CN103977121A - 宫炎平分散片的制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种宫炎平分散片的制备方法和检测方法，本发明制备方法与普通片剂不同在于，通过优选处方并采用崩解剂内加和外加相结合的方法，将中药片剂制成在三分钟内片剂全部崩解，制备得到了质量稳定均一的中药分散片；本发明提供的质量检测方法涉及地稔、两面针、五指毛桃的薄层色谱鉴别，没食子酸的高效液相色谱含量测定及其限度。

Description

宫炎平分散片的制备方法和检测方法

技术领域

本发明涉及一种宫炎平分散片的制备方法和检测方法。

背景技术

盆腔炎(Pelvic inflammatory diseade，PID)指女性上生殖道及其周围组织的炎症，主要包括子宫内膜炎(endometritis)、输卵管炎(salpingitis)、输卵管卵巢脓肿(tubo-ovarian abscess，TOA)、盆腔腹膜炎(peritonitis)。炎症可局限于一个部位，也可同时累及几个部位，最常见的是输卵管炎、输卵管卵巢炎。盆腔炎多发生在性活跃期、有月经的妇女，初潮前、绝经后或未婚者很少发生盆腔炎，若发生盆腔炎也往往是邻近器官炎症的扩散。按其发病过程、临床表现可分为急性与慢性两种。

急性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜发生的急性炎症，可局限于一个部位，也可几个部位同时发病。常见致病菌为葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、厌氧菌及性传播病原体，如淋菌、支原体、衣原体等。经淋巴、血行或直接蔓延至盆腔而引起。常见急性子宫内膜炎、子宫肌炎、输卵管炎、输卵管积脓、输卵管卵巢脓肿、盆腔结缔组织炎、盆腔腹膜炎，严重者可引起败血症及脓毒血症。如不及时控制，可出现感染性休克甚至死亡。

慢性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症。其主要临床表现为月经紊乱、白带增多、腰腹疼痛及不孕等，如已形成慢性附件炎，则可触及肿块。

目前治疗急、慢性盆腔炎的药物多为宫炎平片剂。但片剂普遍存在易吸湿、易被氧化，稳定性不高，药效较差，以及难崩解，起效慢，药物稳定性差的弊端。

宫炎平胶囊是由宫炎平片改变剂型而来，但其同样存在口服不便，药物稳定性差的弊端。尤其是老年人，儿童及吞咽不利患者服用时极其不便，甚至容易出现因服用胶囊药物而导致的窒息等威胁生命的严重问题。

分散片是近年来新兴的新剂型，与普通片剂相比，该剂型只需将片子放入口中，不需用水或只需少量水，无需咀嚼，片刻后药物就随唾液到达吸收组织器官，该剂型尤其适合一些老年人、儿童及吞咽不利患者或外出缺水条件下的病人服用。具有服用方便、起效快、生物利用度高等特点。

目前现有技术中已经涉及宫炎平分散片的专利申请比较少见，仅有例如2004100450226专利申请中，也未具体公开宫炎平分散片的具体成份，也未具体公开如何制备宫炎平分散片，更未公开制备宫炎平分散片检测方法。

发明内容

本发明正是从现有技术出发，提供了一种宫炎平分散片的制备方法和检测方法。

本发明提供的一种宫炎平分散片的制备方法，所述宫炎平分散片由地稔、两面针、当归、五指毛桃、穿破石、微晶纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、淀粉、硬脂酸镁制成，所述地稔、两面针、当归、五指毛桃、穿破石、微晶纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、淀粉、硬脂酸镁的重量比为450∶170∶140∶100∶140∶110∶35∶35∶0.86；

所述宫炎平分散片采用如下制备方法获得：

(1)煎煮：取上述药材地稔450g，两面针170g，当归140g，五指毛桃100g，穿破石140g，加6倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并煎液，滤液备用；

(2)浓缩与醇沉：取上述滤液减压浓缩成相对密度在55～60℃测定为1.25的浸膏；待浸膏的温度降至约30℃，在搅拌下加入乙醇，并使含醇量达50％，静置24小时；

(3)回收乙醇与浓缩：上述醇沉药液经滤过，药液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度在60℃测定为1.35～1.38的浸膏，备用；

(4)干燥、粉碎：取上述浸膏，置真空干燥器内干燥粉碎，过80目筛，药粉置不锈桶内，备用；

(5)制粒与干燥：取上述干膏粉加微晶纤维素110g、淀粉35g、交联聚乙烯吡咯烷酮18g混匀，以乙醇制粒、干燥，备用；

(6)压片：取上述干燥好的颗粒，再加入交联聚乙烯吡咯烷酮17g及硬脂酸镁0.86g，混匀，制成本品1000片。

优选的，其中步骤(2)中滤液减压浓缩的压强是-0.04Mpa～0.06Mpa。

优选的，其中步骤(3)中药液减压的压强是-0.04Mpa～-0.06Mpa。

优选的，其中步骤(4)中置真空干燥器内干燥粉碎的压强为-0.06～0.08Mpa，干燥温度为60～80℃。

优选的，其中步骤(6)中的混匀是在混合机中混合20分钟，测定混合物料的水份小于2.5％，压片控制硬度＞8Kg。

另一方面，本发明还提供了一种制备所述宫炎平分散片的检测方法，其中：

(1)取本品8片，研细，加甲醇50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，合并乙醚液，备用；分取水液，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取地稔对照药材2g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，取滤液，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，同供试品溶液制备方法，制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(17∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本品8片，研细，加甲醇50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用10％的盐酸溶液调节pH至2～3，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取两面针对照药材0.3g，加水微沸30分钟，滤过，滤液浓缩至约30ml，用10％的盐酸溶液调节pH至2～3，同供试品溶液制备方法，制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(15∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，

(3)取(1)项下的乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，

(4)含量测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05％磷酸(1∶99)为流动相；检测波长为274nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000，

对照品溶液的制备  精密称取在105℃下干燥至恒重的没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得，

供试品溶液的制备  取片重差异项下的本品10片，研细，取约2g，精密称定，置100ml平底烧瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，回流提取45分钟，放冷，再称定重量，加50％甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液，

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

优选的，每片含地稔以没食子酸(C₇H₆O₅)计，不少于0.12mg。

通过本发明的实验数据对比可知，本发明采用交联聚乙烯吡咯烷酮部分内加和部分外加，分崩解时限明显缩短，且交联聚乙烯吡咯烷酮用量很小，成本非常低，因此能克服现有技术中存在的缺陷，具有广泛的市场前景。因此，本发明制备方法与普通片剂优势在于，通过优选处方并采用崩解剂内加和外加相结合的方法，将中药片剂制成可以在三分钟内片剂全部崩解，从而制备得到了质量稳定均一的中药分散片。

采用本发明的检测方法，本发明提供的质量检测方法涉及地稔、两面针、五指毛桃的薄层色谱鉴别，没食子酸的高效液相色谱含量测定及其限度。一方面，解决了之前长期存在的由于缺乏专属性导致的给鉴别造成困难的缺陷，另一方面，也排了除了干扰过大的缺陷以及由于缺少含量测定检测导致的不能很好的控制成品质量的缺陷。同时，在控制质量的同时也降低了检测成本，完全能满足实际生产的要求。

附图说明

图1  宫炎平分散片中地稔药材的薄层鉴别的TLC图

图2  宫炎平分散片中两面针药材的薄层鉴别的TLC图

图3  宫炎平分散片中五指毛桃药材薄层鉴别的TLC图

图4  对照品色谱图

图5  对照品光谱图

图6  对照品三维图

图7  供试品色谱图

图8  供试品光谱图

图9  供试品三维图

图10  阴性对照色谱图

图11  阴性对照三维图

图12  没食子酸线性关系图

具体实施方式

下面，给出本发明制备宫炎平胶囊方法的具体实施例。

实施例l、

地稔      450g  两面针  170g  当归    140g

五指毛桃  100g  穿破石  140g  微晶纤维素  110g

交联聚乙烯毗咯烷酮  35g  淀粉  35g  硬脂酸镁  0.86g

具体的制备方法包含如下步骤：

(1)煎煮：取上述药材地稔450g，两面针170g，当归140g，五指毛桃100g，穿破石140g，加6倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并煎液，滤液备用，

(2)浓缩与醇沉：取上述滤液减压浓缩(-0.04Mpa～0.06Mpa)成相对密度为1.25(55～60℃)的浸膏；待浸膏的温度降至约30℃，在搅拌下加入乙醇，并使含醇量达50％，静置24小时，

(3)回收乙醇与浓缩：上述醇沉药液经滤过，药液减压(-0.04Mpa～-0.06Mpa)回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.38(60℃)的浸膏，备用，

(4)干燥、粉碎：取上述浸膏，置真空干燥器内干燥(-0.06～0.08Mpa，60～80℃)，粉碎，过80目筛，药粉置不锈桶内，备用，

(5)制粒与干燥：取上述干膏粉加微晶纤维素110g、淀粉35g、交联聚乙烯吡咯烷酮18g混匀，以乙醇制粒、干燥，备用，

(6)压片：取上述干燥好的颗粒，再加入交联聚乙烯吡咯烷酮17g及硬脂酸镁0.86g，混匀，在混合机中混合20分钟，测定混合物料的水份，应符合小于2.5％要求，压片，控制硬度＞8Kg，压制成1000片。

(7)分装。

而在采用本发明制备宫炎平胶囊的过程中，本发明的检测方法具体包含如下步骤：

(1)取本品8片，研细，加甲醇50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，合并乙醚液，备用；分取水液，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取地稔对照药材2g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，取滤液，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，自“分取水液，用乙酸乙酯振摇提取3次”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G

薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(17∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本品8片，研细，加甲醇50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用10％的盐酸溶液调节pH至2～3，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取两面针对照药材0.3g，加水微沸30分钟，滤过，滤液浓缩至约30ml，用10％的盐酸溶液调节pH至2～3，同供试品溶液制备方法，制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(15∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取(1)项下的乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】分散均匀性  应符合分散片项下分散均匀性的规定(中国药典2010年版二部附录I A)。

其它  应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录I D)。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05％磷酸(1∶99)为流动相；检测波长为274nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取在105℃下干燥至恒重的没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取片重差异项下的本品10片，研细，取约2g，精密称定，置100ml平底烧瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，回流提取45分钟，放冷，再称定重量，加50％甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过。取续滤液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含地稔以没食子酸(C₇H₆O₅)计，不得少于0.12mg。

实验例1：水煎煮工艺中加水量的考察

本项目采用正交设计对工艺条件进行了优化，分别考察加水量、煎煮时间、煎煮次数三因素，用正交表L₉(3⁴)进行试验，方案见表1和2，实验方法及结果见表3、4。

表1

表2  水煎煮工艺因素水平安排

检测指标：由于地稔药材为君药，地稔含没食子酸，因此，检测指标以没食子酸提取率作为考察指标，根据地稔药材质量标准规定，地稔含没食子酸不得少于0.05％，本品实测没食子酸含量为0.07％。

供试品溶液的制备及测定

本实验中，每组1个处方量的药材，按表3方案提取，将收集的煎煮液分别量出体积，备用。

没食子酸测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：甲醇-0.05％磷酸(1∶99)，流速：1ml/min，检测波长274nm，柱温：25℃。理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备  吸取相当于2g地稔药材的提取液，浓缩至约25ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表3。

表3  实验结果及数据分析

表4  方差分析表

F_0.05(2，2)＝19.00F_0.01(2，2)＝99.00

以没食子酸含量为考察指标，由表4中极差R值大小显示，各因素作用的主次为C＞A＞B；方差分析结果表明：因素C、A的影响具有显著性意义(P＜0.05)，B因素的影响无显著性意义(P＞0.05)，以A₂B₀C₂为佳。结合K值分析，B₂与B₃的K值无明显差异，从节约能源、缩短时间、节约成本考虑，宜采用A₂B₂C₂，即药材加6倍量水煎煮二次，每次2小时。

实验例2：干燥方法的优选及得膏率的考察

本发明中稠膏的干燥方法通常采用常温常压干燥或真空干燥，为此我们取2个处方(2000g)药材共4份，分别加6倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.25(55～60℃)，加乙醇至含醇量达50％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，分别浓缩成不同的相对密度，分别采用常温常压干燥(常压，60～80℃)或真空干燥(-0.06～0.08Mpa，60～80℃)，结果见表5。

表5  不同干燥方式所耗时间及样品得膏率

表5结果显示，当稠膏浓缩至1.35～1.38(60℃)时采用常压干燥耗时长，约为真空干燥2倍时间，而真空干燥由于样品在负压下形成了蜂窝状，使干燥物表面积增大，蒸发的水分在负压下迅速散发，因此干燥时间短，且干燥物疏松，易于粉碎，故宜采用真空干燥。但真空干燥时稠膏也不宜太稀，太稀干燥时间延长，同时在负压下浸膏易溢出而损耗；真空干燥开始时负压不宜太大，温度不宜太高，否则易溢出，而应逐渐提高温度和负压；因此，稠膏相对密度浓缩至1.35～1.38(60℃)。

实验例3.成型实验

根据上述实验结果可知，本品干膏得率为11％左右，一个处方得干膏量约110g，分散片又称水分散片，系遇水迅速崩解形成均匀粘性混悬液的一种片剂。具有吸收快，生物利用度高，服用方便等特点。填充剂和崩解剂是分散片中主要的辅料，其用量通常是药物与辅料为1∶1，辅料的选择直接影响分散片的内在质量，常用的填充剂和崩解剂有：低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠；因此，我们取上述辅料与浸膏粉按表6进行实验，并分别以颗粒的流动性(休止角——漏斗法)、片剂的硬度与分散时间为指标，考察处方的优劣。

表6  分散片处方筛选结果

上述实验结果显示，以处方一、处方五的压片效果较佳，处方三与处方五相同，仅交联聚乙烯吡咯烷酮部分内加和部分外加，而分崩解时限明显缩短，处方一崩解时限也较短，但辅料交联聚乙烯吡咯烷酮用量大，成本高，因此拟采用处方五，即干膏粉与微晶纤维素、淀粉、部分交联聚乙烯吡咯烷酮混匀，以乙醇制粒、干燥，加部分交联聚乙烯吡咯烷酮及0.3％硬脂酸镁，混匀，压片。

实验例4：地稔药材的薄层鉴别

提取条件的选择：供试品溶液采取乙醚除去部分脂溶性杂质后用醋酸乙酯提取，杂质减少，而对照药材溶液用乙醚除去脂溶性杂质后，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上出现相同的荧光斑点，分离度高，重现性好。

薄层板：硅胶G板、含0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，厚度均为500μm。

吸附剂的选择：分别采用硅胶G板和以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板进行分离，结果两者的结果相似，为了方便实验操作，选用了以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，并将其列入正文

展开剂的选择：采用了氯仿-甲醇-水(17∶5∶2)的下层液、氯仿-丙酮-冰醋酸(17∶5∶1)、氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃放置12小时以上的下层液，结果采用氯仿-甲醇-水(17∶5∶2)的下层液为展开剂分离效果佳，特征斑点明显，同时阴性样品无干扰，故列入正文。结果见图1，图1中，1.阴性对照2.地稔对照药材3.4.5宫炎平分散片。

实验例5：两面针药材的薄层鉴别

提取条件的选择：两面针药材主要含生物碱类如氯化两面针碱、氧化两面碱、乙氧基白屈菜红碱等脂溶性成分。由于本品制备工艺中两面针药材为水煎煮提取，参照药典的提取方法，以氯化两面针碱为对照品进行鉴别时未找到该斑点。参照复方风湿宁片(国家药品监督管理局.中成药地方标准上升国家标准部分内科经络肢体脑系分册，北京：上海科学技术出版社，2002：371)中两面针含量测定的提取方法，调酸后以水饱和正丁醇振摇提取，以同法制备的两面针对照药材为对照进行鉴别，特征斑点清晰，分离度好，Rf值适中。

薄层板：硅胶G板、含0.5％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，厚度均为500μm，。

吸附剂的选择：分别采用硅胶G板和以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板进行分离，结果两者的结果相似，为了方便实验操作，选用了以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，并将其列入正文

展开剂的选择：分别采用氯仿-丙酮-甲酸(15∶4∶1)、苯-石油醚(60～90℃)(8∶2)、苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水(20∶5∶3∶1∶0.1)、苯-正丁醇-冰醋酸-水(2∶5∶1∶4)为展开剂，结果以氯仿-丙酮-甲酸(15∶4∶1)为展开剂分离效果为佳，且Rf值适中，同时阴性样品无干扰，故列入正文，结果见图2，图中，1.阴性对照2.两面针对照药材3.4.5宫炎平分散片。

实验例5：五指毛桃药材薄层鉴别

提取条件的选择  五指毛桃含香豆素类成份补骨脂素，参照益智康脑丸(国家药品监督管理局.中成药地方标准上升国家标准部分·内科心系分册，北京：上海科学技术出版社，2002：227)甲醇超声后用乙醚振摇提取进行鉴别，结果斑点圆整，分离度好，Rf值适中。

薄层板：硅胶G板，0.5％羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶G板，厚度均为500μm。

吸附剂的选择  分别采用硅胶G板和以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板进行分离，用10％的氢氧化钾甲醇溶液显色后，结果两者的结果相似，为了方便实验操作，选用了以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，并将其列入正文。

显色剂的选择  分别采用10％硫酸乙醇溶液和10％氢氧化钾甲醇溶液为显色剂，结果以后者效果为佳，故列入正文。

展开剂的选择  分别采用正己烷-醋酸乙酯(8∶3)、石油醚-氯仿-甲醇(8∶2∶1)、石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-甲醇(10∶1.5∶0.5)为展开剂，结果以正己烷-醋酸乙酯(8∶3)分离效果为佳，且Rf值适中，同时阴性样品无干扰，故将正己烷-醋酸乙酯(8∶3)为展开剂列入正文，结果见图3，图中，1.阴性对照2.补骨脂素对照品3.4.5宫炎平分散片。

实验例6：含量测定

1色谱条件的选择  对宫炎平分散片中的没食子酸含量测定进行实验研究，色谱柱：Agilent Hypersil C18柱，4.0mm×250mm5μm，流动相：甲醇-0.05％磷酸(1∶99)，流速：1ml/min，检测波长274nm，柱温：室温。在此条件下对照品、供试品在约13min相同时间有一色谱峰，见对照品色谱图4、对照品光谱图5、对照品三维图6，供试品色谱图7、供试品光谱图8、供试品三维图9。

2阴性对照试验  按处方取不含地稔的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照样品，再按含量测定供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，取阴性对照溶液10μl，按样品测定方法注入液相色谱仪，结果在对照品没食子酸色谱峰相应的位置上，无其它色谱峰出现，阴性对照对样品测定无干扰，结果见阴性对照色谱图10、阴性对照三维图11。

3提取溶剂的选择  没食子酸为酚酸类化合物，我们分别选择甲醇、50％甲醇、60％乙醇、乙醇、醋酸乙酯为提取溶剂，分别精密称取本品细粉约2g，共5份，置100ml平底烧瓶中，各精密加入上述溶剂50ml，称定重量，回流处理45分钟，放冷，加上述溶剂补足减失的重量，滤过。吸取续滤液适量，通过微孔滤膜(0.45μm)，即得；另取没食子酸对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含40μg的对照品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相仪中，测得没食子酸含量结果见表7。

表7  不同溶剂提取没食子酸含量

表7测定结果显示，60％乙醇、乙醇、醋酸乙酯提取液中没食子酸含量低，50％甲醇提取液中没食子酸含量较高，故采用50％甲醇作为提取溶剂。

4提取方法的考察：取本品10片，研细，取约2g，精密称定，共2份，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，分别超声、回流提取45分钟，放冷，加50％甲醇补足减少的重量。滤过，吸取续滤液适量通过微孔滤膜(0.45μm)，即得。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。结果见表8。

表8  不同提取方法对测定结果的影响

回流的提取效果远好于超声提取，故采取回流提取。

5样品提取时间的考察：取本品10片，研细，取约2g，精密称定，共4份，置100ml平底烧瓶中，分别精密加入50％甲醇50ml，称定重量，分别回流处理20、30、45、60分钟，放冷，加50％甲醇补足减少的重量。滤过，吸取续滤液适量通过微孔滤膜(0.45μm)，即得。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表9。

表9  不同提取时间对测定结果的影响

提取45、60分钟以上没有显著差异，因此拟提取45分钟。

6提取溶剂用量的考察：取本品10片，研细，取约2g，精密称定，共4份，置100ml平底烧瓶中，分别精密加入50％甲醇25m、50ml、75ml、100ml，称定重量，回流处理45分钟，放冷，加50％甲醇补足减少的重量。滤过，吸取续滤液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。结果见表10。

表10  不同提取溶剂量对测定结果的影响

以50ml以上的溶剂提取效果较好，并且各溶剂量提取的效果未见显著差异好，故拟用50ml进行提取。

7线性关系的考察  精密称取没食子酸对照品18.31mg，置25ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml含没食子酸0.7324mg)。取对照品适量，分别加50％甲醇稀释成以下浓度：0.014648mg/ml、0.029296mg/ml、0.058592mg/ml、0.087888mg/ml、0.117184mg/ml、0.14648mg/ml、0.29296mg/ml，分别吸取10μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品峰面积，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y＝13.4X+18951  r＝0.9997(n＝7)，没食子酸对照品在14.648μg/ml～292.96μg/ml范围内样品浓度与峰面积呈良好的线性关系，结果见表11，图12。

表11  没食子酸线性关系

8精密度试验  精密吸取供试品溶液10μl，按上述色谱条件，重复进样5次，测定供试品溶液中没食子酸峰面积值，计算供试品峰面积值的相对标准差为2.39％。结果见表12。

表12  精密度试验结果

9稳定性试验  精密吸取供试品溶液10μl，按上述色谱条件，每隔半小时或1小时，测定供试品溶液中没食子酸峰面积值，计算供试品没食子酸峰面积值的相对标准差为2.08％。结果见表13。

表13  稳定性试验结果

10重现性试验  取本品10片，研细，取约2g，精密称定，共5份，照含量测定项下实验方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，测定结果经数据处理，RSD为1.95％，结果见表14。

表14  重现性试验结果

11加样回收率试验  取本品10片，研细，取约1g，精密称定，共5份，置100ml平底烧瓶中，各精密加入没食子酸对照品溶液(0.0117mg/ml)50ml，余照含量测定项下实验，吸取10μl注入液相色谱仪中进行含量测定，计算回收率。结果见表15。

表15  回收率测定结果

平均回收率99.89％RSD＝2.83％

12样品测定  取片重差异项下的本品10片，研细，取约2g，精密称定，置100ml平底烧瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，回流提取45分钟，放冷，再称定重量，加50％甲醇补足减少的重量。摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，吸取10μl续滤液注入液相色谱仪中进行含量测定即得。

表16  宫炎平分散片中没食子酸含量

根据表16测定的结果，平均每片含没食子酸0.1711mg，考虑药材来源、操作过程等因素的差异，因此，以平均含量的70％为下限，规定本品每片含地稔以没食子酸(C₇H₆O₅)计，不得少于0.12mg。

实验数据

一般性资料，本发明中药药物应用于临床观察122例；分别分为实施例1组40人，实施例2组40人，对照组42人，实施例1-2组分别给予实施例1、2制备的产后逐瘀颗粒，一次一袋，一日三次，对照组给予市售产妇康颗粒(深圳三顺制药有限公司)，一次一袋(5g)，一日三次，均于产后即连服，一周为一个疗程。连续随访观察两周。进行对比观察。结果：如下表所示，实施例2组在产褥期发生的不利于产后恢复或不舒服的情况比对照组减少，气短无力、多汗怕风时间明显短于对照组，明显减少产褥感染和促进泌乳；恶露持续时间明显缩短。结果见表17：

表17

乳腺和乳汁分泌情况：实施例1和实施例2组均无乳腺炎发生，对照组有1例乳腺炎发生，实施例2组乳汁分泌量从服药后第二、三天起较对照组显著增多。

典型病例

刘某，剖腹产，第一胎，患者因产后恶露不尽50天尚未干净求诊。色暗红夹少量血块，每日换卫生巾3次左右，小腹隐痛，腰酸，大便干结，舌质偏红、舌尖有瘀点，苔薄黄，脉细弦。妇检：阴道畅，内有少量血性分泌物，宫颈光，子宫偏大，宫体轻压痛；双侧附件无殊。B超提示；子宫内膜增厚。辨证为瘀热互结，恶露不绝，给予其服用本发明实施例2制备的药物，药后第二天阴道出血量增，夹有细碎内膜组织，当天下午出血量减少。3日后复诊，小腹疼痛已缓解，大便畅，阴道有少量淡血性分泌物，再予治疗2日，药后血止，诸症愈，舌脉如常，妇检无殊，B超复查子宫附件亦无殊，痊愈。

曹某，38岁高危产妇，产后一个半月恶露淋漓不断，色暗红夹少量血块，腰腹刺痛，头晕心悸，舌黯、脉弦涩。B超检查：子宫肥大、复旧不良。血常规：贫血。曾服中、西药，疗效欠佳。给予本发明实施例2制备药物组合物一个疗程，腹部疼痛消失，阴道出血停止，诸症愈，舌脉如常，妇检及B超复查子宫附件无殊，随访无复发。

本发明制备的产后逐瘀颗粒在现有技术的基础上辩证施药，中药各种成分之间互作配伍，协调效能，成本低廉，经临床验证，对产后血瘀有很好的治疗效果，本申请人多年的医疗实践中，治愈的病例数目众多，取得良好的效果，具有广阔的应用前景。

以上列举的仅是本发明的最佳具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种宫炎平分散片的制备方法，所述宫炎平分散片由地稔、两面针、当归、五指毛桃、穿破石、微晶纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、淀粉、硬脂酸镁制成，所述地稔、两面针、当归、五指毛桃、穿破石、微晶纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、淀粉、硬脂酸镁的重量比为450∶170∶140∶100∶140∶110∶35∶35∶0.86；

所述宫炎平分散片采用如下制备方法获得：

(1)煎煮：取上述药材地稔450g，两面针170g，当归140g，五指毛桃100g，穿破石140g，加6倍量水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并煎液，滤液备用；

(2)浓缩与醇沉：取上述滤液减压浓缩成相对密度在55～60℃测定为1.25的浸膏；待浸膏的温度降至约30℃，在搅拌下加入乙醇，并使含醇量达50％，静置24小时；

(3)回收乙醇与浓缩：上述醇沉药液经滤过，药液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度在60℃测定为1.35～1.38的浸膏，备用；

(4)干燥、粉碎：取上述浸膏，置真空干燥器内干燥粉碎，过80目筛，药粉置不锈桶内，备用；

(5)制粒与干燥：取上述干膏粉加微晶纤维素110g、淀粉35g、交联聚乙烯吡咯烷酮18g混匀，以乙醇制粒、干燥，备用；

(6)压片：取上述干燥好的颗粒，再加入交联聚乙烯吡咯烷酮17g及硬脂酸镁0.86g，混匀，制成本品1000片。

2.如权利要求1所述的制备方法，其中步骤(2)中滤液减压浓缩的压强是-0.04Mpa～0.06Mpa。

3.如权利要求1所述的制备方法，其中步骤(3)中药液减压的压强是-0.04Mpa～-0.06Mpa。

4.如权利要求1所述的制备方法，其中步骤(4)中置真空干燥器内干燥粉碎的压强为-0.06～0.08Mpa，干燥温度为60～80℃。

5.如权利要求1所述的制备方法，其中步骤(6)中的混匀是在混合机中混合20分钟，测定混合物料的水份小于2.5％，压片控制硬度＞8Kg。

6.制备权利要求1所述宫炎平分散片的检测方法，其中：

(1)取本品8片，研细，加甲醇50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，合并乙醚液，备用；分取水液，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取地稔对照药材2g，加水100ml，煎煮30分钟，滤过，取滤液，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，同供试品溶液制备方法，制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(17∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本品8片，研细，加甲醇50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用10％的盐酸溶液调节pH至2～3，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取两面针对照药材0.3g，加水微沸30分钟，滤过，滤液浓缩至约30ml，用10％的盐酸溶液调节pH至2～3，同供试品溶液制备方法，制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(15∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，

(3)取(1)项下的乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，

(4)含量测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05％磷酸(1∶99)为流动相；检测波长为274nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000，

对照品溶液的制备  精密称取在105℃下干燥至恒重的没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得，

供试品溶液的制备  取片重差异项下的本品10片，研细，取约2g，精密称定，置100ml平底烧瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，回流提取45分钟，放冷，再称定重量，加50％甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液，

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.如权利要求6所述的检测方法，每片含地稔以没食子酸(C₇H₆O₅)计，不少于0.12mg。