CN104127431B - 一种兽用环丙-林可霉素长效注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种兽用环丙-林克霉素长效注射液及其制备方法。它是环丙沙星与盐酸林可霉素组成的复方制剂。该方法包括将处方中环丙沙星于适量注射用水中，加乳酸适量，搅拌使其充分溶解；再将聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）加入丙二醇溶剂中，加热溶解；将盐酸林可霉素溶于注射用水中，再将盐酸林可霉素水溶液缓慢加入环丙沙星溶液中，然后再加入含聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）的丙二醇溶剂、吐温80，搅拌混合均匀，过滤、充氮气、蒸汽流灭菌，得到所述的兽用环丙-林可霉素长效注射液。本发明制备的环丙-林可霉素长效注射液稳定性良好，质量可控，治疗效果优于单方环丙沙星和盐酸林可霉素，而且半衰期长，能够减少给药次数，降低药物的不良反应和动物的应激反应，提高畜禽呼吸系统疾病的治疗效果和效率，在兽医临床上将具有广泛的应用前景。

Description

一种兽用环丙-林可霉素长效注射液及其制备方法

技术领域

本发明为兽药制剂领域，更具体，本发明涉及一种兽用环丙-林可霉素长效注射液及其制备方法。

背景技术

近年来，随着畜牧业的规模化发展，不同地区、国家之间频繁的引种，各类疾病尤其是畜禽呼吸道疾病日渐增多，已经成为畜禽业生产过程中的一大难题。引起畜禽慢性呼吸道病及细菌性呼吸道疾病的致病菌主要有支原体、副嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌、支气管败血性波氏杆菌、沙门氏菌、链球菌等。不同细菌血清型多、流行背景复杂，目前主要结合药物来预防和控制类似疾病的流行，因此如何合理选择抗菌药是畜牧业生产中的重要问题，合理使用抗菌药，不仅降低用药成本，减少盲目性，更重要的是减少耐药菌株的出现。

环丙沙星又称环丙氟哌酸，属于化学合成的氟喹诺酮类抗菌药。该药对革兰氏阴性菌、支原体具有强大而稳定的杀灭作用，对革兰氏阳性菌、衣原体等致病菌也有良好的抗菌作用，适用于治疗畜禽慢性呼吸道疾病、支原体病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、巴氏杆菌病等。其口服和注射均吸收迅速，体内分布广，生物利用度高、在猪体内消除半衰期为3～5h，毒性较低，在兽医临床中广泛使用。

林可霉素的抗菌谱与大环内酷类抗生素相似，对革兰氏阳性菌有较强的抗菌能力，特别对厌氧菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌有良好疗效，在临床上多用于治疗链球菌、葡萄球菌、肺炎链球菌引起的呼吸道感染、胆道感染及败血症等。

临床实验发现，环丙沙星和盐酸林可霉素可以通过不同途径阻断细菌蛋白质的合成，达到快速抑菌杀菌作用。但由于二者普通制剂在动物体内有效作用时间短，用药量大，一般每天用药两次，增加了动物的痛苦，也增加了药物制备成本。

针对上述问题，发明人经过反复探索，研究开发一种环丙-林可霉素长效注射液及其制备方法，该长效注射液具有长效缓释作用及大大降低药物的毒副作用。

环丙沙星和盐酸林可霉素所组成的长效注射液未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种兽用环丙-林可霉素长效注射液及其制备方法。达到长效缓释作用及降低药物毒副作用。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

一种兽用环丙-林可霉素长效注射液，主要有以下组分组成：

所述兽用环丙-林可霉素长效注射液每100mL含有：环丙沙星2.0～5.0g、林克霉素2.0～5.0g、聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）3.0～5.0g、乳酸2.0～4.0mL、丙二醇20～30mL、吐温-800.5～2.0mL、注射用水加至100mL。

上述的一种兽用兽用环丙-林可霉素长效注射液，其特征在于，优选组分是：以100mL药液计算，组分为：

环丙沙星5.0g、林克霉素5.0g、聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）4.0g、乳酸2.5mL、丙二醇20mL、吐温-801mL、注射用水加至100mL。

上述的一种兽用兽用环丙-林可霉素长效注射液，其制备方法：

（1）称取环丙沙星2.0～5.0g，加入适量的注射用水，然后加入乳酸2～4mL，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（2）称取盐酸林可霉素2.0～5.0g，加入适量的注射用水，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（3）称取聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）3.0～5.0g，加入丙二醇20～30mL，60～70℃水浴加热，充分搅拌至全部溶解，放至室温，备用；

（4）依次将步骤（2）制备溶液加入步骤（1）制备的溶液中，搅拌均匀，再加入步骤（3）制备的溶剂、吐温-80，补加注射用水至100mL；

（5）经过滤，充氮气分装，100流通蒸汽灭菌30分钟，即为成品。

本发明具有下述技术特点

（1）采用高效抗生素环丙沙星和林可霉素组合注射用药，具有协同增效作用，可迅速杀灭病原微生物，缩短治疗时间，其组方合理，稳定性好，且制备工艺简单，效果优于单方的环丙沙星和盐酸林克霉素，本发明制剂未见报道。（2）该注射剂消除半衰期较普通环丙沙星和盐酸林可霉素长，具有缓释和长效作用，减少临床用药次数，提高治疗效果，减少药物的毒副作用。

附图说明

图1环丙-林可霉素长效注射液和普通环丙沙星对猪肌注后血浆中环丙沙星浓度-时间曲线。

图2环丙-林可霉素长效注射液和普通林可霉素对猪肌注后血浆中林可霉素浓度-时间曲线。

具体实施方案

下面结合具体实施案例对本发明进行详细说明，这些实施案例仅限于说明本发明，并不仅限于本发明。

实施例1

（1）称取环丙沙星2.0g，加入30mL注射用水，然后加入乳酸2.0mL，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（2）称取盐酸林可霉素2.0g，加入5.0mL注射用水，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（3）称取聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）3.0g，加入丙二醇20mL，60-70℃水浴加热，充分搅拌至全部溶解，放至室温，备用；

（4）依次将步骤（2）制备溶液加入步骤（1）制备的溶液中，搅拌均匀，再加入步骤（3）制备的溶剂、吐温-800.8mL，补加注射用水至100mL；

（5）经过滤，充氮气分装，100流通蒸汽灭菌30分钟，即为成品。

实施例2

（1）称取环丙沙星2.5g，加入40mL注射用水，然后加入乳酸3mL，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（2）称取盐酸林可霉素3.0g，加入15mL注射用水，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（3）称取聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）5.0g，加入丙二醇30mL，60-70℃水浴加热，充分搅拌至全部溶解，放至室温，备用；

（4）依次将步骤（2）制备溶液加入步骤（1）制备的溶液中，搅拌均匀，再加入步骤（3）制备的溶剂、吐温-801.5mL，补加注射用水至100mL；

（5）经过滤，充氮气分装，100流通蒸汽灭菌30分钟，即为成品。

实施例3

（1）称取环丙沙星5.0g，加入50mL注射用水，然后加入乳酸2.5mL，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（2）称取盐酸林可霉素5.0g，加入10mL注射用水，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（3）称取聚乙烯吡咯烷酮（PVP₄₀）4.0g，加入丙二醇20mL，60-70℃水浴加热，充分搅拌至全部溶解，放至室温，备用；

（4）依次将步骤（2）制备溶液加入步骤（1）制备的溶液中，搅拌均匀，再加入步骤（3）制备的溶剂、吐温-801mL，补加注射用水至100mL；

（5）经过滤，充氮气分装，100流通蒸汽灭菌30分钟，即为成品。

环丙-林可霉素长效注射液在猪体内药物动力学研究

一、试验材料

1.药品

环丙-林可霉素长效注射液（主要成分环丙沙星、林可霉素）：信阳农林学院兽药实验室自制；环丙沙星标准品（含量99.5%，由中国兽药监察所提供，批号：H010105）；盐酸林可霉素（含量99.0%，由中国兽药监察所提供，批号：H0080306）；环丙沙星注射液（含量10%，湖南长沙远达牧业科技有限公司，批号：（2012）180312769）；盐酸林可霉素注射液（含量10%，湖南长沙远达牧业科技有限公司，批号：（2011）180311365）。

2.试剂

甲酸、乙腈为色谱纯，柠檬酸、三乙胺、氢氧化钠、二氯甲烷、磷酸、磷酸氢二钾等均为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。

3.仪器

Agilent1100型高效液相色谱仪：美国Agilent公司；

4.试验动物与饲料

试验动物：健康杜长大仔猪18头，体重32±2kg，购于华中农业大学精品种猪场。试验开始前饲养一周，使其适应环境。饲料：试验期间按常规饲养，自由饮水和采食，饲料为不含抗菌药物的全价饲料。

二、试验方法

1.标准储备液配制

环丙沙星标准储备液：精密称取环丙沙星标准品50.2mg置于500mL容量瓶中，加入适量0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解并加三蒸水定容，配成浓度为100μg/mL的环丙沙星标准贮备液。避光置于4℃冰箱中保存备用（有效期2个月）。

盐酸林可霉素标准储备液：精密称取盐酸林可霉素原料药20.2mg置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得到浓度为200μg/mL的标准贮备液，避光置于4℃冰箱中保存备用（有效期2个月）。

2.动物分组与给药

将每头猪称重后，随机分为三组，每组6头，A组：单剂量颈部注射环丙沙星注射液，剂量为10mg/kgbw；B组：单剂量颈部注射林可霉素注射液，剂量为10mg/kgbw；C组：单剂量颈部注射环丙-林可霉素注射液，剂量为10mg/kgbw。

3.样品采集

将猪仰卧保定，从前腔静脉采血，每头猪给药前采集空白血样，给药后于0、0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、16、24、48、60h时分别对每头猪进行采血，每次采血量约5mL，采集完毕立即转至加有抗凝剂的5mL离心管中，3000r/min离心10min，分离血浆，于-20℃保存，待测。

4.样品的处理

环丙沙星的血浆样品处理：从冰箱中取出血浆，自然解冻后摇匀，准确吸取1mL，置于15mL具塞塑料离心管中，依次加入5mL乙腈和3mL冰醋酸，于漩涡混悬器上混匀30s，以5000r/min离心10min，吸取全部上清液置于另一15mL具塞塑料离心管中，于40℃水浴氮气吹干，残渣用100μL流动相充分溶解，50μL进样分析。

盐酸林可霉素的血浆样品处理：取新鲜或解冻血浆样品1mL，加入乙睛2mL，涡旋1min，12000r/min离心10min，转移上清液到15mL离心管中，加入100μL，0.4mol/LNaOH溶液，涡旋混匀后加入5mL乙酸乙醋，于漩涡混悬器上混匀5min，12000r/min离心10min，转移下层至离心管中，于50℃水浴氮气吹干，用250μL流动相溶解，漩涡10秒钟，12000r/min离心10min，取50μL进样分析。

5.色谱条件

环丙沙星色谱条件：色谱柱：AgilentTC-C18（4.6×150mm，5μm），保护柱（4.6mm×12.5mm）；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（pH3）（12：88，v/v）；紫外检测波长：278nm；流速：1mL/min；进样量：50μL；柱温：40℃。

盐酸林可霉素色谱条件：色谱柱：AgilentSB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），保护柱（4.6mm×12.5mm）；流动相：甲醇-乙腈-PH5.5硼砂缓冲液(v：v：v=30:5:65)；紫外检测波长：204nm；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：50μL。

6.标准工作曲线的建立

将环丙沙星和林可霉素标准贮备液配制成一定浓度梯度的药物溶液，取适量分别添加到7份1mL空白猪血浆中，充分混匀，得到含环丙沙星和林可霉素浓度为0.05、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10μg/mL的血浆，按血浆样品前处理方法进行处理，进样分析，分别以测得的环丙沙星和林可霉素的峰面积（A）为横坐标，血浆中环丙沙星和林可霉素的浓度（C）为纵坐标，绘制环丙沙星和林可霉素标准工作曲线，并进行拟合回归方程，求出相关系数（r）。环丙沙星回归方程为C=0.0015A+0.023，相关系数r为0.9995，林可霉素回归方程为C=0.84A-0.022，相关系数r为0.9992。

7准确度和精密度考察

分别配制成高、中、低三个浓度的环丙沙星、林可霉素标准工作液，取适量分别添加到空白猪血浆中，混合均匀，配成含环丙沙星浓度和林可霉素浓度分别为0.05、1和10μg/mL的血浆样品，按照上述血浆处理方法分别处理并进行HPLC分析，每个浓度同一天内制备5份样品以考察日内变异系数，连续重复测定5天以考察日间变异系数。所测的环丙沙星的绝对回收率为83.26-91.22%，日内变异系数为1.81-5.22，日间变异系数为2.58-7.39。林可霉素的绝对回收率为75.39-84.71%，日内变异系数为2.79-4.78，日间变异系数为3.15-4.53。

8.数据处理与分析

准确度和精密度等方法学数据和药时曲线图采用Excel软件绘制，药物动力学模型拟合及参数计算用3p97药动学软件分析，评价环丙-林可霉素长效注射液的体内药动学特征。

三、试验结果

1.血浆中药-时数据

环丙-林可霉素长效注射液和普通环丙沙星对猪肌注给药后血浆中环丙沙星浓度-时间曲线见附图1；

环丙-林可霉素长效注射液和普通林可霉素对猪肌注给药后血浆中林可霉素浓度-时间曲线见附图2。

2.药物动力学数据分析

给猪分别注射环丙沙星注射液、盐酸林可霉素注射液和环丙-林可霉素长效注射液后，药物动力学参数见表1，经过房室模型分析，环丙沙星注射液、盐酸林可霉素注射液和环丙-林可霉素长效注射其血药浓度-时间数据均符合一级吸收二室开放模型，试验结果表明，环丙-林可霉素长效注射液肌肉注射后，环丙沙星的消除半衰期（t1/2β）为12.34小时，是普通环丙沙星注射剂的2倍。林可霉素的消除半衰期（t1/2β）为10.74小时，是普通林可霉素注射的3倍，可见环丙-林可霉素长效注射液具有较好的缓释和长效作用。

表1环丙-林可霉素长效注射液在猪体内的药物动力学参数（n=5）

Claims (2)

1.一种兽用环丙-林可霉素长效注射液，其特征在于，所述的注射液每100mL有以下组分组成：环丙沙星2.0～5.0g、盐酸林克霉素2.0～5.0g、乳酸2.0～4.0mL、聚乙烯吡咯烷酮3.0～5.0g、丙二醇20～30mL、吐温-800.5～2.0mL、注射用水加至100mL。

2.权利要求1所述一种环丙-林克霉素长效注射液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）称取环丙沙星2.0～5.0g，加入适量的注射用水，然后加入乳酸2.0～4.0mL，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（2）称取盐酸林可霉素2.0～5.0g，加入适量的注射用水，充分搅拌至全部溶解为止，备用；

（3）称取聚乙烯吡咯烷酮3.0～5.0g，加入丙二醇20～30mL，60-70℃水浴加热，充分搅拌至全部溶解，放至室温，备用；

（4）依次将步骤（2）制备溶液加入步骤（1）制备的溶液中，搅拌均匀，再加入步骤（3）制备的溶剂、吐温-80，补加注射用水至100mL；

（5）经过滤，充氮气分装，100℃流通蒸汽灭菌30分钟，即为成品。