CN104072638A - 一种那屈肝素钙的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药合成领域，公开了一种那屈肝素钙的制备方法。本发明方法先利用亚硝酸钠法制备低分子肝素钠降解液，再经过还原获得还原液。还原液过滤，所得滤液加氯化钙溶液搅拌均匀并超滤，超滤液加入乙醇沉淀，沉淀物加水复溶、过滤，所得滤液除菌、冻干，获得那屈肝素钙成品。本发明制备工艺提供了一种全新的制备思路，舍去了现有方法中的双氧水氧化以及阳离子交换树脂的钙钠置换，将超滤法和氯化钙搅拌转钙融为一体，配合其他优化步骤，整体提高了那屈肝素钙抗Xa/抗Ⅱa比值、降低那屈肝素钙干燥失重比例以及小于2000分子量级分的比例，并且极大地减少了工艺步骤，提高制备效率。

Description

一种那屈肝素钙的制备方法

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种那屈肝素钙的制备方法。

背景技术

肝素是一种糖胺聚糖，是由糖醛酸成的具有不同链长的多糖链的混合物,分子量在3000-30000D之间，具有抗凝血作用。肝素已有70余年的使用历史，目前仍在广泛使用。但有生物利用度低，半衰期短，剂量个体差异大，自发性出血倾向，血小板减少症等缺点。

低分子量肝素是肝素分级或降解形成的分子量较小的片段，大部分分子量在8000D以下，按照降解方法及分子量的不同，目前分为那屈肝素钙，依诺肝素钠，达肝素钠等。

那屈肝素钙是低分子量肝素钙的一种，采用亚硝酸钠酸性条件下裂解肝素钠，转钙，醇沉得到。其欧洲药典规定的质量标准规定，抗Xa效价为95-130IU/mg，抗Xa/抗Ⅱa比值为2.5-4.0，分子量为3600-5000D。与肝素相比，那屈肝素钙抗血栓作用强，抗凝血作用弱，具有生物利用度高，半衰期长，出血倾向小的优点，与另外几种钠盐相比，出血副作用较小，更适用于临床使用，目前已逐步取代肝素应用于临床。

衡量那屈肝素钙的品质的标准有两个，一个是抗Xa因子效价，另一个就是抗Xa/抗Ⅱa比值，这两个标准的值越高，产品质量越好。公开号为CN103408676A的中国专利公开了“一种那屈肝素钙制备工艺”，其以亚硝酸钠法降解低分子量肝素钠并经硼氢化钠还原，然后依次醇沉、双氧水氧化、阴离子树脂转钙、双氧水氧化、醇沉获得那屈肝素钙。但是，该制备工艺整体工序较为复杂，涉及多次氧化、醇沉。同时，该专利的产品的抗Xa/抗Ⅱa比值虽然位于2.5-4.0之间，但整体偏低，仍需要进一步提高。

此外，该专利工艺制备的产品在干燥失重、小于2000级分的那屈肝素钙百分比例方面较高，影响那屈肝素钙的整体品质。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种那屈肝素钙的制备方法，使该制备方法能够提高那屈肝素钙抗Xa/抗Ⅱa比值；

本发明的另一个目的在于提供一种那屈肝素钙的制备方法，使该制备方法能够降低小于2000级分的那屈肝素钙百分比例；

本发明的再一个目的在于提供一种那屈肝素钙的制备方法，使该制备方法能够简化制备那屈肝素钙工艺步骤。

针对现有那屈肝素钙制备方法(CN103408676A)中，抗Xa/抗Ⅱa比值较低，且干燥失重比例以及小于2000级分的那屈肝素钙百分比例略高，影响产品质量，同时工序操作较繁琐的问题，本发明提供如下解决方案：

一种那屈肝素钙的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、利用亚硝酸钠法制备低分子肝素钠降解液，再经还原获得还原液；

步骤2、还原液过滤，所得滤液加氯化钙溶液搅拌均匀并超滤获得超滤液；

步骤3、超滤液加入乙醇醇沉，沉淀物加水复溶、过滤，所得滤液除菌、冻干，获得那屈肝素钙成品。

作为优选，所述超滤的超滤膜分子量为1000-5000D。

作为优选，步骤1为：

步骤1.1、取肝素钠加水溶解，加冰醋酸调节pH值至2-6，加入亚硝酸钠于20-30℃下反应4-6h获得肝素钠降解液；

步骤1.2、所述肝素钠降解液用氢氧化钠调节pH值为8-12，然后向其中加入占肝素钠质量0.5％-5％的硼氢化钠还原4-16h，最后用冰醋酸调节pH值为4-8，获得还原液。

其中，作为优选，所述肝素钠和亚硝酸钠的质量比为2000:50-70，所述硼氢化钠加入量为肝素钠质量的0.5-5％。

作为优选，步骤2和步骤3所述过滤均为采用0.22μm滤膜过滤。

作为优选，所述氯化钙溶液的浓度为0.2-1.0mol/L，更优选为0.5mol/L。

作为优选，所述乙醇为95％乙醇。

作为优选，所述超滤均重复2-6次。在重复的过程中，每一次重复是取上次超滤后的滤液再次超滤。

作为优选，所述那屈肝素钙重均分子量为3600-5000D。

在上述方案以及优选方案中，本发明所述pH值、浓度、分子量、配比、用量等各参数均可以从限定的范围内任取一个点值，并不局限于范围的端点值，且可以和其它参数任意组合。例如，pH值2-6，可以取2、2.5、......3.8、4、5或6；硼氢化钠加入量可以为肝素钠质量0.5％、2％、3.5％......4％或5.0％。

本发明所制备的那屈肝素钙、CN103408676A工艺制备的那屈肝素钙和进口原研样的对比试验结果显示，在抗Xa/抗Ⅱa比值、干燥失重比例以及小于2000级分的百分比例方面，本发明产品优于现有对比方法，和进口原研样具有同等的品质，在某些方面甚至超越了原研样品的质量。

本发明制备工艺提供了一种全新的制备思路，舍去了现有方法中的双氧水氧化以及阴离子交换树脂的钙钠置换，将超滤法和氯化钙搅拌转钙融为一体，配合其他优化后的操作步骤，整体提高了那屈肝素钙抗Xa/抗Ⅱa比值、降低那屈肝素钙干燥失重比例以及小于2000级分的那屈肝素钙百分比例，并且极大地的减少了工艺步骤，提高了制备效率。

附图说明

图1所示为实施例1产品的核磁共振碳谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种那屈肝素钙的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述制备方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

以下就本发明所提供的一种那屈肝素钙的制备方法做进一步说明。

实施例1：制备那屈肝素钙

取精品肝素钠4kg，加入100-200L水溶解，用冰醋酸调节溶液的pH至4，再溶液中加入亚硝酸钠114g，在温度为25℃，搅拌反应5h，获得肝素钠降解液。将制得的肝素钠降解液用氢氧化钠调节pH至8后，加入100g硼氢化钠(2.5％肝素钠质量)还原10h后，用冰醋酸调节pH至7，获得还原液。

将还原液用0.22μm滤膜过滤，滤液加入0.5mol/L氯化钙溶液搅拌均匀并采用1000D超滤膜进行超滤，完成钠钙置换。然后加入注射用水进行超滤，重复2-6次。

向超滤滤液中加入95％乙醇进行沉淀，收集沉淀物，复溶得到粗品溶液。

将粗品溶液用0.22μm滤膜过滤除菌，得到精品溶液。精品溶液于冷冻干燥机中进行冻干，得到那屈肝素钙成品3.0kg。

将制备的样品用核磁共振检测，其碳谱图见图1，结果表明其具有那屈肝素钙典型结构特征。

实施例2：制备那屈肝素钙

取精品肝素钠4kg，加入100-200L水溶解，用冰醋酸调节溶液的pH至6，再溶液中加入亚硝酸钠132g，在温度为20℃，搅拌反应6h，获得肝素钠降解液。将制得的肝素钠降解液用氢氧化钠调节pH至12后，加入20g硼氢化钠(0.5％肝素钠质量)还原16h后，用冰醋酸调节pH至5，获得还原液。

将还原液用0.22μm滤膜过滤，滤液加入0.1mol/L氯化钙溶液搅拌均匀并采用5000D超滤膜进行超滤，完成钠钙置换。然后加入注射用水进行超滤，重复2-6次。

向超滤滤液中加入95％乙醇进行沉淀，收集沉淀物，复溶得到粗品溶液。

将粗品溶液用0.22μm滤膜过滤除菌，得到精品溶液。精品溶液于冷冻干燥机中进行冻干，得到那屈肝素钙成品2.7kg。

将制备的样品用核磁共振检测，其碳谱图结果表明其具有那屈肝素钙典型结构特征。

实施例3：制备那屈肝素钙

取精品肝素钠4kg，加入100-200L水溶解，用冰醋酸调节溶液的pH至3，再溶液中加入亚硝酸钠123g，在温度为30℃，搅拌反应4h，获得肝素钠降解液。将制得的肝素钠降解液用氢氧化钠调节pH至10后，加入200g硼氢化钠(5％肝素钠质量)还原4h后，用冰醋酸调节pH至6，获得还原液。

将还原液用0.22μm滤膜过滤，滤液加入1.0mol/L氯化钙溶液搅拌均匀并采用3000D超滤膜进行超滤，完成钠钙置换。然后加入注射用水进行超滤，重复2-6次。

向超滤滤液中加入95％乙醇进行沉淀，收集沉淀物，复溶得到粗品溶液。

将粗品溶液用0.22μm滤膜过滤除菌，得到精品溶液。精品溶液于冷冻干燥机中进行冻干，得到那屈肝素钙成品2.85kg。

将制备的样品用核磁共振检测，其碳谱图结果表明其具有那屈肝素钙典型结构特征。

实施例4：产品检测

将实施例1-实施例3制备的那屈肝素钙进行检测，对比产品为采用CN103408676A实施例1记载的方法制备的产品以及那屈肝素钙原研样，检测结果如下表：

表1 产品检测结果

由表1可知，本发明制备的产品符合那屈肝素钙的各项质量标准，和原研样相比具有相同品质，在抗Xa/抗Ⅱa比值方面更加优越；与对照产品相比，在抗Xa/抗Ⅱa比值、干燥失重比例以及小于2000级分的那屈肝素钙百分比例方面显著优于CN103408676A。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种那屈肝素钙的制备方法，其特征包括以下步骤：

步骤1、利用亚硝酸钠法制备低分子肝素钠降解液，再经还原获得还原液；

步骤2、还原液过滤，所得滤液加氯化钙溶液搅拌均匀并超滤获得超滤液；

步骤3、超滤液加入乙醇醇沉，沉淀物加水复溶、过滤，所得滤液除菌、冻干，获得那屈肝素钙成品。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1为：

步骤1.1、取肝素钠加水溶解，加冰醋酸调节pH值至2-6，加入亚硝酸钠于20-30℃下反应4-6h获得肝素钠降解液；

步骤1.2、所述肝素钠降解液用氢氧化钠调节pH值为8-12，然后向其中加入占肝素钠质量0.5％-5％的硼氢化钠还原4-16h，最后用冰醋酸调节pH值为4-8，获得还原液。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述肝素钠和亚硝酸钠的质量比为2000:50-70。

4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述硼氢化钠加入量为肝素钠质量0.5-5％。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2和步骤3所述过滤均为采用0.22μm滤膜过滤。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述氯化钙溶液的浓度为0.2-1.0mol/L。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述乙醇为95％乙醇。

8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述超滤均重复2-6次。

9.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述那屈肝素钙重均分子量为3600-5000D。

10.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述超滤的超滤膜分子量为1000-5000D。