CN105232450A - 含利福昔明的乳房注入用原位凝胶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，包括以下质量分数的组分：0.1-15％以分散形式存在的药物活性成分、0.25-20％以包合物形式存在的药物活性成分、12-30％泊洛沙姆407、0.01-11％泊洛沙姆188、0.01-10％高分子阻滞剂、0.001-3％抑菌剂，pH调节剂调节pH至5.5～7.5，余量为注射用水。本发明还公开了含利福昔明的乳房注入用原位凝胶的制备方法。本发明以水为溶媒，生物相容性好，刺激性小，安全性高，在储存条件下以液体状态存在，注入乳房后，受乳房内温度刺激4～15秒内完全形成凝胶，缓释效果显著，体外释药时间长达48d，在整个干乳期内有效治疗和防控奶牛乳房炎。

Description

含利福昔明的乳房注入用原位凝胶及其制备方法

技术领域

本发明属于动物用药物制剂领域，涉及一种含利福昔明的乳房注入用原位凝胶及其制备方法，尤其是一种具有适宜相变温度的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶及其制备方法。

背景技术

奶牛乳房炎是奶牛养殖临床常发、多发病，主要由金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、化脓放线菌、绿脓杆菌、克雷伯氏菌等诱发。我国奶牛乳房炎的发病率高于世界平均水平，已严重制约奶牛养殖业的发展。在奶牛乳房炎防治中，干乳期治疗是控制牛群乳房炎的重要环节，此时奶牛处于停乳时期，有利于防治用药，能治愈乳房已存在的感染，预防新的感染发生。奶牛干乳期是从停止挤奶至产犊前15天，一般为40～70天，常规药物持效时间短，频繁给药费时费力，更会给乳房造成伤害，应首选缓释药物。目前临床将药物制成膏剂、油剂实现缓释，膏剂、油剂生物相容性差，刺激性大，大大制约了药效发挥和疾病转归，且膏剂、油剂的缓释效果一般，仍需重复给药3-5次方能持效至干乳期结束。目前抗菌药仍是奶牛乳房炎防治的主力，临床常采用联合用药，防止耐药菌株增多，耐药性增强。

利福昔明(Rifaximin)是利福霉素的半合成衍生物，为广谱、高效、低毒的肠道或局部用抗生素。本品为桔红色粉末，溶于乙醇、乙酸乙酯、氯仿和甲苯，不溶于水。对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌、粪链球菌及艰难梭菌等、对革兰氏阴性如大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、小肠结膜炎耶尔森菌及革兰阳性厌氧菌也有杀菌活性，但明显弱于抗革兰氏阳性菌的活性。口服和乳房注入基本无吸收，大鼠以100mg/kg剂量单次口服利福昔明后，在胃肠黏膜达到较高浓度，在肝、肾、肺分布极少，大部分药物通过粪便排泄；泌乳期或干奶期奶牛，每个乳头注入100mg利福昔明，血浆内未检测到利福昔明，非常适合防治肠道和乳房等局部敏感菌感染。

利福昔明耐受性好，不良反应轻微，毒性小。小鼠口服LD50>5g/kg；SD大鼠每天灌服利福昔明25、50及100mg/kg，连续180d，除雌性大鼠血清总胆固醇出现剂量相关性增高外，其他血液学、血清生化及病理组织学检查均未见异常改变；大鼠和家兔实验均未观察到利福昔明的胚胎毒性和致畸毒性作用。利福昔明在医学临床主要用于防治敏感菌引起的急、慢性肠道感染、腹泻综合征、夏季腹泻、旅行者腹泻、小肠结肠炎及手术期肠道预防用药，也用于防治牙周、皮肤和阴道等敏感菌感染。兽医临床上，主要用于乳房注入防治奶牛乳房炎，子宫内给药防治奶牛子宫内膜炎，外用防治多种动物如牛、羊、山羊、马、兔、宠物等的局部感染等。利福昔明对大肠杆菌等阴性菌作用相对较弱，单独用于乳房炎的防治，不利于大肠杆菌及其内毒素所致症状的修复。

新霉素(Neomycin)为氨基糖苷类抗生素，常用其硫酸盐，硫酸盐在水中极易溶解，在乙醇、乙醚、丙酮或氯仿中几乎不溶。抗菌谱广，对大多数革兰氏阴性杆菌如大肠杆菌、沙门菌、布鲁菌、巴氏杆菌、变形杆菌等作用强，，对革兰氏阳性球菌有一定作用，但弱于革兰氏阴性菌。内服给药吸收少，在肠道内呈现抗菌作用。常用于治疗畜禽的肠道大肠杆菌感染；子宫或乳管内注入治疗奶牛、母猪等的子宫内膜炎和乳腺炎；局部外用治疗革兰氏阴性杆菌引起的皮肤、眼、耳感染。

新鱼腥草素钠(SodiumNewHouttuyfonate)为合成的十二酰乙醛亚硫酸氢钠加成物，系中药鱼腥草活性成分癸酸乙醛亚硫酸氢钠(即合成鱼腥草素)的同系物，其在热水中易溶，在水、乙醇中微溶，在氯仿、苯中几乎不溶，在氢氧化钠试液中易溶，但同时分解。鱼腥草系三白草科植物蕺菜的新鲜全草或干燥地上部分，属清热解毒类中草药，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、增强免疫力及利尿、止血、镇静、镇痛等多重功效。研究证实新鱼腥草素钠具有同样的药理作用，对金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌等有明显作用，对大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌也有较强作用。鱼腥草还可以增强白细胞等的吞噬能力，显著提高外周T淋巴细胞的比例，促进免疫球蛋白的生成，参与调整中性粒细胞氧化过程，提高中性粒细胞杀菌能力，增强机体非特异性和特异性兔疫能力，这对其抗菌、抗病毒作用也有重要的意义。

我国兽医临床上，已批准上市的利福昔明剂型及规格有：利福昔明乳房注入剂(干乳期)，规格5g：0.1g。医学临床上，已批准上市的利福昔明剂型及规格有：①利福昔明片，规格：0.1g、0.2g；②利福昔明软胶囊，规格：0.1g、0.2g；③利福昔明胶囊，规格：0.1g、0.2g；④利福昔明干混悬剂，规格：0.1g、0.2g。利福昔明已见报道研究的剂型有：利福昔明阴道栓、利福昔明缓释阴道泡腾片、乳房注入剂等。医学临床上，利福昔明已见报道研究的剂型有：利福昔明分散片、纳米乳等。兽医、医学临床均未见利福昔明与硫酸新霉素、鱼腥草组合复方制剂上市，更未见乳房注入用原位凝胶剂型的报道。温敏型原位凝胶(thermosensitiveinsitugel)具有使用方便，生物相容性好，刺激性小，黏膜组织亲和力强，滞留时间长，体外流变学特征良好的优点，在药物制剂中应用广泛，是近年来缓控释制剂领域的研究热点，虽然温敏型原位凝胶具优良的缓释效果，但难以维继40～70天，尤其是主药成分溶于水时，缓释时间还会缩短，限制了温敏型原位凝胶在防治奶牛乳房炎领域的应用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供制备简单、使用方便、释药缓慢、强效抗菌、生物相容性好的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶剂。

本发明的另一目的是提供含利福昔明的乳房注入用原位凝胶的制备方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，包括以分散形式存在的药物活性成分、以包合物形式存在的药物活性成分、温敏型凝胶基质、高分子阻滞剂、抑菌剂、pH调节剂和注射用水，所述温敏型凝胶基质由泊洛沙姆407(P407)和泊洛沙姆188(P188)组成，其中各组分的质量分数为：0.1-15％以分散形式存在的药物活性成分、0.25-20％以包合物形式存在的药物活性成分、12-30％泊洛沙姆407、0.01-11％泊洛沙姆188、0.01-10％高分子阻滞剂、0.001-3％抑菌剂，pH调节剂调节至pH5.5～7.5，余量为注射用水。

优选的，所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶中各组分的质量分数为：0.1-5％以分散形式存在的药物活性成分、1-10％以包合物形式存在的药物活性成分、15-25％泊洛沙姆407、0.5-5％泊洛沙姆188、0.1-1.5％高分子阻滞剂、0.001-0.5％抑菌剂，pH调节剂调节至pH5.5～7.5，余量为注射用水。

最优选的，所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶中各组分的质量分数为：0.2-0.6％以分散形式存在的药物活性成分、2.48-4.81％以包合物形式存在的药物活性成分、16-23％泊洛沙姆407、0.8-1.25％泊洛沙姆188、0.15-1.15％高分子阻滞剂、0.001-0.2％抑菌剂，pH调节剂调节至pH5.5～7.5，余量为注射用水。

本发明所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶的成凝胶温度在32℃～37℃之间。

所述以包合物形式存在的药物活性成分是由以下制备方法制得的：将药物活性成分和乙基化β-环糊精按照摩尔比(0.5-2)∶(0.5-4)放入研磨机中，加入50％乙醇水溶液，研磨20-30分钟，再加入与前述50％乙醇水溶液等量的50％乙醇水溶液，搅拌2-8h，喷雾干燥，过300目筛，即得主药包含物；其中所述加入的50％乙醇水溶液的总体积与药物活性成分的质量比为14-25mL∶1g。

优选的，所述以包合物形式存在的药物活性成分中药物活性成分和乙基化β-环糊精的摩尔比为1∶(1-2)；最优选的，所述以包合物形式存在的药物活性成分中药物活性成分和乙基化β-环糊精的摩尔比为1∶1-1.2。

所述乙基化β-环糊精选自乙基β-环糊精、2,6-二乙基β-环糊精、2,3,6-三乙基β-环糊精中的任意一种或多种。

本发明所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶中，所述以分散形式存在的药物活性成分和以包合物形式存在的药物活性成分中的药物活性成分相同。所述药物活性成分包括药物活性成分A和/或药物活性成分B，所述药物活性成分A为利福昔明，所述药物活性成分B为硫酸新霉素、新鱼腥草素钠中的一种或两种组合；当药物活性成分B为硫酸新霉素时，所述利福昔明与硫酸新霉素的重量比为(0.2-3)∶(0.2-3)；当药物B活性成分为新鱼腥草素钠时，所述利福昔明与新鱼腥草素钠的重量比为(0.5-5)∶(0.1-1)；当药物活性成分B为硫酸新霉素和新鱼腥草素钠的组合时，所述利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠的重量比为(0.1-2)∶(0.2-4)∶(0.1-2)。

优选的，当药物活性成分B为硫酸新霉素时，所述利福昔明与硫酸新霉素的重量比为1∶(0.5-1)；当药物活性成分B为新鱼腥草素钠时，所述利福昔明与新鱼腥草素钠的重量比为1∶(0.1-0.2)；当药物活性成分B为硫酸新霉素和新鱼腥草素钠的组合时，所述利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠的重量比为1∶(1-3)∶0.4。

所述利福昔明、新鱼腥草素钠均经过超微粉碎处理。所述利福昔明、新鱼腥草素钠的颗粒粒径均为：90％颗粒粒径在10μm以下，且不得有粒径大于25μm颗粒。

所述高分子阻滞剂选自聚乙烯醇、聚维酮K30、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙纤维素、羧甲基纤维素钠、卡波姆、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠、磷脂等中的任意一种或多种。

所述抑菌剂选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、三氯叔丁醇、苯酚、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、苯扎溴铵、苯扎氯铵、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫柳汞、度米芬、硼酸、硝酸苯汞、桉叶油、麝香草酚、山梨酸钾等中的任意一种或多种。

所述pH调节剂选自氢氧化钠、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、酒石酸或其钠盐、乳酸、醋酸或其钠盐、枸橼酸或其钠盐、硼酸或其钠盐、磷酸盐缓冲液等中的任意一种或多种。

本发明所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶的制备方法，包括以下步骤：

(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的抑菌剂，用占处方量60-97％的注射用水溶解，再将处方量的温敏性凝胶基质和高分子阻滞剂撒在液面上，在温度0-10℃下冷藏直至得到无团块、分散均匀的溶液A；(b)将处方量的以分散形式存在的药物活性成分和处方量的以包合物形式存在的药物活性成分加入到溶液A中，搅拌致分散均匀，采用pH调节剂调节pH为5.5～7.5，加入余量的注射用水，即得含利福昔明的乳房注入用原位凝胶。

优选的，步骤(2)中，取处方量的抑菌剂，用占处方量85-97％的注射用水溶解，再将处方量的温敏性凝胶基质和高分子阻滞剂撒在液面上，在温度4℃下冷藏直至得到无团块、分散均匀的溶液A。

本发明中，以分散形式存在的药物活性成分是指在含利福昔明的乳房注入用原位凝胶以分散形式存的药物活性成分；以包合物形式存在的药物活性成分是指在含利福昔明的乳房注入用原位凝胶将以环糊精包合物形式存的药物活性成分。

本发明的有益效果：

(1)本发明含利福昔明或系列含利福昔明的组合物乳房注入用原位凝胶，以水为溶媒，不含任何有机溶媒，生物相容性好，刺激性小，安全性高，更适于乳房注入使用；以温敏型原位凝胶为载体，使其在储存条件下以液体状态存在，注入乳房后，受乳房内温度刺激在32℃～37℃、4～15秒内完全形成柔软、润滑的药物贮库凝胶，给药方便，黏附性强，且药物活性成分少部分直接分散在凝胶基质中，大部分制备成缓释的包合物后分散在基质中，一方面起到双重缓释效果，另一方面意外发现包合物能增强凝胶强度，减缓凝胶溶蚀，持效时间更长，缓释效果显著，体外释药时间长达48d，可以在整个干乳期内有效治疗和防控奶牛乳房炎，实现一个疗程给药一次目的，减少了给药次数，节省人力物力，提高动物顺应性；(2)利福昔明与硫酸新霉素、新鱼腥草素钠联用，弥补了利福昔明单方抗菌谱局限的缺陷，且意外发现联合用药产生了协同作用，大大增强了抗菌作用，又能减少细菌耐药性产生；(3)利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠组合，增加了抗炎、镇痛、促进组织修复和增强免疫力的多重功效，对动物乳房炎的防治效果优良；(4)本发明提供的系列乳房注入用原位凝胶，制备简单，克服了微球、脂质体、胶束等工艺复杂，工业化生产困难的缺陷。

附图说明

图1为本发明含利福昔明的乳房注入用原位凝胶的体外释放度曲线。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明的技术方案作进一步说明。

实施例1：体外抑菌试验

(1)试验材料

药品：利福昔明、硫酸新霉素、溶菌酶、新鱼腥草素钠

菌株：临床分离金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和无乳链球菌的耐药株，普通琼脂培养基(自制)、普通肉汤培养基(自制)。

(2)试验方法

以DMSO为溶剂分别制备2％的利福昔明溶液和0.2％新鱼腥草素钠溶液，以注射用水为溶剂分别制备2％的硫酸新霉素溶液。

将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌悬液接种于琼脂培养基上，置于37℃培养箱中培养24-48h，挑取长出的菌落于加有2mL灭菌普通肉汤培养基的试管中，用灭菌的生理盐水适当稀释至含菌量为1.5×10⁸个/mL。无菌操作，用灭菌的棉棒蘸取菌液，在试管内壁的液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂培养基表面均匀涂抹接种3次，每次旋转平板60度以确保接种菌的分布均匀，(琼脂培养基使用前先在37℃温箱中放置1h)，每管菌液用一个棉棒。室温放置5min使其稍干燥，在每个平皿中以等距离均匀安置不锈钢小管(内径为6.0mm)。在小管中分别滴注被检药物溶液50μL(被检测药物溶液中药物活性成分的浓度如表1所示)，将培养基倒置放于37℃培养箱中培养18-24h，观察抑菌圈的大小，并用游标卡尺测量抑菌圈的直径，每个抑菌圈测量3次，取平均值。正常对照组以生理盐水：DMSO(1:1)代替被检药物溶液作相同处理。

表1体外抑菌试验结果(n±SD)

注：同列数据后的不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)

由表1体外抑菌试验结果可见，利福昔明联合硫酸新霉素、利福昔明联合新鱼腥草素钠使用对导致奶牛乳房炎的3种主要病原菌的抑菌圈直径都显著大于利福昔明、硫酸新霉素、新鱼腥草素钠单独使用时的抑菌圈直径(p<0.05)，同时利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠三者联合使用的抑菌圈直径更是显著大于利福昔明与硫酸新霉素或新鱼腥草素钠两者联合使用的抑菌圈直径(p<0.05)，显示利福昔明和硫酸新霉素、利福昔明和新鱼腥草素钠、及三者联合应用对抗奶牛乳房炎的3中主要病原菌呈现协同作用。基于抑菌效果差异显著时选择抑菌效果优的的配比，差异不显著时优选药物浓度低的配比的原则，因此不同组合抑菌效果比较显示：利福昔明与硫酸新霉素组合物较佳配比为(1∶1)；利福昔明与新鱼腥草素钠较佳配比为(1∶0.2)；利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠组合物较佳配比为(0.5∶1∶0.2)。

实施例2：

利福昔明环糊精包合物

处方

利福昔明100g

乙基-β-环糊精190g

50％乙醇水溶液1800mL。

制备方法：(a)、将利福昔明超微粉碎，控制90％的颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒；(b)、将100g利福昔明和190g乙基-β-环糊精放入研磨机中，加入900mL50％乙醇水溶液，研磨30分钟；(c)、再加入余下的900mL50％乙醇水溶液，搅拌4h，喷雾干燥，过300目筛，即得利福昔明环糊精包合物，该环糊精包合物粒度在50μm以下，环糊精包合物中利福昔明以包合物形式存在。

实施例3：

利福昔明-硫酸新霉素环糊精包合物

处方

制备方法：(a)、将利福昔明超微粉碎，控制90％的颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒；(b)、将100g利福昔明、100g硫酸新霉素和400g2,6-二乙基-β-环糊精放入研磨机中，加入2000mL50％乙醇水溶液，研磨30分钟；(c)、再加入余下的2000mL50％乙醇水溶液，搅拌5h，喷雾干燥，过300目筛，即得利福昔明-硫酸新霉素环糊精包合物，该环糊精包合物粒度在50μm以下，环糊精包合物中利福昔明和硫酸新霉素以包合物形式存在。

实施例4：

利福昔明-新鱼腥草素钠环糊精包合物

处方

制备方法：(a)、分别将利福昔明和新鱼腥草素钠超微粉碎，控制90％的颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒；(b)、将100g利福昔明、20g新鱼腥草素钠和281g2,6-二乙基-β-环糊精放入研磨机中，加入1500mL50％乙醇水溶液，研磨30分钟；(c)、加入余下的1500mL50％乙醇水溶液，搅拌5h，喷雾干燥，过300目筛，即得利福昔明-硫酸新霉素环糊精包合物，该环糊精包合物粒度在50μm以下，环糊精包合物中利福昔明和新鱼腥草素钠以包合物形式存在。

实施例5：

利福昔明-硫酸新霉素-新鱼腥草素钠环糊精包合物

处方

制备方法：(a)、分别将利福昔明和新鱼腥草素钠超微粉碎，控制90％的颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒；(b)、将50g利福昔明、100g硫酸新霉素、20g新鱼腥草素钠和400g2,6-二乙基β-环糊精放入研磨机中，加入2000mL50％乙醇水溶液，研磨30分钟；(c)、加入余下的2000mL50％乙醇水溶液，搅拌6h，喷雾干燥，过300目筛，即得利福昔明-硫酸新霉素-新鱼腥草素钠环糊精包合物，该环糊精包合物粒度在50μm以下，环糊精包合物中利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠以包合物形式存在。

测定实施例2-5所制备的包合物中药物活性成分的含量，计算包合率。

采用高效液相色谱法测定环糊精包合物中利福昔明的含量，色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(规格：250mm×4.6mm,5μm)；以甲醇-乙腈-缓冲液(0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，磷酸调pH值至2.5)(25∶40∶35)为流动相，柱温35℃，流速1mL/min，检测波长为240nm。测定法：取环糊精包合物(约相当于利福昔明400mg)，精密称定，加流动相超声溶解并稀释到100mL(临用前配制)，摇匀后过滤，取滤液1mL置100mL容量瓶中，流动相稀释并定容，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积；另取利福昔明对照品约20mg，精密称定，流动相溶解并稀释至40μg/mL，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得利福昔明的含量。

采用HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)法测定环糊精包合物中硫酸新霉素的含量，色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，以甲醇：缓冲盐(0.7％五氟丙酸的0.025mol·L^-1乙酸铵溶液)(56∶44)为流动相，流速为1.0mL/min，漂移管温度为110℃，载气流速为2.6L/min。测定法：取环糊精包合物(约相当于硫酸新霉素100mg)，精密称定，加流动相超声溶解并稀释到100mL，摇匀后过滤，精密量取滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积；另取硫酸新霉素对照品约100mg，精密称定，流动相溶解并稀释至1mg/mL，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得硫酸新霉素的含量。

采用高效液相色谱测定环糊精包合物中新鱼腥草素钠的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱(规格250mm×4.6mm,5μm)，以甲醇-缓冲液(0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，10％的氢氧化钠溶液调pH值至9.0)(80∶20)，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，检测波长为286nm。测定法：取环糊精包合物(约相当于新鱼腥草素钠25mg)，精密称定，加流动相超声溶解并稀释到100mL，摇匀后过滤，精密量取滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积；另取新鱼腥草素钠对照品约20mg，精密称定，加流动相超声溶解并稀释到100mL，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得新鱼腥草素钠的含量。

其测定结果见表2。

表2实施例2-5制得的环糊精包合物中药物活性成分含量

实施例6：

利福昔明乳房注入用原位凝胶(每1g含利福昔明10mg)

处方

制备方法：(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的对羟基苯甲酸甲酯，用700mL的注射用水溶解，再将处方量的凝胶基质P407、P188和羟丙基甲基纤维素撒在液面上，4℃冷藏24h以上，直至得到无团块、分散均匀的溶液A；(c)取处方量的分散形利福昔明(利福昔明经超微粉碎，控制90％颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒)和利福昔明环糊精包合物加入到溶液A液中，搅拌均匀，采用氢氧化钠调节pH为6.5，加入余量的注射用水至1000g，过滤，即得。

实施例7：

复方利福昔明乳房注入用原位凝胶(每1g含利福昔明10mg，硫酸新霉素10mg)

处方

制备方法：(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的对羟基苯甲酸甲酯，用750mL的注射用水溶解，再将处方量的凝胶基质P407、P188和羟丙基甲基纤维素撒在液面上，4℃冷藏24h以上，直至得到无团块、分散均匀的溶液A；(c)、取处方量的分散形利福昔明、分散形硫酸新霉素(分别将利福昔明和硫酸新霉素超微粉碎，控制90％颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒)和利福昔明-硫酸新霉素环糊精包合物加入到溶液A中，搅拌均匀，采用氢氧化钠调节pH为6.5，加入余量的注射用水至1000g，过滤，即得。

实施例8：

复方利福昔明乳房注入用原位凝胶(每1g含利福昔明10mg，新鱼腥草素钠2mg)

处方

制备方法：(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的苯扎氯铵，用700mL注射用水溶解，再将处方量的凝胶基质P407、P188和羟丙基甲基纤维素撒在液面上，4℃冷藏24h以上，直至得到无团块、分散均匀的溶液A；(c)取处方量的分散形利福昔明、分散形新鱼腥草素钠(分别将利福昔明和新鱼腥草素钠超微粉碎，控制90％颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒)和利福昔明-新鱼腥草素钠环糊精包合物加入到溶液A中，搅拌均匀，采用氢氧化钠调节pH为6.5，加入余量的注射用水至1000g，过滤，即得。

实施例9：

复方利福昔明乳房注入用原位凝胶(每1g含利福昔明5mg、硫酸新霉素10mg，新鱼腥草素钠2mg)

处方

制备方法：(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的硫柳汞，用700mL注射用水溶解，再将处方量的凝胶基质P407、P188和聚维酮K30及羧甲基纤维素钠撒在液面上，4℃左右冷藏过夜，得到澄清、无团块、分散均匀的溶液A；(c)、取处方量的分散形利福昔明、分散形新鱼腥草素钠、硫酸新霉素(分别将利福昔明和新鱼腥草素钠超微粉碎，控制90％颗粒粒径在5μm以内，且不得有粒径大于10μm颗粒)和利福昔明-硫酸新霉素-新鱼腥草素钠环糊精包合物一起加入到溶液A中，搅拌均匀，采用氢氧化钠调节pH为6.5，加入余量的注射用水至1000g，过滤，即得。

实施例10：

复方利福昔明乳房注入用原位凝胶(每1g含利福昔明5mg、硫酸新霉素10mg，新鱼腥草素钠2mg)

处方

制备方法：(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的对羟基苯甲酸甲酯，用600mL注射用水溶解，再将处方量的凝胶基质P407、P188、聚维酮K30和甲基纤维素撒在液面上，4℃冷藏24h以上，直至得到无团块、分散均匀的溶液A；(c)、取处方量的分散形利福昔明、分散形硫酸新霉素和分散形新鱼腥草素钠(分别将利福昔明和新鱼腥草素钠超微粉碎，控制90％颗粒粒径在10μm以内，且不得有粒径大于25μm颗粒)、和利福昔明-硫酸新霉素-新鱼腥草素钠环糊精包合物加入到溶液A中，搅拌均匀，采用氢氧化钠调节pH为6.5，加入余量的注射用水至1000g，过滤，即得。

对实施例6-10所制备的原位凝胶进行体外性能评价，包括胶凝温度、胶凝时间、热可逆性、释放度、黏度、pH值的测定等。测定方法如下：凝胶温度测定采用试管倒转法。取储存于冰箱中的凝胶溶液3～4mL至试管，将温度计插入凝胶溶液中。将试管置于水浴中(水浴液面高出试管内容凝胶溶液3cm)，缓慢升温，升温速率约为每1min～2min升高0.5℃。将试管倾斜90°，观察内容物不流动时的温度即定义为胶凝温度。每个样品测定3次，结果取其平均值。

胶凝时间测定原位凝胶溶液，25℃放置0.5h后，置于已预热至37℃的试管中并保温，记录相变时间。

热可逆性测定将凝胶加热至特定温度(30，35，40，45，50，55，60，70℃)，然后缓慢冷却至室温，即算作一次加热循环，检验直至凝胶不再具备温敏性或者成分发生改变，若重复10次仍具有温敏性，记做循环次数>10。

释放度测定精密称取10mL原位凝胶制剂，置于预先已称重的平底具塞刻度试管中，再行称重。将该试管置于37.3±0.2℃的恒温水浴振荡器中平衡10min，使聚合物溶液完全形成凝胶。小心加入经37℃预热的5mL磷酸缓冲液(pH7.4，含SDS0.5％)作为释放介质，在70次/min恒温水浴振荡，分别在1、4、8、12h、1、2、4、8、12、24、36、40、44、48d立即倾出全部释放介质，将容器内外表面用滤纸吸干，迅速称量并纪录，然后重新放入恒温水浴振荡器中平衡10min，再补充释放介质5mL。如此反复操作，直至实验结束。

黏度测定使用旋转式黏度计测定室温(25℃)下凝胶的黏度。

pH值测定用酸度计测定处方凝胶溶液室温下的pH值。

实施例6-10的测定结果见表3，体外释放结果见图1。

表3实施例6-10制得的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶体外性能评价

结合表3和图1可知，含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，胶凝温度适宜，在32℃～37℃之间；胶凝时间短，在4～15秒内完全形成凝胶；性质稳定，室温下为流动性好的液体状态，乳房注入后可以快速在乳室中形成凝胶，缓释效果显著，体外释药时间长达48d，可以在整个干乳期内有效治疗和防控奶牛乳房炎。

Claims (10)

1.一种含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于它包括以分散形式存在的药物活性成分、以包合物形式存在的药物活性成分、温敏型凝胶基质、高分子阻滞剂、抑菌剂、pH调节剂和注射用水，所述温敏型凝胶基质由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188组成，其中各组分的质量分数为：0.1-15％以分散形式存在的药物活性成分、0.25-20％以包合物形式存在的药物活性成分、12-30％泊洛沙姆407、0.01-11％泊洛沙姆188、0.01-10％高分子阻滞剂、0.001-3％抑菌剂，pH调节剂调节至pH5.5～7.5，余量为注射用水。

2.根据权利要求1所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶中各组分的质量分数为：0.1-5％以分散形式存在的药物活性成分、1-10％以包合物形式存在的药物活性成分、15-25％泊洛沙姆407、0.5-5％泊洛沙姆188、0.1-1.5％高分子阻滞剂、0.001-0.5％抑菌剂，pH调节剂调节至pH5.5～7.5，余量为注射用水。

3.根据权利要求2所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶中各组分的质量分数为：0.2-0.6％以分散形式存在的药物活性成分、2.48-4.81％以包合物形式存在的药物活性成分、16-23％泊洛沙姆407、0.8-1.25％泊洛沙姆188、0.15-1.15％高分子阻滞剂、0.001-0.2％抑菌剂，pH调节剂调节至pH5.5～7.5，余量为注射用水。

4.根据权利要求1、2或3所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述以包合物形式存在的药物活性成分是由以下制备方法制得的：将药物活性成分和乙基化β-环糊精按照摩尔比(0.5-2)∶(0.5-4)放入研磨机中，加入50％乙醇水溶液，研磨20-30分钟，再加入与前述50％乙醇水溶液等量的50％乙醇水溶液，搅拌2-8h，喷雾干燥，过300目筛，即得主药包含物；其中所述加入的50％乙醇水溶液的总体积与药物活性成分的质量比为14-25mL∶1g。

5.根据权利要求4所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述以包合物形式存在的药物活性成分中药物活性成分和乙基化β-环糊精的摩尔比为1∶(1-2)，优选为1∶1-1.2。

6.根据权利要求4所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述乙基化β-环糊精选自乙基β-环糊精、2,6-二乙基β-环糊精、2,3,6-三乙基β-环糊精中的任意一种或多种。

7.根据权利要求1、2或3所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述含利福昔明的乳房注入用原位凝胶中，所述以分散形式存在的药物活性成分和以包合物形式存在的药物活性成分中的药物活性成分相同；所述药物活性成分包括药物活性成分A和/或药物活性成分B，所述药物活性成分A为利福昔明，所述药物活性成分B为硫酸新霉素、新鱼腥草素钠中的一种或两种组合；

当药物活性成分B为硫酸新霉素时，所述利福昔明与硫酸新霉素的重量比为(0.2-3)∶(0.2-3)，优选为1∶(0.5-1)；

当药物B活性成分为新鱼腥草素钠时，所述利福昔明与新鱼腥草素钠的重量比为(0.5-5)∶(0.1-1)，优选为1∶(0.1-0.2)；

当药物活性成分B为硫酸新霉素和新鱼腥草素钠的组合时，所述利福昔明、硫酸新霉素和新鱼腥草素钠的重量比为(0.1-2)∶(0.2-4)∶(0.1-2)，优选为1∶(1-3)∶0.4。

8.根据权利要求7所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述利福昔明、新鱼腥草素钠均经过超微粉碎处理；所述利福昔明、新鱼腥草素钠的颗粒粒径均为：90％颗粒粒径在10μm以下，且不得有粒径大于25μm颗粒。

9.根据权利要求1、2或3所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶，其特征在于所述高分子阻滞剂选自聚乙烯醇、聚维酮K30、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙纤维素、羧甲基纤维素钠、卡波姆、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠、磷脂中的一种或多种；

所述抑菌剂选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、三氯叔丁醇、苯酚、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、苯扎溴铵、苯扎氯铵、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫柳汞、度米芬、硼酸、硝酸苯汞、桉叶油、麝香草酚、山梨酸钾中的一种或多种；

所述pH调节剂选自氢氧化钠、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、酒石酸或其钠盐、乳酸、醋酸或其钠盐、枸橼酸或其钠盐、硼酸或其钠盐、磷酸盐缓冲液中一种或多种。

10.权利要求1所述的含利福昔明的乳房注入用原位凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(a)、按照处方量称取各组分；(b)、取处方量的抑菌剂，用占处方量60-97％的注射用水溶解，再将处方量的温敏性凝胶基质和高分子阻滞剂撒在液面上，在温度0-10℃下冷藏直至得到无团块、分散均匀的溶液A；(b)将处方量的以分散形式存在的药物活性成分和处方量的以包合物形式存在的药物活性成分加入到溶液A中，搅拌致分散均匀，采用pH调节剂调节pH为5.5～7.5，加入余量的注射用水，即得含利福昔明的乳房注入用原位凝胶。