CN104095817A - 一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用，本发明以壳聚糖为载体，三聚磷酸钠为交联剂，通过离子交联法，包封厚朴酚或和厚朴酚药物，然后经过滤、透析除去溶液中未包埋的药物和小分子物质，最后冷冻干燥即得含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球。所制备的载药纳米微球的平均粒径为40～150nm，载药量为74.4～283.14μg/mg，包封率为20.27～82.11％，多分散系数为0.3～0.4，Zeta电位为20～50mV。所制得的载药纳米微球粒径均一、分散性好，有较高的抗氧化活性和抗癌活性，有效地提高了厚朴酚、和厚朴酚的水溶性、稳定性和生物利用度，在新型天然抗氧化剂和抗肿瘤制剂方面有很好的应用前景。

Description

一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用。

背景技术

我国是中药资源生物多样性最丰富的国家。但是，我国中药制剂剂型老化、单一，极大的限制了中药临床疗效的提高。充分利用现代科学技术，使中药具有更好的现代剂型可能是现代中药发展的重要方向之一。纳米药物具有一些特别的性质，像靶向性、缓释行、可控性、低毒性等，纳米中药也具有这些相似的性质。将纳米技术引入中药的研究，开发具有自主知识产权的中药新剂型，对中药的研究是很有意义的。相关研究表明，引入纳米技术，将中药制备成纳米中药，能有效改善药物的稳定性、水溶性、使药物具有缓释效果、提高药物靶向性，从而提高中药生物利用度；同时，还可丰富传统中药剂型和给药途径，解决中药剂型单一的问题。虽然纳米技术在中医药领域起步较晚，但已展现出巨大的潜力及广阔的前景。

厚朴(Magnolia officinalis.)是我国传统中药，在我国已有2000多年的药用历史，而厚朴酚(magnolol)与和厚朴酚(honokiol)是木兰科植物厚朴中的两个主要活性成分，属于难溶性药物。研究发现，厚朴酚、和厚朴酚具有良好抗炎、抗菌、抗肿瘤、肌肉松弛、降胆固醇和抗衰老等广泛的药理活性，且毒副作用小，是很具有开发前途的中药经济作物。但由于厚朴酚与和厚朴酚均为酚类结构，由于溶解性差在生物体内利用率很低，主要滞留于胃肠内，95％由粪便排出，进入循环后以肝代谢和肾排泄为主。且酚类物质稳定性较差，在潮湿、阳光、高温等条件下极易发生氧化、聚合、缩合等反应，使其分子结构中有生物活性的酚羟基变成醌，导致其应用受到局限。因此，采用现代科学技术将厚朴酚或和厚朴酚包裹起来，制备成纳米微球，改善其水溶性和稳定性以提高其生物利用度，成为亟需解决的一大难题。

壳聚糖是一种具有反应性官能团，较高的吸附能力和可生物降解性的高分子电解质。此外，它有良好的生物相容性，在体内能被降解，降解产物能完全地被人体吸收，对生命体无毒且有抗细菌、抗真菌和抗肿瘤的能力。这些特点使它在药物的控制与释放、改善药物的溶解性和吸收性等方面发挥重要作用。壳聚糖作为药物缓释载体还具有维持血药浓度平衡、降低药物不良反应、提高药物疗效等优势。因此壳聚糖是制备纳米微球理想的载体。

将难溶性药物通过壳聚糖载体进行包裹可制得载药的纳米微球，这种微球已被证实可提高药物分子的溶解性和生物活性。壳聚糖载药微球的制备方法通常有喷雾干燥法、溶剂蒸发法、乳化-化学交联法和离子交联法等。乳化交联法，溶剂蒸发法和喷雾干燥法都会用到乳化剂，如果清洗不彻底，会影响药物活性甚至对生物体产生副作用，且这些方法的制备工艺比较复杂，而离子交联法工艺简便易行，而且不会用到有毒的有机溶剂。

目前关于难溶性药物的壳聚糖载药微球的报道还不多，例如，CN102389398 A公开了一种壳聚糖载辣椒素微球的制备方法。以壳聚糖溶液和辣椒素溶液为主要原料，通过离子交联法联合喷雾干燥法制备得到，交联剂为三聚磷酸钠，得到的微球粒径分布在0.8～4.5μm。CN 102641245 A公开了一种装载紫杉醇等难溶性药物的壳聚糖-壳聚糖衍生物纳米球制备方法，先将难溶性药物溶于有机溶剂，然后与壳聚糖溶液、乳化剂在一定压力的条件下先制备成初乳再制备成O/W/O型复乳液，多次过微孔滤膜再加入戊二醛或甲醛等交联剂，最后固化得到产物。CN 102349871 B公开了一种制备难溶性药物10-羟基喜树碱载药纳米微球的方法，先在较高压力下通过反复压过微孔膜制备含药乳滴，再通过两步较长时间交联固化得到粒径在300nm～2μm之间的载药纳米微球。这些壳聚糖载药微球的制备方法步骤复杂，反应条件较苛刻，有些方法使用了有毒溶剂，并且所得到的载药微球粒径均偏大，分布较广。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的上述不足，提供一种粒径较小、分散良好的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用。

本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：

一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球，该纳米微球为壳聚糖与三聚磷酸钠交联形成的三维网状结构，厚朴酚或和厚朴酚以分子形式固定其中，厚朴酚或和厚朴酚的包封率为20.27～82.11％，纳米微球的平均粒径为40～150nm，纳米微球粒径的多分散系数(PDI)为0.3～0.4，载药量为74.4～283.14μg/mg，Zeta电位为20～50mV。

本发明还提供了上述含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，步骤如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖溶于含有浓度为0.01～0.05mg/mL的泊洛沙姆188和体积浓度为1.0～1.5％醋酸的溶剂中，所述的溶剂为水或水与乙醇的混合物，其中乙醇体积含量不超过50％，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为1.0～3.0mg/mL的溶液，然后用碱液调节pH值为3.5～4.5，即得壳聚糖溶液；

(2)厚朴酚或和厚朴酚溶液的配制：将厚朴酚或和厚朴酚溶于无水乙醇中，配制厚朴酚或和厚朴酚浓度为1.0～10.0mg/mL的乙醇溶液，然后过滤得到厚朴酚或和厚朴酚溶液；

(3)含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备：将步骤(2)所得厚朴酚或和厚朴酚溶液逐滴加入步骤(1)所得壳聚糖溶液中，并逐滴加入1.0～2.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，其中厚朴酚或和厚朴酚溶液、壳聚糖溶液及三聚磷酸钠水溶液的体积比为1:5:2，在30～40℃持续搅拌反应10～60min，所得微乳液静置陈化10～15h，再后处理即得含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球。

按上述方案，步骤(1)所述壳聚糖脱乙酰度为82～97％，分子量为10～50万。

按上述方案，步骤(1)所述碱液为浓度1mol/L的NaOH溶液。

按上述方案，步骤(1)和步骤(2)所述过滤为采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤。

按上述方案，步骤(3)所述搅拌速率为800～1600r/min，优选搅拌速率为1200r/min。

优选的是，步骤(3)所述三聚磷酸钠水溶液浓度为1.2mg/mL。

按上述方案，步骤(3)所述后处理包括过滤、透析、真空冷冻干燥。

本发明还提供了上述含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的应用，具体为在制备抗氧化剂方面的应用，及在制备人肝癌细胞抑制剂方面的应用。

本发明的有益效果在于：1、本发明以壳聚糖为载体，三聚磷酸钠为交联剂，泊洛沙姆188为稳定剂，采用离子交联法制备含厚朴酚或和厚朴酚的载药纳米微球，改善其水溶性差，吸收较差的问题，以提高其生物利用度。2、将厚朴酚与和厚朴酚制备成纳米微球，改善了药物的水溶性，增强了药物的稳定性，提高了药物的生物利用度，为开发治疗和预防由体内氧化反应引起的心脑血管、糖尿病、癌症等疾病的新制剂提供了新途径，并对开发中药新剂型和实现中药现代化具有积极促进作用。3、本发明所提供的制备方法操作简单，条件温和，重复性好，制得的纳米微球粒径均一、分散稳定，且纳米微球中的药物以分子形式存在其中，解决了现有制备技术中存在的有毒物质残留和载药微球粒径偏大、粒度分布广、生物活性低的问题，可实现难溶药物溶解度的增加和生物利用度的提高，并有效提高了难溶药物的包封率，可实现药物的控释缓释，有望在大规模中药纳米微球的制备上得到应用。

附图说明

图1为本发明实施例1所制备的含厚朴酚的纳米微球的原子力显微镜(AFM)图；

图2为实施例2所制备的含厚朴酚的纳米微球的AFM图；

图3为实施例4所制备的含和厚朴酚的纳米微球的AFM图；

图4为实施例5所制备的含和厚朴酚的纳米微球的AFM图；

图5是实施例2和5所制备的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球清除自由基活性图；

图6是实施例2和5所制备的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球对人肝癌细胞(HepG2)存活率关系图；

图7是施例5所制备的含和厚朴酚的纳米微球的释放曲线图。

具体实施方式

为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合附图对本发明作进一步详细描述。

实施例1

本实施例含厚朴酚的纳米微球的制备方法如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖(脱乙酰度82％，分子量50万)溶于含有0.01mg/mL泊洛沙姆188和1.0％(V/V)醋酸的溶剂中，溶剂为含50％(V/V)乙醇的水溶液，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为1.5mg/mL的溶液，然后用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，所得滤液经浓度为1mol/L的NaOH溶液调节pH值为4.5，得到壳聚糖溶液；

(2)厚朴酚溶液的配制：将厚朴酚溶于无水乙醇中配成浓度为1.0mg/mL的厚朴酚乙醇溶液，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，得到厚朴酚溶液；

(3)含厚朴酚的纳米微球的制备：将1mL步骤(2)所得厚朴酚溶液缓慢加入5mL步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌(搅拌速率为800r/min)，并逐滴加入2mL 1.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，在40℃持续搅拌反应30min，所得微乳液静置10h，采用中速定量滤纸抽滤，再将滤液放入8000～14000截留分子量的透析袋中并在室温下于超纯水中透析3h；将透析后的微乳液倒入培养皿中，在-20℃预冻12h，然后在-50℃真空冷冻干燥24h，即得含厚朴酚的纳米微球。

本实施例所制备的纳米微球平均粒径约为40nm，载药量为74.4μg/mg，包封率为78.12％。

附图1为采用美国Veeco公司MultiMode^TM型原子力显微镜所观察到的本实施例所得含厚朴酚的纳米微球的原子力显微镜(AFM)图。由AFM图可以看出，制备得到的纳米微球球形规则，粒径均一，分散良好，微球平均粒径约为40nm。

实施例2

本实施例含厚朴酚的纳米微球的制备方法如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖(脱乙酰度97％，分子量10万)溶于含有0.03mg/mL泊洛沙姆188和1.0％(V/V)醋酸的溶剂中，溶剂为含20％(V/V)乙醇的水溶液，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为1.0mg/mL的溶液，然后用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，所得滤液经浓度为1mol/L的NaOH溶液调节pH值为4.0，得到壳聚糖溶液；

(2)厚朴酚溶液的配制：将厚朴酚溶于无水乙醇中配成浓度为5.0mg/mL的厚朴酚乙醇溶液，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，得到厚朴酚溶液；

(3)含厚朴酚的纳米微球的制备：将1mL步骤(2)所得厚朴酚溶液缓慢加入5mL步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌(搅拌速率为1200r/min)，并逐滴加入2mL 1.2mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，在30℃持续搅拌反应60min，所得微乳液采用与实施例1相同的方法后处理得含厚朴酚的纳米微球。

本实施例所制备的纳米微球平均粒径约为120nm，载药量为81.73μg/mg，包封率为20.27％。

附图2是本实施例所制备的含厚朴酚的纳米微球的AFM图。由AFM图可以看出，制备得到的载药微球球形规则，粒径均一，分散良好，微球平均粒径约为120nm。

实施例3

本实施例含厚朴酚的纳米微球的制备方法如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖(脱乙酰度90％，分子量30万)溶于含有0.02mg/mL泊洛沙姆188和1.5％(V/V)醋酸的溶剂中，溶剂为含30％(V/V)乙醇的水溶液，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为2.0mg/mL的溶液，然后用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，所得滤液经浓度为1mol/L的NaOH溶液调节pH值为4.0，得到壳聚糖溶液；

(2)厚朴酚溶液的配制：将厚朴酚溶于无水乙醇中配成浓度为7.0mg/mL的厚朴酚乙醇溶液，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，得到厚朴酚溶液；

(3)含厚朴酚的纳米微球的制备：将1mL步骤(2)所得厚朴酚溶液缓慢加入5mL步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌(搅拌速率为1000r/min)，并逐滴加入2mL 1.5mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，在35℃持续搅拌反应30min，所得微乳液采用与实施例1相同的方法后处理得含厚朴酚的纳米微球。

本实施例所制备的纳米微球平均粒径约为140nm，载药量为115.42μg/mg，包封率为32.98％。

实施例4

本实施例含和厚朴酚的纳米微球的制备方法如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖(脱乙酰度82％，分子量50万)溶于含有0.05mg/mL泊洛沙姆188和1.5％(V/V)醋酸的水中，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为3.0mg/mL的溶液，然后用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，所得滤液经浓度为1mol/L的NaOH溶液调节pH值为3.5，得到壳聚糖溶液；

(2)和厚朴酚溶液的配制：将和厚朴酚溶于无水乙醇中配成浓度为10.0mg/mL的和厚朴酚乙醇溶液，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，得到厚朴酚溶液；

(3)含和厚朴酚的纳米微球的制备：将1mL步骤(2)所得和厚朴酚溶液缓慢加入5mL步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌(搅拌速率为1600r/min)，并逐滴加入2mL 2mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，在35℃持续搅拌反应10min，所得微乳液采用与实施例1相同的方法后处理得含和厚朴酚的纳米微球。

本实施例所制备的纳米微球平均粒径约为150nm，载药量为283.14μg/mg，包封率为82.11％。

附图3是本实施例所制备的含和厚朴酚的纳米微球的AFM图。由AFM图可以看出，纳米微球球形较规则，粒径均一，分散良好，微球的平均粒径约为150nm。

实施例5

本实施例含和厚朴酚的纳米微球的制备方法如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖(脱乙酰度97％，分子量10万)溶于含有0.03mg/mL泊洛沙姆188和1.0％(V/V)醋酸的溶剂中，溶剂为含20％(V/V)乙醇的水溶液，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为1.0mg/mL的溶液，然后用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，所得滤液经浓度为1mol/L的NaOH溶液调节pH值为4.0，得到壳聚糖溶液；

(2)和厚朴酚溶液的配制：将和厚朴酚溶于无水乙醇中配成浓度为5.0mg/mL的和厚朴酚乙醇溶液，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，得到厚朴酚溶液；

(3)含和厚朴酚的纳米微球的制备：将1mL步骤(2)所得和厚朴酚溶液缓慢加入5mL步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌(搅拌速率为1200r/min)，并逐滴加入2mL 1.2mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，在30℃持续搅拌反应60min，所得微乳液采用与实施例1相同的方法后处理得含和厚朴酚的纳米微球。

本实施例所制备的纳米微球平均粒径约为130nm，载药量为240.64μg/mg，包封率为59.68％。

附图4是本实施例所制备的含和厚朴酚的纳米微球的AFM图。由AFM图可以看出，纳米微球球形较规则，粒径均一，分散良好，微球的平均粒径约为130nm。

实施例6

本实施例含和厚朴酚的纳米微球的制备方法如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖(脱乙酰度90％，分子量30万)溶于含有0.04mg/mL泊洛沙姆188和1.2％(V/V)醋酸的水中，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为2.0mg/mL的溶液，然后用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，所得滤液经浓度为1mol/L的NaOH溶液调节pH值为4.0，得到壳聚糖溶液；

(2)和厚朴酚溶液的配制：将和厚朴酚溶于无水乙醇中配成浓度为8.0mg/mL的和厚朴酚乙醇溶液，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，得到厚朴酚溶液；

(3)含和厚朴酚的纳米微球的制备：将1mL步骤(2)所得和厚朴酚溶液缓慢加入5mL步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌(搅拌速率为1000r/min)，并逐滴加入2mL 2mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，在35℃持续搅拌反应60min，所得微乳液采用与实施例1相同的方法后处理得含和厚朴酚的纳米微球。

本实施例所制备的纳米微球平均粒径约为80nm，载药量为252.87μg/mg，包封率为69.54％。

实施例7

含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球抗氧化活性测试：

将二苯代苦味酰基自由基(DPPH)用无水乙醇配置成1mmol/L的工作液，实施例1、实施例2和实施例3制备的载药纳米微球都用无水乙醇配成浓度为0，0.5，1，2，4，8mg/mL待用。实验时按顺序依次加入3.5mL无水乙醇，400μL DPPH·溶液和100μL不同浓度样品溶液混合均匀，37℃于暗处振荡反应1h；3000r/min离心5min，去上清液，使用紫外可见分光光度计测其在517nm处的吸光值，以无水乙醇调零。实施例1作为对照组，结果表示为样品对DPPH·自由基的清除率(％)＝(A_c－A_i)/A_c×100％(A_c为未加样品的吸光值，A_i为加入样品的吸光值)。实验均重复三次，取平均值。

附图5是实施例2、5所制备的纳米微球清除自由基活性图。结果表明，含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球均有较好的清除自由基的能力，且起清除作用的是游离的羟基。载药量越高，清除自由基活性越强。

实施例8

含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球对人肝癌细胞(HepG2)的细胞毒性测试：

将实施例2、5制备的纳米微球用二甲亚砜(DMSO)超声分散，然后用DMEM高糖型培养液稀释为1mg/mL溶液，现配现用；厚朴酚用DMSO溶解后用高糖型DMEM稀释至80μg/mL；和厚朴酚用DMSO溶解后用高糖型DMEM稀释至240μg/mL；所有溶液中DMSO的含量均为2.5％。收集对数期HepG2细胞，以1×10⁵个/mL接种至96孔板中，每孔接种100μL；细胞培养至对数生长期，4、8、16、32、64μL/孔加入载药纳米微球溶液与(和)厚朴酚溶液，每个浓度5孔，每孔最终体积为200μL，连续培养48h后，每孔避光加入20μL MTT(5mg/mL)溶液，37℃培养4h；弃去孔内培养液，每孔加入100μL DMSO，37℃恒温低速振荡30min，使用酶标仪在490nm处检测吸光值。结果表示为细胞存活率(％)＝(A₁/A₀)×100％(A₀为对照孔的吸光值；A₁为加药孔的吸光值)。对比载药纳米微球和裸药对HepG2细胞生长的抑制作用。所用浓度为微球的浓度，裸药与微球中所含药物浓度一致。

附图6是实施例2、5所制备纳米微球及(和)厚朴酚对人肝癌细胞(HepG2)存活率的影响图。由图可知，所制备载药纳米微球能有效抑制HepG2细胞的生长，且实施例2、4的载药纳米微球对HepG2细胞的细胞毒性均优于裸药。

实施例9

含和厚朴酚的纳米微球的释放曲线：

称取5mg含和厚朴酚的纳米微球于透析袋中，透析袋内加入10mL释放介质，放入含有100mL释放介质的烧杯中，于37℃、150r/min震荡，每隔一段时间取出2mL释放介质，补充2mL释放介质。取出的释放介质测其在294nm的紫外吸收值，对比标准曲线，计算释放量，作释放曲线。释放介质为pH＝1.2的HCl和pH＝7.4的磷酸缓冲盐(PBS)溶液。

附图7是实施例5所制备的含和厚朴酚的纳米微球于pH＝1.2的HCl和pH＝7.4的磷酸缓冲盐(PBS)溶液中的释放曲线。由图可知，所制备的载药纳米微球在酸性环境下48小时后释放达到80％，在中性环境下48小时后释放达到95％，具有缓释效果。

实施例10

含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的动态光散射(DLS)和Zeta电位测试，采用英国Malvern仪器公司的Zetasizer Nano仪器，用来说明微球在溶液中的尺寸、多分散性和稳定性。

表1是实施例1、2、4、5所制备的载药纳米微球DLS和Zeta电位表征。

表1

根据表征数据可以看出所制备的载药纳米微球分散较好，粒径均一，状态稳定(通常Zeta电位越高，体系越稳定)。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (9)

1.一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球，其特征在于：该纳米微球为壳聚糖与三聚磷酸钠交联形成的三维网状结构，厚朴酚或和厚朴酚以分子形式固定其中，厚朴酚或和厚朴酚的包封率为20.27～82.11％，纳米微球的平均粒径为40～150nm，纳米微球粒径的多分散系数为0.3～0.4，载药量为74.4～283.14μg/mg，Zeta电位为20～50mV。

2.一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，其特征在于步骤如下：

(1)壳聚糖溶液的配制：将壳聚糖溶于含有浓度为0.01～0.05mg/mL的泊洛沙姆188和体积浓度为1.0～1.5％醋酸的溶剂中，所述的溶剂为水或水与乙醇的混合物，其中乙醇体积含量不超过50％，搅拌溶解、过滤，配成壳聚糖浓度为1.0～3.0mg/mL的溶液，然后用碱液调节pH值为3.5～4.5，即得壳聚糖溶液；

(2)厚朴酚或和厚朴酚溶液的配制：将厚朴酚或和厚朴酚溶于无水乙醇中，配制厚朴酚或和厚朴酚浓度为1.0～10.0mg/mL的乙醇溶液，然后过滤得到厚朴酚或和厚朴酚溶液；

(3)含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备：将步骤(2)所得厚朴酚或和厚朴酚溶液逐滴加入步骤(1)所得壳聚糖溶液中，充分搅拌，并逐滴加入1.0～2.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，其中厚朴酚或和厚朴酚溶液、壳聚糖溶液及三聚磷酸钠水溶液的体积比为1:5:2，在30～40℃持续搅拌反应10～60min，所得微乳液静置陈化10～15h，再后处理即得含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球。

3.根据权利要求2所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(1)所述壳聚糖脱乙酰度为82～97％，分子量为10～50万。

4.根据权利要求2所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(1)所述碱液为浓度1mol/L的NaOH溶液。

5.根据权利要求2所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(1)和步骤(2)所述过滤为采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤。

6.根据权利要求2所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(3)所述搅拌速率为800～1600r/min。

7.根据权利要求2所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球的制备方法，其特征在于步骤(3)所述后处理包括过滤、透析、真空冷冻干燥。

8.一种权利要求1所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球在制备抗氧化剂方面的应用。

9.一种权利要求1所述的含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球在制备人肝癌细胞抑制剂方面的应用。