cerrado植物中发现。在马来西亚，取来自桂叶山牵牛的碎叶的汁液用于月经过多，将其放入耳用于耳聋并且用于泥敷伤口和疖(Burkill,I.H.(1966).“ADictionary of the Economic Products of the Malay Peninsula.VolumeII(I–Z)”.Ministry of Agriculture and Cooperatives,KualaLumpur.)。在泰国，叶用作解热药和去毒的解毒药(Kanchanapoom,T.等人(2002).“Iridoid glucosides from Thunbergia laurifolia”.Phytochemistry 60:769–771)。

KTFK是合成的四肽赖氨酸-苏氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(Lys-Thr-Phe-Lys)，已知它在胶原蛋白和纤连蛋白合成中具有活性。KTFK预先公开在美国专利申请公开号US2004/0126344中，将该文献的公开内容引入本文参考。

臭魔芋在马达加斯加到亚洲、波利尼西亚和北澳大利亚的热带地区发现。根是驱风药、补品、健胃药和强壮剂。Chopra.R.N.,Nayar.S.L.和Chopra.I.C.Glossary of Indian Medicinal Plants(包括增刊).Council of Scientific and Industrial Research,New Delhi.1986；Medicinal Plants of Nepal Dept.of Medicinal Plants.Nepal.1993。它是干燥的并且用于治疗痔和痢疾。文献同上。新鲜的根用作辛辣刺激剂和祛痰药，它大多在印度用于治疗急性风湿，文献同上。臭魔芋先前公开在美国专利US7,618,862中，将该文献的公开内容引入本文参考。

硫代二丙酸(TDPA)是白色结晶固体，其具有轻度的特异气味并且显示一些抗微生物和抗氧化剂活性(WHO/Food Add./24.65FAONutrition Meetings Report Series No.38A)。硫代二丙酸及其酯类先前公开在美国专利申请公开号US2004/0126344中，将该文献的公开内容引入本文参考。

毛瓣无患子(Sapindus rarak)是无患子属的组成部分，其包含荔枝科无患子属中约5－12个灌木和小树的种类，天然生长在旧大陆和新大陆中适中的温带至热带区域。毛瓣无患子提取物显示止痛作用。毛瓣无患子先前公开在美国专利US 7,514,092中，将该文献的公开内容引入本文参考。

Tiliacora科的Tiliacora triandra Diels，也称作Yanang，是天然生长在东南亚大陆的有花植物种类，且特别在泰国东北部和老挝用于烹饪。它是攀缘植物，具有大多单一、平滑、椭圆形、深绿色叶和淡黄色花。在传统的东南亚药物中，Tiliacora triandra已经用作退热、酒精中毒、炎症和细菌/真菌感染的草药。例如，Tiliacora triandraDiels抗恶性疟原虫(导致人类疟疾)的应用公开在Pavanand等人的Phytother.Res.,3,215-217(1989)中。Tiliacora triandra是与本申请同时提交的单独申请的主题。

用于治疗、预防、减轻、抑制和/或改善因表皮和真皮皮肤层进行性退化导致的老化皮肤病征兆(包括环境应激)的安全、有效和新的组合物成分可以有利地用于治疗制剂和皮肤产品。如本文所述，本文提供了用于处理皱纹等以及用于个人皮肤护理产品的新的和有益方法和组合物及其作用方式。

发明内容

本发明的一个目的在于提供具有化合物、特别是天然植物材料、其掺合物或来源于其中的成分的局部用组合物，其用量足以改善人皮肤外观美感和预防、改善和/或减轻自然老化或激素老化或光老化皮肤的皮肤学征兆，例如细线、皱纹、松垂皮肤和其他因表皮和真皮层中细胞生长、增殖和功能性的进行性退化导致的情况，其中植物材料、其掺合物或来源于其中的成分在化妆品、皮肤学可接受的媒介物、载体或稀释剂中。

本发明的另一个目的在于提供适合于局部施用于人皮肤的组合物，其具有一种或多种刺激MAGP-1表达的MAGP-1活性剂，包含：(i)植物材料，尤其是其提取物，该植物材料选自五月茶、盒果藤、龙船花和尖齿臭茉莉及其混合物；和(ii)选自2-(2-苄基-1-苯并咪唑基)乙酰胺类似物和N-取代的磺酰氧基苄胺的化合物及其组合/混合物。

本发明的另一个目的在于提供将组合物局部施用于人皮肤的方法，该组合物具有化合物，特别是天然植物材料，其掺合物，或来源于其中的成分，并且刺激MAGP-1表达。

本说明书的另一个目的在于提供局部用组合物，其包含两种或多种成分，其中至少一个第一种成分选自五月茶、盒果藤、龙船花、尖齿臭茉莉和N-取代的磺酰氧基苄胺，且至少一个第二种成分选自木田菁、臭魔芋、毛瓣无患子、Tiliacora triandra、桂叶山牵牛、四肽赖氨酸-苏氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(KTFK)和硫代二丙酸(TDPA)及其酯类，其用量有效地治疗、预防、控制、改善、抑制和/或减轻自然老化或激素老化或光老化皮肤的皮肤学征兆，例如细纹、皱纹、松垂的皮肤以及其他因表皮和真皮层中细胞生长、增殖和功能性的进行性退化导致的情况。

本说明书的另一个目的在于提供改善皮肤外观美感的方法，包括处理皮肤中的老化效应，通过将本说明书的组合物局部施用于皮肤来进行。

本说明书另外的目的在于提供用于鉴定刺激MAGP-1蛋白质表达的化合物的筛选方法和提供使用这种筛选方法鉴定的活性成分的组合物。

本发明的其他目的、特征和优点在阅读详细描述时将会得到更好的理解。

根据本发明的上述和其他目的，令人意外地发现皮肤中MAGP-1的表达通过增加弹性、绷紧毛孔、改善血管完整性和减少眼下部的暗圈和减少整体的细线、皱纹和下垂改善了老化或光损伤皮肤的外观。

附图说明

图1示例避光的和光暴露的年轻受试者(18-25岁)和老年受试者(40-65岁)真皮中的MAGP-1蛋白质表达。

图2示例避光的和光暴露的年轻受试者(18-25岁)和老年受试者(40-65岁)毛囊和毛孔周围的MAGP-1表达。

发明详述

除非另有指定，否则本文所用的术语欲以具有其通常的含义。

本说明书提供了改善人皮肤外观美感的新的活性剂和新的方法，通过局部施用新近发现的有效处理老化征兆和与皮肤的皮肤学老化相关的后果的组合物来进行，所述的老化征兆和与皮肤的皮肤学老化相关的后果例如细纹、皱纹、松垂的皮肤以及其他因老化(包括自然老化或激素老化和/或光老化)导致的情况，以改善皮肤的外观美感。应理解，自然老化代表皮肤中与老化和其他身体器官中的退化性改变平行发生的结构、功能和代谢改变，而光老化是单独的过程且主要涉及因暴露于环境(例如日光)中导致的对皮肤中胶原蛋白和弹性纤维的损害。可以通过将这些组合物局部地、基于规律性地和持续性地(例如基于每日)施用于皮肤上改善皮肤外观美感。

正如图1和2中所示和实施例中更详细描述的，发现皮肤组织中的MAGP-1随年龄和光暴露而改变。因此，老化皮肤显示与原纤蛋白和其他微纤维蛋白形成的MAGP-1复合物的数量减少，同时伴有皮肤弹性和健康皮肤的大量其他特性缺失。提供了包含用于增加MAGP-1表达的一种或多种活性剂的本发明组合物，其用于减少、减轻、改善皮肤老化的有害作用，并且有助于恢复皮肤的更年轻外观。

不希望受到理论约束，本文所述的化合物和天然植物材料和提取物(下文称作MAGP-1活性剂)刺激皮肤中MAGP-1表达并且改善老化或光损伤皮肤的外观，通过增加弹性、紧固毛孔、改善血管完整性、减少眼部下暗圈和减少整体的细线、皱纹和皮肤松垂来实现。认为MAGP-1表达与微纤维蛋白(例如原纤蛋白)形成复合物。原纤蛋白是糖蛋白，其是形成在结缔组织中发现的弹性纤维所必不可少的。原纤蛋白由成纤维细胞分泌入胞外基质并且掺入不溶性微纤维蛋白，它们显然提供了弹性蛋白的沉积平台，弹性蛋白是结缔组织中的蛋白质，它是弹性的并且使得身体内的许多组织在拉张或收缩后恢复其形状。

本说明书提供了新的组合物及其使用方法，新近发现它们有效地处理皮肤老化征兆和与皮肤的皮肤学老化(包括自然老化或激素老化和/或光老化)相关的后果，通过影响一种或多种如下情况进行：增加弹性、减少细纹、皱纹、松垂的皮肤、减少眼部下暗黑/擦伤和脂肪袋、修整/减少脂肪垫效应和改善肤色、提供改善的光泽和健康光泽和其他情况。

因MAGP-1刺激增加形成微纤维蛋白例如原纤蛋白，其由成纤维细胞分泌入胞外基质，所以本发明的另一个实施方案提供了包含本发明MAGP-1活性剂与植物或化合物这样对增加成纤维细胞增殖具有活性的材料的组合物。这种组合增加了胶原蛋白产生；提供了角化细胞之间的锚定和粘着增加；促进了表皮和真皮中的细胞-细胞粘着；并且强化了真皮表皮接合部。伴随地，本文通过一种或多种皮肤坚韧度、皮肤澄清度、皮肤柔软度或皮肤厚度的增加改善了老化皮肤的外观美感。

本发明还提供了将组合物局部施用于皮肤的方法，其通过刺激胞外蛋白MAGP-1表达改善了皮肤情况和外观。

本发明的方法掺入了一种MAGP-1活性剂或其组合，其包含选自如下的化合物和/或植物提取物：木田菁、五月茶、盒果藤、龙船花、尖齿臭茉莉、四肽赖氨酸-苏氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(KTFK)、臭魔芋、硫代二丙酸(TDPA)及其1－6个碳的一酯类和二酯类、毛瓣无患子、Tiliacora triandra、桂叶山牵牛、N-取代的磺酰氧基苄胺，所述的N-取代的磺酰氧基苄胺具有结构式I，即甲磺酸4-((N-异丁基苯基磺酰氨基)甲基)苯酯(CAS 853758-16-4)：

和具有结构式II的取代的2-(2-苄基-1-苯并咪唑基)乙酰胺类似物，即2-{2-[(3-甲基苯基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-1-基}1-(吗啉-4-基)乙-1-酮(CAS 1043743-29-8)：

化合物I和II购自AMRI Hungary,Zahony u 7,H-1031Budapest,Hungary。

应理解，本文所用的术语“处理”包括减少、改善、改进、缓解和/或消除老化和/或环境应激的皮肤学效应。本发明的组合物和方法适用于处理身体大量区域中的皮肤美容和皮肤学情况，包括、但不限于面部、前额、唇、颈部、臂、手、腿、膝、脚、胸、背部、腹股沟、臀部等。在一个优选的实施方案中，将所述组合物施用于面部。

本说明书的一个实施方案涉及包含一种新的MAGP-1活性剂或其组合的新的组合物，所述的活性剂选自五月茶、结构I的N-取代的磺酰氧基苄胺(上文)、结构II的取代的2-(2-苄基-1-苯并咪唑基)乙酰胺类似物(上文)、盒果藤、龙船花和尖齿臭茉莉，且该组合物还包含化妆品、皮肤学或药理学可接受的媒介物；本说明书还涉及通过对有处理需要的皮肤局部施用所述新的局部用组合物改善皮肤的方法。

在另一个实施方案中，本发明的组合物联合包含一种或多种新的上文举出的MAGP-1活性剂与一种或多种其他MAGP-1活性剂，以及化妆品、皮肤学或药理学可接受的媒介物；还涉及通过对有处理需要的皮肤局部施用所述新的局部用组合物改善皮肤的方法。在所述的一种或多种其他MAGP-1活性剂中，可以列举出木田菁、KTFK、臭魔芋、硫代二丙酸(TDPA)及其C₁－C₆烷基一-和二酯类、Tiliacoratriandra和桂叶山牵牛。

皮肤的组织学研究显示当老化发生时，皮肤经历与其他身体器官中的老化和退化性改变平行发生的结构、功能和代谢改变。尽管实序年龄和/或激素老化起显著作用，但是存在的大量皱纹也高度依赖于个体生活过程中暴露于环境应激中的量，例如在来自过度暴露紫外线(UV)日光的氧化性损伤的个人生活机会的反复暴露于日光中超过10、20、30或更多年。尽管存在每年递增约1％老化的男性皮肤逐步变薄，但是大部分女性皮肤的厚度仍然令人意外地保持恒定，直到绝经为止，此后，随年龄的递增显著且有时引人注目地变薄，在老龄女性中促使了对处理的需求，这种处理增加皮肤胶原蛋白的含量且由此改善皮肤的坚韧度、厚度和清楚度。

因此，从这一观点来看，年轻皮肤的成功恢复必须解决各种关键问题，包括：成纤维细胞和角化细胞的活力、表皮和真皮中细胞-细胞粘着、细胞对表皮的滋养、角化细胞之间的细胞-细胞锚定和粘着、真皮与表皮之间的沟通、胶原酶过度产生、胶原蛋白替代和皮肤的机械性能。解决这些关键问题的化妆品成分用于本说明书的局部用组合物。

局部用组合物

天然植物材料可以是任意的形式，包括、但不限于完整植物、干燥植物、磨碎的植物或其部位，包括、但不限于种子、针叶、叶、根、树皮、球果、茎、根茎、愈合组织细胞、原生质体、花和分生组织或在天然植物材料和/或植物的部分中发现或分离自它们的成分和/或组分或其任意的组合。在一个实施方案中，天然植物材料是来源于天然植物材料的选择部分的提取物形式。典型地，植物材料获自完整植物或植物叶。应理解"天然植物材料"还包括来源于天然植物材料的组分、成分、组成成分或提取物。

就Tiliacora triandra而言，植物提取物优选获自植物的藤。就龙船花和木田菁而言，提取物优选获自植物的花。就五月茶、桂叶山牵牛和尖齿臭茉莉而言，提取物优选获自叶。就盒果藤而言，提取物优选获自植物的地上部分，即不包括根的完整植物。

就本发明关注的Tiliacora trianda组合物而言，本发明关注这样的实施方案，其不包括过氧化氢、碘、tarrow根和tarrow根与碘的混合物。

当局部施用，优选以每日的方式施用时，包含这些植物的组合物是有效的。

所述组合物具有的MAGP-1活性剂浓度占该组合物总重的约0.0001wt％－约90wt％、约0.001wt％－约25wt％、约0.01wt％－约10wt％、约0.05wt％－约1wt％。就植物提取物而言，上述量是指植物提取物的“活性量”。术语“活性量”或“干重”以同义词方式使用并且指除去溶剂和/或其他稀释剂后的植物/提取物的量。普通的本领域技术人员能够根据期望的具体应用或效应调整所用的提取物的量。

本说明书的MAGP-1活性剂优选包含在化妆品或皮肤学可接受的媒介物、介质、稀释剂或载体中。在一个包括局部应用的实施方案中，本说明书的组合物包含与人皮肤相容的介质(媒介物、稀释剂或载体)。可以将这些组合物配制成基于水、醇或水/醇的溶液、软膏、化妆水、凝胶、油包水型、水包油型、具有霜剂或凝胶外观的水-油-水三重乳剂、微乳或气雾剂。此外，这些组合物可以是包含如上所述的离子和/或非离子型脂质的囊泡分散体形式。根据本领域使用的常规知识和技术配制适合于这种组合物的剂型。

MAGP-1活性剂的使用方法

正如从业者所理解的，例如，可以通过局部施用如本文所述的化妆品组合物，根据给予这种组合物的方案进行美容处理，这种处理包括含有天然植物材料(包括本发明的提取物、成分和/或组分)的组合物。优选将局部化妆品组合物每日施用一次或两次(例如早晨和晚间)，持续至少1周期限，但可以包括约2、4、8或12周期限。消费者希望在延长的时间阶段持续使用该组合物。优选将化妆品组合物施用于面部和颈部，但可以施用于有美容改善需要的皮肤的任何区域，其中化妆品组合物保留在受侵害的皮肤区域，优选不除去或从皮肤上冲洗掉。该方法将霜剂、化妆水、凝胶、面膜、浆液、软膏、贴剂、粉底、粉底除去乳、防晒霜组合物等形式的组合物/产品施用于皮肤。优选化妆品组合物是局部保留制剂，其中还关注自我施用形式的喷雾剂。

在本发明的一个具体的实施方案中，具有本发明MAGP-1活性剂的局部用组合物，包括包含两种或多种这种活性剂的组合物和包含一种或多种如上述所定义的新活性剂的组合物，单独地或与一种或多种其他活性剂(包括来源于其中的成分或提取物)的组合用于改善老化、特别是发育成熟或成熟皮肤影响的皮肤情况和外观美感，通过下列方法的任意一种进行：减轻自然老化、光老化、激素老化和/或光化性老化的皮肤学征兆；预防和/或减轻细纹和/或皱纹的外观；减轻面部细纹和皱纹、面颊、前额上的面部皱纹、两眼之间的垂直皱纹、眼上方的水平皱纹和口周围的皱纹、木偶线且特别是深度皱纹或皱褶的引人注目性；预防、减轻和/或减少细纹和/或皱纹的外观和/或深度；改善眼眶下细纹和/或眼眶周围细纹的外观；减轻鱼尾纹外观；使皮肤，特别是老化皮肤恢复年轻和/或恢复活力；减轻皮肤脆性；预防和/或逆转糖胺聚糖类和/或胶原蛋白丧失；减轻皮肤脆弱性；改善雌激素失衡效应；预防和/或皮肤萎缩；预防、减轻和/或处理色素沉着过度；将皮肤变色减轻到最低限度；改善肤色、光亮度、透明度和/或紧绷度；预防、减轻和/或改善皮肤松垂；改善皮肤坚韧度、丰满度、柔韧性和/或柔软性；改善前胶原蛋白和/或胶原蛋白产生；改善皮肤肌理和/或促进皮肤肌理恢复原状；改善皮肤屏障修复和/或功能；改善皮肤轮廓的外观；恢复皮肤光泽和/或亮度；将疲劳和/或紧张状态的皮肤学征兆减轻到最低限度；抵抗环境应激；补充因老化和/或绝经而减少的皮肤中的组分；改善皮肤细胞间沟通；增加细胞增殖和/或繁殖；增加因老化和/或绝经而减少的皮肤细胞代谢；延缓细胞老化；改善给皮肤上增加湿度；强化皮肤厚度；增加皮肤的弹性和/或回弹力；促进表皮剥脱；改善微循环；减少和/或防止脂肪团形成；及其任意的组合。

所公开的局部用组合物的活性成分还用于处理、预防、阻止、改善、减轻或减少老化侵害的皮肤医学和/或皮肤学情况。本文所用的这类情况通常包括，但不限于皮肤学老化(自然老化、激素老化和/或光化性老化)、皮炎、皮肤和毛发脆性、多毛症、酒渣鼻、皮肤瑕疵、敏感性皮肤、色素沉着过度或色素沉着不足、皮肤变薄、粗糙、角化病、皮肤萎缩、皱纹、细纹、超常增生、纤维化及其任意的组合。该局部用组合物的活性成分还可以用于增强皮肤的一般健康状态、活力、情况和外观。

可以通过例如使用例如Northern印迹技术和聚合酶链反应(PCR)这样的技术例如本领域实施的"实时"PCR和逆转录PCR(RT PCR)测定培养细胞中的RNA水平测定基因表达(例如，参见Sambrook等人,1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,New York；R.Higuchi等人,1992,Biotechnology,10:413-417；R.Higuchi等人,1993,Biotechnology,11:1026-1030；E.S.Kawasaki,1990,"Amplification ofRNA",:RNA Protocols:A Guide to Methods&Applications,M.A.Innis等人,Academic Press,San Diego,CA,pp.21-27；将全部文献引入本文参考)。此外，可以使用基因(cDNA)阵列(包含膜、玻璃、塑料或硅支持物材料等的微阵列或核酸基因芯片阵列)、基因表达的系列分析(SAGE)(例如V.E.Velculescu等人,Science,270(5235):484-487,1995；A.La等人,Cancer Res.,59(21):5403-5407,1999所述；将两篇文献引入本文参考)或差异显示技术评价皮肤、皮肤替代物或培养细胞中的基因表达，所述的技术均是本领域公知和使用的。

局部用组合物使用与皮肤学老化征兆(例如细纹、皱纹和松垂的皮肤)相关的基因影响的植物材料/活性成分作为可以改善受侵害皮肤的情况和外观的化合物的生物标记。如果这种核酸/蛋白质生物标记的表达水平在有天然植物材料或来源于其中的活性成分存在下改变或升高，则该天然植物材料可以用于改善皮肤的情况和外观的本发明局部用组合物。这种表达水平测定法包括各种测定已经接触一种或多种测试物质的细胞中的核酸水平的方法。适合的方法包括检测和评价例如DNA、RNA或mRNA的基因活化或表达。作为非限制性实例，聚合酶链反应(PCR)测定法(例如RT-PCR)、Northern印迹、原位杂交和本领域中已知并实施的其他测定法可以用于对检测耐受特定处理的细胞中的RNA定量(例如，参见J.O'Connell,2002,RT-PCR Protocols,Humana Press,Totowa,NJ；R.Rapley and D.L.Manning,1998,RNAIsolation and Characterization Protocols,Humana Press；R.Rapley,2000,Nucleic Acid Protocols Handbook,Humana Press；将所有这些文献引入本文参考)。根据这种测定法，如果在有一种或多种测试物质存在下至少一种核酸生物标记的水平升高，则它可以预示所述的物质可以改善皮肤学老化征兆。然后这些物质或天然植物材料可以用于局部用组合物，优选将其每日施用于皮肤，以便处理、预防、改善和/或减少皮肤学老化征兆，尤其是细纹、皱纹和松垂的皮肤，由此改善皮肤的情况和外观美感。

在另一个实施方案中，本文所用的植物材料还包括“合成”提取物，即组合在一起以便基本上模拟天然来源的植物提取物的组成和/或活性的已知植物材料成分和/或组分的各种组合。这种合成提取物包括在术语“植物提取物”中。合成提取物具有与植物共同的两种或多种、三种或多种、或四种或多种活性成分。最优选合成提取物具有基本上与天然提取物相同数量的活性成分。合成提取物与植物或天然提取物之间的活性成分的数量关联的对应性也可以描述为“共同性百分比”。优选合成提取物具有与植物或天然提取物化学组成约50％或50％以上的共同性。换句话说，合成提取物具有约50％或50％以上的在植物或天然提取物中发现的活性成分。更优选合成提取物的化学组成可以与植物或天然提取物的化学组成具有约70％或70％以上的共同性。最佳地，合成提取物具有与植物或天然提取物的化学组成约90％或90％以上的共同性。

就用于本说明书的组合物而言，植物提取物或成分和/或活性成分优选直接来源于植物。所述的成分可以为纯的形式、半纯的形式或不纯的形式。在一个实施方案中，所述的成分可以是使用有机溶剂提取得到的提取物形式。

使用有机溶剂提取的方法是本领域公知的并且可以根据本发明使用。简单地说，一种有机溶剂提取方法包括使用有机溶剂洗涤和提取植物材料。有机溶剂的非限制性实例包括甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、氯仿、己烷、二甲苯和石油醚。本领域众所周知的方法可以用于有机溶剂提取。

有机溶剂提取包括从含有所需成分的植物中采集原料，例如种子、针叶、叶、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体、器官和器官系统以及分生组织。将这些植物材料研磨成小颗粒大小且然后用可测量的装料机通过原料入口放入提取器。用推进器将植物原料推入提取器并且使植物原料缓慢向前运动。可以将有机溶剂(例如乙醇)通过废物排出口上部的溶剂入口加入到提取器中。由于重力和平衡的差异，溶剂流向原料入口，浸透原料并且从溶剂入口对侧流出。由于植物材料和溶剂彼此沿相反方向运动，所以植物材料被恒定浸入含有低浓度提取物的溶液中。作为平衡的结果，可以通过对低浓度溶液连续提取植物材料获得高收率的植物成分。

采用约1-8小时作为典型的用于取出植物成分的提取时间是合适的，更优选为约2-6小时，最优选约3-5小时。提取温度约为30℃-90℃，约40℃-70℃，约50℃-60℃。然后精细过滤收集的提取物以除去碎片并且可以将其直接使用或例如通过蒸馏溶剂或通过其它常规加工进行浓缩，还可以将所述的提取物制成干粉。

类似地，水-有机溶剂提取包括最初从含有所需生物碱的植物中采集原料，例如植物的种子、针叶、叶、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体、器官和器官系统以及分生组织，将它们研磨成小颗粒大小。将研磨的植物材料浸入酸性或碱性的水溶液中，这取决于所需提取物在酸性或碱性条件下的溶解度和稳定性。就在酸性条件下提取而言，将例如盐酸或硫酸这类酸加入到水中，例如浓度约3％(w/v)。就在碱性条件下提取而言，将例如氢氧化钠或碳酸钠这类碱加入到水中。提取时间和提取温度典型地与上述有机溶剂提取方法中使用的提取时间和提取温度类似。

然后收集提取物并且进行精细过滤以便除去碎片。根据收集的提取物的酸度或碱度的不同，可以将碱性剂(例如氨)或酸化剂(例如硫酸)加入到提取物中以便通过调节pH中和溶液。可以直接使用、浓缩或干燥含水提取物。或者，然后可以将有机溶剂加入到中和的溶液中以便将提取物活性成分从水相转移到有机相中。这种有机溶剂的非限制性实例包括，但不限于乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇、己醇和二甲苯。可以直接使用、作为浓缩物使用或干燥包含溶于有机溶剂的转移的提取物活性成分的提取物。

还可以通过用水、乙醇或其混合物提取植物材料得到提取物。水醇溶剂系统可以包含约10％体积－约90％体积的乙醇和约10％体积－约90％体积的水。更典型地，该溶剂系统包含约40％体积－约90％体积的乙醇和约10％体积－约60％体积的水。

可以共同混合和提取含有不同成分的不同植物。这种混合提取方法可以优选用于提取那些含有在用于提取的溶剂(例如乙醇)中具有相似溶解度的成分的植物。可以浓缩提取物的混合物并且将其贮存在适合的溶剂中。

可以将提取物与生理学可接受的溶剂混合作为浓缩物使用，其中通过蒸发或其他适合的物理方法除去部分溶剂或其他稀释剂，或优选可以除去溶剂以提供干燥的提取物。优选通过过滤、离心或其他适合的方法从提取物中取出固体。可以通过冻干、喷雾干燥、颗粒化或其他适合的方法进行干燥。喷雾干燥可以通过合并提取液与填充剂(例如麦芽糖糊精)、然后进行喷雾干燥进行。

适合的提取方法公开在PCT公开号WO03/079816(描述具有高含量番茄红素的番茄提取物的制备方法)、WO04/014404(描述狭叶紫锥花提取物的制备方法)和WO04/014958(描述提取狭叶紫锥花根的多糖)中，将全部文献完整地引入本文参考。

媒介物和组合物

根据本说明书，包含MAGP-1活性成分的组合物还可以包含抗氧化剂、消炎剂、防晒剂、美容剂，包括化妆品、抗老化制剂，例如用于细线和/或皱纹的霜剂、局部用制剂、皮肤渗透增强剂、喷雾剂等。根据本说明书，还可以将包含植物成分和另外的成分的这种组合物配制成各种产品形式。优选可以将组合物制备成特别用于局部给药的靶向递送系统，例如霜剂、化妆水、凝胶、浆液、透皮贴剂等。还可以通过离子电渗疗法实现靶向递送和/或渗透增强。

本说明书进一步提供了包含植物成分的优选用于局部给药或用于靶向递送而不诱发明显刺激的组合物。因此，本发明的组合物尤其适合于敏感性皮肤。将所述组合物施用于皮肤足以改善皮肤外观美感的一段时间。优选将组合物每日局部施用1次、2次或2次以上，优选每日1次或2次。优选将每日局部施用进行1周、2周、4周或4周以上的期限。可以将组合物配入脂质体或其他包囊物或递送媒介物，它们可以包含其他添加剂或物质和/或可以改进以便在给药后更特异性地达到或保留在部位上。

本发明说明书还包括包含化妆品或皮肤学可接受制剂的组合物，所述的制剂适合于接触活的动物组织，包括人体组织，而实际上对使用者无不良生理效应。可以将本说明书包括的组合物制成任何化妆品和/或皮肤学适合的形式，优选制成化妆水或霜剂，而且还可以制成无水或含水基料形式和可喷雾液体形式。用于本说明书组合物的其他合适的化妆品形式包括：例如乳液、唇膏、保湿唇膏、化妆水、面膜、软膏、摩丝、贴剂、润发油、溶液、喷雾剂、蜡基棒状物或湿纸巾。此外，本说明书关注的组合物可以包括一种或多种本领域技术人员常用和已知的相容性化妆品可接受的辅助剂，例如着色剂、香料、润肤剂、保湿剂、防腐剂、维生素、螯合剂、增稠剂、麻醉剂、抗过敏反应剂、抗真菌剂、抗微生物剂、其他抗炎剂、抗氧化剂、抗菌药、脱色剂、成膜剂、驱虫药、药物活性剂、光稳定剂、遮光剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂等以及其他植物药(例如芦荟、黄春菊等)且进一步如下所述。

可以用于本发明局部用组合物的化妆品或皮肤学可接受的媒介物包括、但不限于一种或多种水性系统、甘油C1-4醇类、脂肪醇类、脂肪醚类、脂肪酯类、多元醇类、二醇类、植物油、矿物油、脂质体、层状脂质材料、硅油、水或其任意的组合。

在本说明书中，所述的媒介物可以是水相、油相、凝胶、水包蜡型乳剂、水包硅氧烷型乳剂、硅氧烷包水型乳剂、水包油型乳剂或油包水型乳剂的形式。水相是一种或多种水可溶性或水可分散性成分的混合物，它们在室温(25℃)下可以是液体、半固体或固体。所述媒介物包含或可以是水或水-醇媒介物的混悬液、分散液或溶液形式，其可以包含增稠剂或胶凝剂。本领域技术人员可以基于本领域技术人员所拥有的知识选择适合的产品形式、其中包含的成分及其制备方法。

组合物可包括水相，其可以包含水或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物，所述的亲水性有机溶剂包含醇，尤其是含2－5个碳原子的直链或支链低级一元醇，例如乙醇或丙醇；多元醇，例如丙二醇、山梨醇、甘油、二甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。这种水相可以占组合物重量的约0.5－约99.99wt％。

当本说明书的组合物是乳剂形式时，它还可以任选包含表面活性剂，优选其用量占组合物重量的0.1－30％且特别是约1－约20wt％。

组合物还可以包含增稠聚合物，例如两亲聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯和/或基于烃的树脂。可以将聚合物溶于或分散于化妆品可接受的媒介物且任选与增塑剂合并。

本说明书的组合物还可以包含油相，其包含在室温(25℃)下为液体的油可溶性或油可分散性组分和/或在室温下为固体的油状或蜡状物质，例如蜡、半固体、树胶及其混合物。该油相还可以包含有机溶剂。

在室温下为液体、通常称作油的适合的油性物质包括：基于烃的来源于动物的油，例如全氢化角鲨烯；基于烃的植物油，例如液态的4-10个碳原子的脂肪酸的甘油三酯类，例如庚酸或辛酸甘油三酯类，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄子油、蓖麻油、鳄梨油、辛酸/癸酸甘油三酯类、霍霍巴油；矿物或合成来源的直链或支链烃类，例如液体石蜡及其衍生物、凡士林；合成酯类和醚类，特别是脂肪醇的酯类，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、异硬脂酸异硬脂醇酯；羟基化酯类，例如乳酸异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛基十二烷基酯，脂肪醇的庚酸酯类、辛酸酯类和癸酸酯类；多元醇酯类，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二异壬酸酯和季戊四醇酯类；含有12-26个碳原子的脂肪醇类，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一基十五烷醇、油醇；部分基于烃的氟油和/或氟硅油；硅油，例如在室温下为液体或半固体的挥发性或非挥发性的直链或环状聚甲基硅氧烷(PDMS)，例如环状聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任选包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。这些油通常以占油相重量约0wt％-约90wt％，优选约1wt％-约80wt％的量存在。

本说明书组合物的油相还可以包含一种或多种化妆品可接受的有机溶剂。这些溶剂的存在量占组合物总重的约0wt％-约60wt％，优选约1wt％-约30wt％，并且可以选自亲脂性有机溶剂、两亲性有机溶剂及其混合物。可以用于本发明组合物的合适的溶剂包括：乙酸酯类，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯或乙酸2-甲氧基乙酯；乙酸异丙酯；烃类，例如甲苯、二甲苯、对-二甲苯、己烷或庚烷；含有至少3个碳原子的醚类及其混合物。

本说明书的组合物可以进一步包含常用于化妆品领域中的任何组分。这些组分包括防腐剂、水相增稠剂(多糖生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠剂、芳香剂、亲水性和亲脂性活性剂及其混合物。这些不同组分的量为常用于化妆品领域以便实现其预期目的的量，并且范围一般为占组合物总重的约0.01重量％-约20重量％。这些组分的性质及其用量必须与本说明书组合物的生产方法相容。

本发明的组合物还可以包含另外的颗粒相，其一般的存在量占组合物总重的约0wt％－约30wt％，优选约0.05wt％－约20wt％，并且可以包含化妆品组合物中使用的颜料和/或珠光剂和/或填充剂。合适的无机颜料包括氧化钛和氧化铁；适合的填充剂包括滑石粉、云母、聚乙烯粉末、一氮化硼、共聚物微球和硅氧烷树脂微珠(来自Toshiba的Tospearl)。

本说明书组合物的油相可以包含一种或多种蜡、树胶或其混合物。蜡包括基于烃的蜡、氟蜡和/或硅氧烷蜡并且可以为植物、矿物、动物和/或合成来源的。特别地，所述的蜡具有高于25℃，优选高于45℃的熔点。本说明书的组合物可以包含占组合物总重0－约20wt％的蜡。树胶一般为高分子量PDMS或纤维素树胶或多糖类，并且半固体物质一般为基于烃的化合物，例如，但不限于羊毛脂及其衍生物，或者可以为PDMS。本说明书的组合物可以包含占组合物总重0－约20wt％，典型地约0.1％wt－约10wt％的树胶。

在另一个优选的实施方案中，本发明的局部用组合物还可以包括至少一种下列成分：皮肤渗透增强剂、表面光滑剂、皮肤丰满剂、光学扩散剂、防晒剂、表皮脱落促进剂和抗氧化剂。有关这些和其他适合的化妆品组分的详细描述可以在如下出版物中找到：“InternationalCosmetic Ingredient Dictionary and Handbook,”第10版(2004),Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association(CTFA)出版，pp.2177-2299，将该文献完整地引入本文参考。

在可以用于本发明组合物的遮光剂中有阿伏苯宗、肉桂酸衍生物(例如肉桂酸辛基甲氧基酯)、水杨酸辛酯、羟苯甲酮、二氧化钛、氧化锌或其任意的混合物。遮光剂的存在量占组合物总重的约1wt％－约30wt％。添加遮光剂可以防止/减少在包装的同时组合物的光降解，还可以用于防止皮肤受到紫外线照射。

除了以上所述的以外，抗氧化剂起从皮肤中清除自由基的作用以便防止皮肤受到环境攻击因素的损害。可以用于本发明组合物的抗氧化剂的实例包括、但不限于α羟基酸(AHA)；过氧化苯甲酰；β羟基酸；酮酸，例如丙酮酸、2-氧代丙酸、2-氧代丁酸和2-氧代戊酸；美国专利US5,847,003和US5,834,513中披露的含氧酸(将其披露的内容引入本文作为参考)；水杨酸；脲；或其任意的混合物。优选的抗氧化剂是3,6,9-三氧杂十一烷二酸、羟基乙酸、乳酸或其任意的混合物；带有酚羟基官能团的化合物，例如抗坏血酸及其衍生物/酯类；β-胡萝卜素；儿茶素；姜黄素；四氢姜黄素；生育酚及其衍生物；或其任意的混合物。本说明书的组合物可以具有抗氧化剂，其占组合物总重优选约0.001wt％－约10wt％且更优选约0.001wt％－约5wt％。

在本发明的组合物还可以具有一种或多种下列活性剂、组分或辅料：麻醉剂；抗过敏反应剂；抗真菌剂；抗菌药；螯合剂；着色剂；缓和剂；润肤剂；乳化剂；芳香剂；保湿剂；润滑剂；增湿剂；pH调节剂；色素改变剂；防腐剂；稳定剂；表面活性剂；增稠剂；粘度调节剂；维生素；或其任意的混合物。这些不同物质的量为常用于化妆品或药物领域的量，例如它们可以占组合物总重的约0.01％－约20％。

用于配制成本说明书组合物的活性剂的非限制性实例除了所述的天然植物活性成分外还包括那些具有对处理皱纹和/或细纹具有作用的试剂，例如角质层分离剂，即具有脱屑、表皮脱落或擦洗性能的活性剂或能够软化皮肤角质层的活性剂。抗皱纹或抗细纹活性剂的其他实例包括羟基酸和类视黄醇。例如，可以以相对于组合物总重约0.0001％－约5％(重量)的量配制这些活性剂。

合适的羟基酸包括：例如羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、2-羟基链烷酸、扁桃酸、水杨酸及其烷基衍生物，包括5-正-辛酰基水杨酸、5-正-十二烷酰基水杨酸、5-正-癸酰基水杨酸、5-正-辛基水杨酸、5-正-庚氧基水杨酸、4-正-庚氧基水杨酸和2-羟基-3-甲基苯甲酸或其烷氧基衍生物，例如2-羟基-3-甲氧基苯甲酸。

典型的类视黄醇包括，但不限于视黄酸(例如全反式或13-顺式)及其衍生物、视黄醇(维生素A)及其酯类，例如棕榈酸视黄醇酯、乙酸视黄醇酯和丙酸视黄醇酯及其盐。

更具体地，局部施用的组合物可以是对皮肤保护性护理的组合物，优选用于面部、颈部、手、足或身体其他区域。非限制性实例包括日霜或化妆水、晚霜或化妆品、防晒霜、化妆水或油、体乳、化妆品(粉底)、人工晒黑组合物、脱毛剂和贴剂。

乳化剂的用量典型地在本说明书的乳剂组合物中相对于总重占约0.1％－约30％重量且优选约0.5％－约30％重量。

在基于水的制剂中，可以在pH 1－8范围配制活性化合物，其中优选pH＝2-7，最优选pH 3.5-5.5。

在本发明的另一个实施方案中，使用测定法或筛选方法筛选用于刺激MAGP-1蛋白质表达的化合物的活性，所述测定法或筛选方法包括在具有DMEMD与10％血清的培养板中培养正常人体表皮成纤维细胞，然后在37℃和10％CO₂温育24小时。24小时后，用适合的溶剂(例如DMSO)制备作为测试物质的本发明化合物的储备溶液。然后在具有10％CO₂的加湿37℃温育器中用生长培养基稀释的测试物质或相应的媒介物对照品处理细胞48小时。温育后，典型地取出生长培养基并且将TRIzol试剂加入到培养板中。采集得到的细胞裂解液，放入冷藏箱直至RNA分离和分析。可以使用本领域技术人员公知的任意方法进行RNA分离。分离之后，通过Nanodrop(ThermoScientific,DE)或任意其他公知方法测定总RNA浓度。然后使分离的RNA进行逆转录(RT)和定量聚合酶链反应(qPCR)以扩增RNA，然后根据公知方法测定和计算，以测定每种化合物的MAGP-1刺激活性水平。

本发明的另一个实施方案在于制备包含根据上述筛选方法鉴定的MAGP-1活性成分的组合物。

下列实施例的含义在于以非限制性方式显示本发明的一些方面。

具体实施方式

实施例1–提取物的制备

龙船花–通过使用乙醇提取、然后进一步用己烷提取干燥切碎的龙船花植物得到提取物。简言之，首先手工将龙船花的切碎植物研磨成小颗粒，得到约250克粉末。然后用50％乙醇提取研磨的粉末。过滤和真空蒸发后，用水稀释总的浓缩提取物，离心，过滤。然后用己烷将液体提取三次，弃去己烷上层，冻干水层，得到约90克的提取物。

尖齿臭茉莉–通过使用乙醇提取方案提取尖齿臭茉莉植物叶得到提取物。首先手工将尖齿臭茉莉龙的叶研磨成小颗粒，得到约250克粉末/烧瓶(2个烧瓶)。然后用80vol％乙醇提取研磨的粉末(2X2,000ml/烧瓶)。过滤和真空蒸发后，冻干总的浓缩提取物，得到30.77克的乙醇提取物。

五月茶–提取物获自用4450ml的1:1乙醇-水溶液、体积分三部分提取的400克研磨植物叶。过滤提取物，真空浓缩，以除去乙醇，用水稀释至1300ml，然后离心。用500ml二氯甲烷洗涤得到的上清液，用10g活性炭脱色，过滤。然后浓缩，得到57.7g提取物，干燥至得到粉末。

盒果藤(Operculina turphetum)–通过使用乙醇提取方案提取Operculina turphetum植物的地上部分得到提取物。首先手工将Operculina turphetum研磨成小颗粒，得到约250克粉末。然后用水-乙醇混合物(50-50)提取研磨的粉末。过滤和真空蒸发后，用二氯甲烷洗涤水溶液，真空浓缩，干燥。

Tiliacora triandra-通过使用乙醇提取方案提取Tiliacoratriandra植物的藤得到提取物。简言之，首先手工将Tiliacora triandraDiels的藤研磨成小颗粒，得到约250克粉末/烧瓶(2个烧瓶)。然后用80％乙醇提取研磨的粉末(2X2,000ml/烧瓶)。过滤和真空蒸发后，冻干总的浓缩提取物，得到50克的乙醇提取物。

实施例2–真皮中的MAGP-1表达

材料和方法

皮肤活检组织获自15位年轻受试者(18-25年龄)和15位年老受试者(40-65年龄)的光暴露和避光的区域。将组织固定在福尔马林中并且进行免疫组织化学研究。由此施用将抗-MAGP-1和碱性磷酸酶-缀合的二次抗体以显示皮肤中蛋白质固定。用Zeiss Axionskop2缩微成像系统取影像。

结果

光老化在结构上降解MAGP-1蛋白(图1)。图1中的箭头指示在乳头状真皮中不存在MAGP-1原纤维。星号指示真皮中MAGP-1结构降解。

实施例3–毛孔和毛囊周围的MAGP-1表达

使用与实施例2中举出类似的材料和方法，此处的结果显示MAGP-1蛋白质水平在毛囊/毛孔周围因光老化而显著降低(图2)。图2中的箭头指示来自年轻受试者的毛囊/毛孔周围高水平的MAGP-1原纤维结构；且箭头指示在来自老龄受试者的光暴露的皮肤中毛囊/毛孔周围不存在MAGP-1。

实施例4–筛选方法

细胞处理

将正常人表皮成纤维细胞(Cascade Biologics)在具有10mlDMEM与10％血清的100mm培养板中培养并且在37℃和10％CO₂条件下温育24小时。24小时后，用适合的溶剂(例如DMSO)制备测试化合物/植物提取物的储备溶液。在具有10％CO₂的加湿37℃温育器中用生长培养基稀释的测试物质或相应的媒介物对照品处理细胞48小时。温育后，从每一培养板中取出生长培养基并且将800ul TRIzol试剂(Invitrogen)加入到培养板中。采集得到的细胞裂解液，放入–80℃冷藏箱直至RNA分离和分析。

RNA分离

按照制造商的方法分离RNA。简言之，使细胞裂解液达到室温，加入0.2ml氯仿/1ml试剂。剧烈振摇试管15秒，在环境温度温育2－3分钟。在2－8℃以12,000×g将样品离心15分钟。离心后，该混合物分离成多相，仅RNA保留在上层水相中。

然后将水相转入新试管。通过与用于最初的匀化的0.5ml异丙醇/1ml试剂混合使RNA从水相中沉淀。将样品在15－30℃温育10分钟，在2－8℃以12,000×g将样品离心10分钟。除去上清液，通过添加用于细胞裂解液的至少1ml 75％乙醇/1ml试剂用75％乙醇将RNA沉淀洗涤1次。通过涡旋和在2－8℃以7,500×g离心5分钟混合样品。简单地风干RNA沉淀。将RNA溶于不含RNase(核糖核酸酶)的水中，通过使用Nanodrop(Thermo Scientific,DE)测定总RNA浓度。

逆转录酶和qPCR

逆转录(RT)反应在20μl总体积中进行。制备包含20μl 10XTaqMan RT缓冲液、4.4μl 25mM MgCl2、4.0μl dNTP混合物、1.0μl随机六聚物、0.4μl RNase抑制剂、0.5μl MultiScribe逆转录酶(50U/ml)、2.0μg RNA和不含RNase的水以构成终体积20μl的RT混合物。使用Stratagene Mx 3005P QPCR机将该反应体系在25℃温育10min，在48℃温育30min，然后在95℃温育5min。RT步骤后，将该反应体系贮存在–20℃用于qPCR分析。

定量聚合酶链反应(qPCR)在20μl总体积中进行。使用AppliedBiosystems(AB)Universal PCR主混合物。制备包含10μl TaqmanUniversal PCR混合物、1μl引物和探针混合物、2μl RT产物和7μl去离子水的混合物。MAGP-1和GAPDH引物和探针购自AppliedBiosystems，MAGP-1的ID是Hs00250064_ml，人GAPDH的编号是4352934E。

QPCR的温度曲线图是50℃ 2min和95℃ 10min，1个循环；然后是95℃ 15sec和60℃ 1min，40个循环。采集MAGP-1mRNA的值与参比基因GAPDH的值。将数值对GAPDH校准以测定处理后MAGP-1mRNA的改变。通过将测试结果与媒介物对照品相比计算MAGP-1的mRNA百分比增加。

表1列出了所测定的在MAGP-1刺激表达下具有活性的成分。

表1–MAGP-1筛选数据

活性关键词

除非另有指示，否则所有百分比均基于组合物的总重按重量计。

将本文引述的全部参考文献包括专利申请和公开文献完整性地引入本文参考，且为了所有目的，其引用程度如同为所有目的而将每篇公开文献或专利或专利申请各自特别和单独所示的完整地引入参考。正如本领域技术人员显而易见的，可以在不脱离本发明精神和范围的情况下对本发明进行许多变型和改变。本文所述的具体实施方案仅作为实施例提供，本发明仅受待批权利要求以及这些权利要求所赋予权力的等效方案的全部范围的限制。

Claims (28)

1.改善皮肤外观美感的方法，包含将MAGP-1刺激物质局部施用于有此需要的皮肤区域，其用量有效地改善皮肤外观，其中已经通过MAGP-1筛选测定法鉴定了所述MAGP-1刺激物质的活性。

2.权利要求1的方法，其中MAGP-1筛选测定法包括下列步骤：(1)用街测的候选物质处理人表皮成纤维细胞；(2)从所述细胞中分离MAGP-1RNA；(3)扩增所述分离的RNA；和(4)测定由此得到的MAGP-1RNA水平是否高于从其它条件都相同时用对照品处理的细胞中得到的MAGP-1RNA水平，其中用所述候选物质处理后比起对照品水平来MAGP-1RNA刺激的增加显示该物质是MAGP-1刺激物质。

3.权利要求1的方法，其中使用定量聚合酶链反应测定MAGP-1RNA的刺激。

4.MAGP-1筛选测定方法，包括下列步骤：(1)用待测的候选物质处理表皮成纤维细胞；(2)从所述细胞中分离MAGP-1RNA；(3)扩增所述分离的RNA。

5.权利要求5的方法，还包括下列步骤：测定由此得到的MAGP-1RNA水平是否高于从其它条件都相同时用对照品处理的表皮成纤维细胞中得到的MAGP-1RNA水平，其中用所述候选物质处理后比起对照品水平来MAGP-1RNA刺激的增加显示该物质是MAGP-1刺激物质。

6.权利要求4的方法，其中使用定量聚合酶链反应测定步骤(3)中的MAGP-1RNA的刺激。

7.组合物，包含在化妆品可接受的媒介物中的MAGP-1刺激物质，其中已经通过MAGP-1筛选测定法鉴定了所述MAGP-1刺激物质的活性。

8.用于改善人皮肤外观美感的组合物，包含：

(i)选自下组的MAGP-1活性剂：

五月茶(Antidesma bunis)的提取物；

盒果藤(Operculin turpethum)的提取物；

龙船花(Ixora chinensis)的提取物；

尖齿臭茉莉(Clerodendron lindleyi)的提取物；

具有式I的化合物：

式II的化合物：

及其组合；和

(ii)化妆品可接受的媒介物。

9.权利要求8的组合物，其中该组合物是气溶胶型喷雾剂、泵式喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、浆液、棒状物或小毛巾的形式。

10.权利要求8的组合物，其中MAGP-1活性剂的存在量占该组合物总重的约0.01wt％－约10wt％。

11.权利要求8的组合物，包含五月茶。

12.权利要求8的组合物，包含盒果藤。

13.权利要求8的组合物，包含龙船花。

14.权利要求8的组合物，包含尖齿臭茉莉。

15.权利要求8的组合物，包含具有下式的化合物：

16.权利要求8的组合物，包含具有下式的化合物：

17.权利要求8的组合物，还包含第二种MAGP-1活性剂，其选自木田菁(Sesbania grandiflora)的提取物、臭魔芋(AmorphophallusCampanulatus)的提取物、毛瓣无患子(Sapindus rarak)的提取物、Tiliacora triandra的提取物、桂叶山牵牛(Thumbergia laurifolia)的提取物、KFTK、硫代二丙酸及其C₁–C₄一-和二烷基酯类及其组合。

18.用于改善人皮肤外观美感的组合物，包含在化妆品可接受的媒介物中的两种或更多种MAGP-1刺激剂。

19.用于改善人皮肤情况或外观美感的方法，包括给有此需要的皮肤局部施用有效量的权利要求8的组合物，其中所述改善选自下组：

(a)处理、减少和/或预防细线或皱纹；

(b)皮肤孔径减小；

(c)皮肤厚度、丰满度和/或紧固度改善；

(d)皮肤柔韧度和/或柔软性改善；

(e)皮肤色泽、光泽度和/或澄明度改善；

(f)前胶原和/或胶原产生改善；

(g)弹性蛋白维持和重塑改善；

(h)皮肤纹理改善和/或促进重织构化；

(i)皮肤屏障修复和/或功能改善；

(j)皮肤轮廓外观改善；

(k)恢复皮肤光泽和/或光亮度；

(l)补充皮肤中的必需营养物和/或成分；

(m)绝经导致的皮肤外观下降的改善；

(n)皮肤保湿性改善；

(o)皮肤弹性和/或回弹力增加；

(p)处理、减少和/或预防皮肤下垂；或

(r)色素斑减少；或其组合。

20.权利要求19的方法，其中所述改善是处理、减少和/或预防细线或皱纹。

21.权利要求19的方法，其中所述改善是皮肤弹性和/或回弹力增加。

22.权利要求19的方法，其中所述改善是处理、减少和/或预防皮肤下垂。

23.权利要求19的方法，其中将所述组合物每日局部施用至少一次，持续至少一周。

24.用于改善人皮肤情况或外观美感的方法，包括给有此需要的皮肤局部施用有效量的权利要求17的组合物，其中所述改善选自下组：

(a)处理、减少和/或预防细线或皱纹；

(b)皮肤孔径减小；

(c)皮肤厚度、丰满度和/或紧固度改善；

(d)皮肤柔韧度和/或柔软性改善；

(e)皮肤色泽、光泽度和/或澄明度改善；

(f)前胶原和/或胶原产生改善；

(g)弹性蛋白维持和重塑改善；

(h)皮肤纹理改善和/或促进重织构化；

(i)皮肤屏障修复和/或功能改善；

(j)皮肤轮廓外观改善；

(k)恢复皮肤光泽和/或光亮度；

(l)补充皮肤中的必需营养物和/或成分；

(m)绝经导致的皮肤外观下降的改善；

(n)皮肤保湿性改善；

(o)皮肤弹性和/或回弹力增加；

(p)处理、减少和/或预防皮肤下垂；或

(r)色素斑减少；或其组合。

25.权利要求24的方法，其中所述改善是处理、减少和/或预防细线或皱纹。

26.权利要求24的方法，其中所述改善是皮肤弹性和/或回弹力增加。

27.权利要求24的方法，其中所述改善是处理、减少和/或预防皮肤下垂。

28.权利要求24的方法，其中将所述组合物每日局部施用至少一次，持续至少一周。