CN104198646A

CN104198646A - 一种改进的蛋白质测定方法

Info

Publication number: CN104198646A
Application number: CN201410403271.1A
Authority: CN
Inventors: 张玉良; 陈凯松
Original assignee: GUANGZHOU HENGCHUANG TESTING TECHNOLOGY SERVICES Co Ltd
Current assignee: GUANGZHOU HENGCHUANG TESTING TECHNOLOGY SERVICES Co Ltd
Priority date: 2014-08-15
Filing date: 2014-08-15
Publication date: 2014-12-10

Abstract

本发明提出了一种改进的蛋白质测定方法，包括以下步骤：（1）称取待测样品放入消化管中，向消化管中加入硫酸钾和硫酸铜，然后量取浓硫酸缓缓加入到消化管中，混合均匀后，在消化管瓶口放一小漏斗，放入消化炉中消化；（2）当消化管中内容物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，取下消化管冷却后，向消化管中加入过氧化氢溶液将消化管管壁上粘有的碳化粒冲到消化管底部；（3）继续消化至呈透明为止，然后取下消化管，稍冷后将消化液小心移入100mL容量瓶中；（4）蒸馏、吸收和滴定。本发明提高了消化速度，缩短了测定时间，使企业不仅能快速获得产品蛋白质的指标，还可以节省大量检测试剂，提高了企业的经济效益。

Description

一种改进的蛋白质测定方法

技术领域

本发明涉及一种改进的蛋白质测定方法，属于蛋白质检测领域。

背景技术

蛋白质是食品检验中经常检查的项目。测定食品中蛋白质的含量，有利于掌握食品的营养价值和品质的变化，以达到合理利用食品资源。

在蛋白质测定中常用的方法是凯氏定氮法，应用凯氏定氮法操作易造成结果偏差，因此需要改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种改进的蛋白质测定方法，该方法缩短了测定的时间，能快速获得产品蛋白质的指标，节省大量检测试剂，节约成本，提高企业的经济效益。

为解决上述技术问题，本发明的技术采用以下技术方案：

一种改进的蛋白质测定方法，包括以下步骤：

（1）称取待测样品0.5000g放入消化管中，向消化管中加入4.5g硫酸钾和0.5g硫酸铜，然后量取10～12mL浓硫酸缓缓加入到消化管中，混合均匀后，在消化管瓶口放一小漏斗，放入消化炉中消化；

（2）当消化管中内容物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，取下消化管冷却后，向消化管中加入10mL 30％的过氧化氢溶液将消化管管壁上粘有的碳化粒冲到消化管底部；

（3）将消化管再次放入消化炉中继续消化至呈透明为止，然后取下消化管，稍冷后将消化液小心移入100mL容量瓶中；

（4）蒸馏

吸取25mL消化液于定氮蒸馏器中，在其冷凝器的下端放置一个盛有5OmL硼酸溶液和3滴甲基红-溟甲酚绿混合指示剂的25OmL锥形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在锥形瓶内的液面以下；将10mL质量分数为40%的氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中，迅速将塞子塞好，然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸至液面达15OmL时，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度线以上，继续蒸馏，蒸至液位达200mL；

（5）滴定

用0.1mol/L的硫酸标准溶液滴定至溶液出现酒红色为止，记录所用硫酸标准溶液的体积；

（6）计算结果

X=(V一V0)×c(H^＋) ×2×0.014×F×100/m

式中:X—蛋白质含量，g/100g；

V—滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

Vo—空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

c(H^＋)—硫酸标准溶液中H十的浓度，mol/L；

m—样品的质量，g；

0.014—氮原子的摩尔质量，kg/mol；

F—氮换算为蛋白质的系数，乳粉为6.38 ，纯谷物类(配方)食品为5.90，含乳婴幼儿谷物(配方)食品为6.25。

进一步地，所述步骤（1）中浓硫酸的浓度为1.84g/mL。

进一步地，所述步骤（3）中消化时间为0.5～1.0h。

进一步地，所述步骤（4）中甲基红-溟甲酚绿混合指示剂制备步骤为：用体积分数为95%的乙醇，将澳甲酚绿及甲基红分别配成lg/L的乙醇溶液，使用时按澳甲酚绿：甲基红为5：1的比例混合。

进一步地，所述步骤（4）中硼酸溶液浓度为30g/L

发明与现有技术相比具有的有益效果为：本发明提高了消化速度，缩短了测定时间，使企业不仅能快速获得产品蛋白质的指标，还可以节省大量检测试剂，提高了企业的经济效益；此外，本发明经济实用，更易满足企业的需要。

具体实施方式

为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本发明，下面将对本发明作进一步的说明。

一种改进的蛋白质测定方法，包括以下步骤：

（1）分别称取待测的三种样品0.5000g放入消化管中，向消化管中加入4.5g硫酸钾和0.5g硫酸铜，然后量取10～12mL浓硫酸（密度为1.84g/mL）缓缓加入到消化管中，混合均匀后，在消化管瓶口放一小漏斗，放入消化炉中消化；

（3）将消化管再次放入消化炉中继续消化至呈透明为止，约需0.5～1.0h；然后取下消化管，稍冷后将消化液小心移入100mL容量瓶中；

（4）蒸馏、吸收和滴定。

吸取25mL消化液于定氮蒸馏器中，在冷凝器的下端放置一个盛有5OmL硼酸溶液(30g/L)，3滴甲基红—溟甲酚绿混合指示剂(用体积分数为95%的乙醇，将澳甲酚绿及甲基红分别配成lg/L的乙醇溶液，使用时按lg/L澳甲酚绿:lg/L甲基红为5:1的比例混合)的25OmL锥形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在液面以下；将10mL氢氧化钠溶液（质量分数为40%）慢慢地加入蒸馏瓶中(溶液应呈强碱性)，迅速将塞子塞好，然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸至液面达15OmL时，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度线以上，继续蒸馏，蒸至液位达200mL。

（5）滴定用硫酸标准溶液(0.1mol/L)滴定至溶液出现酒红色为止，记录所用硫酸标准溶液的体积。

（6）计算结果

X=(V－V0)×c(H^＋) ×2×0.014×F×100/m

式中:X—蛋白质含量，g/100g；

V—滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

Vo—空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

c(H^＋)—硫酸标准溶液中H十的浓度，mol/L；

m—样品的质量，g；

0.014—氮原子的摩尔质量，kg/mol；

本实施例所用试剂的量与传统国标法试剂用量如表1：

表1

操作要点对比	GB/T 5009.5-2010	改进方法
			硫酸钾加入量（g）	6	4.5
硫酸铜加入量（g）	0.2	0.5
			浓硫酸加入量（ml）	20	10
40%氢氧化钠加入量（ml）	25	10

从表1可见，本实施例可以节省大量检测试剂，从而可以节约成本，符合企业经济效益。

本实施例得到的测定结果与传统国标法得到的测定结果比较如表2：

表2

测定结果（g/100g）	GB/T 5009.5-2010	改进方法	误差（%）
				样品1	15.25	15.31	0.20
样品2	12.35	12.55	0.80
				样品3	20.15	20.21	0.15

从表2可见：改进方法的测定结果和国标方法的测定结果差异不显著，测定结果的精密性和重现性较好，实验结果比较稳定。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于包括以下步骤：

（4）蒸馏

（5）滴定

（6）计算结果

X=(V一V0)×c(H^＋) ×2×0.014×F×100/m

式中:X—蛋白质含量，g/100g；

V—滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

Vo—空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，mL；

c(H^＋)—硫酸标准溶液中H十的浓度，mol/L；

m—样品的质量，g；

0.014—氮原子的摩尔质量，kg/mol；

2.根据权利要求1所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（1）中浓硫酸的浓度为1.84g/mL。

3.根据权利要求2所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（3）中消化时间为0.5～1.0h。

4.根据权利要求3所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（4）中甲基红-溟甲酚绿混合指示剂制备步骤为：用体积分数为95%的乙醇，将澳甲酚绿及甲基红分别配成lg/L的乙醇溶液，使用时按澳甲酚绿：甲基红为5：1的比例混合。

5.根据权利要求4所述的一种改进的蛋白质测定方法，其特征在于：所述步骤（4）中硼酸溶液浓度为30g/L。