CN104043113A - 一种艾塞那肽长效微球制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种艾塞那肽微球制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)称取5-50wt％艾塞那肽和95-50wt％的聚酯类，所述的聚酯类为酯基末端或羧基末端的PLGA或PLA的一种或两者的混合物，所述PLGA分子量为3.0×103-7×104道尔顿，PLA的分子量为4.0×103-7×104道尔顿；(2)将聚酯类物质投入到有机溶剂中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液；(3)将均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置的高速旋转圆碟中形成微滴，微滴固化即得到微球制剂。该方法得到的微球制剂有优良的缓释性能，载药率35％，包封率95％以上，突释率低，缓释期在2周以上，无释放延滞期。

Description

一种艾塞那肽长效微球制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种应用超微粒制备系统(UPPS)获得艾塞那肽长效微球制剂的制备方法。 

背景技术

艾塞那肽是一种新型的抗糖尿病药物，系人工合成的毒蜥外泌肽(exendin)-4，这是从分布在北美洲西南部的钝尾毒蜥唾液腺中分离出来的天然胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物。艾塞那肽含39个氨基酸残基，与哺乳动物的GLP-1具有53％的同源性，都是GLP-1受体的有效激活剂，与GLP-1R有高度亲和性(艾塞那肽与GLP-1R结合的能力是GLP-1的2.4倍)，并通过胰腺GLP-1R的介导发挥相近的血糖调节作用，促进胰腺分泌胰岛素，而且这种促胰岛素分泌的作用是葡萄糖依赖性的，因此用其治疗糖尿病不会发生低血糖。进一步的研究还发现，它们的作用不仅仅只是促进胰岛素释放，还可改善胰岛B-细胞的功能缺陷。GLP-1R是一种G蛋白偶联的由7个跨膜结构组成的受体蛋白，最早被称为毒蜥外泌肽受体，除存在于胰腺细胞外，还广泛分布于脑、心脏、肾脏、胃肠道等组织。GLP-1作为一种肠促胰岛素，在体内主要由肠道L细胞分泌，并由胰高糖素原基因转录、翻译及加工而形成。胰高糖素原基因在体内的翻译存在多态性，在胰岛A细胞，胰高糖素原基因的主要表达产物是胰高血糖素；而在肠黏膜的L细胞，前激素转换酶将胰高血糖素剪切后，其羧基端的肽链序列部分即为GLP-1。GLP-1分子有两种生物活性形式，它们仅有1个氨基酸不同，约80％的循环活性是由GLP-I(7～36)酰胺介导的。GLP-1作为人体内功能性多肽，是迄今能诱导胰岛素分泌的最强物质，可以促进胰岛素基因转录和胰岛素分泌，提高受体对胰岛素的敏感性，消除胰岛素抵抗引发的各种并发症，而且其降糖作用依赖于患者血糖浓度，用药后不会引起低血糖；此外还可抑制胃的 排空，控制食欲，减轻体重，消除其饥饿感和“三多”症状，降低血脂，预防冠心病。除了调节血糖，其最显著的作用足促进胰岛细胞功能再生，防止胰岛B-细胞凋亡，是一种标本兼治的新型糖尿病治疗药物。 

艾塞那肽与目前的糖尿病治疗药物，尤其是磺酰脲类相比，具有新的药物作用靶点，例如促进B-细胞增殖、增加胰岛素的分泌、降低用药后低血糖的发生等，而且该药物在体内不被DPP-IV降解，具有比GLP-1更长的体内半衰期，已引起研究者的广泛关注。但其在临床应用上仍然需要每日1次皮下注射才能有效控制血糖，与传统治疗糖尿病药物的给药频率相当。为了降低艾塞那肽的给药频率，Diane等构建了艾塞那肽的类似物AC3174，AC3174与艾塞那肽的不同之处在于，艾塞那肽的第14位氨基酸是Met(甲硫氨酸)，而AC3174将其替换为Leu(亮氨酸)，目的足提高艾塞那肽的抗氧化能力。但研究结果不太理想，AC3174虽然具有艾塞那肽的生物活性，如降低血糖、延缓胃排空和抑制胰高血糖素的生成等，但其半衰期仅为42-43min(艾塞那肽为90-216min，GLP-1为1-5min)。克服此缺陷，除了改变艾塞那肽的非活性部位氨基酸序列外，还可借鉴延长GLP-1半衰期的方法，通过化学联结或生物合成的方法使艾塞那肽与其他大分子如人白蛋白或1gG重链结合蛋白(IgG-Fe)等结合，延长其在体内的滞留时间和半衰期，提高血药浓度。另外，通过缓释微球制剂技术，亦可实现延长艾塞那肽在体内的滞留时间和半衰期，提高血药浓度，减少给药次数的想法，应用超微粒是要系统，研究者尝试将艾塞那肽的给药次数有1-2周给药一次，延长至一个月给药一次。 

目前众多临床研究结果均支持艾塞那肽可以血糖依赖性降糖，降低体重。2005年4月艾塞那肽获得美国食品与药品管理局(FDA)批准，被用于治疗未使用胰岛素且通过饮食和口服二甲双胍或磺酰脲类药物都不能理想控制血糖的2型 糖尿病患者，其商品名为Byetta，目前批准的制剂为皮下注射针剂，每日用药2次。其长效缓释皮下注射剂(艾塞那肽LAR，代号AC一2993LAR)也已进入临床研究阶段，该注射剂采用了Alkermes公司所拥有的Medisorb注射缓释给药技术，目的是使艾塞那肽在体内保持更长的活性时间。 

超微粒制备系统(UPPS)相对于目前蛋白质多肽药物微球的制备方法，其优势包括可以避免使用有机溶剂和表面活性剂，后处理较简单。UPPS特点是微小均匀的液滴在较大的空间分散，逐渐缓慢干燥的载体材料在表面先形成致密膜，内部含有的蛋白多肽药物受到膜保护，整个过程没有高温的影响，药物不易而失活。另外，微球的载药率不受有机溶剂分散系数的影响而扩散损失，药物包封率较高。UPPS用高速旋转的盘面均匀分散液体，将液滴分散在受控制的气流中高速旋转、悬浮，在液-气界面张力的作用下形成的微小的球形液滴。控制溶液的浓度、粘度、转速、盘面形状、容器系统内的气流等参数，结合液氮或载气等固化处理的方法，可获得设计所需的药物微球。由于没有表面活性剂和有机溶剂，低温的制备条件使蛋白多肽药物处于活性稳定状态。UPPS属于机械操控，可连续制备，重现性好。 

发明内容

本发明的目的是提供一种低毒、分散性好、载药量高，包封率高的艾塞那肽微球制剂的制备方法。 

实现上述目的的技术方案如下： 

一种艾塞那肽微球制剂的制备方法，包括以下步骤： 

(1)按比例称取原料药，所述的原料药由5-50wt％艾塞那肽和95-50wt％的聚酯类组成，所述的聚酯类为酯基末端或羧基末端的PLGA或PLA的任意一种或两者的混合物，所述PLGA分子量为3.0×10³-7×10⁴道尔顿，PLA的分子量为4.0×10³-7×10⁴道尔顿； 

(2)将步骤(1)中的聚酯类物质投入到有机溶剂中完全溶解得到澄清溶液， 再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，得到的均相油溶液的粘度为0.72～1.96mPa.S；所述有机溶剂为二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合物；(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置的高速旋转圆碟中形成微滴，微滴固化即得到微球制剂。 

在其中的一些实施例中，所述步骤(1)中的原料药由30～40wt％艾塞那肽和60～70wt％的聚酯类组成。 

在其中的一些实施例中，所述步骤(2)中的有机溶剂为二氯甲烷(DCM)∶碳酸二甲酯(DMC)＝1∶1-2(体积比)的混合液。 

在其中的一些实施例中，所述步骤(2)中得到的均相油溶液的粘度为0.84～1.83mPa.S。 

在其中的一些实施例中，所述步骤(3)蠕动泵泵速为3～20mL·min^-1，高速旋转圆碟转速为3000～10000rpm。 

在其中的一些实施例中，所述PLGA中LA∶GA的质量百分比为10∶90～90∶10，较优选的LA∶GA的质量百分比为75∶25～50∶50，最优选的LA∶GA的质量百分比为50∶50。 

本发明的另一目的是提供由上述方法制备得到的艾塞那肽微球制剂。 

本发明的有益效果： 

本发明提供的微球制剂处方简单，生产效率高，可连续供液规模化生产。所制备的微球中位粒径在40μm以下可控，且分布集中，载药量高达35％，包封率均在95％以上，无卤代溶剂残留，通过选用适当的有机溶剂以及合适分子量和规格的聚酯类为基质材料，再在众多制备方法中，选用超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置可制备不同缓释周期的微球。微球染菌率极低，可避免使用辐照灭菌对微球骨架结构的破坏。具有优良的缓释性能，突释率低，缓释期在2周及以上，无释放延滞期。 

另外，经研究发现，聚酯类溶液粘度的大小会影响微球的形貌及艾塞那肽微球中艾塞那肽的释放速率。当粘度值过高时，微球产物中会出现纤维丝状物，药物释放过程中会出现一定的突释现象；当粘度过低时，微球体骨架不完整，药物释放速率明显加快，因此，本发明提供了在体内能持续释放2周及以上的 艾塞那肽长效微球，配制溶液粘度为0.72～1.96mPa.S的聚酯类溶液，优选为0.84～1.83mPa.S。 

附图说明

图1：采用UPPS系统制备的艾塞那肽长效微球的扫描电镜图 

图2：不同溶剂制备得到的艾塞那肽-PLGA长效微球扫描电镜图； 

图3：采用UPPS系统制备的艾塞那肽长效微球的激光粒径扫描测定图 

图4：实施例2组1和组2艾塞那肽-PLGA微球的体外释放度图； 

图5：不同载药量的艾塞那肽-PLGA长效微球的显微镜图； 

图6：不同粘度制备得到的艾塞那肽-PLGA微球的扫描电镜图。 

具体实施方式

在本发明中，聚酯类溶液的粘度按如下条件测定：将聚酯类化合物用有机溶剂溶解后，加入艾塞那肽，得到均相含药油溶液，采用DV-III+可编程控制式流变仪(美国Brookfield公司)在25℃条件下测定。 

本发明所述PLGA由聚乳酸(PLA)和聚羟基乙酸(PGA)由酯键缩聚而成，末端为酯基；若在聚合时保留聚合物链末端的羧基，为末端羧基PLGA(PLGA-COOH)。本发明所使用的PLGA和PLA均可购置于济南岱罡生物工程有限公司。 

以下通过具体实施例，对本发明做进一步的阐述，但是所列实施例并非用于限制本发明。 

实施例1不同的有机溶剂用于制备艾塞那肽PLGA微球 

本实例分别选取碳酸二甲酯(DMC)、二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(Et-Ac)作为有机溶剂制备三组微球制剂，所述三组微球制剂的配方见表1。每组微球制剂的配方为10wt％艾塞那肽与90wt％的聚酯类。 

溶剂的种类对产物的形貌影响显著。本实施例通过不同的有机溶剂制备艾塞那肽PLGA微球。制备方法如下(可参见图1)： 

(1)按比例称取0.1g艾塞那肽(1)和0.9g酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)； 

(2)将步骤(1)中的酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)投入到有机溶剂中完全溶解得到澄清的有机溶剂/PLGA溶液(2)，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液即含药PLGA溶液(3)，粘度值为1.42mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵(4)经喷嘴(5)均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置的高速旋转圆碟(6)，调节高速旋转圆碟转速为5000rpm，供液速度为7mL·min^-1，形成微液滴(7)，微滴与气体场中气体分子(8)接触，溶剂挥发，微滴表面液-气界面(9)首先固化，进而内部溶剂分子逐渐向外扩散，聚合物高分子向内析出，直至微滴完全固化得到微球(10)，固化微球沉降在样品收集器(11)中被收集或经旋风分离器收集。 

表1：本实施例配方 

对制备得到的微球制剂进行扫描电镜观察，使用仪器为场发射环境扫描电子显微镜(Quanta200型，美国FEI公司)，扫描电镜图见图2。 

结果显示，以DCM为溶剂得到的产物为分散性好，但为蜂窝状；以Et-Ac为溶剂得到的产物聚集粘连，呈碗状；以DMC为溶剂得到的产物光滑圆整，分散性好。 

实施例2不同型号酯基末端的PLGA的艾塞那肽微球的制备 

本实例制备组1：酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)的艾 塞那肽微球制剂，组2：酯基末端的PLGA(分子量为45,000，LA/GA＝75/25)的艾塞那肽微球制剂，本实施例使用的有机溶剂为二氯甲烷(DCM)和碳酸二甲酯(DMC)的混合溶液，其中组1艾塞那肽微球配方为32wt％艾塞那肽和68wt％的聚酯类，具体为0.45g艾塞那肽与0.97g酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)，其制备方法为： 

(1)按比例称取0.45g艾塞那肽和0.97g酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)投入到二氯甲烷(DCM)和碳酸二甲酯中(体积比为1∶1)完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为1.71mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置，如实施例1所述，本实施例中高速旋转圆碟转速为4000rpm，供液速度为5mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

组2的艾塞那肽微球配方为32wt％艾塞那肽和68wt％的聚酯类，具体为0.45g艾塞那肽与0.97g酯基末端的PLGA(分子量为45,000，LA/GA＝75/25)，其制备方法为： 

(1)按比例称取0.45g艾塞那肽和0.97g酯基末端的PLGA(分子量为45,000，LA/GA＝75/25)； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为45,000，LA/GA＝75/25)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液(体积比为1∶1)中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为1.93mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置的高速旋转圆碟转速为5500rpm，供液速度为7mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

对组1的艾塞那肽微球外观拍照，见图3。图片显示采用本发明的制备方法制备的微球外观呈白色疏松状粉末，流动性较好。 

对组1和组2两种微球制剂进行体外释放度测定：精密称取各微球约10mg置10mL离心管中，加pH7.4PBS8mL，置37℃、100rpm恒温水浴振荡器中， 在预设时间点取出离心管，4000rpm离心5min，取尽释放液，补充等量新鲜介质并涡旋使微球重新分散后置于恒温水浴振荡器中继续释放度试验。取出液采用高效液相色谱法(HPLC)检测药物释放量，具体条件为选用菲罗门Luna5μC₁₈(2)柱(4.6mm×150mm，5μm)色谱柱；以甲醇/2％三乙胺溶液(冰醋酸调节pH为7.2±0.1)＝75/25为流动相；设定柱温为40℃；紫外检测波长277nm；流速1mL·min^-1；进样量20μL，结果见图4。从图中可以看到，艾塞那肽微球均即刻释放药物，无释放停滞期，不同型号的基质材料缓释周期不同。本发明提供的微球制剂显示出良好的缓释作用。 

对组1的微球残留溶剂进行检测：取艾塞那肽长效微球约500mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加入DMSO，超声溶解，稀释至刻度，配制供试品溶液，采用气相色谱法检测有机溶剂的残留。具体操作为采用DB-624弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm，1.80μm)，载气为氮气，氢火焰离子化检测器(FID)，进样口温度为220℃，检测器温度为250℃。柱温采用程序升温法：初始温度为80℃，保持8min，以80℃·min^-1的速率升至200℃，保持4min；流速为1mL·min^-1；进样量1μL；分流比为10∶1，结果发现，乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均未检出，碳酸二甲酯含量为0.18％，表明本发明的微球无毒性有机溶剂残留，低毒性有机溶剂碳酸二甲酯残留低。 

对组1的微球染菌水平检测：取艾塞那肽微球分装成80mg/支，共20支，根据《中国药典》2010版初始污染菌检查法，分别选用水性溶液和二氯甲烷将微球混悬，于培养基上培养7天，观察细菌数、霉菌和酵母菌数及芽孢杆菌数，结果见表2。由表格中可以看到，本发明的微球染菌水平极低。 

表2：组1的微球染菌水平检测结果 

实施例3不同载药量艾塞那肽微球的制备 

本实施分别制备载药量为15.6％，24.5％和33.5％的三组艾塞那肽微球，具体配方见表3： 

表3：本实施例的配方 

A制剂的具体制备方法如下： 

(1)分别称取0.28g艾塞那肽和1.5g酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)； 

(2)将步骤(1)中的1.5gPLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为1.76mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置如实施例1所述，本实施例中高速旋转圆碟转速为5000rpm，供液 速度为5mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

B、C制剂的制备过程与上述A制剂的制备过程相同，制备B、C制剂的溶液粘度值分别为1.63mPa.s、1.44mPa.s。 

对上述制备得到的三组艾塞那肽微球进行扫描电镜观察和拍照，使用仪器为场发射环境扫描电子显微镜(Quanta200型，美国FEI公司)，电镜图见图5(A、载药量15.6％B、载药量24.5％C、载药量33.5％)。通过电镜图可知，当载药量为25％以下时，微球粉末流动性差，扫描电镜图中可见聚集粘连，当载药量高达30％以上时，微球粉末流动性好，扫描电镜下可见微球表面光滑圆整，分散性较好。 

实施例4末端为羧基的PLGA艾塞那肽微球的制备 

本实施例制备末端为羧基的PLGA(PLGA-COOH)艾塞那肽微球，艾塞那肽微球的配方为34wt％艾塞那肽和66wt％聚酯类，具体为0.5g艾塞那肽和0.97gPLGA-COOH(分子量为45,000，LA/GA＝50/50)，制备方法如下： 

(1)分别称取0.5g艾塞那肽和0.97gPLGA-COOH(分子量为45,000，LA/GA＝50/50)； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为45,000，LA/GA＝50/50)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为1.34mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置如实施例1所述，本实施例中的高速旋转圆碟转速为4000rpm，供液速度为5mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

实施例5PLA艾塞那肽微球的制备 

本实施例制备PLA艾塞那肽微球的制备，其配方为39wt％艾塞那肽和61wt％聚酯类，具体为0.63g艾塞那肽和0.97g PLA(分子量为40,000)，制备方法如下： 

(1)分别称取0.63g艾塞那肽和0.97g PLA(分子量为40,000)； 

(2)将步骤(1)中的PLA(分子量为40,000)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得 到均相油溶液，粘度值为1.59mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置如实施例1所述，本实施例中的高速旋转圆碟转速为4000rpm，供液速度为3mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

实施例6PLGA-PLA复合艾塞那肽微球的制备 

本实施例制备PLGA-PLA复合艾塞那肽微球，其配方为29.4wt％艾塞那肽和70.6wt％聚酯类，具体为0.4g艾塞那肽和酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)和PLA(分子量为40,000)各0.48g。制备方法如下： 

(1)分别称取0.4g艾塞那肽和PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)和PLA(分子量为40,000)各0.48g； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)和PLA(分子量为40,000)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为1.67mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置如实施例1所述，本实施例中的高速旋转圆碟转速为4000rpm，供液速度为4mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

实施例7 

本实施例微球制剂的配方为30wt％艾塞那肽和70wt％聚酯类，具体为1.2g艾塞那肽和2.8g酯基末端的PLGA(分子量为70,000，LA/GA＝90/10)，具体制备方法如下： 

(1)分别称取1.2g艾塞那肽和2.8g酯基末端PLGA(分子量为70,000，LA/GA＝90/10)； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为70,000，LA/GA＝90/10)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为1.91mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置，如实施例1所述，本实施例中的高速旋转圆碟转速为10000rpm，供液速度为20mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

实施例8 

本实施例微球制剂的配方为50wt％艾塞那肽和50wt％聚酯类，具体为0.4g艾塞那肽和0.4g酯基末端的PLGA(分子量为70,000，LA/GA＝10/90)，具体制备方法如下： 

(1)分别称取0.4g艾塞那肽和0.4g酯基末端PLGA(分子量为70,000，LA/GA＝10/90)； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为70,000，LA/GA＝10/90)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，粘度值为0.84mPa.s； 

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置如实施例1所述，本实施例中的高速旋转圆碟转速为3000rpm，供液速度为3mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

实施例9粒径分布分析 

对实施例2-8的微球样品进行粒径分布分析，仪器为Mastersizer2000(Malvern instrument)。均采用湿法测定，介质为0.05％的CMC溶液。 

粒径检测结果见表4，结果显示，采用本发明提供的实施方法，以连续的方式制备的艾塞那肽聚酯微球中位粒径大小均在40μm以下，大小分布集中，一致性优良。 

表4实施例2-8制备的微球样品粒径测试结果 

实施例10微球载药量和包封率的测定 

对实施例2-8的艾塞那肽微球进行载药量和包封率的测定。测定方法为：精密称取干燥的微球5mg，加入1ml乙腈超声溶解微球，充分破坏微球骨架结构后，加入0.1NHCL萃取并稀释药物，用紫外-可见分光光度计在波长274nm处测定，按标准曲线方程计算药物含量。结果见表5，其中 

微球载药量(％)＝测定微球中药物的含量/微球质量×100％ 

药物包封率(％)＝测定微球中药物的含量/药物投入质量×100％ 

结果显示，采用本发明提供的制备方式制备的微球载药量在30％以上，包封率均可达90％以上。 

表5：微球载药量和包封率的测定结果 

实施例11不同粘度PLGA的艾塞那肽微球的制备 

本实施例微球制剂的配方为10wt％艾塞那肽和90wt％聚酯类，具体配方如表6所示，具体制备方法如下： 

(1)分别称取处方量的艾塞那肽和酯基末端的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)； 

(2)将步骤(1)中的PLGA(分子量为40,000，LA/GA＝50/50)投入到二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合液中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，测得三组粘度值分别为1.96mPa.s、1.83mPa.s、0.72mPa.s； 

(3)分别将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置，如实施例1所述，本实施例中的高速旋转圆碟转速为4000rpm，供液速度为5mL·min^-1，一步得到固化微球，收集样品收集器中的样品。 

表6：本实施例配方 

对上述制备得到的三组艾塞那肽微球进行扫描电镜观察，使用仪器为场发 射环境扫描电子显微镜(Quanta200型，美国FEI公司)，电镜图见图6(A、1.96mPa.s B、1.83mPa.s C、0.72mPa.s)。通过电镜图可知，当粘度高达1.96mPa.s时，产物中微球与丝状物共存，当粘度低至0.72mPa.s时，微球结构疏松骨架不完整，当粘度为二者浓度之间为1.83mPa.s可得到形貌较好的微球。 

Claims (9)

1.一种艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按比例称取原料药，所述的原料药由5-50wt％艾塞那肽和95-50wt％的聚酯类组成，所述的聚酯类为酯基末端或羧基末端的PLGA或PLA的任意一种或两者的混合物，所述PLGA分子量为3.0×10³-7×10⁴道尔顿，PLA的分子量为4.0×10³-7×10⁴道尔顿；

(2)将步骤(1)中的聚酯类物质投入到有机溶剂中完全溶解得到澄清溶液，再往澄清溶液中投入艾塞那肽混合搅拌均匀得到均相油溶液，得到的均相油溶液粘度为0.72～1.96mPa.S；所述有机溶剂为二氯甲烷和碳酸二甲酯的混合物；

(3)将步骤(2)中的均相油溶液通过蠕动泵均速供入超微粒制备系统(UPPS)微滴发生装置的高速旋转圆碟中形成微滴，微滴固化即得到微球制剂。

2.根据权利要求1所述的艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的有机溶剂为二氯甲烷∶碳酸二甲酯＝1∶1-2(体积比)的混合液。

3.根据权利要求1所述的艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，所述的原料药由30～40wt％艾塞那肽和60～70wt％的聚酯类组成。

4.根据权利要求1所述的艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中得到的均相油溶液的粘度为0.84～1.83mPa.S。

5.根据权利要求1所述的艾塞那肽微球制剂，其特征在于，所述步骤(3)蠕动泵泵速为3～20mL·min^-1，高速旋转圆碟转速为3000～10000rpm。

6.根据权利要求1-6任一项所述的艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，所述PLGA中LA∶GA的质量百分比为10∶90～90∶10。

7.根据权利要求1-6任一项所述的艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，所述PLGA中LA∶GA的质量百分比为75∶25～50∶50。

8.根据权利要求1-6任一项所述的艾塞那肽微球制剂的制备方法，其特征在于，所述PLGA中LA∶GA的质量百分比为50∶50。

9.采用超微粒制备系统，连续制备药物微球包封率在95％以上。