CN103006572A - 一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法 - Google Patents
一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103006572A CN103006572A CN2012105551001A CN201210555100A CN103006572A CN 103006572 A CN103006572 A CN 103006572A CN 2012105551001 A CN2012105551001 A CN 2012105551001A CN 201210555100 A CN201210555100 A CN 201210555100A CN 103006572 A CN103006572 A CN 103006572A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chitosan
- sulforaphen
- solution
- preparation
- sensitivity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，属于药物载体的制备方法。其包括以下步骤：1）将壳聚糖粉末溶于乙酸溶液中；2）取萝卜硫素水溶液，加入壳聚糖乙酸溶液中；3）将三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。上述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，设计合理，以壳聚糖为载体，三聚磷酸钠为交联剂，通过离子交联法制备得到微球，其实验简单温和，不需使用有机溶剂，安全环保，可成功制备平均粒径500nm的载药微球溶液，并且制得的微球溶液稳定性好，长时间放置粒径无太大变化，在酸性条件下，萝卜硫素更容易释放，pH值越大，缓释时间越长，是萝卜硫素的理想缓释剂型。
Description
技术领域
本发明属于药物载体的制备方法，具体涉及一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法。
背景技术
萝卜硫素（sulforaphane）又称“莱菔硫烷”，是葡萄糖萝卜硫苷(glucoraphanin)经黑芥子酶(EC 3.2.3.1)酶解或酸水解后产生的。它是迄今为止蔬菜中发现的最强的抑癌活性物。萝卜硫素就其化学成分而言，为异硫氰酸酯类化合物，易溶于水，相对分子质量177.3，分子式C6H11S2NO，结构式如下：
它是一种多功能诱导物，可诱导机体产生Ⅱ型解毒酶——谷胱甘肽转移酶和醌还原酶，此酶可对许多致癌物产生抗性，从而起到抗癌作用。另外，萝卜硫素还具有抑制DNA去乙酰化酶的能力。近年来，随着癌症的发病率的逐渐上升，萝卜硫素作为一种具有较强的抗癌作用的植物活性物质，有着广阔的研究价值及市场前景。
虽然萝卜硫素具有很好的抗癌作用，但是该化合物却不稳定，在常温下易氧化降解。本发明以壳聚糖为载体，将萝卜硫素微球化，制成缓释制剂。壳聚糖是带氨基的多糖，无毒，生物相容性好，其氨基质子化后能与多价阴离子发生静电作用而凝聚。三聚磷酸钠无毒，可作为壳聚糖的离子交联剂，且不与萝卜硫素发生化学反应。以三聚磷酸钠交联壳聚糖得到具有pH敏感性的负载萝卜硫素的纳米粒，可以提高萝卜硫素稳定性，并且延长有效成分的作用时间，提高萝卜硫素的生物利用率，更好的发挥其作用，有着重要的意义。
现有技术中尚未有以壳聚糖为载体，三聚磷酸钠为交联剂制备pH敏感性的萝卜硫素-壳聚糖微球的报告。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法的技术方案。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将壳聚糖粉末溶于乙酸溶液中，使溶液中壳聚糖的最终浓度达到0.5～5.5mg/ml，调节上述溶液的pH值至4.8～6.2，再依次经80～100μm滤纸和0.15～0.55μm滤膜过滤；
2）取浓度为10～40mg/ml萝卜硫素水溶液，加入到步骤1）制得的壳聚糖乙酸溶液中，使得溶液中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:1～4；
3）在10～30℃、100～400rpm转速下，用7号针头将0.4～0.8mg/ml的三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，滴加速度为1～5滴/秒，使得溶液中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:4～7，继续搅拌1～1.5小时，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中壳聚糖粉末脱乙酰度为90～95%。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中乙酸溶液的浓度为1～5%。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中壳聚糖的最终浓度达到1～3.5mg/ml。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中溶液的pH值至5.2～5.8。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中萝卜硫素水溶液浓度为20～30mg/ml。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:2～3。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:4～5。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中三聚磷酸钠溶液滴加速度为1～3滴/秒。
所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中在15～25℃、150～300rpm转速下，继续搅拌1～1.3小时。
上述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，设计合理，以壳聚糖为载体，三聚磷酸钠为交联剂，通过离子交联法制备得到微球，其实验简单温和，不需使用有机溶剂，安全环保，可成功制备平均粒径500nm的载药微球溶液，并且制得的微球溶液稳定性好，长时间放置粒径无太大变化，在酸性条件下，萝卜硫素更容易释放，pH值越大，缓释时间越长，是萝卜硫素的理想缓释剂型。
本发明的优点：1）以壳聚糖为载体，将萝卜硫素微球化，可提高其稳定性。体外加速降解实验表明，壳聚糖包埋后的萝卜硫素稳定性可以提高84%。2）萝卜硫素-壳聚糖微球稳定性好，长时间放置粒径无太大变化。3）萝卜硫素壳聚糖微球具有缓释效果，延长有效成分的作用时间，提高萝卜硫素的生物利用率，更好的发挥其作用。4）萝卜硫素壳聚糖微球的缓释效果具有pH敏感性。在pH3.7时，3小时处释放63%，pH5.8时，9小时处释放63%，而pH7.2时，11.5小时处释放63%。而在此3种pH条件下，72小时处累计释放均可达到96%。5）萝卜硫素壳聚糖微球产品的生产过程简单温和，不需使用有机溶剂，安全环保，生产设备相对比较简单。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明。
实施例1
1）将脱乙酰度为91.2%的壳聚糖粉末溶于浓度为3%的乙酸溶液中，使溶液中壳聚糖的最终浓度达到3mg/ml，调节上述溶液的pH值至5.0，再依次经85μm滤纸和0.45μm滤膜过滤；
2）取浓度为25mg/ml萝卜硫素水溶液，加入到步骤1）制得的壳聚糖乙酸溶液中，使得溶液中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:2；
3）在25℃、300rpm转速下，用7号针头将0.6mg/ml的三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，滴加速度为3滴/秒，使得溶液中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:5，继续搅拌1.2小时，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。
该萝卜硫素壳聚糖微球粒径为498.2nm，Poly.Index为0.698，Zeta电位为31.9mV，载药量为97.2mg/g，在pH3.7时，3小时处释放63%，pH5.8时，9小时处释放63%，而pH7.2时，11.5小时处释放63%。而在此3种pH条件下，72小时处累计释放均可达到96%。萝卜硫素在pH=3.7条件下的释放速率要快于pH=7.2条件下的释放速率，具有pH敏感性。
实施例2
1）将脱乙酰度为92%的壳聚糖粉末溶于浓度为1%的乙酸溶液中，使溶液中壳聚糖的最终浓度达到0.5mg/ml，调节上述溶液的pH值至4.8，再依次经80μm滤纸和0.15μm滤膜过滤；
2）取浓度为10mg/ml萝卜硫素水溶液，加入到步骤1）制得的壳聚糖乙酸溶液中，使得溶液中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:1；
3）在10℃、400rpm转速下，用7号针头将0.4mg/ml的三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，滴加速度为5滴/秒，使得溶液中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:4，继续搅拌1.5小时，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。
该萝卜硫素壳聚糖微球粒径为474.1nm，Poly.Index为0.613，Zeta电位为29.9mV，载药量为111.0mg/g，微球在不同pH溶液中的释放性能同实施例1。
实施例3
1）将脱乙酰度为95%的壳聚糖粉末溶于浓度为5%的乙酸溶液中，使溶液中壳聚糖的最终浓度达到5.5mg/ml，调节上述溶液的pH值至4.8，再依次经100μm滤纸和0.55μm滤膜过滤；
2）取浓度为40mg/ml萝卜硫素水溶液，加入到步骤1）制得的壳聚糖乙酸溶液中，使得溶液中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:4；
3）在30℃、100rpm转速下，用7号针头将0.8mg/ml的三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，滴加速度为1滴/秒，使得溶液中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:6，继续搅拌1小时，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。
该萝卜硫素壳聚糖微球粒径为544.2nm，Poly.Index为为0.558，Zeta电位为33.2mV，载药量为54.4mg/g，微球在不同pH溶液中的释放性能同实施例1。
实施例4
1）将脱乙酰度为92%的壳聚糖粉末溶于浓度为1.5%的乙酸溶液中，使溶液中壳聚糖的最终浓度达到3.5mg/ml，调节上述溶液的pH值至5，再依次经90μm滤纸和0.25μm滤膜过滤；
2）取浓度为35mg/ml萝卜硫素水溶液，加入到步骤1）制得的壳聚糖乙酸溶液中，使得溶液中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:3；
3）在15℃、250rpm转速下，用7号针头将0.7mg/ml的三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，滴加速度为2滴/秒，使得溶液中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:5，继续搅拌1.3小时，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。
该萝卜硫素壳聚糖微球粒径为455.8nm，Poly.Index为0.478，Zeta电位为32.5mV，载药量为65.4mg/g，微球在不同pH溶液中的释放性能同实施例1。
Claims (10)
1.一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将壳聚糖粉末溶于乙酸溶液中，使溶液中壳聚糖的最终浓度达到0.5～5.5mg/ml，调节上述溶液的pH值至4.8～6.2，再依次经80～100μm滤纸和0.15～0.55μm滤膜过滤；
2）取浓度为10～40mg/ml萝卜硫素水溶液，加入到步骤1）制得的壳聚糖乙酸溶液中，使得溶液中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:1～4；
3）在10～30℃、100～400rpm转速下，用7号针头将0.4～0.8mg/ml的三聚磷酸钠溶液滴入步骤2）得到的混合液中，滴加速度为1～5滴/秒，使得溶液中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:4～7，继续搅拌1～1.5小时，即得到萝卜硫素-壳聚糖微球。
2.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中壳聚糖粉末脱乙酰度为90～95%。
3.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中乙酸溶液的浓度为1～5%。
4.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中壳聚糖的最终浓度达到1～3.5mg/ml。
5.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中溶液的pH值至5.2～5.8。
6.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中萝卜硫素水溶液浓度为20～30mg/ml。
7.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中萝卜硫素与壳聚糖的最终质量比为1:2～3。
8.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中三聚磷酸钠与壳聚糖的最终质量比为1:4～5。
9.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中三聚磷酸钠溶液滴加速度为1～3滴/秒。
10.如权利要求1所述的一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中在15～25℃、150～300rpm转速下，继续搅拌1～1.3小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210555100.1A CN103006572B (zh) | 2012-12-20 | 2012-12-20 | 一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210555100.1A CN103006572B (zh) | 2012-12-20 | 2012-12-20 | 一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103006572A true CN103006572A (zh) | 2013-04-03 |
| CN103006572B CN103006572B (zh) | 2014-04-09 |
Family
ID=47956039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210555100.1A Expired - Fee Related CN103006572B (zh) | 2012-12-20 | 2012-12-20 | 一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103006572B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104095817A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-10-15 | 武汉工程大学 | 一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用 |
| CN104127386A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-05 | 武汉工程大学 | 一种大叶茜草素/壳聚糖纳米微球及其制备方法和应用 |
| CN106924214A (zh) * | 2017-05-11 | 2017-07-07 | 四川理工学院 | 具有药物缓释性能的竹炭/壳聚糖复合微球的制备方法 |
| CN107375223A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-11-24 | 深圳市老年医学研究所 | 含莱菔素胃滞留组合物及其制备方法 |
| CN109394729A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-03-01 | 曲阜师范大学 | 一种负载萝卜硫素的载药体系及其制备方法 |
| CN110403919A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-11-05 | 长江师范学院 | 一种胭脂萝卜硫素纳米微胶囊的制备方法 |
| CN111938155A (zh) * | 2020-08-03 | 2020-11-17 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 萝卜硫素的包埋物及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102293752A (zh) * | 2011-08-26 | 2011-12-28 | 广东药学院 | 壳聚糖载辣椒素微球制备方法及微球和减肥降脂以及降糖应用 |
| CN102389398A (zh) * | 2011-08-26 | 2012-03-28 | 广东药学院 | 壳聚糖载辣椒素微球的制备方法及微球和应用 |
-
2012
- 2012-12-20 CN CN201210555100.1A patent/CN103006572B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102293752A (zh) * | 2011-08-26 | 2011-12-28 | 广东药学院 | 壳聚糖载辣椒素微球制备方法及微球和减肥降脂以及降糖应用 |
| CN102389398A (zh) * | 2011-08-26 | 2012-03-28 | 广东药学院 | 壳聚糖载辣椒素微球的制备方法及微球和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 张小林: "《萝卜硫烷的研究进展》", 《化工中间体》 * |
| 张祖菲，周建平: "《壳聚糖微球给药系统》", 《药学进展》 * |
| 杨 婷，侯文龙，杨越冬: "《壳聚糖微球的制备及其在生物医药领域的应用》", 《高分子通报》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104095817A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-10-15 | 武汉工程大学 | 一种含厚朴酚或和厚朴酚的纳米微球及其制备方法和应用 |
| CN104127386A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-05 | 武汉工程大学 | 一种大叶茜草素/壳聚糖纳米微球及其制备方法和应用 |
| CN104127386B (zh) * | 2014-07-22 | 2017-01-11 | 武汉工程大学 | 一种大叶茜草素/壳聚糖纳米微球及其制备方法和应用 |
| CN106924214A (zh) * | 2017-05-11 | 2017-07-07 | 四川理工学院 | 具有药物缓释性能的竹炭/壳聚糖复合微球的制备方法 |
| CN107375223A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-11-24 | 深圳市老年医学研究所 | 含莱菔素胃滞留组合物及其制备方法 |
| CN109394729A (zh) * | 2018-12-11 | 2019-03-01 | 曲阜师范大学 | 一种负载萝卜硫素的载药体系及其制备方法 |
| CN110403919A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-11-05 | 长江师范学院 | 一种胭脂萝卜硫素纳米微胶囊的制备方法 |
| CN110403919B (zh) * | 2019-08-29 | 2021-11-02 | 长江师范学院 | 一种胭脂萝卜硫素纳米微胶囊的制备方法 |
| CN111938155A (zh) * | 2020-08-03 | 2020-11-17 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 萝卜硫素的包埋物及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103006572B (zh) | 2014-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103006572B (zh) | 一种pH敏感性萝卜硫素壳聚糖微球的制备方法 | |
| Algharib et al. | Preparation of chitosan nanoparticles by ionotropic gelation technique: Effects of formulation parameters and in vitro characterization | |
| Bhattacharyya et al. | Preparation of polyurethane–alginate/chitosan core shell nanoparticles for the purpose of oral insulin delivery | |
| Yang et al. | Hyaluronic acid/chitosan nanoparticles for delivery of curcuminoid and its in vitro evaluation in glioma cells | |
| Zhou et al. | Molecularly precise dendrimer–drug conjugates with tunable drug release for cancer therapy | |
| Nanjwade et al. | Preparation and evaluation of carboplatin biodegradable polymeric nanoparticles | |
| Debnath et al. | Ionotropic gelation–a novel method to prepare chitosan nanoparticles | |
| Xiong et al. | Auricularia auricular polysaccharide-low molecular weight chitosan polyelectrolyte complex nanoparticles: Preparation and characterization | |
| Liu et al. | Preparation and characterization of glutaraldehyde cross-linked O-carboxymethylchitosan microspheres for controlled delivery of pazufloxacin mesilate | |
| Sharma et al. | Preparation and in vitro evaluation of enteric controlled release pantoprazole loaded microbeads using natural mucoadhesive substance from Dillenia indica L | |
| CN103655482A (zh) | 用于载药的自微乳化海藻酸钙凝胶微丸及其制备方法 | |
| Dalmoro et al. | Ultrasonic atomization and polyelectrolyte complexation to produce gastroresistant shell–core microparticles | |
| CN102961362B (zh) | 一种β-聚苹果酸/壳聚糖纳米药物缓释微胶囊及其制备方法 | |
| JP2011512418A (ja) | 薬物の投与のためのナノ粒子キャリア及びその製造方法 | |
| CN110996924A (zh) | 包封天然生物活性物质反式-白藜芦醇(rsv)和南蛇藤醇(cl)的组合的聚合物纳米颗粒、制备方法和其在处理前列腺癌中的用途 | |
| Sun et al. | Preparation and characterization of 5-Fluorouracil loaded chitosan microspheres by a two-step solidification method | |
| Kadare et al. | Encapsulation of isoniazid in chitosan-gum Arabic and poly (lactic-co-glycolic acid) PVA particles to provide a sustained release formulation | |
| CN104910077B (zh) | 阿苯达唑的制备方法及应用 | |
| Madureira et al. | Chitosan nanoparticles loaded with 2, 5-dihydroxybenzoic acid and protocatechuic acid: properties and digestion | |
| Varshousaz et al. | Effect of citric acid as cross-linking agent on insulin loaded chitosan microspheres | |
| CN101836970A (zh) | 一种聚丙烯酸纳米凝胶微球及其制法和用途 | |
| Grabnar et al. | Physicochemical characterization of protein-loaded pectin-chitosan nanoparticles prepared by polyelectrolyte complexation | |
| CN103319733B (zh) | 一种微乳液制备壳聚糖-阴离子多糖复合物纳米微球的方法 | |
| Pourhossein et al. | Stimuli‐responsive zein‐based nanoparticles as a potential carrier for ellipticine: Synthesis, release, and in vitro delivery | |
| Lakkakula et al. | Exploring oral drug delivery: In vitro release and mathematical modeling of hydrophobic drug (Na-L-thyroxine) and its cyclodextrin inclusion complex in chitosan microparticles |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20190221 Address after: 317100 Building 407, No. 1, Electronic Commerce Industrial Park, Sanmen County, Taizhou City, Zhejiang Province Patentee after: ZHEJIANG KUIRUI AGRICULTURAL DEVELOPMENT Co.,Ltd. Address before: 310023 Xihu District, Hangzhou, Hangzhou, Zhejiang Province, No. 318 Patentee before: Zhejiang University of Science and Technology |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140409 Termination date: 20211220 |