CN104069142B - 生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其采用了三酶法，即纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶，使板蓝根浸膏中有效成分表告依春的含量较传统的水提醇沉法提高了一倍以上，出膏率也有大幅提高。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取领域，具体涉及一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法。
技术背景
众所周知，板蓝根是我国传统治疗病毒性感冒及腮腺炎的理想药物，板蓝根性寒，味苦，具有清热、解毒、凉血、利咽之功效，为中药的广谱抗菌药。过去认为靛蓝、靛玉红等成分为其抗病毒的有效成分，但现在的研究表明，靛蓝、靛玉红没有抗病毒活性，抗病毒作用的有效部位为总生物碱，其中表告依春是板蓝根体内产生的含硫生物碱，其为板蓝根抗流感的主要成分之一。[见文献：1.板蓝根抗病毒有效成分研究进展—中医药信息2005年第22卷第5期pages37-40;2.板蓝根抗病毒物质基础研究思路—中草药第39卷第4期pages616-618；3.板蓝根不同提取物中抗病毒成分表告依春在大鼠体内的药代动力学—中国科技大学学报第37卷第6期pages519-522；4.板蓝根总生物碱中表告依春在发热大鼠体内的药动学-药效学结合模型研究—中草药第38卷第10期pages1514-1519等]。故表告依春的含量，是反映板蓝根质量的一个重要指标。
目前板蓝根制剂多采用板蓝根浸膏制成，而板蓝根浸膏一般是将板蓝根饮片用水提醇沉的方法进行提取制得，用该方法得到的板蓝根浸膏，抗病毒成分表告依春的含量不够理想，从而影响板蓝根制剂的治疗作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法。
本发明解决上述技术问题采取的技术方案：
一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，包括如下步骤：
（1）取板蓝根饮片，加水浸润；
（2）加入纤维素酶和蛋白酶进行酶解；
（3）加热煎煮灭活，过滤；
（4）滤渣加水煎煮，过滤；
（5）合并步骤（3）和（4）的滤液，加入淀粉酶进行液化，再加热灭活，过滤，将滤液浓缩成浸膏即得。
其中，
步骤（1）中加入所述板蓝根饮片8倍质量的水浸润1小时；
步骤（2）的具体步骤为：加热至30-50℃，调pH值2.5-6.0，以板蓝根饮片的质量计，分别按10-50U/g和5-10U/g加入纤维素酶和蛋白酶，恒温搅拌，酶解30-90分钟；优选加热至40-50℃，调pH值3.5-5.0；
步骤（3）中是在100℃下煎煮灭活1小时；
步骤（4）中加入所述板蓝根饮片6倍质量的水在100℃下煎煮1小时；
步骤（5）的具体步骤为：合并步骤（3）和（4）的滤液，加热至50-75℃，调pH值5.5-7.5，以板蓝根饮片的质量计，按6-8U/g加入淀粉酶，液化1小时，再加热至100℃灭活10-20分钟，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.06-1.10，过滤，将滤液在10℃冷置15-24小时，取上清液，再次过滤后浓缩至相对密度为1.25-1.35的浸膏。
优选地，步骤（5）中加热至60-70℃，调pH值6.0-7.0，所述淀粉酶为中温α-淀粉酶、高温α-淀粉酶或β-淀粉酶，优选中温α-淀粉酶。
本发明创造性地将纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶应用到板蓝根浸膏的提取工艺中，方法工艺简单，易于操作，用料价廉易得，得到的板蓝根浸膏中有效成分表告依春的含量较传统的水提醇沉法提高了一倍以上，出膏率也有大幅提高。药代动力学研究发现，表告依春单体的口服生物利用度明显高于板蓝根总提取物，因此用本发明得到的板蓝根浸膏制成的板蓝根制剂，其抗病毒作用要明显优于传统板蓝根浸膏制剂。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
取板蓝根饮片100kg，投料至提取罐内，加水800L浸润1小时，加热至45℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为4.5，加入纤维素酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，100000u/ml）3×106U，加入蛋白酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，50000u/ml）8×105U，恒温，搅拌，酶解1小时，继续加热至100℃煎煮（灭活）1小时，滤过，出药汁；加水600L，100℃煎煮1小时，滤过，出药汁。合并两次药汁至双效浓缩罐，调温至70℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为6.5，加入中温α-淀粉酶（购于山东省安丘市酶制剂厂，食品级，2000u/ml）8×105U，液化1小时，加热至100℃，灭活10分钟，浓缩至相对密度为1.08，滤过，得药液160kg，冷置16小时，提取上清液，浓缩至相对密度1.27（20℃测），收得浸膏56.6kg，出膏率为56.6%，溶化性合格，测得表告依春含量0.171%。
实施例2
取板蓝根饮片100kg，投料至提取罐内，加水800L浸润1小时，加热至40℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为6，加入纤维素酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，100000u/ml）1×106U，加入蛋白酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，50000u/ml）10×105U，恒温，搅拌，酶解1小时，继续加热至100℃煎煮（灭活）1小时，滤过，出药汁；加水600L，100℃煎煮1小时，滤过，出药汁。合并两次药汁至双效浓缩罐，调温至60℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为6，加入中温α-淀粉酶（购于山东省安丘市酶制剂厂，食品级，2000u/ml）7×105U，液化1小时，加热至100℃，灭活20分钟，滤过，将滤液浓缩至相对密度1.34（20℃测），收得浸膏54.7kg，出膏率为54.7%，溶化性合格，测得表告依春含量0.169%。
实施例3
取板蓝根饮片100kg，投料至提取罐内，加水800L浸润1小时，加热至30℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为3.5，加入纤维素酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，100000u/ml）5×106U，加入蛋白酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，50000u/ml）5×105U，恒温，搅拌，酶解1小时，继续加热至100℃煎煮（灭活）1小时，滤过，出药汁；加水600L，100℃煎煮1小时，滤过，出药汁。合并两次药汁至双效浓缩罐，调温至65℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为7，加入中温α-淀粉酶（购于山东省安丘市酶制剂厂，食品级，2000u/ml）6×105U，液化1小时，加热至100℃，灭活15分钟，浓缩至相对密度为1.10，滤过，得药液160kg，冷置20小时，提取上清液，浓缩至相对密度1.32（20℃测），收得浸膏55kg，出膏率为55%，溶化性合格，测得表告依春含量0.17%。
实施例4
取板蓝根饮片100kg，投料至提取罐内，加水800L浸润1小时，加热至45℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为5，加入纤维素酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，100000u/ml）4×106U，加入蛋白酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，50000u/ml）7×105U，恒温，搅拌，酶解1小时，继续加热至100℃煎煮（灭活）1小时，滤过，出药汁；加水600L，100℃煎煮1小时，滤过，出药汁。合并两次药汁至双效浓缩罐，调温至50℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为7.5，加入中温α-淀粉酶（购于山东省安丘市酶制剂厂，食品级，2000u/ml）6×105U，液化1小时，加热至100℃，灭活15分钟，浓缩至相对密度为1.06，滤过，得药液172kg，冷置24小时，提取上清液，浓缩至相对密度1.314（20℃测），收得浸膏55.4kg，出膏率为55.4%，溶化性合格，测得表告依春含量0.169%。
实施例5
取板蓝根饮片100kg，投料至提取罐内，加水800L浸润1小时，加热至50℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为2.5，加入纤维素酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，100000u/ml）3×106U，加入蛋白酶（购于山东泰安信得利生物工程有限公司，食品级，50000u/ml）8×105U，恒温，搅拌，酶解1小时，继续加热至100℃煎煮（灭活）1小时，滤过，出药汁；加水600L，100℃煎煮1小时，滤过，出药汁。合并两次药汁至双效浓缩罐，调温至70℃，用碳酸钠和醋酸调pH值为5.5，加入中温α-淀粉酶（购于山东省安丘市酶制剂厂，食品级，2000u/ml）8×105U，液化1小时，加热至100℃，灭活10分钟，浓缩至相对密度为1.08，滤过，得药液160kg，冷置16小时，提取上清液，浓缩至相对密度1.27（20℃测），收得浸膏56kg，出膏率为56%，溶化性合格，测得表告依春含量0.168%。
实施例6
本实施例选用高温α-淀粉酶（购于山东省安丘市酶制剂厂，食品级，20000u/ml），其他条件同实施例1，制得相对密度为1.27的浸膏54.5kg，出膏率54.5%，溶化性合格，表告依春含量0.169%。
实施例7
本实施例选用β-淀粉酶，其他条件同实施例1，制得相对密度为1.27的浸膏39.6kg，出膏率39.6%，溶化性合格，表告依春含量0.142%。
对比例1
取板蓝根饮片100kg，投料至提取罐内，加水800L浸润1小时，加热至100℃煎煮2小时，滤过，出药汁；加水600L，100℃煎煮1小时，滤过，出药汁。合并两次药汁，浓缩至相对密度为1.20（50℃下测得），重160kg，放至室温，加乙醇使含醇量60%，10℃冷置24小时，提取上清液，浓缩至相对密度1.25（20℃测），收得流浸膏23.2kg，出膏率为23.2%，溶化性合格，测得表告依春含量0.061%。
Claims (7)
1.一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）取板蓝根饮片，加水浸润；
（2）加热至30-50℃，调pH值2.5-6.0，以板蓝根饮片的质量计，分别按10-50U/g和5-10U/g加入纤维素酶和蛋白酶，恒温搅拌，酶解30-90分钟；
（3）加热煎煮灭活，过滤；
（4）滤渣加水煎煮，过滤；
（5）合并步骤（3）和（4）的滤液，加热至50-75℃，调pH值5.5-7.5，以板蓝根饮片的质量计，按6-8U/g加入淀粉酶，液化1小时，再加热至100℃灭活10-20分钟，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.06-1.10，过滤，将滤液在10℃冷置15-24小时，取上清液，再次过滤后浓缩至相对密度为1.25-1.35的浸膏。
2.根据权利要求1所述的一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：步骤（1）中加入所述板蓝根饮片8倍质量的水浸润1小时。
3.根据权利要求2所述的一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：步骤（2）中加热至40-50℃，调pH值3.5-5.0。
4.根据权利要求1所述的一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：步骤（3）中是在100℃下煎煮灭活1小时。
5.根据权利要求1所述的一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：步骤（4）中加入所述板蓝根饮片6倍质量的水在100℃下煎煮1小时。
6.根据权利要求1所述的一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：步骤（5）中加热至60-70℃，调pH值6.0-7.0，所述淀粉酶为中温α-淀粉酶、高温α-淀粉酶或β-淀粉酶。
7.根据权利要求6所述的一种生物催化法提高板蓝根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于：所述淀粉酶为中温α-淀粉酶。
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