CN104042640A - 一种海藻提取物的鼻喷剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种海藻提取物的鼻喷剂,其组成为海藻提取物、保湿剂、渗透压调节剂和注射用水;本发明鼻喷剂效果突出,制备简单,易操作,可定量使用,该制剂无防腐剂,制剂稳定,施用方便。海藻提取物鼻喷剂在鼻粘膜上形成一层保湿粘膜,相比其他单成分如卡拉胶、硫酸多糖等取得了意想不到的物理防护作用,能有效维持鼻粘膜湿润,物理性的辅助治疗和预防感冒,降低其发生的几率,无副作用。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域,具体涉及包含海藻提取物作为主要成分的鼻喷剂及其制备。
背景技术
海藻的多种提取物具有抗病毒活性,一种基于角叉菜胶的阴道消毒剂carraguard可有效抑制HIV和其他性传染病原,已经在南非进入了Ⅲ期临床试验;近年来,随着海藻的广泛应用以及对海藻多糖认识的深入,人们对海藻多糖生物活性的研究越来越重视,包括卡拉胶在内的硫酸化多糖因其抗病毒效能而在本领域中为人所知。
鼻病毒(HRV)由至少100个血清型组成,是普通感冒的主要致病媒介。由于血清型的数量较大,疫苗的开发成为难题;因而抗病毒剂可能是最好的治疗手段。鼻病毒感染导致普通感冒,症状例如有发热、咳嗽和鼻塞,由免疫系统共的国度或非特异性反应引起,因而鼻病毒感染的普通治疗形式包括使用诸如阿司匹林或对乙酰氨基酚、扑热息痛等镇痛药及针对咽喉的局部化形式(通常以锭剂形式递送)、通过使局部血管收缩来减轻鼻通道炎症的鼻部减充血剂、止咳剂(其用于抑制脑的咳嗽反射或通过稀释肺内黏液来发挥作用)以及第一代抗组胺剂,例如溴苯那敏、氯曲米通和克力马丁(其可减少粘液腺分泌,从而对抗阻塞、流涕的鼻子,但也可以令使用者昏昏欲睡)。
另外,海藻提取物中的活性物质与皮肤蛋白质结合形成保湿性凝胶,而且它可以通过水合作用在皮肤的表面形成保护膜,防止水分蒸发,研究人员对大量繁殖在沿海潮汐的海藻进行研究,发现其中的硫酸多糖具有明显的保湿作用。
CN101784272A中提供了包含硫酸多糖的抗病毒组合物,用于预防或治疗由呼吸道病毒感染引起或与该感染相关的病理状态或疾病,所述呼吸道病毒选自正粘病毒、副粘病毒、腺病毒和冠状病毒组成的组;CN102652017A涉及在预防性治疗或治疗性治疗由流感病毒感染相关的症状、病症或疾病中用作药剂的t-和/或k-角叉菜胶与神经氨酸酶抑制剂的组合。专利CN101678040B中提供了海藻提取物卡拉胶或其混合物在制造用于预防或治疗鼻病毒感染的抗病毒药物组合物中的应用;专利CN102065869A涉及在预防性或治疗性治疗过敏性疾病或疾病中用作药物的、基于一种海藻多糖作为活性组分的海藻提取物的药物组合物,以用于对呼吸道胃肠道或眼睛进行施用;可有效地预防和治疗I型过敏反应,并且另外可以在与非海藻提取物治疗剂一起对粘膜组合施用时发挥佐剂功能。
以上专利有关海藻提取物的抗病毒的活性和作用在上述专利申报之前就有较多研究和报道,且上述专利的实施例中均无鼻喷剂或其他剂型的制备过程,仅有该病毒试验描述。
发明内容
本发明涉及一种具有突出的预防病毒性流感作用的海藻提取物的鼻喷剂及其制备方法。
本发明提供的鼻喷剂的制备方法操作简单,制剂无防腐剂,制剂稳定,使用方便,可维持鼻粘膜湿润,在鼻腔内形成保护膜,预防病毒性流感效果明显。
由于海藻提取物中的分子结构中存在大量羟基或羧基等极性基团,可与水分子形成氢键,并常常相互交联成网状结构,该网状结构具有较好的粘性和成膜性能,形成一层保湿粘膜,可以提供屏障抵御外部有毒有害物质与鼻腔内受体结合,并可以粘附进入鼻腔中的有害物质,减少有害物质的吸入量,从而辅助治疗和预防感冒,这层薄膜具有物理防护作用,阻止一般感冒病毒的传播和繁殖;同时改善感冒引起的鼻腔干痒、流涕、鼻塞、打喷嚏、口臭等症状。
上述的海藻提取物的制剂类型选自:鼻喷剂、滴鼻剂、口服剂型以及注射剂型;通过抵御鼻病毒的药效试验,发现鼻喷剂的效果要远远优于其他制剂形式,且鼻喷剂的施用方便,故本发明海藻提取物的制剂优选为鼻喷剂。
本发明鼻喷剂由海藻提取物以及保湿剂、渗透压调节剂及注射用水组成。
保湿剂选自丙二醇、山梨醇、甘油,优选为甘油;渗透压调节剂为氯化钠。
本发明的鼻喷剂中海藻提取物的浓度为每毫升溶液中含有1.25mg~5.5mg;海藻提取物中可定量检测的的成分为海藻多糖,本发明涉及的产品所含海藻多糖的含量为每毫升溶液中含有1.0mg~2.5mg,优选海藻多糖的含量为每毫升溶液中含有1.3mg~2.5mg;甘油的含量为每毫升溶液中含有0.1mg~0.3mg,氯化钠的含量为每毫升溶液中含有4.0~5.0mg。
配制海藻提取物四种浓度为1.0mg/ml、1.25mg/ml、1.5 mg/ml、1.625 mg/ml、2.5mg/ml、3.125mg/ml、3.25mg/ml海藻提取物鼻喷剂溶液试验结果如下。
浓度考察结果表
每毫升溶液中海藻提取物的量控制在1.25mg~3.125mg/ml, 大于3.125 mg/ml时溶液直接成冻,影响使用;但小于1.25 mg/ml时溶液喷在鼻粘膜表面无法成膜,流动性太大,无法起到物理屏障的作用。
本发明所提及的海藻提取物,经检测分析,主要成分为海藻多糖,还包括海藻纤维、电解质、植物胶原蛋白等物质,在对比研究后,我们惊奇的发现,含有这些混合物质的海藻提取物,比单一的卡拉胶或硫酸多糖有更明显的阻隔鼻病毒和预防流感的作用。海藻多糖也是一种混合物,除了含有少量的卡拉胶和硫酸多糖等单一成分,还含有其他多糖类,经检测本发明的海藻提取物中所含有的海藻多糖混合物的量为40%~80%,优选80%;而所含的卡拉胶、硫酸多糖等成分的量均小于0.05%;且本发明通过药理试验测定,海藻提取的量控制在1.25~3.125mg/ml(其中海藻多糖的量控制在1.0mg~2.5 mg/ml)范围内时,相比同剂量范围内的单一卡拉胶或硫酸多糖制备的鼻喷剂防护效果提升了35.0%~55.0%,本发明的海藻提取物鼻喷剂达到了更突出的预防流感的物理防护作用,且优选海藻提取物的量为1.625~3.125mg/ml(即其中所含海藻多糖的量控制在1.3~2.5 mg/ml)。
药效试验证明,用渗透压调节剂氯化钠调节鼻喷剂的渗透压,不同渗透压的鼻喷剂相比,渗透压为等渗条件下相比高渗和低渗的情况下的鼻喷剂, HRV2型鼻病毒对人体鼻上皮细胞的感染能力显著降低。故本发明的鼻喷剂在渗透压调节剂的调节下成鼻粘膜等渗条件时的抵御病毒感染的效果最好,优选鼻喷剂的渗透压为285~310 (mOsm/kgH2O),故氯化钠的含量优选为含量为4.0~5.0mg/mL。
由于海藻提取物中的主要成分海藻多糖是鼻喷剂具有物理性防护作用的重要成分,为了保证鼻喷剂的作用效果,通过紫外-可见分光光度法测定海藻提取物鼻喷剂中含有的海藻多糖的含量。
溶液PH值范围为6.5~7.0,接近中性,溶液为无色透明黏稠液体。
按照GB 15044-2009国标4.3中的粘度分析方法,安装在带有中空1号转子(直径约为19mm,长度约为55mm)的粘度计上,以30r/min的转速旋转,待标尺盘上指针保持稳定后,得出读数,测定在本发明的各组分处方量范围内海藻提取物鼻喷剂的粘度为300~400mPa·s,发挥的作用最好。
该鼻喷剂的制备过程如下:
取处方量的海藻提取物加入到灭菌容器内,加入经活性炭处理过的灭菌注射用水适量,微热搅拌均匀至清液,加入适量保湿剂溶解,搅拌均匀,加入其余注射用水,用氯化钠调节渗透压值至285-310(mOsm/kgH2O),过滤,滤液密闭加热100℃ 30min,冷却至室温,灌装。
该鼻喷剂的容量为每瓶12mL,每喷剂量为0.10~0.12mL,保持粘膜湿润、预防病毒性流感的剂量为0.60~0.72mL/日,每日三次。
本发明的海藻提取物鼻喷剂的优点在于:鼻喷剂相比其他剂型,效果突出,制备简单,易操作,可定量使用,该制剂无防腐剂,制剂稳定,施用方便。海藻提取物鼻喷剂在鼻粘膜上形成一层保湿粘膜,相比其他单成分如卡拉胶、硫酸多糖等取得了意想不到的物理防护作用,能有效维持鼻粘膜湿润,物理性的辅助治疗和预防感冒,降低其发生的几率,无副作用。
具体实施方式
实施例1 海藻提取物鼻喷剂的制备
处方组成:海藻提取物2.5g(其中含海藻多糖2g),甘油0.2g,5g氯化钠,其余为注射用水。
制备工艺:取处方量的海藻提取物加入到灭菌容器内,加入经活性炭处理过的灭菌注射用水适量300ml,微热搅拌均匀至清液,加入适量保湿剂溶解,搅拌均匀,再加入剩余的注射用水700 ml放冷后用5g氯化钠调节渗透压至285-310(mOsm/kgH2O),过滤,滤液密闭加热100℃ 30min,冷却至室温,灌装,分装于塑料喷瓶中(12mL/瓶), 即得(注:瓶口为特殊的喷雾泵(喷雾系统),含无菌过滤器)。
实施例2海藻提取物鼻喷剂的制备
处方组成:海藻提取物2.0g(其中含海藻多糖1.2g),甘油0.2g,5g氯化钠,其余为注射用水。
制备工艺:取处方量的海藻提取物加入到灭菌容器内,加入经活性炭处理过的灭菌注射用水适量300ml,微热搅拌均匀至清液,加入适量保湿剂溶解,搅拌均匀,再加入剩余的注射用水700 ml放冷后用5g氯化钠调节渗透压至285-310(mOsm/kgH2O),过滤,滤液密闭加热100℃ 30min,冷却至室温,灌装,分装于塑料喷瓶中(12mL/瓶), 即得(注:瓶口为特殊的喷雾泵(喷雾系统),含无菌过滤器)。
实施例3~5 分别为以上同样方法制备海藻提取物浓度为1.25mg/ml;1.625 mg/ml;3.125mg/ml(即所含海藻多糖浓度为1.0 mg/ml、1.3 mg/ml、2.5 mg/ml)。
实施例6 鼻喷剂的性状、pH、最低装量、每喷量检查
根据实施例2的制备方法,制备三个批次的产品,分别为001、002、003批次,对其进行性状、PH值、装量、每喷量、均匀度的检查。
检查结果
批次 | 性状 | PH值 | 装量ml | 每喷量μl/次 |
001 | 透明无色黏稠液体 | 7.01 | 11.98±0.19 | 116.3±1.8 |
002 | 透明无色黏稠液体 | 7.10 | 12.01±0.16 | 108.6±1.4 |
003 | 透明无色黏稠液体 | 7.05 | 11.98±0.29 | 112.7±1.6 |
该鼻喷剂为透明无色液体,溶液均匀,PH为中性,每喷剂量含主药量均一。
实施例7海藻提取物鼻喷剂的稳定性考察
本品考察在正常光条件下配液,将该溶液在正常光条件下放置12h,测0、4、8、12h的吸光度、含量及有关物质,结果如下:
正常光条件下配制的溶液稳定性结果
从实验结果看出,正常光条件下配制的海藻提取物鼻喷剂溶液颜色、含量和有关物质符合要求,且正常光条件下放置12h后与0h相比,吸光度、含量及有关物质无明显变化,所以认为正常光条件下,配制的海藻提取物溶液稳定。
强光照射试验 将本品横置于光照箱中,一定时间后取样测定,温度为(60+2)℃,考察制剂性状、PH值、每瓶总喷次等,考察时间为0、0.5、10d,考察结果如下见。
强光稳定性考察结果
时间(d) | 性状 | PH值 | 每瓶总喷次 |
0 | 透明无色黏稠液体 | 7.10 | 119.3±1.8 |
0.5 | 透明无色黏稠液体 | 7.10 | 119.4±1.4 |
10 | 透明无色黏稠液体 | 7.10 | 119.2±1.9 |
所测结果与0点时比较基本一致,质量稳定。
实施例8海藻提取物鼻喷剂粘度的测定
仪器:旋转式粘度计(Brook field)。
分析步骤:将本发明鼻喷剂的溶液500g置于75℃的恒温槽中,预先将粘度计的摆锤和防护套在水中加热至75℃干燥后,安装在带有中空1号转子(直径约为19mm,长度约为55mm)的粘度计上,以30r/min的转速旋转,待标尺盘上指针保持稳定后,得出读数。
实验结果测定其粘度为300~400mPa·s。
实施例9药理实验
鼻喷剂中海藻多糖含量不同对药效的影响;
取人体鼻腔上皮细胞,分别加入不同浓度的红藻提取物和不同稀释度的病毒HRV2混合物,海藻提取物浓度为1.0 mg/mL 、1.25 mg/mL、1.5 mg/mL、1.625 mg/mL、2.5 mg/mL、3.125 mg/mL(其中含有海藻多糖含量为0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、1.2 mg/mL、1.3 mg/mL、2.0 mg/mL、2.5 mg/mL)的按照实施例1方法制备的鼻喷剂,同样方法制备浓度为1.2 mg/mL卡拉胶及1.2 mg/mL的硫酸多糖组作对比,放入37 °C,5 % CO2细胞培养箱中培养。在显微镜下观察CPE,通过Reed-Muench两氏法计算lgTCID50值。
细胞使用以上各个混合物溶液共同培养,测定lgTCID50值的绝对值如下表所示。
海藻提取物不同浓度下lgTCID
50
的绝对值
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 均值 | SD | |
kb | 6.43 | 6.47 | 6.44 | 6.54 | 6.54 | 5.10 | 5.31 | 0.11 |
1.0mg/ml | 6.44 | 6.73 | 6.67 | 6.49 | 6.65 | 6.68 | 6.67 | 0.12 |
1.25 mg/ml | 5.42 | 5.48 | 5.80 | 5.47 | 5.86 | 5.70 | 5.62 | 0.14 |
1.5mg/ml | 5.35 | 5.62 | 5.58 | 5.48 | 5.57 | 5.54 | 5.52 | 0.14 |
1.625 mg/ml | 4.25 | 4.06 | 4.17 | 4.23 | 4.22 | 4.16 | 4.56 | 0.12 |
2.5mg/ml | 3.20 | 3.15 | 3.13 | 3.15 | 3.19 | 3.21 | 4.42 | 0.13 |
3.125mg/ml | 2.22 | 2.16 | 2.19 | 2.27 | 2.30 | 2.25 | 3.31 | 0.16 |
卡拉胶组 | 5.87 | 5.85 | 5.82 | 5.91 | 5.90 | 5.85 | 5.86 | 0.15 |
硫酸多糖组 | 6.02 | 6.01 | 6.03 | 6.02 | 6.08 | 6.09 | 6.04 | 0.16 |
可见,和用卡拉胶和硫酸多糖单一成分作为原材料的鼻喷剂相比,红藻提取物的鼻喷剂, HRV2型鼻病毒对人体鼻上皮细胞的感染能力显著降低。这种抑制作用是呈浓度依赖性的;且浓度为1.625~3.125mg/mL(即红藻多糖浓度为1.3~2.5 mg/mL)时效果明显进步;故本发明的鼻喷剂中海藻提取物的浓度优选为1.625~3.125mg/mL(即所含海藻多糖浓度为1.3mg/mL~2.5 mg/mL)。
实施例10不同制剂形式对药效的影响
按照实施例的海藻提取物的处方量,按照制备鼻喷剂、滴鼻剂、片剂以及注射剂型的常规方法制备海藻提取物的这几种剂型;将50名受试者,随机分为 5组,受试者具有不同程度的感冒引起的鼻腔干痒、流涕、鼻塞、打喷嚏等症状,其中一组为空白对照,其余四组分别施用以上四种不同剂型;观察3天内的感冒患者的鼻腔干痒、流涕、鼻塞、打喷嚏改善或治愈状态。
结果显示:施用鼻喷剂的80%患者的鼻腔干痒、流涕、鼻塞、打喷嚏等症状消失,感冒治愈,18%的患者的鼻腔干痒、流涕、鼻塞、打喷嚏等症状明显改善;
施用滴鼻剂的50%的患者其感冒症状消失;30%的患者感冒症状改善;
施用片剂的30%的患者其感冒症状消失;20%的患者感冒症状改善;其余相比空白对照组无明显变化;
施用注射剂型的20%的患者其感冒症状消失30%的患者感冒症状改善;其余相比空白对照组无明显变化;
因此,海藻提取物在辅助治疗和预防感冒,改善感冒引起的鼻腔干痒、流涕、鼻塞、打喷嚏、口臭等症状方面,优选为鼻喷剂剂型。
实施例11药理实验
鼻喷剂中渗透压调节剂的不同含量所致渗透压的不同对药效的影响;
取人体鼻腔上皮细胞,分别加入不同渗透压的红藻提取物鼻喷剂和不同稀释度的病毒HRV2混合物,按照实施例1方法制备的渗透压为低渗245 mOsm/kgH2O、265 mOsm/kgH2O;等渗285 mOsm/kgH2O;310 mOsm/kgH2O;高渗330 mOsm/kgH2O 、350 mOsm/kgH2O的鼻喷剂,放入37 °C,5 % CO2细胞培养箱中培养。在显微镜下观察CPE,通过Reed-Muench两氏法计算lgTCID50值。
细胞使用以上各个混合物溶液共同培养,测定lgTCID50值的绝对值如下表所示。
不同渗透压的鼻喷剂lgTCID
50
的绝对值
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 均值 | SD | |
kb | 6.43 | 6.47 | 6.44 | 6.54 | 6.54 | 5.10 | 5.31 | 0.11 |
245mg/ml | 6.44 | 6.73 | 6.67 | 6.49 | 6.65 | 6.68 | 6.67 | 0.12 |
265 mg/ml | 5.42 | 5.48 | 5.80 | 5.47 | 5.86 | 5.70 | 5.62 | 0.14 |
285mg/ml | 3.44 | 3.71 | 3.67 | 3.57 | 3.56 | 5.63 | 3.61 | 0.15 |
310 mg/ml | 2.22 | 2.16 | 2.19 | 2.27 | 2.30 | 2.25 | 3.31 | 0.16 |
330mg/ml | 5.35 | 5.62 | 5.58 | 5.48 | 5.57 | 5.54 | 5.52 | 0.14 |
350mg/ml | 6.44 | 6.73 | 6.67 | 6.49 | 6.65 | 6.68 | 6.67 | 0.12 |
可见,不同渗透压的鼻喷剂相比,渗透压为等渗条件下相比高渗和低渗的情况下的鼻喷剂, HRV2型鼻病毒对人体鼻上皮细胞的感染能力显著降低。故本发明的鼻喷剂在渗透压调节剂的调节下成鼻粘膜等渗条件时的抵御病毒感染的效果最好,优选鼻喷剂的渗透压为285~310 (mOsm/kgH2O)。
Claims (8)
1.一种海藻提取物的鼻喷剂,其组成为海藻提取物、保湿剂、渗透压调节剂和注射用水;其特征在于,其海藻提取物主要成分为海藻多糖,海藻多糖含量为1.0~2.5mg/mL,保湿剂含量为0.1~0.3mg/mL。
2.权利要求1所述的鼻喷剂中,海藻多糖含量为1.3~2.5mg/mL。
3.权利要求1所述的鼻喷剂中的保湿剂选自甘油、丙二醇、山梨醇。
4.权利要求1所述的鼻喷剂中的渗透压调节剂为氯化钠,含量为4.0~5.0mg/mL。
5.权利要求1所述的鼻喷剂,其特征在于其渗透压为285-310(mOsm/kgH2O)。
6.权利要求1所述的鼻喷剂的PH值范围为6.5~7.0。
7.一种权利要求1所述鼻喷剂的制备方法,制备过程如下:
取处方量的海藻提取物加入到灭菌容器内,加入经活性炭处理过的灭菌注射用水适量,微热搅拌均匀至清液,加入适量保湿剂溶解,搅拌均匀,加入其余注射用水用氯化钠调节渗透压至285-310(mOsm/kgH2O),过滤,滤液密闭加热100℃ 30min,冷却至室温,灌装。
8. 权利要求1所述鼻喷剂,在维持鼻粘膜湿润、物理性预防病毒性流感及症状发生方面的应用。
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- 2014-06-24 CN CN201410284901.8A patent/CN104042640A/zh active Pending
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