CN104053774A - 微流体装置、方法和应用 - Google Patents

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Abstract

微流体装置、方法及相关应用，使用并适用于福尔马林固定的、石蜡包埋的(FFPE)组织样品，和进行液液提取，以在核酸纯化步骤之前从组织样品中移除石蜡。微流体装置包括专用液液提取工艺容器、核酸纯化工艺组件和核酸扩增反应器。液液提取和核酸纯化试剂盒包括：能进行液液提取工艺和核酸纯化工艺的微流体装置，其包括专用液液提取工艺容器、设置在容器中的不混溶液体或其前驱相、核酸纯化工艺组件、以及流体相连的核酸扩增反应器；以及适于实现所述液液提取工艺和所述核酸纯化工艺的试剂源。

Description

微流体装置、方法和应用
相关申请信息
本申请要求于2011年11月17日提交的序列号为61/561,007的美国临时专利申请的权益，其主题在此通过引用全入并入。
背景
发明领域
本发明的实施方案涉及生物学领域。更具体而言，本发明的实施方案涉及处理用于分子生物学研究的福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品的系统及其应用。
相关领域说明
组织学的一个方面依赖于保护组织防止腐烂以用于之后的检查或研究。常通过用防止组织由于自溶和/或腐败而腐烂的化学物质(常是福尔马林溶液)处理来保藏这些组织。化学固定剂还可以通过向组织蛋白的氨基团中引入化学交联来保持组织的结构。然后常将同样的组织包埋在碳氢化合物基质(常是石蜡)中，以更方便地将其储存在固相中以及更可靠地取出被固定组织的薄切片，用于显微研究。由此保藏的组织常称为福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)。随着分子生物学的引进，FFPE组织不仅必然要用于显微分析，而且其还常利于研究同样保藏在组织中的基因材料。在这种情况中，为了从FFPE组织分离基因材料并使其与组织分子生物学研究需要的化学过程相容，需要从组织中移除石蜡，并且需要逆转由固定剂引起的交联。传统上通过将包埋的组织样品置于二甲苯溶液中，使FFPE组织样品从固体石蜡(paraffin wax)中脱蜡。然后将固体石蜡溶解于二甲苯中，随后从二甲苯中移出组织样品，并在连续稀释过程中用乙醇/二甲苯混合物对其再水化。可替换地，可将二甲苯喷到组织样品上，且因为新的二甲苯施于组织样品上，所以“冲走”了溶解的石蜡。尽管二甲苯是用于样品脱蜡的有效溶剂时，但将其引入组织处理步骤使得用于分子生物学的化学过程困难化；对于实验室技术员来说，二甲苯还是待处理的危险化学物质(一般要求通风罩和特殊废弃物处理装置)，并且其有机性质使得许多含水缓冲步骤自动成为挑战。可以完成除去固体石蜡而不使用二甲苯的系统是有利的。另外，如果该系统是与之后用于核酸试验的分子生物学过程相容的含水系统，则该技术相对于使用二甲苯将是重要的改进。
包埋在固体石蜡中的组织样品在包埋之前常被化学地“固定”。通过在氨基之间形成交联亚甲基桥完成该固定。该聚合网络结构导致蛋白质主链中大分子的渗透率低，但很好地保持了蛋白质分子的结构特征。该化学交联使组织免于腐烂。然后，因此其可以在环境条件下储存很长时间。为了使固定的组织产生适于分子生物研究的核酸，需要逆转化学诱导的交联，从而可以从组织样品中纯化出核酸。可以通过用还可含有去垢剂或表面活性剂的适合的缓冲液处理组织样品(一旦石蜡已移除)以及适当提高温度以逆转交联，来实现解交联。因此，能容易地从组织移除石蜡，然后继续解交联大分子从而使组织样品处于与传统含水样品制备、纯化和核酸扩增相容的条件，这样的系统和方法将非常有利，且如果该系统可以自动进行，甚至将更为有利。
发明概述
本文描述的本发明的实施方案是与标准实验室材料和技术相容的液-液提取系统。其还与用于进行核酸提取的一些已建立的自动程序相容。当将包含在含水缓冲溶液中的FFPE样品加热至石蜡的熔点以上时，发生脱蜡。用不混溶液体如硅油或密度比水溶液低且沸点水溶液高的一些其它油覆盖该水溶液。在这种情况中，因为石蜡与水溶液不混溶且其密度比水溶液的还低，所以融化的石蜡飘浮在水溶液的表面并进入其中可混溶的油相，由此其能与存在组织样品的水溶液永久地分开。
本发明的实施方案涉及从含水缓冲液中的FFPE组织样品中纯化核酸的方法。该方法包括反应容器中的液-液提取，密度比水溶液低的油层飘浮在含有FFPE组织样品的底层水溶液的顶部。将待处理的FFPE组织样品置于水溶液中，且整个过程期间其都存在于水溶液中。将水溶液加热至组织样品中固体石蜡的熔点以上，且因为固体石蜡的密度比水溶液的低，融化的石蜡飘浮在水溶液的表面并与飘浮在表面的油接触。因为固体石蜡与油混溶，其混进油中，并因此与水溶液和组织样品永久分开。组织样品保持在可用于进一步处理如解交联、细胞裂解和核酸纯化的反应容器中的水相中，从而备好用于进一步分析的组织样品的基因材料。提取反应容器(下文中称为管(tube))中使用的组合物于室温以及期望的储存温度和条件下在管中可以是固体，且在提取反应期间温度首次上升时，其变成覆盖管中溶液的暴露表面的液体。可选的是，在加入组织样品和含水缓冲液之前、期间或之后，可以将油如硅油加入到管中，其中密度比水溶液低的油与水溶液分开，并漂浮在含有组织样品的水溶液的表面。
本发明的实施方案是上述提及的呈高纯度硅油和蜡的受控混合物形式的组合物。此外，于一般室温和期望的储存条件(温度等)下，该混合物是固体。该混合物被设置为提取管开口下方管内表面上的一层固体材料，提取管中存在或不存在组织样品。当将组织和水溶液引入到管中后，将温度上升至硅油蜡混合物的熔点之上时，混合物融化并覆盖溶液的表面。可选的是，在组织样品和水溶液加入管中之前、期间或之后，将油如高纯度硅油加入到管中。不论是哪种情况，漂浮的不混溶层在延长的加热期间阻止水溶液蒸发。该过程使得组织样品不含石蜡并留在管中溶液的水相中。在将组织包埋在固体石蜡中之前进行“固定”的情况中，管中含有组织的水溶液可以是离液序列高的缓冲液和表面活性剂的混合物。一经脱蜡，离液序列高的缓冲液和表面活性剂混合液中的组织样品还将在升高的温度下由于离液序列高的缓冲液和表面活性剂混合液的作用而解交联，其间组织蛋白质网络中通过化学固定剂形成的化学连接(chemical linkage)被水化。同时，该油或硅油蜡混合物(现具有来自组织样品的加入的固体石蜡)继续作为溶液蒸发的屏障。一经完成脱蜡和提取，含有核酸的组织样品可能被裂解，且通过将管、内腔(lumen)或移液管插入溶液中并经由该管、内腔或移液管取出溶液，将裂解物(lysate)从油层下方移出。根据一个方面，该混合物由1-20体积％的蜡和余量的硅油(balance silicone oil)组成。根据一个方面，该混合物由大约5％的蜡和95％的硅油组成。该蜡可以是标准PCR蜡(例如熔点为58-62℃的SigmaAldrich固体石蜡)。可选的是，可以使用熔点为46-68℃的任何高纯度固体石蜡(C20H42-C40H82)。或者，液体油可以是任何高纯度硅油或高纯度碳氢化合物，如矿物油。
本发明的一个实施方案是降低或防止提取反应管中的溶液蒸发，同时提供选择相供从组织样品融出的石蜡混合和与提取反应的水相分开的方法。该方法包括在提取反应之前，用固体形式的硅油和蜡的受控混合物涂覆反应管内壁的至少一部分的步骤。或者，该方法包括在将组织样品和含水相缓冲液加入管中之前、期间或之后，加入液体油的步骤。该反应包括加热管和创造将固体混合物转化为漂浮在管中溶液表面的(不混溶)液体的条件，从而密封该管以防止蒸发，并提供液相供从组织样品中融出的石蜡混合。可选的是，该液体油漂浮在水溶液的顶部，且当溶液被加热时，油密封该管以防止蒸发，并提供液相供从组织样品中融出的石蜡混合。在一个方面，将固体混合物转化为液体的条件是(但不限于)加热工艺。在一个方面，该方法包括用1-20体积％的蜡和余量硅油的混合物涂覆管内壁的至少一部分。在一个方面，该方法包括使用大约5％的蜡和95％的硅油的混合物。在一个方面，该方法还包括使用液液提取方法，其中含水层的表面覆盖有一层低密度的不混溶油液混合物。
本发明的一个示例性实施方案是核酸纯化方法。该方法包括下列步骤：在容器中，提供一定密度和一定沸点的水溶液中的福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品；在该容器中，提供密度低于该水溶液的密度且沸点高于该水溶液的沸点的不混溶液体或其前驱相；以及进行液液提取以在核酸纯化步骤之前从组织样品中移除石蜡。在各种非限制示例性及说明性方面，具体发明可包括下列特征和/或特点：
还包括在一个微流体装置中进行液液提取步骤和核酸纯化步骤；
还包括提供作为不混溶液体的硅油；
还包括提供作为不混溶液体的矿物油；
还包括提供作为不混溶液体或其前驱相的固体硅油/蜡混合物；
其中该液液提取步骤还包括将容器中水溶液的温度升高至包埋组织样品的石蜡的熔点以上；
其中该溶液是离液序列高的缓冲液和表面活性剂的混合物；
还包括从组织样品中移除石蜡后，向溶液加入蛋白消化酶。
本发明的一个示例性实施方案是微流体装置。该装置包括至少一个专用液液提取工艺容器；经由第一微流体通道与该容器流体相连的核酸纯化工艺组件；以及经由与第一微流体通道不同的至少一个第二微流体通道与该核酸纯化工艺组件流体相连的至少一个核酸扩增反应器，其中该至少一个专用液液提取工艺容器与该至少一个核酸扩增反应器之间不存在直接微流体连接。
本发明的一个示例性实施方案是液液提取和核酸纯化试剂盒。该试剂盒包括能进行液液提取工艺和核酸纯化工艺两者的微流体装置，其包含至少一个专用液液提取工艺容器，设置在至少一个容器中的不混溶液体或其前驱相，与该容器流体相连的核酸纯化工艺组件，以及与该核酸纯化工艺组件流体相连的至少一个核酸扩增反应器；以及适于实现该液液提取工艺和该核酸纯化工艺的试剂源(supply)。
本发明的所有实施方案和方面可特别应用于微流体系统、方法和应用。
附图简要说明
图1A是专用于液液提取工艺的容器(下文中称为“管”)的截面图，示出设置在管内表面下部的固体蜡/硅油混合物，将流体引入之前、将FFPE组织引入管之前以及加热管之前，将该管插入相应的管式加热器中。根据本发明的说明性实施方案，该管还包括用于将流体引入管中和用于在反应完成后从蜡/硅油层取出流体的内腔；
图1B是管的截面图，示出设置在管内表面上部的固体蜡/硅油混合物，将流体引入之前、将FFPE组织引入管之前以及加热管之前，将该管插入相应的管式加热器中。根据本发明的说明性实施方案，该管还包括用于将流体引入管中和用于在反应完成后从蜡/硅油层吸取流体的内腔；
图1C是管的可替换设置的截面图，示出作为环设置在管内表面的一部分上的固体蜡/硅油混合物，将流体引入之前、将FFPE组织引入管之前以及加热管之前，将该管插入相应的管式加热器中。根据本发明的说明性实施方案，该管还包括用于将流体引入管中和用于在反应完成后从蜡/硅油层吸取流体的内腔；
图2A是管的截面图，示出设置在管内表面上部的固体蜡/硅油混合物，将流体和FFPE组织样品引入该管之后且在加热管之前，将该管插入相应的管式加热器中。根据本发明的说明性实施方案，该管还包括用于将流体引入管中和用于在反应完成后从蜡/硅油层取出流体的内腔；
图2B是管的截面图，示出设置在管中液体表面上的蜡/硅油混合物，将该管插入相应的管式加热器中并加热该管。可替换地，图2B示出一层油，其设置在将含有FFPE组织样品的含水液体加入管之前、期间或之后已被加入的液体表面上。在一个示例性方面，高纯度硅油设置在预装有含有FFPE组织样品的水溶液的管中，将该管加热至升高的温度以融化组织样品中的蜡，其飘浮进硅油中。根据本发明的说明性实施方案，该管还包括用于将流体和/或液体油引入管中和用于在反应完成后从蜡/硅油层取出流体的内腔；
图2C是插入相应的管式加热器中的管的截面图，示出内腔并示出将另一体积的含水缓冲液加入管中后的蜡/硅油混合物层。加入的水溶液使得体积升高至内腔底部之上，以便于从蜡/硅油层下方移除部分水溶液。根据本发明的说明性实施方案，加入量可以是与初始分配入管中的水溶液相同或其它水溶液，不论是哪种情况，该水溶液可以包括裂解试剂、去垢剂、表面活性剂、蛋白消化酶或本领域已知的用于制备核酸纯化样品的其它试剂。
图2D是根据本发明的一个说明性实施方案的插入相应管式加热器中的管的截面图，示出内腔并示出从管中移除部分液体量后的蜡/硅油混合物的固化层。
图2E是根据本发明的说明性实施方案的插入相应管式加热器中的管的截面图，示出内腔并示出取出之后和首先加入额外的溶液然后经由内腔从管中移除该溶液之后的液体形式的蜡/油层。
图3是用于自动化微流体系统的微流体装置的透视图，示出两个并排的液液提取系统和核酸纯化系统。根据本发明的说明性实施方案，这两个系统的每一个都包括至少一个管，用于对FFPE组织样品进行液液提取工艺，以移除包埋组织样品的石蜡和制备用于传统自动化纯化核酸的组织，所述核酸用于分析经由微流体通道与管相连的系统的核酸纯化组件中的组织样品。
图4是根据本发明的说明性实施方案的图3中示出的示例性微流体装置的部件分解图；
图5是根据本发明的说明性实施方案的图3中示出的示例性微流体装置的平面图；
图6是根据本发明的说明性实施方案的图3中示出的用于示例性微流体装置的自动化微流体系统界面的平面图；
图7示出根据本发明的说明性实施方案的用分析使由具体的系统/方法回收的洗脱DNA经受分析紫外线(λ＝260nm；λ＝280nm)后的定性结果；以及
图8示出根据本发明的说明性实施方案的由具体的系统/方法回收的纳克每微升洗脱的DNA的定性结果。
本发明的非限制示例性实施方案的详细说明
如图1A-1C所示，管(专用液液提取工艺容器)100是锥形安瓿形式，其锥形化为封闭的底端114。该管可包括硅油(95％)/蜡(5％)混合物104，其或置于图1A中的管内表面下部(朝向底部)或图1B中的管内表面上部(朝向顶部)或作为环涂覆图1C所示的管的内表面的一部分(下部或上部)。
如图2A所示，将FFPE组织样品120和水溶液(下文中，为“溶液”)102引入管中，并通过相应的管式加热器108对其加热。该过程中，由于温度升高，使得管中少量的溶液102蒸发。可以通过在管的顶部安装密封盖，其于加压盖下夹紧以防止其变松，从而避免蒸发；然而，这种盖设置将不满足自动化工作流系统设计的要求，因为自动化工作流需要进入(access)管中流体的能力。因此，根据本发明，将硅油(95％)/蜡(5％)混合物104设计为管加热时即融化并覆盖溶液的表面；或者，可提供高纯度硅油或其它高纯度矿物油来覆盖溶液的表面，以代替加盖系统来防止蒸发。选择硅油(95％)/蜡(5％)混合物104或高纯度油，作为在含有FFPF组织样品的溶液加热期间从FFPE组织样品中融出石蜡的有利提取媒介。内腔106提供往返管的流体路径，用于运输往返该管和往返系统的其它储库(例如，纯化系统125，图3)的溶液，同时在工艺的温度升高期间，还使管的蒸发最小。
如图2B所示，一层不混溶液体例如硅油(95％)/蜡(5％)混合物104漂浮在溶液102的表面，并可以有效地防止溶液蒸发，同时在石蜡从FFPE组织样品融出后，形成用于将固体石蜡从溶液中选择性提取出的层。可选的是，在引入FFPE组织样品后，可以将高纯度液体油分配进管中。加热该管和其内容物，包括FFPE组织样品、水溶液和油或蜡/油混合物。石蜡从FFPE组织样品中融出，且因为其在水相中不混溶，并且其密度比水溶液的密度低，其移到飘浮在水相表面的油或蜡/油混合物中，并因此被提取出并与水相永久分开。当冷却管时，该不混溶的液化蜡/硅油混合物一旦重新固化将位于溶液表面的高度。用内腔106或移液管头穿入该管，以用溶液或某些情况中用油填充该管，取出完成后，从油或硅油/蜡下方移除反应的溶液。
如有关的图2C所示，在完成液液提取工艺后，向管中另外加入水相试剂。该试剂可以包括与首次量的溶液相同或不同的溶液、裂解试剂、去垢剂、表面活性剂、蛋白消化酶或本领域中已知的用于制备核酸纯化的生物样品的其它试剂。加入的水溶液将升高至内腔106底部之上，从而促进从蜡-油层104下方移除部分水溶液。
如图2D所示，加入的油和所有从FFPE样品提取的蜡在较低温度时可以变为固化的蜡/硅油层104，或该层可保持为液体(移除含部分水溶液后，如图2E中所描述的)，但不论是哪种情况，在移除部分溶液102后，其都保留在管中。
图3、4和5示出可以用于自动化微流体系统(例如Rheonix Encompassplatform)中的示例性微流体装置10(例如Rheonix CARD Consumable)的各种视图。US2012/0045799和US2012/0129714提供了其它信息，在可适用的法律和法规的最大允许程度内，其主题通过引用全部并入本文。图5示意性示出示例性双系统(并排/上下)微流体装置的平面图。参照图5中的“上半部(top-half)”系统和图4中的部件分解图，装置10包括：至少一个管(专用液液提取工艺容器)100和相应的内腔106，至少一个核酸扩增反应器105和相应的内腔106a，与设置用来加热该至少一个管和至少一个核酸扩增反应器的每个管有关的至少一个加热器108，以及经由微流体通道20a与至少一个管100流体相连和经由不同的微流体通道20b与至少一个反应器105流体相连的核酸扩增系统。虽然微流体装置10还示出在图5左侧的微阵列室和核酸分析组件，但应该认识到可以在一个或多个扩增反应器中进行分析。还应注意到，至少一个管100与至少一个核酸扩增反应器105之间不存在直接微流体连接。该装置10能进行液液提取工艺和核酸纯化工艺两者。装置10还可以构成自动化液液提取和核酸纯化试剂盒的基础，所述试剂盒进一步包括如本文所述的适于启动该液液提取工艺和该核酸纯化工艺的试剂源。
图3更具体地示意性示出双系统微流体装置10，其每个系统都包含一个单管100、三个扩增反应器管105、储库15、净化器125以及微流体通道20a、20b，该装置可以用来完成从FFPE样品到基因扩增产品的微阵列分析的全部整合的分子试验。
如图4所示，微流体系统10是通过由通道层25a和膜层25b组成的两层微流体通道系统25和附设的储库层30组装而成(尽管储库层30和通道层25a可以由相同的基质形成，但为清晰起见，其分开显示)。通道网络由选择性结合于通道层25a的膜层25b组成。首先通过在面对膜层25b的通道层25a的基质面中生成一系列不连通的细长凹部(开口通道)来制作通道20。然后通过选择性结合膜层，同时生成膜片35将通道20围住，当用仪器界面50(图6)驱动时，膜片35提供供通道20连通的手段，并且为了完成试验，随着膜片35的协调驱动，可以将流体从系统10中一个位置泵入其它位置。内腔106和106a穿入膜层25b，并且与通道20连通。附设到膜层，内腔106a进入扩增反应器105，而内腔106进入管100。储库层中存在一个或多个净化器125，其可以由能选择性结合核酸以从细胞裂解物分离核酸的任何已知材料组成。净化器125可以由二氧化硅基质组成。在一个可选的设置中，二氧化硅基质可以由二氧化硅珠组成。
如图5进一步所示，使内腔106进入管100中，所述内腔106并入单独的通道网络(20a)而不是内腔106a进入的扩增反应器105的通道网络(20b)。如上所述，首先将FFPE组织样品置于管100中，然后将含有管100的管排(tube strip)和扩增反应器105组装到微流体系统10上。其后提供液液提取所需试剂，完成液液提取，然后通过内腔106将某些试剂加入管中，以进行样品的化学解交联和裂解；其后通过内腔106取出部分已处理的溶液，并将其进一步纯化，以提供使用系统其它组件从原始液体部分取出的任何核酸。然后将来自原始组织样品的纯化的核酸从纯化系统洗脱，经由内腔106a将其连同所需试剂一起输送至一个或多个扩增反应器105，以对可能包括在从原始组织样品输送至扩增反应器的核酸中的选择序列进行核酸扩增。
图6示出可以通过自动化微流体系统使用的多反应器系统的仪器界面50的平面图。膜片35(图5)与用于膜片35的气动驱动的垫层60对齐，以通过微流体系统10选择性地泵出流体。将至少两个提取反应器100安装入加热器108(其可以是与用于加热扩增反应器105的那些一样的加热设备的一部分，或加热器108可以是单独的加热设备)中，以处理FFEP组织样品，从而移除包埋组织样品的石蜡并由来自用于分析样品的组织样品中的细胞制备用于自动化纯化核酸的组织。
在图1-6描述的每种情况中，管中的溶液可以是裂解缓冲液和表面活性剂的混合物，以及本领域中已知的其它试剂。当温度升高时，含水混合物作用，使组织样品中的大分子解交联。一经完成裂解和解交联，就可以向溶液中加入蛋白消化酶以进一步在反应的溶液中制备核酸用于纯化和之后的分析。可选的是，可以于温度升高时，在蛋白消化酶的辅助下，使含水混合物中的组织样品裂解,然后在更高的温度下培育以解交联。
实施例1
1、将3份10mg福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品置于用10μl硅油/蜡混合物滴预涂覆的管中，或在将管连接至微流体系统之前或在将管连接至微流体系统之后经由内腔供应高纯度油；
2、将管连接至微流体系统；
3、将15μl吐温20+15μl裂解缓冲液供应到样品管中；
4、加热并将反应温度在90℃保持10min(分钟)；
5、将管温度降至56℃；
6、将5μl吐温20+5μl裂解液+4μl蛋白酶K供应至管中；
7、将反应温度在56℃保持30min；
8、将15μl EtOH供应至管中；
9、将管温度降至35℃；
10、从管中移除样品溶液，并将其导入微流体系统的净化器125中(图5；基于二氧化硅珠或基于二氧化硅滤器的系统)；
11、通过净化器将反应溶液移到废液储库(waste reservoir)中；
12、用2×50μl洗涤缓冲液洗涤净化器；
13、用2×50μl洗涤缓冲液再洗涤净化器；
14、将50μl水分配到净化器中；
15、通过净化器中的侧通道将水移到废液储库中；
16、重复14-15；
17、通过净化器将剩余的水移到废液储库中；
18、将20μl洗脱溶液分配到净化器中；
19、培育30秒；
20、从净化器取出洗脱溶液的一部分，并将其导入扩增反应器中；
21、将适合的扩增主要混合物分配到扩增器中(注入扩增反应器之前可将洗脱液与主要混合物混合)；
22、扩增洗脱液；
23、分析扩增子。
图7示出生成的DNA纯度，该DNA是通过使用进行液液提取，然后进行解交联、裂解以及基于传统的二氧化硅用之后的洗脱对核酸进行亲和捕捉的微流体系统回收。使用UV测量的传统A260/A280方法来完成纯度评价。该结果将使用各种缓冲液和表面活性剂的液液提取系统与传统的二甲苯提取方法进行比较。
图8示出DNA的质量，该DNA是通过使用进行液液提取，然后进行解交联、裂解以及基于传统的二氧化硅用之后的洗脱对核酸进行亲和捕捉的微流体系统回收。该结果将使用各种缓冲液和表面活性剂的液液提取系统和传统的二甲苯提取方法进行比较。
除非本文中另有说明或上下文有明显的矛盾，描述本发明的上下文中使用的术语“一种(a)”和“一种(an)”和“该(the)”以及相似的指示物解释为既覆盖单数又覆盖复数。除非另有注明，术语“包含(comprising)”、“具有(having)”、“包括(including)”和“含有(containing)”解释为开放式术语(即意思是“包括但不限于”)。术语“连接(connected)”解释为即使有介入的东西，其仍部分地或整体地包含于其中、与其连接或接合在一起。
除非本文中另有说明，本文中值范围的记载仅意为用作单独引用落入范围的每个单独值的简写方法，并且每个单独的值并入说明书中犹如其是单独记载在本文中的。
除非本文另有说明或上下文另有明显的矛盾，可以以任何适合的顺序进行本文中描述的所有方法。本文中使用的任一个及所有实施例或示例性语言(例如，如(such as))仅仅是本发明更好的示例性实施方案，且除非另有声明，其并不对发明的范围施以限制。
说明书中的语言不应解释为表示本发明的实践必需任何非要求的元素。
在不背离本发明的精神和范围内可以对本发明进行各种修改和变化，这对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的。并不意图将本发明限制为所公开的特定一种形式或多种形式，相反，本发明意图覆盖落入本发明的精神和范围内的所有修改、可替换结构和等同物，如所附权利要求书中限定的。因此，本发明意图覆盖提供在所附权利要求书及其等同物的范围内的发明的修改和变化。

Claims (10)

1.核酸纯化方法，包括：
在容器中，提供具有一个密度和一个沸点的水溶液中的福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品；
在所述容器中，提供密度低于所述水溶液的密度且沸点高于所述水溶液的沸点的不混溶液体或其前驱相；以及
进行液液提取以在核酸纯化步骤之前从所述组织样品中移除石蜡。
2.如权利要求1所述的方法，其还包括在一个微流体装置中进行液液提取步骤和核酸纯化步骤。
3.如权利要求1所述的方法，其还包括提供作为所述不混溶液体的硅油。
4.如权利要求1所述的方法，其还包括提供作为所述不混溶液体的矿物油。
5.如权利要求1所述的方法，其还包括提供作为所述不混溶液体或其前驱相的固体硅油/蜡混合物。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述液液提取步骤还包括使所述容器中所述水溶液的温度升高至包埋组织样品的所述石蜡的熔点以上。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述溶液是离液序列高的缓冲液和表面活性剂的混合物。
8.如权利要求7所述的方法，其还包括在从所述组织样品中移除所述石蜡后向所述溶液加入蛋白消化酶。
9.微流体装置，包括：
至少一个专用液液提取工艺容器；
核酸纯化工艺组件，其经由第一微流体通道与所述容器流体相连；以及
至少一个核酸扩增反应器，其经由与所述第一微流体通道不同的至少一个第二微流体通道与所述核酸纯化工艺组件流体相连，
其中所述至少一个专用液液提取工艺容器与所述至少一个核酸扩增反应器之间不存在直接微流体连接。
10.液液提取和核酸纯化试剂盒，包含：
微流体装置，其能进行液液提取工艺和核酸纯化工艺，包括至少一个专用液液提取工艺容器，设置在所述至少一个容器中的不混溶液体或其前驱相，与所述容器流体相连的核酸纯化工艺组件，以及与所述核酸纯化工艺组件流体相连的至少一个核酸扩增反应器；以及
适于实现所述液液提取工艺和所述核酸纯化工艺的试剂源。
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