CN104069312A - 治疗中风的中药组合物及其制备方法、药物制剂和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗中风的中药组合物，所述中药组合物包括作为活性成分的穿山龙有效部位和刺五加有效部位，其中，所述穿山龙有效部位中所含的穿山龙总皂苷和所述刺五加有效部位中所含的刺五加总黄酮之和占所述中药组合物的50～90%w/w。本发明还提供了制备上述中药组合物的方法，以及含有该中药组合物的药物制剂，和上述中药组合物或药物制剂在制备治疗中风病（脑梗塞）恢复期气虚血瘀证的药物中的应用。药理学实验结果表明，该中药组合物具有良好的对脑缺血保护和活血化瘀的作用，且物质基础更加明确，化学成分更加清楚，质量更加可控，降低服用量，服用方便，符合中药现代化的要求，具有良好的发展前景。

Description

治疗中风的中药组合物及其制备方法、药物制剂和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种治疗中风的中药组合物及其制备方法、药物制剂和应用。

背景技术

中风是当今社会威胁人类生命与健康的主要疾病之一，发展中国家死亡于中风的人数为发达国家的两倍。1/3的中风患者在发作六个月内死亡，幸存者有90%留有程度不同的后遗症，其中一半失去生活自理和工作能力的严重后遗症；有1/3的中风患者3-5年内反复发作，直至死亡。由于本病发病率高、死亡率高、致残率高、复发率高以及并发症多的特点，所以医学界把它同冠心病、癌症并列为威胁人类健康的三大疾病之一。目前我国中风的发病率正以每年近9%的速度上升，并有年轻化、轻型化的趋势。2008年公布的我国居民第三次死因抽样调查结果显示，中风已成为我国国民第一位的死亡原因，死亡率高于欧美国家4-5倍，并且绝大部分脑卒中存活患者会遗留有偏瘫、失语甚至失明等严重的后遗症，严重危害患者健康，并影响其生活质量，同时也给患者家庭和社会带来沉重的医疗、经济和社会负担。

中风也叫脑卒中。分为两种类型：缺血性脑卒中和出血性脑卒中。自古以来，中医对中风病就已经有了一定的认识，在我国第一部医学著作《黄帝内经》中便有了详细的记载，在以后历代医家的总结中逐步得到完善和充实。中风是中医学对急性脑血管疾病的统称。文献报道，从发病、病情变化及转归看，气虚血瘀在中风的全过程中处于主导地位，从中风先兆的表现，诱发因素及缺血性中风患者的血液流变学变化等方面也证实了气虚血瘀是缺血性中风的主要病机。气虚血瘀是缺血性中风的主要证型，也是中风发病率最高的证型。研究开发益气活血化瘀药治疗中风更有临床价值。中风一病，始源于《内经》。汉·张仲景在《金匮要略》中首创中风这一病名，并对证因脉治做了较详细的论述。概述了中风病的两个主要特征：发病急，变化快，病情危重；半身不遂、口眼歪斜为其主证。还进一步指出风邪入中的浅深和病情轻重之不同，而有在经在络、中脏中腑之区别，为后世辨治奠定了基础，沿用至今。直至唐宋，诸家仍以外风立论，自金以后，认识到火（盛）气（虚）痰（湿）血（瘀）等内在病因，丰富了中风的病因学说。现代医家在临床上依据有无神志改变而将中风分为中经络和中脏腑两大类。在中经络中风病中，归纳为肝阳上亢、风火上扰、风痰瘀血、痹阻脉络、痰热腑实、风痰上扰、阴虚风动和气虚血瘀等证型。其中气虚血瘀证中风为临床常见证型。

中风属本虚标实之证已成公论。本虚实为气阴两虚，以气虚为主。李东垣曰：“凡年逾四旬，气衰者，多有此疾。”沈金鳌在《杂病源流犀烛》中云：“曰火、曰痰、总乎由虚，虚因为中风之根。”清代王清任以气虚血瘀说立论更为明确，盖气为血之帅，气行则血行，即气虚运血无力，血行瘀滞，脉络阻塞而致中风偏枯。故气虚是本病之根源，血瘀是本病发生发展的核心。益气活血是治疗本病的关键。年老久病体衰，脏腑阴阳严重失调，气血运行失常，复因忧思恼怒，或饮食不节，恣酒饱食，脑劳过渡，房室不节，扰动气血，血随气逆上冲于脑，横窜经隧，或气血痹阻，肌肤筋脉失濡，而见半身不遂诸症。正如《杂病源流犀烛·中风源流》所说：“人至五六十，气血就衰，乃有中风之病，少壮无是也，然肥盛之人，或兼平日嗜欲太过，耗其精血，虽甚少壮，无奈形盛气衰，往往亦成中风。”因气虚血瘀，经络阻痹，肢体肌肤失养，致肌肤不仁，手足麻木，甚者半身不遂；气血阻痹，阻滞经络，致口舌歪斜，语言不利；气虚不能运血荣于面，故有面色晃白；心气内虚，则见心悸不宁，气短无力；卫气不足，营失内守，则有自汗出；气血虚弱，固摄无权，故见口角流涎，便溏，手足肿胀之症，舌质暗淡或有瘀斑，苔薄白或白腻，脉细弦滑，皆为气虚血瘀之象。活血化瘀，补中益气，舒筋活络，为其治疗之大法。

各国政府和医务工作者一直关注着防治中风病药物的研究开发，目前用于治疗缺血性脑卒中的药物主要集中在急性发作期，对于恢复期以保护脑神经为主要治疗方式，从不同途径寻找治疗经络受阻，气虚血瘀证之中风，证见半身不遂，口眼歪斜，语言不清或蹇涩，或偏身麻木的药物，仍是当务之急。

在中国专利CN1507910A中公开了一种治疗中风的药物组合物，该药物组合物的活性成分由穿山龙和刺五加制成，其采用传统提取方式，出膏率较高，但患者服用剂量大。因此需要开发一种物质基础更加明确，化学成分更加清楚，质量更加可控，能降低服用量，服用方便，适用范围广泛，同时保证疗效稳定，安全性高，工艺过程易于产业化的特点，提供各种剂型，为临床提供更加有效、更加方便的中药品种，以符合中药现代化新药研发的发展需求。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种治疗中风的中药组合物，该中药组合物物质基础更加明确，化学成分更加清楚，质量更加可控，可降低服用量，服用方便，适用范围广泛。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述中药组合物的方法。

本发明的又一个目的是提供一种包含上述中药组合物的药物制剂。

本发明的再一个目的是提供上述中药组合物或药物制剂的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。

本发明的中药组合物包含穿山龙、刺五加有效部位。穿山龙始载于《东北药植志》，其味甘、苦，性温，入肝、肺经，功专活血化瘀，舒筋活络，用此药治疗瘀血阻滞之证疗效颇佳。本方取其活血化瘀，舒筋活络之功，治瘀血内停，经络受阻，筋脉失濡所致半身不遂或偏身麻木，口眼歪斜，言语蹇涩或不语，当为方中之君药。刺五加始载于《神农本草经》，列为上品，性温，味辛、微苦，入脾、肾、心三经，它作为活血化瘀、补肾健脾，坚筋骨，强意志之上品应用近两千年，功能明确，疗效确切，与君药相伍，助其活血化瘀，舒筋通络之功，有增补中益气，补肾健脾之效，主心悸气短，乏力汗出，流涎便溏，面色晃白，手足肿胀，是为臣药。正如张锡纯在《医学衷中参西录》中所言“气血虚者，其经络多瘀滞……加此益气活血之品，以化其瘀滞，则偏枯、痿废者自易愈也”。本品方简药精，功专效著，君臣相辅，共奏活血化瘀，益气通络之功，与经络受阻，气虚血瘀证之病理病机甚为吻合，方从法立，药证合拍，是治疗中经络气虚血瘀型中风病恢复期的良方。

穿山龙有效成分为甾体皂苷类，其中水不溶性成分主要为薯蓣皂苷(Dioscin)，纤细皂苷(Gracillin)和水溶性皂苷，总皂苷水解产生薯蓣皂苷元（Diosgenin）。现代药理学研究表明，其具有强心、降压作用，增加兔耳灌流量，对垂体后叶素所致家兔心肌缺血性心电图有改善作用，使小鼠冠脉营养性血流量增加，明显增加冠脉流量，能降低兔血清中的胆固醇含量，减轻兔主动脉内壁和眼角膜的类脂质浸润，对兔的粥样斑块的形成有一定的防治作用，延长兔血清的凝血时间和凝血酶元时间，并减低凝血酶元指数，有降低整体动物耗氧速度和增加耐缺氧能力；穿山龙总皂苷类成分具有调节免疫、改善心血管功能、祛痰、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种药理作用，显著降低兔血胆甾醇及血压，延缓心率、增强心收缩振幅、增加尿量、降低β/α脂蛋白比例，改善冠状循环，其对实验性动脉粥样硬化家兔主动脉斑块、肝脏脂肪沉积有减轻作用，能显著增加小鼠冠脉流量，并能对抗垂体后叶素引起的冠脉收缩(兔心电图法)。

刺五加的化学成分主要包括刺五加苷A、B(即紫丁香苷)、C、D、E、F、G等糖苷类，此外还有多糖类、香豆素类、有机酸类等。刺五加中的有效成分包括刺五加多糖、刺五加总皂苷、异秦皮啶、β-谷甾醇、胡萝卜苷、紫丁香树脂醇苷等。现代药理学研究发现，刺五加具有免疫功能及中枢神经系统、L-血管系统的调节作用，镇静、抗缺氧、耐高温、抗辐射和解毒作用，能调节内分泌紊乱，调节红细胞与血压，具有扩张脑血管，改善大脑供血量，增加冠脉流量，减少心肌耗氧量，改善血液循环，清除自由基对组织的损害、保护实验性脑缺血等作用，对垂体后叶素引起的急性心肌缺血所致T波升高和心率减慢有一定的改善作用，对血小板聚集有明显的抑制作用，能促进小鼠脑内DNA、RNA和蛋白质的合成，对免耳血管试验证明具有显著的扩张血管作用，能显著增加小鼠心肌C5134的摄取能力，起到增加心肌血流量的功效。现代药理证明刺五加中总黄酮是治疗糖尿病、低血压、肺心病和高血脂等症有效成分。这些药理学研究的结果为本品具有活血化瘀、补中益气，舒筋通络的作用，用于气虚血瘀中风的治疗提供了动物实验的科学依据。

本申请人在中医药理论基础上，从大量中药中筛选出穿山龙和刺五加两味药物，重新组方，通过中药现代化提取工艺精制得到有效部位组合而成中药组合物作为入药组分，制成适宜的剂型。

本申请在原申请专利（公开号CN1507910A）的基础上，采用现代提取（如：超声波提取、微波提取等）、精制（如：大孔树脂富集、聚酰胺树脂富集等）方法，以穿山龙、刺五加药物有效部位穿山龙总皂苷和刺五加总黄酮组合成中药组合物，制备成适宜的药物新制剂剂型（如：滴丸剂、软胶囊剂、缓释片剂、粉针剂、注射剂），可用于治疗中风病（脑梗塞）恢复期气虚血瘀证。

一方面，本发明提供一种治疗中风的中药组合物，所述中药组合物包含作为活性成分的穿山龙有效部位和刺五加有效部位，其中，所述穿山龙有效部位中所含的穿山龙总皂苷和所述刺五加有效部位中所含的刺五加总黄酮之和占所述中药组合物的50～90%w/w。

优选地，所述穿山龙有效部位中所含的穿山龙总皂苷占所述中药组合物的20～70%w/w；所述刺五加有效部位中所含的刺五加总黄酮占所述中药组合物的1～40%w/w。

优选地，穿山龙有效部位和刺五加有效部位是通过提取下述重量份配比的原料药材而制备的：穿山龙1～10份，刺五加0.1～10份，优选为穿山龙1～5份，刺五加0.1～5份，更优选为穿山龙1～3份，刺五加0.1～2份。

另一方面，本发明提供上述中药组合物的制备方法，所述制备方法包括：（1）用水或乙醇水溶液对穿山龙和刺五加的混合物进行提取得到粗提物；（2）通过如下方法中的一种或多种对该粗提物进行纯化：A、用乙酸乙酯或正丁醇萃取得到萃取液；B、过大孔树脂柱得到洗脱液；和C、过聚酰胺树脂柱得到洗脱液；（3）将得到的萃取液或洗脱液浓缩干燥即得穿山龙有效部位和刺五加有效部位的混合物；

或者，所述制备方法包括：（1）用水或乙醇水溶液对穿山龙和刺五加分别进行提取得到各自的粗提物；（2）通过如下方法中的一种或多种对粗提物分别进行纯化：A、用乙酸乙酯或正丁醇萃取得到萃取液；B、过大孔树脂柱得到洗脱液；和C、过聚酰胺树脂柱得到洗脱液；（3）将得到的萃取液或洗脱液浓缩、干燥即得穿山龙有效部位和刺五加有效部位。

优选地，所述步骤（1）中的提取方法为浸渍、渗漉、热回流、超临界流体、超声提取或微波提取2-5次，每次0.1-48h；优选渗漉或热回流提取2-5次，每次1-24h。

优选地，所述步骤（1）中，在提取之前相对于1kg的原料先用4-20L的0-95%v/v乙醇将穿山龙和刺五加浸渍0.1-24h；优选相对于1kg的原料用6-12L的0-75%v/v乙醇浸渍0.1-24h；优选地，在提取之后将提取液进行过滤，并将滤液减压浓缩至密度为1.0-1.3（60℃），再加入95%v/v乙醇至含醇量0-90%v/v，优选至含醇量30-75%v/v后，静置，过滤，滤液减压回收至无醇，溶液密度为1.0-1.3（60℃），得到粗提物。

优选地，所述步骤（2）中，当采用乙酸乙酯或正丁醇萃取进行纯化时，向步骤（1）所得粗提物中相对于1kg粗提物加入2-10L的乙酸乙酯或正丁醇萃取2-5次得萃取液；优选地，步骤（3）中所述干燥方法为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。

优选地，所述步骤（2）中的大孔树脂柱为非极性大孔树脂柱、弱极性大孔树脂柱、中等极性大孔树脂柱，如AB-8、D101、HPD100、DM301、HPD300、HPD500、HPD600、NKA-9、NKA-12；优选地，以生药量计，上样液浓度为0.02～2g/mL，吸附流速1～5BV/h，树脂柱径高比1：4～15，以生药量计，上样量为0.5～10g/mL，水洗脱0～8倍树脂体积进行除杂，用20～90%v/v乙醇洗脱2～15倍树脂体积，洗脱流速为1～4BV/h；优选地，所用的洗脱剂为0-95%v/v乙醇。

优选地，步骤（2）中当选用大孔树脂柱纯化时，所述大孔树脂柱是非极性或弱极性大孔树脂柱，如AB-8、NKA-9或D101。

优选地，步骤（2）中当选用聚酰胺树脂柱纯化时，上样液浓度为0.1～1.5g/mL（以生药量计），吸附流速1～5BV/h，树脂柱径高比1：6～18，上样量为0.5～10g/mL（以生药量计），水洗脱0～8倍树脂体积进行除杂，用30～95%v/v乙醇洗脱3～10倍树脂体积，洗脱流速为1～4BV/h。

还一方面，本发明提供一种药物制剂，该药物制剂包含上述的中药组合物，任选地，所述药物制剂还包括药学上可接受的药用辅料。

优选地，其中穿山龙总皂苷和刺五加总黄酮占所述药物制剂的10～90%w/w。

优选地，所述药物制剂为口服、外用或注射剂型；优选地，所述药物制剂选自丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、分散片、缓释片、控释片、口腔速崩片、注射液、输液和粉针剂。

优选地，本发明的药物组合物被制成适于注射的剂型如注射剂或粉针剂时，其中穿山龙有效部位中穿山龙总皂苷含量在80%w/w以上，刺五加有效部位中刺五加总黄酮含量在80%w/w以上。

可以采用医药领域的常规方法，使用常规的药用辅料与载体制备上述药物制剂。例如采用一般方法取中药组合物，与任何一种或一种以上药剂学上常用的载体或药用辅料混合均匀，然后制成各种所需的剂型。所述的载体选自赋形剂、稀释剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、矫味剂和芳香剂等。优选地，所述载体选自淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇和甘氨酸等。

再一方面，本发明提供上述的中药组合物或上述的药物制剂在制备治疗中风病（脑梗塞）恢复期气虚血瘀证的药物中的应用。

本发明的用于治疗中风病（脑梗塞）恢复期气虚血瘀证的穿山龙和刺五加有效部位药物组合物采用现代提取（如：超声波提取、微波提取等）、精制（如：大孔树脂富集、聚酰胺树脂富集等）方法，以穿山龙、刺五加药物有效部位穿山龙总皂苷和刺五加总黄酮组合成中药组合物，较原申请专利（CN1507910A）更易制备成适宜的药物新制剂剂型（如：滴丸剂、软胶囊剂、缓释片剂、粉针剂、注射剂），较原申请专利（CN1507910A）物质基础更加明确，化学成分更加清楚，质量更加可控，降低服用量，服用方便，适用范围广泛，避免了采用传统提取方式出膏率较高，患者服用剂量大，同时保证疗效稳定，安全性高，工艺过程易于产业化的特点，可为临床提供更加有效、更加方便的中药品种。因其中的有效成分高以及其含量可以得到有效地控制，因此，可获得高效的、质量均一的药品，有利于中药制剂的标准化。

该组合物中的有效部位之一穿山龙有效部位可以用下述方法制备，例如：取穿山龙药材10kg，粉碎成粗粉，用50-150L40-60%v/v乙醇浸渍提取2-5次，每次6-36h，滤过，合并提取液，回收溶剂，浓缩至相对密度1.10～1.20（60℃），加水调节至5L，用10L D101大孔树脂吸附，先用20-70L水洗，再用30-80%v/v浓度乙醇40-120L解吸附，收集洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥，即得穿山龙有效部位。

上述穿山龙有效部位中总皂苷的含量测定（紫外-可见分光光度法）

对照品溶液的制备：精密称取薯蓣皂苷对照品适量，用75%v/v乙醇溶液制成每1m1含0.6mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取上述总皂苷约25mg，置25m1量瓶中，加入75%v/v乙醇至刻度，超声30min，摇匀，即得。

测定法：分别精密量取对照品与供试品溶液0.5mL，于10mL具塞锥形瓶中，挥尽溶剂，分别精密加入5mL高氯酸，振摇5min，65℃水浴中加热15min后，冰水冷却，照紫外－可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在407nm处测定吸光度，计算，即得。

本发明组合物中的另一有效部位刺五加有效部位可以用下述方法制备，例如：取刺五加药材10kg，粉碎成粗粉，用50-120L60-80%v/v乙醇回流提取8-16h，滤过，回收溶剂，浓缩至相对密度1.10～1.20（60℃），加水调节至5L，上聚酰胺树脂柱，先用40-60L水洗，再用60-80%v/v乙醇解吸附，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得刺五加有效部位。

上述刺五加有效部位中总黄酮的测定（紫外-可见分光光度法）

对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，加入75%v/v乙醇溶液溶解，并稀释至刻度，制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密称取上述总黄酮约20mg，置50mL量瓶中，加入75%v/v乙醇溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密量取对照品与供试品溶液2mL置50mL量瓶中，加水稀释至6mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min后，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min后，再加入4%氢氧化钠溶液10mL，加水至刻度，摇匀，即得，放置15min后，照紫外－可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在500nm波长处测定吸收度，计算，即得。

本发明的药物组合物含有穿山龙总皂苷和刺五加总黄酮，能活血化瘀、保护脑缺血，药理实验对急性脑缺血小鼠存活时间的影响结果表明，本发明有效部位组较原专利的药物组合物服用量降低，质量更加可控，并且对大脑中动脉梗塞大鼠脑梗塞面积的影响结果表明，本发明有效部位组能明显降低MCAO大鼠脑梗塞面积。

本发明的中药组合物较原专利中传统提取方式制备的药物组合物避免了出膏率高、患者服用剂量大等问题，其物质基础更加明确，化学成分更加清楚，质量更加可控，降低了服用量，服用方便，适用范围广泛，疗效稳定，安全性高，其制备工艺过程易于产业化，精制有效部位更适宜制备成药物新制剂剂型（如：滴丸剂、软胶囊剂、缓释片剂、粉针剂、注射剂），从而达到治疗中风病（脑梗塞）恢复期气虚血瘀证的目的。为临床提供更加方便、更加有效、质量更加可控的中药品种，为患者带来更多的利益，不仅符合传统中医药治疗中风的组方原则，而且符合中药现代化的发展需求，对推动我国医药产业从仿制向自主创新转变以及推动中药国际化具有十分重大的意义。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

取穿山龙10kg，粉碎成粗粉，加100L70%v/v乙醇提取三次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度1.03～1.08（60℃），加水稀释至上样液浓度2g/mL（以生药量计），用10L D101大孔树脂吸附（树脂径高比1:8），吸附流速2BV/h，先用5BV水洗脱，再用50%v/v乙醇5BV洗脱，洗脱流速2BV/h，收集50%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，即得穿山龙有效部位500g。其中含有穿山龙总皂苷260g。

另取刺五加5kg，粉碎成粗粉，加35L的75%v/v的乙醇，回流提取3次，每次4小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度1.03～1.08（60℃），加水稀释至上样液浓度0.3g/mL（以生药量计），用10L聚酰胺树脂吸附（树脂径高比1:6），吸附流速3BV/h，先用8BV水洗脱，再用50%v/v浓度乙醇5BV洗脱，洗脱流速1BV/h，收集50%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，即得刺五加有效部位102g。其中含有刺五加总黄酮51g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共602g，其中含有穿山龙总皂苷43.2%w/w，刺五加总黄酮8.47%w/w。

将所述中药有效部位组合物粉碎成细粉，取PEG6000适量，70℃熔融，以固体分散技术将上述粉末加入熔融的PEG6000中，以5℃液体石蜡为冷却剂，制成滴丸。

实施例2

取穿山龙药材10kg，粉碎成粗粉，加80L30%v/v乙醇回流提取三次，每次1小时，滤过，合并提取液，回收溶剂，浓缩至无醇味，用水稀释至20L，离心，上清液加水稀释至上样液浓度1g/mL（以生药量计），用10LHPD100大孔树脂吸附（树脂径高比1:4），吸附流速1BV/h，先用水2BV洗脱，再用70%v/v乙醇4BV洗脱，洗脱流速4BV/h，收集70%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥，即得穿山龙有效部位470g。其中含有穿山龙总皂苷280g。

另取刺五加6kg，粉碎成粗粉，加30L的50%v/v的乙醇，冷浸提取三次，每次24小时，合并提取液，回收溶剂，浓缩减压浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度0.05g/mL（以生药量计），用5L AB-8树脂吸附（树脂径高比1:15），吸附流速5BV/h，先用水4BV洗脱，再用90%v/v乙醇溶液2BV洗脱，洗脱流速3BV/h，收集90%v/v乙醇洗脱液，回收溶剂，喷雾干燥，即得刺五加有效部位108g。其中含有刺五加总黄酮59.4g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共578g，其中含有穿山龙总皂苷48.4%w/w，刺五加总黄酮10.3%w/w。

将所述中药有效部位组合物混合粉碎成细粉，溶于适量热注射用水中，过滤至澄明，分装于10ml安瓿中，100℃灭菌1h，制得注射液。

实施例3

取穿山龙8kg，粉碎成粗粉，加80L50%v/v乙醇冷浸提取三次，每次24h，滤过，合并三次提取液，回收溶剂，浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度1.5g/mL（以生药量计），用5L NKA-9大孔树脂吸附（树脂径高比1:15），吸附流速5BV/h，先用水4BV洗脱，再用60%v/v乙醇8BV洗脱，洗脱流速1BV/h，收集60%v/v乙醇洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得穿山龙有效部位320g。其中含有穿山龙总皂苷231g。

另取刺五加10kg，粉碎成粗粉，用100L水煎煮三次，每次2h，滤过，合并三次提取液，回收溶剂，浓缩至相对密度1.2（60℃），加乙醇使其含醇量达50%v/v，静置过夜，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度1.2g/mL（以生药量计），用20L HPD300树脂吸附（树脂径高比1:12），吸附流速2.5BV/h，先用水6BV洗脱，再用65%v/v乙醇溶液7BV洗脱，收集65%v/v乙醇洗脱液，洗脱流速1.5BV/h，回收溶剂，冷冻干燥，即得刺五加有效部位42g。其中含有刺五加总黄酮21g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共362g，其中含有穿山龙总皂苷63.8%w/w，刺五加总黄酮5.8%w/w。

将所述中药有效部位组合物粉碎成细粉，加入羟丙纤维素100g，糊精50g，混匀，用95%v/v乙醇，制成颗粒。

实施例4

取穿山龙药材3kg，刺五加药材6kg，粉碎成粗粉，用45L90%v/v乙醇浸泡，过夜，第二日渗漉，收集渗漉液，回收溶剂，浓缩至相对密度1.2（60℃），加水稀释至6kg，加入正丁醇萃取3次，每次12L，分取正丁醇萃取层浓缩，减压干燥，即得穿山龙和刺五加有效部位组合物241g。其中穿山龙总皂苷含量为30.92%w/w，刺五加总黄酮含量为25.49%w/w。

将上述所得有效部位组合物粉碎成细粉，取PEG6000:PEG4000(1:1)适量，85℃熔融，以固体分散技术将上述粉末加入熔融的PEG中，以5℃液体石蜡为冷却剂，制成滴丸。

实施例5

取穿山龙药材1kg，粉碎成粗粉，用8L70%v/v乙醇超临界流体萃取，萃取压力20MPa，萃取温度40℃，萃取时间60min，回收溶剂，浓缩至2L，加入正丁醇萃取5次，每次6L，分取正丁醇萃取层浓缩，冷冻干燥，即得穿山龙有效部位33g。其中含有穿山龙总皂苷22.8g。

另取刺五加药材7kg，粉碎成粗粉，用70L30%v/v乙醇回流提取二次，每次2h，滤过，合并三次提取液，回收溶剂，浓缩至相对密度1.15（60℃），加水稀释至上样液浓度0.8g/mL（以生药量计），离心，收集上清液，调pH5-6，用14L NKA-12树脂吸附（树脂径高比1:10），吸附流速4.5BV/h，先用水7BV洗脱，再用40%v/v乙醇12BV洗脱，洗脱流速2.5BV/h，收集40%v/v乙醇洗脱液，回收溶剂，冷冻干燥，即得刺五加有效部位72g。其中含有刺五加总黄酮35.07g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共105g，其中含有穿山龙总皂苷21.7%w/w，刺五加总黄酮33.4%w/w。

将所述中药有效部位组合物混合粉碎成细粉，加入适量注射用水，溶解，滤过至澄明，分装5ml安瓿中，低温冷冻干燥约24h后无菌熔封，制得粉针剂。

实施例6

取穿山龙药材7kg，粉碎成粗粉，用42L50%v/v乙醇回流提取三次，每次12h，滤过，合并提取液，回收溶剂，得到穿山龙浓缩液。

另取刺五加药材3kg，粉碎成粗粉，用24L水煎煮提取三次，每次2h，滤过，合并三次提取液，回收溶剂，浓缩至相对密度1.15-1.20（60℃），加乙醇至含醇量达到约50%，静置12h，离心，上清液回收乙醇至无醇味，得到刺五加浓缩液。

上述穿山龙、刺五加浓缩液合并，加水稀释至5L，加入正丁醇萃取3次，每次10L，分取正丁醇萃取层浓缩，喷雾干燥，即得穿山龙和刺五加有效部位组合物368g。其中穿山龙总皂苷含量为46.06%w/w，刺五加总黄酮含量为4.88%w/w。

将所述中药有效部位组合物混合粉碎成细粉，加入聚乙烯吡咯烷酮200g，HPMC200g混匀，制粒，过筛，压片，干燥，制得缓释片剂。

实施例7

取穿山龙药材8kg、刺五加药材10kg，粉碎成粗粉，用144L30%v/v乙醇回流提取三次，每次4h，滤过，合并三次提取液，回收溶剂，浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度1g/mL（以生药量计），用10L聚酰胺树脂吸附（树脂径高比1:18），吸附流速1BV/h，先用3BV水洗脱，收集流出液及水洗液，备用；再用70%v/v浓度乙醇4BV洗脱，洗脱流速2BV/h，收集70%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，得回收液备用；用10LHPD300树脂吸附（树脂径高比1:18），吸附流速1BV/h，先用3BV水洗脱，再用30%v/v浓度乙醇5BV洗脱，洗脱流速2BV/h，收集30%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，与上述回收液合并，冷冻干燥，即得穿山龙和刺五加有效部位组合物517g。其中穿山龙总皂苷含量为35.83%w/w，刺五加总黄酮含量为37.50%w/w。

将上述所得中药有效部位组合物混合粉碎成细粉，将糖粉400g、淀粉50g混匀制成30～40目颗粒做空白芯粒，置于包衣造粒机中，旋转中不断喷入PVP乙醇液，撒入有效部位混合物，制成微丸，干燥过筛装入硬胶囊中。

实施例8

取穿山龙药材10kg，粉碎成粗粉，用30L75%v/v乙醇室温浸渍12h，用50L75%v/v乙醇渗漉，收集渗漉液，减压回收溶剂，浓缩至无醇味，加水稀释至5L，加入乙酸乙酯萃取5次，每次2.5L，分取乙酸乙酯萃取层浓缩，喷雾干燥，即得穿山龙有效部位550g。其中含有穿山龙总皂苷287.3g。

取刺五加1kg，粉碎成粗粉，用3L50%v/v乙醇超临界流体萃取，萃取压力15MPa，萃取温度35℃，萃取时间30min，回收溶剂，浓缩冷冻干燥，即得刺五加有效部位10g。其中含有刺五加总黄酮7.2g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共560g，其中含有穿山龙总皂苷51.3%w/w，刺五加总黄酮1.29%w/w。

将所述中药有效部位组合物混合粉碎成细粉，加入瓜尔豆胶100g，混匀，压制成缓控释片。

实施例9

取穿山龙1kg，粉碎成粗粉，加12L水煎煮4次，每次1小时，合并水煎液，减压浓缩至相对密度1.05（60℃），放冷后加入乙醇，充分搅拌，使含醇量达60%v/v，静置过夜，离心，去除沉淀；回收乙醇，减压浓至无醇味，加水稀释至2L，加入正丁醇萃取3次，每次4L，分取正丁醇萃取层浓缩，减压干燥，即得穿山龙有效部位77g。其中含有穿山龙总皂苷39.0g。

取刺五加10kg，粉碎成粗粉，加80L50%乙醇回流提取4次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度1.8g/mL（以生药量计），用5L HPD600大孔树脂吸附（树脂径高比1:14），吸附流速2BV/h，先用5BV水洗脱，用55%v/v乙醇9BV洗脱，洗脱流速4BV/h，收集55%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，即得刺五加有效部位152g。其中含有刺五加总黄酮78.6g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共229g，其中含有穿山龙总皂苷17.0%w/w，刺五加总黄酮34.3%w/w。

将所述中药有效部位组合物混合粉碎成细粉，加入微晶纤维素250g，淀粉100g，混匀，用85%v/v乙醇制粒，装入胶囊中，制成胶囊剂。

实施例10

取穿山龙3kg，粉碎成粗粉，加12L40%v/v乙醇超声提取5次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度0.5g/mL（以生药量计），用10L D101大孔树脂吸附（树脂径高比1:5），吸附流速4BV/h，先用6BVpH3水洗脱，用85%v/v乙醇3BV洗脱，洗脱流速1BV/h，收集85%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，冷冻干燥，即得穿山龙有效部位211g。其中含有穿山龙总皂苷97g。

取刺五加3kg，粉碎成粗粉，加2L水煮提取3次，每次3小时，合并水煮液，减压浓缩至密度1.30（60℃），放冷后加入乙醇，充分搅拌，使含醇量达40%v/v，静置过夜，离心，去除沉淀；回收乙醇，减压浓缩至无醇味，加水稀释至上样液浓度0.8g/mL（以生药量计），用1LHPD400大孔树脂吸附（树脂径高比1:8），吸附流速5BV/h，先用3BV pH9水洗脱，用60%v/v乙醇6BV洗脱，洗脱流速2BV/h，收集60%v/v乙醇洗脱液，回收乙醇，冷冻干燥，即得刺五加有效部位52g。其中含有刺五加总黄酮35g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共263g，其中含有穿山龙总皂苷36.9%w/w，刺五加总黄酮13.3%w/w。

将所述中药有效部位组合物粉碎成细粉，加入羟丙纤维素750g、羧甲基淀粉钠50g、甜菊糖25g、混匀，用75%乙醇制粒，干燥，加入微分硅胶20g，混匀，压制成分散片。

实施例11

取穿山龙10kg，粉碎成粗粉，加40L50%v/v乙醇微波提取5次，每次0.5小时，合并提取液，减压浓缩至密度1.15（60℃），加水稀释至上样液浓度1.5g/mL（以生药量计），用2L DM301吸附（树脂径高比1:9），吸附流速4BV/h，用30%v/v乙醇10BV洗脱，洗脱流速4BV/h，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥，即得穿山龙有效部位432g。其中含有穿山龙总皂苷300g。

取刺五加0.5kg，粉碎成粗粉，加5L85%乙醇浸渍2次，每次12小时，合并提取液，减压浓缩至密度1.25（60℃），加水稀释至0.1L，加入乙酸乙酯萃取2次，每次0.5L，分取乙酸乙酯萃取层浓缩，真空干燥，即得刺五加有效部位14g。其中含有刺五加总黄酮7.5g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共446g，其中含有穿山龙总皂苷67.3%w/w，刺五加总黄酮1.68%w/w。

将所述中药有效部位组合物粉碎成细粉，加入乳糖1500g、低取代羟丙基纤维素250g，羟甲基淀粉钠250g和玉米淀粉250g混合均匀，压制得分散片。

实施例12

取穿山龙4kg，粉碎成粗粉，加40L70%v/v乙醇浸渍提取2次，每次48小时，合并提取液，减压浓缩至密度1.15（60℃），加水稀释至6kg，加入正丁醇萃取5次，每次30L，分取正丁醇层减压浓缩，喷雾干燥，即得穿山龙有效部位182g。其中含有穿山龙总皂苷96.8g。

取刺五加0.8kg，粉碎成粗粉，加3.6L30%v/v乙醇微波提取3次，每次0.1小时，合并提取液，减压浓缩至密度1.0（60℃），加水稀释至上样液浓度0.6g/mL（以生药量计），用0.8L HPD500大孔树脂吸附（树脂径高比1:4），吸附流速3BV/h，先用2BV水洗脱，再用25%v/v乙醇14BV洗脱，洗脱流速3BV/h，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得刺五加有效部位4.2g。其中含有刺五加总黄酮2.4g。

将上述所得穿山龙有效部位和刺五加有效部位混合得中药有效部位组合物共186.2g，其中含有穿山龙总皂苷51.99%w/w，刺五加总黄酮1.29%w/w。

将所述中药有效部位组合物粉碎成细粉，加入酒石酸250g、碳酸氢钠250g、羧甲基纤维素125g、微晶纤维素125g、滑石粉10g、硬脂酸镁10g，混匀，用明胶作囊壳材料，压制成泡腾片。

对比例1

按照现有专利CN1507910A实施例3的方法制备传统粗提物

（1）穿山龙1662g加水煎提2次，每次2-3小时，水提液经过滤，减压浓缩，相对密度为1.06～1.08（60℃），浓缩液放冷后加入95%v/v乙醇至含醇70%v/v，混匀，静置过夜，滤去沉淀；

（2）刺五加1108g，按中华人民共和国药典2000年版一部491页制法制备，加入步骤（1）得到的穿山龙提取物滤液中，减压浓缩，干燥，即得传统粗提物360.1g。

经测定上述粗提物中含有穿山龙总皂苷含量为4.8%w/w；上述粗提物中含有刺五加总黄酮含量为4.5%w/w。

经药理实验证明，本发明的中药组合物较原专利CN1507910A的中药组合物具有更好的活血化瘀、保护脑缺血的作用，并且本发明的中药组合物能明显降低MCAO大鼠脑梗塞面积，实验例如：

实验例1

本发明实施例2所得的中药有效部位组合物与对比例1中所得的传统粗提物对小鼠急性脑缺血保护作用的比较

昆明种小鼠，体重21-25g，（上海斯莱克实验动物有限责任公司，批号：SCXK(京)2007-0005）雌雄各半，动物按体重随机均分为4组，即空白对照组、传统粗提物组、有效部位组、阳性药（血塞通片，云南维和药业股份有限公司，批号：20090426）组，各动物组每天给药一次，连续6天，空白组给予常水，于末次给药1小时后，结扎动物的双侧颈总动脉和迷走神经，造成急性脑缺血，记录动物存活时间，观察药物的作用，以t检验比较给药组与对照组均数差异的显著性。结果见表1，由表可见，有效部位与传统粗提取组均能明显延长急性脑缺血小鼠的存活时间，有效部位效果有优于传统粗提物的趋势，与空白对照组相比具有明显的差异，阳性对照药也表现出相似的有益作用。

表1.对小鼠急性脑缺血保护作用的比较

实验例2

本发明的实施例2的中药有效部位组合物与对比例1中所得的传统粗提物对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响

Wistar大鼠，体重190～230g，（北京维通利华试验动物技术有限公司，批号：SCXK(京)2007-0001SC）雄雌兼用。腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉，侧卧位固定，在亚无菌条件下，经眼外呲与外耳连线开口，剪断颧骨，固定创口。在手术显微镜下，于颅骨底开颅窗，暴露大鼠中动脉，用高频电刀灼断，止血后，缝合创口，回笼饲养。动物制成中动脉梗塞模型24h后，动物按体重随机分为6组，即空白对照组，阳性对照药血塞通片（云南维和药业股份有限公司，批号：20090426）组，传统粗提物组，和低、中、高剂量有效部位组。各组动物每天给药一次，连续7天，空白对照组给予常水，于末次给药1h后，断头处死动物，取脑组织切成5片，常规TTC染色，用1%甲醛固定后，按落点法（100点/cm²）计算脑梗塞面积占全部脑切片面积的百分比，观察药物的影响。以t检验比较给药组与对照组均数差异的显著性。实验结果见表2。

表2.对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响(x±s)

由表可见，有效部位组均能明显降低MCAO大鼠脑梗塞面积，与空白对照组相比具有明显的差异（p<0.01），与传统粗提物组相比无显著性差异，阳性对照药血塞通也表现出相似的有益作用。但有效部位高剂量组与传统粗提物组相比有显著性差异，临床应用可以提高给药剂量。

Claims (14)

1.一种治疗中风的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包含作为活性成分的穿山龙有效部位和刺五加有效部位，其中，所述穿山龙有效部位中所含的穿山龙总皂苷和所述刺五加有效部位中所含的刺五加总黄酮之和占所述中药组合物的50～90%w/w。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其中，所述穿山龙有效部位中所含的穿山龙总皂苷占所述中药组合物的20～70%w/w；所述刺五加有效部位中所含的刺五加总黄酮占所述中药组合物的1～40%w/w。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其中，穿山龙有效部位和刺五加有效部位是通过提取下述重量份配比的原料药材而制备的：穿山龙1～10份，刺五加0.1～10份，优选为穿山龙1～5份，刺五加0.1～5份，更优选为穿山龙1～3份，刺五加0.1～2份。

4.权利要求1至3中任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：（1）用水或乙醇水溶液对穿山龙和刺五加的混合物进行提取得到粗提物；（2）通过如下方法中的一种或多种对该粗提物进行纯化：A、用乙酸乙酯或正丁醇萃取得到萃取液；B、过大孔树脂柱得到洗脱液；和C、过聚酰胺树脂柱得到洗脱液；（3）将得到的萃取液或洗脱液浓缩干燥即得穿山龙有效部位和刺五加有效部位的混合物；

或者，所述制备方法包括：（1）用水或乙醇水溶液对穿山龙和刺五加分别进行提取得到各自的粗提物；（2）通过如下方法中的一种或多种对粗提物分别进行纯化：A、用乙酸乙酯或正丁醇萃取得到萃取液；B、过大孔树脂柱得到洗脱液；和C、过聚酰胺树脂柱得到洗脱液；（3）将得到的萃取液或洗脱液浓缩、干燥即得穿山龙有效部位和刺五加有效部位。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述步骤（1）中的提取方法为浸渍、渗漉、热回流、超临界流体、超声提取或微波提取2-5次，每次0.1-48h；优选渗漉或热回流提取2-5次，每次1-24h。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其中，所述步骤（1）中，在提取之前相对于1kg的原料先用4-20L的0-95%v/v乙醇将穿山龙和刺五加浸渍0.1-24h；优选相对于1kg的原料用6-12L的0-75%v/v乙醇浸渍0.1-24h；优选地，在提取之后将提取液进行过滤，并将滤液减压浓缩至密度为1.0-1.3（60℃），再加入95%v/v乙醇至含醇量0-90%v/v，优选至含醇量30-75%v/v后，静置，过滤，滤液减压回收至无醇，溶液密度为1.0-1.3（60℃），得到粗提物。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的制备方法，其中，所述步骤（2）中，当采用乙酸乙酯或正丁醇萃取进行纯化时，向步骤（1）所得粗提物中相对于1kg粗提物加入2-10L的乙酸乙酯或正丁醇萃取2-5次得萃取液；优选地，步骤（3）中所述干燥方法为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的制备方法，其中，所述步骤（2）中的大孔树脂柱为非极性大孔树脂柱、弱极性大孔树脂柱、中等极性大孔树脂柱，如AB-8、D101、HPD100、DM301、HPD300、HPD500、HPD600、NKA-9、NKA-12；优选地，以生药量计，上样液浓度为0.02～2g/mL，吸附流速1～5BV/h，树脂柱径高比1：4～15，以生药量计，上样量为0.5～10g/mL，水洗脱0～8倍树脂体积进行除杂，用20～90%v/v乙醇洗脱2～15倍树脂体积，洗脱流速为1～4BV/h；优选地，所用的洗脱剂为0-95%v/v乙醇。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，步骤（2）中当选用大孔树脂柱纯化时，所述大孔树脂柱是非极性或弱极性大孔树脂柱，如AB-8、NKA-9或D101。

10.根据权利要求4至6中任一项所述的制备方法，其中，步骤（2）中当选用聚酰胺树脂柱纯化时，以生药量计，上样液浓度为0.1～1.5g/mL，吸附流速1～5BV/h，树脂柱径高比1：6～18，以生药量计，上样量为0.5～10g/mL，水洗脱0～8倍树脂体积进行除杂，用30～95%v/v乙醇洗脱3～10倍树脂体积，洗脱流速为1～4BV/h。

11.一种药物制剂，该药物制剂包含权利要求1至3中任意一项所述的中药组合物，任选地，所述药物制剂还包括药学上可接受的药用辅料。

12.根据权利要求11所述的药物制剂，其中，穿山龙总皂苷和刺五加总黄酮占所述药物制剂的10～90%w/w。

13.根据权利要求11或12所述的药物制剂，其中，所述药物制剂为口服、外用或注射剂型；优选地，所述药物制剂选自丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、分散片、缓释片、控释片、口腔速崩片、注射液、输液和粉针剂。

14.权利要求1至3中任一项所述的中药组合物或权利要求11至13中任一项所述的药物制剂在制备治疗中风病（脑梗塞）恢复期气虚血瘀证的药物中的应用。