CN103957709A - Mek抑制剂与奥诺拉(aurora)a激酶选择性抑制剂的组合 - Google Patents

Mek抑制剂与奥诺拉(aurora)a激酶选择性抑制剂的组合 Download PDF

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Abstract

本发明涉及治疗增生性病症的方法。具体地说，本发明提供通过投与MEK抑制剂与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合治疗增生性病症的方法。

Description

MEK抑制剂与奥诺拉(AURORA)A激酶选择性抑制剂的组合
优先权要求
本申请案要求2011年6月3日提交的美国临时专利申请案第61,493,217号和2012年3月20日提交的美国临时专利申请案第61,613,207号的优先权，每一文献以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及治疗各种细胞增生性病症的方法。具体地说，本发明提供通过投与MEK抑制剂与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合治疗各种细胞增生性病症的方法。本发明还提供包含MEK抑制剂与选择性奥诺拉A激酶抑制剂的组合的医药组合物和试剂盒。
背景技术
癌症是美国第二大常见死亡原因并且在全世界每八例死亡中即占一例。在2010间，美国癌症学会(American Cancer Society)估计仅在美国就将确诊约1,529,560例新癌症病例，并且估计569,490个美国人将死于癌症。在2008，确诊估计1240万新癌症病例，并且全世界760万人死于癌症。尽管医学进步己改良了癌症存活率，但仍不断需要新颖并且更有效的治疗。
癌症特征是不受控制的细胞复制。调节从静止到细胞增生的转变的细胞分裂周期包含四个阶段：G1、S阶段(DNA合成)、G2和M阶段(有丝分裂)。未分裂细胞在静止阶段GO休息。细胞分裂周期还具有若干检查点机制，其使细胞周期停滞并且诱导有助于修复细胞损坏的基因转录。细胞周期检查点是控制细胞周期转变的次序和时序的调节通路。主要细胞周期检查点包括G1阶段和G2阶段内的DNA损伤检查点以及M阶段内的纺锤体组装检查点(Spindle Assembly Checkpoint)。这些检查点确保例如DNA复制和染色体分离的关键事件高保真地完成。
细胞周期检查点的调节是肿瘤细胞对许多化学疗法和辐射的反应方式的关键决定因素。许多有效的癌症疗法通过引起DNA损伤而起作用；然而，这些药剂的抗性在癌症治疗中仍存在显著局限性。产生药物抗性的一种重要机制是活化使细胞周期停滞以提供修复时间的检查点通路。细胞周期进展通过此机制而受阻，并且可避免受损细胞发生立即细胞死亡。
细胞分裂周期涉及通常在癌症细胞中过度表达的各种蛋白激酶。这些细胞周期激酶的实例包括(1)G1／S阶段激酶：周期素依赖性激酶(CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7和CDK9)和细胞分裂周期7激酶(CDC7)；(2)DNA损伤检查点激酶：共济失调毛细血管扩张症突变激酶(ATM)、ATM和Rad3相关激酶(ATR)、检查点激酶(CHK1和CHK2)、WEE1和髓磷脂转录因子1(MYT1)；以及(3)有丝分裂激酶：CDK1、NIMA相关激酶2(NEK2)、保罗样激酶1(PLK1)、奥诺拉A激酶(Aurora A kinase)、奥诺拉B激酶、奥诺拉C激酶、免赖得出芽抑制解除激酶(Budding Uninhibited by Benomyl kinase，BUB1、BUB1B(也称为BUBR1)和BUB3)和着丝点激酶TTK(也称为MPS1)。(当代药物化学(Curr.Med.Chem.)(2007)14，969-985)。由于其在细胞分裂周期中的重要作用，己研究这些细胞周期激酶作为癌症疗法的目标。
首先在酵母(Ip11)、非洲爪蟾(Xenopus)(Eg2)和果蝇(Drosophila)(奥诺拉)中鉴别到的奥诺拉激酶是有丝分裂的关键调节剂。(欧洲分子生物学学会杂志(Embo J)(1998)17，5627-5637；遗传学(Genetics)(1993)135，677-691；细胞(Cell)(1995)81，95-105；细胞科学杂志(J Cell Sci)(1998)111(Pt5)，557-572)。在人类中，存在奥诺拉激酶的三种同功异型物，包括奥诺拉A、奥诺拉B和奥诺拉C。奥诺拉A和奥诺拉B在细胞通过有丝分裂的正常进展中起关键作用，而奥诺拉C活性主要局限于减数分裂细胞。奥诺拉A和奥诺拉B在结构上紧密相关。其催化域位于C端，在C端其仅有几个氨基酸不同。更大多样性存在于其非催化N端域中。正是奥诺拉A和奥诺拉B的此区域中的序列多样性支配其与不同蛋白质搭配物的相互作用，从而使这些激酶在有丝分裂细胞内具有唯一次细胞定位和功能。
奥诺拉B激酶的过度表达已经在一些癌症中有报导，并且已经与一些癌症中的预后恶化相关。(分子癌症治疗学(Mol Cancer Ther)(2007)6，1851-1857)。奥诺拉B激酶定位于细胞分裂后期前细胞(preanaphase cell)的着丝点。其在纺缍体两极性和纺缍体组装检查点的建立和维持中起关键作用。(细胞生物学杂志（J Cell Biol)(2001)153，865-880；细胞生物学杂志(2003)161，267-280；细胞生物学杂志(2003)161，281-294；当代生物学(Curr Biol)(2002)12，894-899)。缺乏奥诺拉B激酶功能的细胞表明归因于有丝分裂纺缍体检查点的快速作用和有效覆盖在有丝分裂期间正常染色体比对的损失。末期期间，奥诺拉B激酶分别定位于纺缍体中间区和中间体。由此，奥诺拉B激酶在胞质分裂中起作用。(细胞生物学杂志(2001)152，669-682；基因到细胞(Genes Cells)(2005)10，127-137)。通过使用基因突变、RNA干扰或ATP竞争性选择性小分子抑制剂抑制奥诺拉B激酶会引起纺缍体微管与着丝点的连接、染色体分离以及卵裂沟形成的缺陷。(细胞生物学杂志(2001)153，865-880；细胞生物学杂志(2003)161，267-280；细胞生物学杂志(2001)152，669-682；细胞的分子生物学(Mol Biol Cell)(2003)14，3325-3341；当代生物学(2002)12，894-899；基因到细胞(2005)10，127-137)。奥诺拉B激酶抑制还阻止纺缍体组装检查点的适当形成，使细胞提前退出有丝分裂而不会发生有丝分裂停滞并且通常不会完成胞质分裂。(细胞生物学杂志(2003)161，267-280；细胞生物学杂志(2003)161，281-294)。在称为核内复制的方法中，这些细胞进入细胞周期的G1部分，使DNA的量翻倍。文献中的报导表明此核内复制事件是奥诺拉B抑制的抗增生和抗存活效应的先决条件。此效应可能与奥诺拉B磷酸化Rb肿瘤抑制蛋白质有关，其可能有助于自有丝分裂临时退出时有丝分裂期后G1阶段中的细胞周期停滞。与此一致，发现在ZM447439抑制奥诺拉B后核内复制和由此发生的细胞凋亡不依赖于p53。(分子癌症治疗学(2009)8(7)，2046-56)。
尽管奥诺拉B激酶与奥诺拉A激酶都是奥诺拉激酶家族的成员，但在有丝分裂过程中其具有不同作用。在正常有丝分裂细胞分裂过程中，细胞将双极性纺缍体组织起来，其中两径向排列的微管各聚焦于一端的纺缍极并且连接到另一端的染色体。就在姐妹染色分体分离成子细胞的一瞬间，染色体沿直线(‘中期板’)配置。此组织双极性有丝分裂纺锤体与充分比对的染色体的方法用以确保有丝分裂期间细胞染色体补体的完整性。
奥诺拉A基因(AURKA)定位于染色体20q13.2，在各种肿瘤类型中其通常以高发生率扩增或过度表达。(欧洲分子生物学学会杂志(1998)17，3052-3065；国际癌症杂志(IntJ Cancer)(2006)118，357-363；细胞生物学杂志(2003)161，267-280；分子癌症治疗学(2007)6，1851-1857；美国国家肿瘤研究所杂志(JNatl Cancer Inst)(2002)94，1320-1329)。奥诺拉A基因表达增加与癌症病因和预后恶化相关。(国际肿瘤学杂志(Int J Oncol)(2004)25，1631-1639；癌症研究(Cancer Res)(2007)67，10436-10444；临床癌症研究(Clin CancerRes)(2004)10，2065-2071；临床癌症研究(2007)13，4098-4104；国际癌症杂志(2001)92，370-373；英国癌症杂志(BrJ Cancer)(2001)84，824-831；美国国家肿瘤研究所杂志(2002)94，1320-1329)。以实验模型支持此概念，表明奥诺拉A过度表达导致致癌性转化。(癌症研究(2002)62，4115-4122；分子癌症研究(Mol Cancer Res)(2009)7，678-688；癌基因(Oncogene)(2006)25，7148-7158；细胞研究(Cell Res)(2006)16，356-366；癌基因（2008)27，4305-4314；自然遗传学(Nat Genet)(1998)20，189-193)。怀疑奥诺拉A激酶的过度表达会引起奥诺拉A与其调节搭配物之间的化学计量不平衡，从而导致染色体不稳定性和后续转化事件。奥诺拉A的潜在致癌作用使得对靶向此激酶以治疗癌症产生极大兴趣。
作为有丝分裂的关键调节剂，奥诺拉A在有丝分裂进入和细胞通过有丝分裂的正常进展中起必要作用。(自然分子细胞生物学评论(Nat Rev Mol Cell Biol)(2003)4，842-854；发育生物学当前课题(Curr Top Dev Biol)(2000)49，331-42；自然分子细胞生物学评论(2001)2(1)，21-32)。在正常细胞周期期间，奥诺拉A激酶首先表达于G2阶段中，其中其定位于中心体并且在中心体成熟和分离以及细胞进入有丝分裂中起作用。在有丝分裂细胞中，奥诺拉A激酶主要定位于中心体和初期有丝分裂纺缍体的近端部分。由此，其与在形成有丝分裂纺锤极和纺缍体、纺缍体在着丝点连接到姐妹染色分体、染色体的后续比对和分离、纺缍体组装检查点以及胞质分裂中共同起作用的各组蛋白质相互作用并且磷酸化各组蛋白质。(细胞科学杂志(2007)120，2987-2996；细胞生物学趋向(TrendsCell Biol)(1999)9，454-459；自然分子细胞生物学评论(2003)4，842-854；细胞生物学趋向(2005)15，241-250)。
虽然奥诺拉A激酶的选择性抑制使有丝分裂进入延迟(生物化学杂志(The Journalofbiological chemistry)(2003)278，51786-51795)，但细胞通常仍会进入有丝分裂，尽管具有非活性奥诺拉A激酶。己选择性抑制奥诺拉A激酶的细胞表明多种有丝分裂缺陷，包括异常有丝分裂纺锤体(单极或多极纺锤体)和染色体比对过程中的缺陷。随着时间的推移，单极和多极纺锤体可分解形成两个相对纺锤极，但一些这些缺陷可通过缺陷有丝分裂立即导致细胞死亡。尽管由奥诺拉A激酶抑制产生的纺缍体缺陷会假定通过活化纺缍体组装检查点诱导有丝分裂延迟，但细胞最终会以接近未处理细胞的频率分裂。(分子与细胞生物学(Mol Cell Biol)(2007)27(12)，4513-25；细胞周期Cell Cycle)(2008)7(17)，2691-704；分子癌症治疗学(2009)8(7)，2046-56)。此不当细胞分裂在归因于奥诺拉A激酶功能损失的纺缍体组装检查点的缓动抑制后发生。(细胞周期(2009)8(6)，876-88)。在奥诺拉A激酶不起作用下形成的双极性纺缍体通常显示染色体比对和分离缺陷，包括中期的染色体集合缺陷、后期的落后染色体以及末期桥。与染色体分离缺陷一致，用MLN8054(一种奥诺拉A激酶选择性抑制剂)处理的细胞显现随着时间增加的非整倍体。在通过缺陷有丝分裂重复继代后，用MLN8054处理的细胞通常将经历衰老，即一种具有独特形态特征的不可逆生长停滞。(分子癌症研究(2010)8(3)，373-84)。在一些细胞系中，MLN8054处理的细胞退出有丝分裂并且活化p53依赖性有丝分裂期后G1检查点，其随后诱导p21和Bax，从而导致G1停滞，随后诱导细胞凋亡。(分子癌症治疗学(Mol.Cancer Ther)(2009)8(7)，2046-56)。一些细胞还可退出有丝分裂而不发生胞质分裂。这些细胞以正常DNA含量的两倍进入细胞周期的G1阶段，并且因此称为G1四倍体细胞。最后，一些细胞可能发生分裂，但具有严重染色体分离缺陷(分子与细胞生物学(2007)27( 2)，4513-25)。在后两种结果中，异常有丝分裂产生有害非整倍体，从而导致细胞死亡或停滞。或者，一部分这些细胞可能抵抗这些最终结果并且可再进入细胞周期，这是因为己表明非整倍体为肿瘤细胞生长的抑制因子与促进剂。
癌症疗法的其它目标包括有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联，其为涉及正常细胞增生、存活以及分化调节的关键信号传导通路。在己知MAPK信号传导通路中，RAF-MEK-ERK通路介导促进肿瘤生长、进展以及转移的生长因子和致癌因子(例如Ras和Raf突变表型)的增生和抗细胞凋亡信号传导。视刺激和细胞类型而定，此通路可传递使得阻止或诱导细胞凋亡或细胞周期进程的信号。
细胞外信号调节激酶(ERK)是通过Raf丝氨酸／苏氨酸激酶活化的演化保守性信号传导模块的下游组分。Raf活化MAP激酶ERK激酶(MEK)1／2双特异性蛋白激酶，其接着活化ERK1／2。另外，Raf-MEK-ERK通路是Ras小GTP酶的关键下游效应子。Ras是表皮生长因子受体(EGFR)的关键下游效应子。ERK活化还促进EGFR配体的上调表达，促进对于肿瘤生长关键的自分泌生长环。例如PI3K／PTEN／Akt通路的其它信号转导通路与Raf／MEK／ERK通路相互作用以积极或消极地调节其活性，或改变下游目标的磷酸化状态。
人类癌症中此通路的常见突变活化表明此通路在人类肿瘤形成中的重要作用。Ras小GTP酶(人类癌症中最常突变的致癌基因)在多种人类癌症中以突变方式活化和／或过度表达。由于Ras处的突变以及用以调节其活性的其它通路中的基因，故此通路的异常活化出现于白血病中。Raf和Erk在许多不同肿瘤类型中也通常发生突变。
30％以上原发性肿瘤细胞系中报导MAPK的组成性作用，这些细胞系包括由结肠、肺、乳房、胰腺、卵巢和肾产生的细胞系。(癌基因(1999)18，813-822)。在肿瘤组织中己检测到与正常邻近组织相比较高浓度的活性MAPK／ERK(pMAPK／pERK)。(临床检查杂志(J.Clin.Invest.)(1997)99，1478-1483)。
己显示Ras／Raf／MEK活性的抑制伴随GO-G1边界的细胞周期停滞，以及在一些病例中由Bc12抗细胞凋亡蛋白质下调介导的细胞凋亡，两者都用以阻断细胞增生。许多生物化学标记与此停滞相关，包括p21Waf1、p27Kip1的上调、周期素／周期素依赖性激酶2(cdk2)活性的抑制、低磷酸化pRb的积聚以及E2F活性的抑制。(癌症研究(2005)65(11)，4870-80)。
倘若涉及驱动细胞周期的蛋白激酶具有重要性，如果可开发出靶向这些激酶的更有效治疗方案，那么将会为有益的。具体地说，组合治疗方案对患细胞增生性病症的患者可能有帮助，并且甚至可能降低复发率或克服有时可见于这些患者中的对特定抗癌剂的抗性。
因此，需要新颖癌症治疗方案，包括组合疗法。
发明内容
附图说明
图1用DMSO(黑色条)、200nM TAK-733(白色条)、50nM MLN8237(灰色条)或200nM TAK-733和50nM MLN8237(阴影线条)连续处理120小时的A2780细胞中有丝分裂的频率。时移视频由120小时内以5分钟时间间隔获取的细胞影像产生，并且当附着(间期)细胞从培养板的底部集拢时记录进入有丝分裂的时间。在此段落中，MLN8237是指钠盐，单水合4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠，并且TAK-733是指3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮。
图2与仅单一药剂相比，TAK-733与MLN8237的组合使细胞死亡适度增加。在37℃、5％CO2下将A2780细胞以每毫升2×104个细胞接种并且生长于6孔细胞培养皿上过夜。细胞用DMSO(0.05％v／v)、TAK-733(50nM或200nM)、MLN8237(20nM或50nM)或同时用TAK-733和MLN8237处理并且在37℃、5％CO2下培育96(A)或120(B)小时。如方法中所述产生细胞周期概况。将亚二倍体细胞闸分为与2N DNA含量的细胞相比具有较低水平的碘化丙锭荧光的细胞。在此段落中，MLN8237是指钠盐，单水合4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠，并且TAK-733是指3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮。
具体实施方式
本发明提供治疗增生性病症的新颖组合疗法。具体地说，本发明提供一种治疗患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投与MEK抑制剂与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。本发明还提供一种MEK抑制剂与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合，其用于制造用以治疗增生性病症的药剂，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。本发明还提供包含MEK抑制剂与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合的医药组合物和试剂盒。
尽管单一药剂MEK抑制剂和单一药剂奥诺拉A激酶选择性抑制剂可证明对治疗某些患者和某些癌症类型有效，但本发明者意外地发现MEK抑制剂与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合疗法提供任一药剂个别不会实现的效益。
如上文所述，MEK抑制的典型理解是在细胞周期的GO-G1边界完全停滞，由此阻断细胞增生。与此理解相反，本发明者发现用MEK抑制剂处理的细胞通过一个或一个以上细胞周期事件使周期继续。尽管抑制MEK，此继续细胞周期分裂仍出现并且伴随异常细胞周期进程时间和在G1、S以及G2／M阶段内改变的继代速率。本发明者也在一些细胞类型中观测到DNA损伤标记和异常有丝分裂表型的上调。
这些观测与关于MEK在DNA修复中的功能和DNA损伤检查点功能中所报导的作用一致。不希望受理论束缚，本发明者相信MEK抑制会引起归因于诱导与损害DNA损伤反应和细胞周期检查点功能相关的细胞病变的细胞生存力降低。这些细胞病变诱导细胞周期进程减缓并且诱导细胞死亡或最终生长停滞。在MEK抑制剂治疗的直接后果中，发明者报导细胞使周期继续多轮细胞分裂。单一药剂MEK抑制剂处理的此继续循环表型根据文献不直观，并且表明与选择性奥诺拉A抑制剂组合，MEK抑制剂处理将提供附加治疗效益，这是因为在任一药剂的活性不妨碍其它药剂的活性的情况下由于诱导立即细胞周期阻断将扰乱多个点的正常细胞周期进程。相反，典型地认为，预计MEK抑制剂不会与奥诺拉A激酶抑制剂充分组合，这是因为通过MEK抑制诱导的完全并且立即的细胞周期阻断将视为干扰抑制奥诺拉A激酶通过诱导有丝分裂缺陷降低细胞生存力的能力。
定义：
除非另外指出，否则本文所用的术语应符合以下定义的含义。
如本文所用，术语“MEK”是指MAPK激酶家族的成员，其为磷酸化其MAP激酶底物的活化环内的苏氨酸和酪氨酸残基的双特异性酶。此家族中的酶包括MEK1、MEK2、MEK3、MEK4、MEK5、MEK6和MEK7。
术语“MEK抑制剂”或“MEK的抑制剂”用以表示能够与MEK相互作用并且抑制其酶活性的化合物。抑制MEK酶活性意指降低MEK磷酸化底物肽或蛋白质的能力。在多个实施例中，所述MEK活性降低至少约50％，至少约75％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在多个实施例中，降低MEK酶活性所需的MEK抑制剂的浓度小于约1tM、小于约500nM、小于约100nM或小于约50nM。
在一些实施例中，所述抑制具有选择性，即MEK抑制剂以低于产生另一不相关生物效应(例如降低不同激酶的酶活性)所需的抑制剂浓度的浓度降低MEK磷酸化底物肽或蛋白质的能力。在一些实施例中，MEK抑制剂也降低另一激酶，优选涉及癌症的激酶的酶活性。
如本文所用，术语“奥诺拉A激酶”是指涉及有丝分裂进展的丝氨酸／苏氨酸激酶。奥诺拉A激酶也称为AIK、ARK1、AURA、BTAK、STK6、STK7、STK15、AURORA2、MGC34538和AURKA。多种在细胞分裂中起作用的细胞蛋白质是用于通过奥诺拉A激酶磷酸化的底物，包括(但不限于)p53、TPX-2、XIEg5(在非洲爪蟾中)和D-TACC(在果蝇中)。奥诺拉A激酶本身也是用于自磷酸化的底物，例如在Thr288。奥诺拉A激酶优选为人类奥诺拉A激酶。
使用术语“奥诺拉A激酶的抑制剂”或“奥诺拉A激酶抑制剂”表示能够与奥诺拉A激酶相互作用并且抑制其酶活性的化合物。抑制奥诺拉A激酶酶活性意指降低奥诺拉A激酶磷酸化底物肽或蛋白质的能力。在多个实施例中，所述奥诺拉A激酶活性降低至少约75％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在多个实施例中，降低奥诺拉A激酶酶活性所需的奥诺拉A激酶抑制剂的浓度小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM或小于约50nM。抑制奥诺拉A激酶酶活性的浓度优选低于抑制奥诺拉B激酶酶活性所需的抑制剂的浓度。在多个实施例中，降低奥诺拉A激酶酶活性所需的奥诺拉A激酶抑制剂的浓度为降低奥诺拉B激酶酶活性所需的抑制剂的浓度的至少约1／2、至少约1／5、至少约1／10、至少约1／20、至少约1／50、至少约1／100、至少约1／500或至少约1／1000。
抑制奥诺拉A和抑制奥诺拉B产生明显不同的细胞表型。(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.)(2007)104：4106；分子癌症治疗学(2009)8(7)，2046-56；化学与生物学(Chem Biol.)(2008)15(6)552-62)。举例来说，如定量丝氨酸10上的磷酸化组蛋白H3(pHisH3)所测量，在不抑制奥诺拉B下抑制奥诺拉A使有丝分裂指数增加。pHisH3是生理性系统中奥诺拉B的唯一底物(例如完整细胞)。相反，抑制奥诺拉B或双重抑制奥诺拉A与奥诺拉B使pHisH3降低。因此，如本文所用，术语“奥诺拉A激酶选择性抑制剂”或“选择性奥诺拉A激酶抑制剂”是指展现有效抗肿瘤浓度的奥诺拉A激酶抑制剂表型的抑制剂。在一些实施例中，如定量pHisH3所测量，选择性奥诺拉A激酶抑制剂在以使血浆中的游离部分调节浓度(Cave)等于人类在最大耐受剂量(MTD)下于血浆中实现的游离部分调节浓度的剂量投与小鼠时，会引起短暂有丝分裂延迟。如本文所用，“游离部分调节浓度”是指游离药物(未结合蛋白质)的血浆浓度。
如本文所用，术语“组合”是指使用MEK抑制剂与选择性奥诺拉A激酶抑制剂治疗相同患者的相同疾病或病状。如下文所进一步描述，除非明确地指定，否则术语“组合”不会限制MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂的投药时序。
本文使用术语“约”意指大约、在……左右、大致或左右。术语“约”与数值范围结合使用时，可通过在所述数值上下扩展边界值来修饰所述范围。一般来说，本文使用术语“约”以10％偏差在数值上下修饰所述数值。
如本文所用，术语“包含”意指“包括(但不限于)”。
如本文所用，术语“脂肪族”或“脂肪族基”意指完全饱和或含有一个或一个以上不饱和单元，但非芳香族的经取代或未经取代的直链、分支链或环状C1-12烃。举例来说，适当脂肪族基包括经取代或未经取代的直链、分支链或环状烷基、烯基、炔基和其杂合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
单独或作为较大部分的一部分使用的术语“烷基”、“烯基”和“炔基”是指具有1到12个碳原子的直链和分支链脂肪族基。就本发明来说，当连接脂肪族基到分子的其余部分的碳原子为饱和碳原子时，使用术语“烷基”。然而，烷基可包括其它碳原子处的不饱和。因此，烷基包括(但不限于)甲基、乙基、丙基、烯丙基、炔丙基、丁基、戊基和己基。
就本发明来说，当连接脂肪族基到分子的其余部分的碳原子形成碳-碳双键的一部分时，使用术语“烯基”。烯基包括(但不限于)乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、1-戊烯基和1-己烯基。
就本发明来说，当连接脂肪族基到分子的其余部分的碳原子形成碳-碳三键的一部分时，使用术语“炔基”。炔基包括(但不限于)乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、1-戊炔基和1-己炔基。
单独或作为较大部分的一部分使用的术语“环脂肪族”是指具有3到约14个成员的饱和或部分不饱和环状脂肪族环系统，其中所述脂肪族环系统任选地经取代。在一些实施例中，环脂肪族为具有3到8或3到6个环碳原子的单环烃。非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环辛烯基和环辛二烯基。在一些实施例中，环脂肪族为具有6到12、6到10或6到8个环碳原子的桥连或稠合双环烃，其中双环系统中的任何个别环具有3到8个成员。
在一些实施例中，环脂肪族环上的两个邻近取代基连同插入环原子一起形成具有0到3个选自由O、N和S组成的群组的环杂原子的任选地经取代的稠合5到6元芳香族环或3到8元非芳香族环。因此，术语“环脂肪族”包括稠合到一个或一个以上芳基、杂芳基或杂环基环的脂肪族环。非限制性实例包括二氢茚基、5,6,7,8-四氢喹喔啉基、十氢萘基或四氢萘基，其中连接基团或连接点在脂肪族环上。术语“环脂肪族”可与术语“碳环(carbocycle)”、“碳环基(carbocyclyl)”、“碳环(carbocyclo)”或“碳环状(carbocyclic)”互换使用。
“环烷基”意指非芳香族、饱和或部分不饱和单环、双环或多环状环集合。通常使用(Cx)环烷基和(Cx-Y)环烷基，其中X和Y指示环集合中的碳原子数。举例来说，(C3-10)环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、2，5-环己二烯基、双环[2.2.2]辛基、金刚烷-1-基、十氢萘基、侧氧基环己基、二侧氧基环己基、硫基环己基、2-侧氧基双环[2.2.1]庚-1-基等等。在特定实施例中，单独或与另一基团一起表示的“环烷基”可为(C3-14)环烷基、(C3-10)环烷基、(C3-7)环烷基、(C8-10)环烷基或(C5-7)环烷基。或者，单独或与另一基团一起表示的“环烷基”可为(C5)环烷基、(C6)环烷基、(C7)环烷基、(C8)环烷基、(C9)环烷基或(C10)环烷基。
“双环烷基”意指饱和或部分不饱和稠合、螺或桥连双环状环集合。在特定实施例中，单独与另一基团一起表示的“双环烷基”可为(C4-15)双环烷基、(C4-10)双环烷基、(C6-10)双环烷基或(C8-10)双环烷基。或者，单独或与另一基团一起表示的“双环烷基”可为(C8)双环烷基、(C9)双环烷基或(C10)双环烷基。
“双环芳基”意指稠合、螺或桥连双环状环集合，其中构成所述集合的环中的至少一者为芳香族环。通常使用(Cx)双环芳基和(Cx-Y)双环芳基，其中X和Y指示双环状环集合中直接与环连接的碳原子数。在特定实施例中，单独或与另一基团一起表示的“双环芳基”可为(C4-15)双环芳基、(C4-10)双环芳基、(C6-10)双环芳基或(C8-10)双环芳基。或者，单独或与另一基团一起表示的“双环烷基”可为(C8)双环芳基、(C9)双环芳基或(C10)双环芳基。
单独或作为较大部分(例如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”)的一部分使用的术语“芳基”和“芳-”是指包含1到3个环的C6到C14芳香族烃，各环任选地经取代。芳基优选为C6-10芳基。芳基包括(但不限于)苯基、萘基和蒽基。在一些实施例中，芳环上的两个邻近取代基连同插入环原子一起形成具有0到3个选自由O、N和S组成的群组的环杂原子的任选地经取代的稠合5到6元芳香族环或4到8元非芳香族环。因此，如本文所用，术语“芳基”包括芳环稠合到一个或一个以上杂芳基、环脂肪族或杂环基环的基团，其中连接基团或连接点在芳环上。这些稠环系统的非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、芴基、二氢茚基、菲啶基、四氢萘基、吲哚啉基、吩噁嗪基、苯并二氧杂环己烷基和苯并间二氧杂环戊烯基。芳基可为单环、双环、三环或多环，优选为单环、双环或三环，更优选为单环或双环。术语“芳基(aryl)”可与术语“芳基(aryl group)”、“芳基部分”和“芳环”互换使用。
“芳烷基”或“芳基烷基”包含与烷基共价连接的芳基，所述烷基或芳基独立地任选地经取代。芳烷基优选为C6-10芳基(C1-6)烷基、C6-10芳基(C1-4)烷基或C6-10芳基(C1-3)烷基，包括(但不限于)苯甲基、苯乙基和萘甲基。
单独或作为较大部分(例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”)的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指具有5到14个环原子，优选5、6、9或10个环原子；于环排列中共有6、10或14个π电子；并且除碳原子外具有1到4个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫并且包括任何氧化形式的氮或硫以及任何季铵化形式的碱性氮。杂芳基包括(但不限于)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。在一些实施例中，杂芳基上的两个邻近取代基连同插入环原子一起形成具有0到3个选自由O、N和S组成的群组的环杂原子的任选地经取代的稠合5到6元芳香族环或4到8元非芳香族环。因此，如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”也包括杂芳环稠合到一个或一个以上芳基、环脂肪族或杂环基环的基团，其中连接基团或连接点在杂芳环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2，3-b]-1，4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可为单环、双环、三环或多环，优选为单环、双环或三环，更优选为单环或双环。术语“杂芳基(heteroaryl)”可与术语“杂芳环”、“杂芳基(heteroaryl group)”或“杂芳香族”互换使用，这些术语中的任一者包括任选地经取代的环。术语“杂芳烷基”是指经杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地任选地经取代。
如本文所用，术语“杂环”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基(heterocyclic radical)”和“杂环状环”可互换使用并且是指稳定的3到7元单环或指稠合7到10元或桥连6到10元双环杂环部分，其为饱和或部分不饱和并且除碳原子外具有一个或一个以上(优选1到4个)如上所定义的杂原子。当关于杂环的环原子使用时，术语“氮”包括经取代的氮。举例来说，在具有1到3个选自氧、硫或氮的杂原子的杂环基环中，所述氮可为N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N-取代的吡咯烷基中)。可将杂环状环于任何可产生稳定结构的杂原子或碳原子处连接到其侧基并且这些环原子中的任一者都可任选地经取代。这些饱和或部分不饱和杂环基的实例包括(但不限于)四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑啶基、哌嗪基、二氧杂环己烷基、二氧杂环戊烷基、二氮杂环己三烯基、氧杂氮杂环己三烯基、硫杂氮杂环己三烯基、吗啉基和奎宁环基。
在一些实施例中，杂环状环上的两个邻近取代基连同插入环原子一起形成具有0到3个选自由O、N和S组成的群组的环杂原子的任选地经取代的稠合5到6元芳香族环或3到8元非芳香族环。因此，术语“杂环”、“杂环基(heterocyc1yl)”、“杂环基环”、“杂环基(heterocyclic group)”、“杂环部分”和“杂环基(heterocyclic radical)”在本文中可互换使用，并且包括杂环基环稠合到一个或一个以上芳基、杂芳基或环脂肪族环的基团，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接基团或连接点在杂环基环上。杂环基可为单环、双环、三环或多环，优选为单环、双环或三环，更优选为单环或双环。术语“杂环基烷基”是指经杂环基取代的烷基，其中所述烷基和所述杂环基部分独立地任选地经取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指于环原子之间包括至少一个双或三键的环部分。术语“部分不饱和”打算涵盖具有多个不饱和位点的环，但不打算包括如本文所定义的芳基或杂芳基部分。
术语“卤基脂肪族”、“卤基烷基”、“卤基烯基”和“卤基烷氧基”是指视具体情况而定经一个或一个以上卤素原子取代的脂肪族基、烷基、烯基或烷氧基。如本文所用，术语“卤素”或“卤基”意指F、C1、Br或I。术语“氟脂肪族”是指卤素为氟的卤基脂肪族基。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”为聚亚甲基，即-(CH2)n-，其中n为正整数，优选为1到6，1到4，1到3，1到2或2到3。经取代的亚烷基链为聚亚甲基，其中一个或一个以上亚甲基氢原子经取代基置换。适当取代基包括以下关于经取代脂肪族基描述的取代基。亚烷基链也可在一个或一个以上位置经脂肪族基或经取代脂肪族基取代。
“氨基”意指具有两个其它取代基的氮部分，其中例如氢或碳原子与氮连接。举例来说，代表性氨基包括-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NH((C1-10)烷基)、-N((C1-10)烷基)2、-NH(芳基)、-NH(杂芳基)、-N(芳基)2、-N(杂芳基)2等等。任选地，两个取代基连同氮一起也可形成环。除非另外指示，否则含有氨基部分的本发明化合物可包括其经保护的衍生物。氨基部分的适当保护基包括乙酰基、叔丁氧羰基、苯甲氧羰基等等。
“羰基”意指基团-C(=O)-和／或-C(=O)R，其中R为氢或另一取代基。应注意，羰基可进一步经多个取代基取代以形成包括酸、酸卤化物、醛、酰胺、酯和酮的不同羰基。
“羧基”意指基团-C(=O)-O-和／或-C(=O)-OR，其中R为氢或另一取代基。应注意，含有羧基部分的本发明化合物可包括其经保护的衍生物，即其中氧经保护基取代。羧基部分的适当保护基包括苯甲基、叔丁基等等。
“氰基”意指基团-CN。
“硝基”意指基团-NO2。
“羟基”意指基团-OH。
“亚氨基”意指基团-CR(=NR′)和／或-C(=NR′)-，其中R和R′各独立地为氢或另一取代基。
“氧基”意指基团-O-或-OR，其中R为氢或另一取代基。因此，应注意氧基可经多个取代基进一步取代以形成不同氧基，包括羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基或羰氧基。
“亚磺酰基”意指基团-SO-和／或-SO-R，其中R为氢或另一取代基。应注意，亚磺酰基可经多个取代基进一步取代以形成不同亚磺酰基，包括亚磺酸、亚磺酰胺、亚磺酰酯和亚砜。
“磺酰基”意指基团-SO2-和／或-SO2-R，其中R为氢或另一取代基。应注意，磺酰基可经多个取代基进一步取代以形成不同磺酰基，包括磺酸、磺酰胺、磺酸酯和砜。
“硫基”表示用硫置换氧，并且包括(但不限于)含-SR、-S-和=S的基团。
“硫烷基”意指如上所定义的烷基，其例外为其中形成烷基链的一个或一个以上碳原子经硫原子(-S-或-S-R，其中R为氢或另一取代基)置换。举例来说，硫(C1-10)烷基是指包含1到10个碳和一个或一个以上硫原子的链。
“硫羰基”意指基团-C(=S)-和／或-C(=S)-R，其中R为氢或另一取代基。应注意，硫羰基可经多个取代基进一步取代以形成不同硫羰基，包括硫代酸、硫代酰胺、硫代酯和硫代酮。
“可在体内转化为氢的取代基”意指可通过酶学或化学方式(包括(但不限于)水解和氢解)转化为氢原子的任何基团。实例包括可水解基团，例如酰基、具有氧羰基的基团、氨基酸残基、肽残基、邻硝基苯基次磺酰基、三甲基硅烷基、四氢吡喃基、二苯基氧膦基等等。酰基的实例包括甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等等。具有氧羰基的基团的实例包括乙氧羰基、叔丁氧羰基[(CH3)3C-OCO-]、苯甲氧羰基、对甲氧基苯甲氧羰基、乙烯基氧羰基、β-(对甲苯磺酰基)乙氧羰基等等。适当氨基酸残基的实例包括氨基酸残基本身和经保护基保护的氨基酸残基。适当氨基酸残基包括(但不限于)Gly(甘氨酸)、Ala(丙氨酸；CH3CH(NH2)CO-)、Arg(精氨酸)、Asn(天冬酰胺)、Asp(天冬氨酸)、Cys(半胱氨酸)、Glu(谷氨酸)、His(组氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸；(CH3)2CHCH2CH(NH2)CO-)、Lys(赖氨酸)、Met(甲硫氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Ser(丝氨酸)、Thr(苏氨酸)、Trp(色氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Nva(正缬氨酸)、Hse(高丝氨酸)、4-Hyp(4-羟脯氨酸)、5-Hyl(5-羟基赖氨酸)、Orn(鸟氨酸)和β-Ala残基。适当保护基的实例包括通常用于肽合成的保护基，包括酰基(例如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧羰基(例如苯甲氧羰基和对硝基苯甲氧羰基)、叔丁氧羰基[(CH3)3C-OCO-]等等。适当肽残基包括包含2到5个，并且任选地2到3个前述氨基酸残基的肽残基。这些肽残基的实例包括(但不限于)例如Ala-Ala[CH3CH(NH2)CO-NHCH(CH3)CO-]、Gly-Phe、Nva-Nva、Ala-Phe、Gly-Gly、Gly-Gly-Gly、Ala-Met、Met-Met、Leu-Met和Ala-Leu的肽残基。这些氨基酸或肽的残基可以D形、L形或其混合物的立体化学配置呈现。此外，氨基酸或肽残基可具有不对称碳原子。具有不对称碳原子的适当氨基酸残基的实例包括Ala、Leu、Phe、Trp、Nva、Val、Met、Ser、Lys、Thr和Tyr的残基。具有不对称碳原子的肽残基包括具有一个或一个以上具有不对称碳原子的组成氨基酸残基的肽残基。适当氨基酸保护基的实例包括通常用于肽合成中的氨基酸保护基，包括酰基(例如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧羰基(例如苯甲氧羰基和对硝基苯甲氧羰基)、叔丁氧羰基[(CH3)3C-OCO-]等等。“可在体内转化为氢”的取代基的其它实例包括可还原消除的可氢解基团。适当可还原消除的可氢解基团的实例包括(但不限于)芳基磺酰基(例如邻甲苯磺酰基)；经苯基或苯甲氧基取代的甲基(例如苯甲基、三苯甲基和苯甲氧基甲基)；芳基甲氧羰基(例如苯甲氧羰基和邻甲氧基-苯甲氧羰基)；以及卤基乙氧羰基(例如β,β，β-三氯乙氧羰基和β-碘乙氧羰基)。
具有以虚线键表示的式的化合物打算包括任选地具有0个、一个或一个以上双键的式，如下文所例示并且展示：
表示
等。
如本文所用，术语“经取代”意指指定部分的氢基经特定取代基的基团替换，其限制条件为取代反应产生稳定或化学上可行的化合物。如本文所用，短语“一个或一个以上取代基”是指取代基数量等于1到基于可用键结位点的数量可能存在的最大取代基数量，其限制条件为满足上述稳定性和化学可行性条件。除非另外指出，否则视任选地经取代的基团可在所述基团的每一可取代的位置具有取代基，并且取代基可相同或不同。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等等的芳基部分)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳烷氧基等等的杂芳基部分)可含有一个或一个以上取代基。芳基或杂芳基的不饱和碳原子上的适当取代基的实例包括-卤基、-NO2、-CN、-R*、-C(R*)=C(R*)2、-C≡C-R*、-OR*、-SR°、-S(O)R°、-SO2R°、-SO3R°、-SO2N(R+)2、-N(R+)2、-NR+C(O)R*、-NR+C(O)N(R+)2、-NR+CO2R°、-O-CO2R*、-OC(O)N(R+)2、-O-C(O)R*、-CO2R*、-C(O)-C(O)R*、-C(O)R*、-C(O)N(R+)2、-C(O)N(R+)C(=NR+)-N(R+)2、-N(R+)C(=NR+)-N(R+)-C(O)R*、-C(=NR+)-N(R+)2、-C(=NR+)-OR*、-N(R+)-N(R+)2、-N(R+)C(=NR+)-N(R+)2、-NR+SO2R°、-NR+SO2N(R+)2、-P(O)(R*)2、-P(O)(OR*)2、-O-P(O)-OR*和-P(O)(NR+)-N(R+)2；或两个邻近取代基连同其插入原子一起形成具有0到3个选自由N、O和S组成的群组的环原子的5到6元不饱和或部分不饱和环。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等等的芳基部分)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳烷氧基等等的杂芳基部分)可含有一个或一个以上取代基。芳基或杂芳基的不饱和碳原子上的适当取代基的实例包括-卤基、-NO2、-CN、-R*、-C(R*)=C(R*)2、-C≡C-R*、-OR*、-SR°、-S(O)R°、-SO2R°、-SO3R°、-SO2N(R+)2、-N(R+)2、-NR+C(O)R*、-NR+C(O)N(R+)2、-NR+CO2R°、-O-CO2R*、-OC(O)N(R+)2、-O-C(O)R*、-CO2R*、-C(O)-C(O)R*、-C(O)R*、-C(O)N(R+)2、-C(O)N(R+)C(=NR+)-N(R+)2、-N(R+)C(=NR+)-N(R+)-C(O)R*、-C(=NR+)-N(R+)2、-C(=NR+)-OR*、-N(R+)-N(R+)2、-N(R+)C(=NR+)-N(R+)2、-NR+SO2R°、-NR+SO2N(R+)2、-P(O)(R*)2、-P(O)(OR*)2、-O-P(O)-OR*和-P(O)(NR+)-N(R+)2；或两个邻近取代基连同其插入原子一起形成具有0到3个选自由N、O和S组成的群组的环原子的5到6元不饱和或部分不饱和环。
每一R+独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基，或同一氮原子上的两个R+连同所述氮原子一起形成5到8元芳香族或非芳香族环，除所述氮原子外所述5到8元芳香族或非芳香族环还具有0到2个选自N、O和S的环杂原子。每一R*独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基。每一R°为任选地经取代的脂肪族基或芳基。
脂肪族基或非芳香族杂环状环可经一个或一个以上取代基取代。脂肪族基或非芳香族杂环状环的饱和碳上的适当取代基的实例包括(但不限于)上文关于芳基或杂芳基的不饱和碳所列举的取代基和以下：=O、=S、=C(R*)2、=N-N(R*)2、=N-OR*、=N-NHC(O)R*、=N-NHC02R°、=N-NHSO2R°或=N-R*，其中每一R*和R°如上文所定义。
非芳香族杂环状环的氮原子上的适当取代基包括-R*、-N(R*)2、-C(O)R*、-CO2R*、-C(O)-C(O)R*、-C(O)CH2C(O)R*、-SO2R*、-SO2N(R*)2、-C(=S)N(R*)2、-C(=NH)-N(R*)2和-NR*SO2R*；其中每一R*如上文所定义。
除非另外说明，否则本文所述结构意指包括其区别仅在于存在一个或一个以上同位素增浓原子的化合物。举例来说，除以氘或氚替换氢原子，或以13C或14C增浓碳替换碳原子外具有本发明结构的化合物在本发明的范围内。
所属领域的技术人员将了解，某些本文所述化合物可以互变异构形式存在，化合物的所有这些互变异构形式都在本发明的范围内。除非另外说明，否则本文所述的结构也意指包括所述结构的所有立体化学形式；即，每一不对称中心的Ｒ和S配置。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体与非对映异构体混合物在本发明的范围内。
任何能够抑制MEK的酶活性的分子都可用于本发明的方法、医药组合物和试剂盒中。在一些实施例中，MEK抑制剂为小分子量化合物。这些化合物的实例包括(但不限于)WO08／079814、WO10／059503和2011年4月20日提交的美国申请案第61／477，196号(所有文献都以全文引用的方式并入本文中)中所公开的化合物，3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)、PD98059、U0126、Ro09-2210、CI-1040(辉瑞(Pfizer)-先前为PD184352)、PD0325901(辉瑞)、AZD6244(艾瑞制药(Array BioPharma)／阿斯利康(AstraZeneca)-先前为ARRY-142886)、GDC-0973(爱克利斯(Exelixis)／基因泰克(Genentech)-先前为XL518)、AR-119／RDEA119(阿迪亚生物技术(Ardea Biosciences)／拜尔(Bayer)-先前为BAY869766)、GSK1120212(葛兰素史克(GlaxoSmithKline))、AZD8330(艾瑞制药／阿斯利康)、RO5126766、RO4987655、RO4927350、RO5068760(罗氏霍夫曼(Hoffmann La Roche))、AS703026、AS-701173和AS-701255(EMD雪兰诺(EMD Serono))。也适用于本发明的方法、医药组合物和试剂盒的为任一这些化合物的溶剂化和水合形式。也适用于本发明的方法、医药组合物和试剂盒的为任一化合物的药学上可接受的盐以及这些盐的溶剂化和水合形式。这些MEK抑制剂可以有机合成领域的技术人员众所周知的多种方式来制备，包括(但不限于)本文所提及的参考文献中详细描述的合成方法。
在一些实施例中，本发明的MEK抑制剂为ATP竞争性MEK抑制剂、非ATP竞争性MEK抑制剂或ATP非竞争性MEK抑制剂。在某些实施例中，MEK抑制剂为非ATP竞争性异位抑制剂。在其它实施例中，MEK抑制剂例如通过干扰mRNA稳定性或翻译抑制基因表达。在一些其它实施例中，MEK抑制剂为小干扰RNA(siRNA)(也称为短干扰RNA、沉默RNA)、短发夹RNA(shRNA)或小发夹RNA。
可在体外或体内分析MEK抑制剂选择性结合于MEK和／或抑制MEK的能力。体外分析包括测定选择性抑制MEK磷酸化底物蛋白质或肽的能力的分析。替代体外分析定量化合物选择性结合于MEK的能力。选择性抑制剂结合可通过在结合前放射性标记抑制剂、分离抑制剂／MEK复合物以及测定结合的放射性标记的量来测量。或者，选择性抑制剂结合可通过运作竞争实验来测定，其中用结合于己知放射性配体的MEK培育新颖抑制剂。也可分析化合物影响MEK活性所介导的细胞或生理功能的能力。每一这些活性的分析都在所属领域中己知。
在一些实施例中，MEK抑制剂为由式(I)表示的化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
X1和X2各独立地选自由CR6R7、CO、CS和NR8组成的群组；
X3和X4各独立地选自由CR7和N组成的群组；
X5选自由CR6R7、CS和NR8组成的群组；
R1选自由以下各物组成的群组：(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代；
R2为氢或可体内转化为氢的取代基；
R3选自由以下各物组成的群组：氢、氧基、羟基、羰氧基、烷氧基、羟基烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羟基(C1-10)烷基、氨基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，其限制条件为当R3所结合的原子形成双键的一部分时，R3不存在；
R4选自由以下各物组成的群组：氢、氧基、羟基、羰氧基、(C1-10)烷氧基、(C4-12)芳氧基、杂(C1-10)芳氧基、羰基、氧羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、酰胺基、(C1-10)烷基酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羟基(C1-10)烷基、酰胺基(C1-10)烷基、羰基(C1-10)烷基、硫羰基(C1-10)烷基、磺酰基(C1-10)烷基、亚磺酰基(C1-10)烷基、(C1-10)氮杂烷基、亚氨基(C1-10)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-10)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂(C1-10)芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C1-10)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，其限制条件为当R4所结合的原子形成双键的一部分时，R4不存在；
R5选自由以下各物组成的群组：氢、氧基、羟基、羰氧基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、羰基、氧羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，或R5和R4一起形成经取代或未经取代的环，其限制条件为当R5所结合的原子形成双键的一部分时，R5不存在；
R6和R7各独立地选自由以下各物组成的群组：氢、卤基、氰基、杂芳氧基、羰基、氧羰基、氨基羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，或R7和R5一起形成经取代或未经取代的环，其限制条件为当R7所结合的原子形成双键的一部分时，R7不存在；以及
R8选自由以下各物组成的群组：氢、氧基、羟基、羰氧基、(C1-10)烷氧基、(C4-12)芳氧基、杂(C1-10)芳氧基、羰基、氧羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羟基(C1-10)烷基、羰基(C1-10)烷基、硫羰基(C1-10)烷基、磺酰基(C1-10)烷基、亚磺酰基(C1-10)烷基、(C1-10)氮杂烷基、亚氨基(C1-10)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-10)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂(C1-10)芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C1-10)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，其限制条件为当R8所结合的原子形成双键的一部分时，R8不存在。
在一些实施例中，MEK抑制剂为由式(IA)表示的化合物：
或其互变异构体、对映异构体或药学上可接受的盐，其中：
X1为CR6；
X5为CR6；
R1为未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C4-12)芳基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的磺酰基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的亚磺酰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的卤基(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的羟基(C1-10)烷基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；
R3选自由以下各物组成的群组：氢；羟基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C1-10)烷氧基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的羟基(C1-10)烷氧基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C1-10)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；本身具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的卤基(C1-12)烷基：硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-12)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；本身具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的羟基(C1-10)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的氨基(C1-10)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C3-12)环烷基(C1-5)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基，其中杂(C3-12)环烷基选自由哌啶基、4-吗啉基、4-哌嗪基、吡咯烷基、1，3-二氧杂环己烷基和1，4-二氧杂环己烷基组成的群组并且未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的芳基(C1-10)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；杂芳基(C1-5)烷基，其中杂芳基选自由呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、1，2，3-噁二唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啉基、噻唑基、1，3，4-噻二唑基、三唑基和四唑基组成的群组并且未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C3-12)环烷基：卤基；硝基；氰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；以及(C1-10)烷基；未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C4-12)芳基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的磺酰基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的亚磺酰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的卤基(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的羟基(C1-10)烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；杂(C1-10)芳基，其中所述杂芳基选自由呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、1，2，3-噁二唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啉基、噻唑基、1，3，4-噻二唑基、三唑基和四唑基组成的群组并且未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；
R5为未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C1-6)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；
R6各独立地选自由以下各物组成的群组：氢；卤基；未经取代或经一个或一个以上(C1-10)烷基取代的氨基；以及未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C1-5)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基。
在一些实施例中，对于式(IA)化合物来说，X1上的R6为卤基。
在一些其它实施例中，对于式(IA)化合物来说，X1上的R6为氢。
在其它实施例中，对于式(IA)化合物来说，X5上的R6为卤基。
在其它实施例中，对于式(IA)化合物来说，X5上的R6为未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基通过可用原子价取代的(C1-5)烷基：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基。
在其它实施例中，对于式(IA)化合物来说，X5上的R6为氢。
在其它实施例中，对于式(IA)化合物来说，R1包含：
其中：
R14a、R14b、R14c、R14d和R14e各独立地选自由以下各物组成的群组：氢；卤基；氰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-3)烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、(C1-10)烷氧基、氨基(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的羟基(C1-3)烷基。
在一些实施例中，MEK抑制剂为由式(II)表示的化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
m选自由0、1、2、3、4和5组成的群组；
n选自由1、2、3、4、5和6组成的群组；
R11选自由以下各物组成的群组：氢、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代；
每一R12和R13独立地选自由以下各物组成的群组：氢、卤基、硝基、氰基、硫基、氧基、羟基、羰氧基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、羰基、氧羰基、氨基羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代；以及
每一R14独立地选自由以下各物组成的群组：氢、卤基、硝基、氰基、硫基、氧基、羟基、羰氧基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、羰基、氧羰基、氨基羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，或两个R14一起形成经取代或未经取代的环。
表1提供式(I)化合物的特定实例的化学名称。
表1.式(I)化合物的实例
式(I)、式(IA)和式(II)的化合物在所属领域中己知并且可通过WO2008／079814的方法来制备，所述文献以全文引用的方式并入本文中。在一个实施例中，式(I)、式(IA)或式(II)的化合物为3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)或其药学上可接受的盐。
任何能够选择性抑制奥诺拉A激酶的酶活性的分子都可用于本发明的方法、医药组合物和试剂盒中。在一些实施例中，选择性奥诺拉A激酶的抑制剂为小分子量化合物。具体地说，奥诺拉A激酶的选择性抑制剂包括本文所述化合物，以及例如美国公开案第2008／0045501号、美国专利第7,572,784号、WO05／111039、WO08／021038、美国专利第7,718,648号、WO08／063525、美国公开案第2008／0167292号、美国专利第8,026,246号、WO10／134965、美国公开案第2010／0310651号、WO11／014248、美国公开案第2011／0039826号和美国公开案第2011／0245234号所公开的化合物，每一者以全文引用的方式并入本文中，以及化合物4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠、KW-2449(共和(Kyowa))、ENMD-2076(爱蒙(EntreMed))和MK-5108(沃德斯(Vertex)／默克(Merck))。也适用于本发明的方法、医药组合物和试剂盒的为任一这些化合物的溶剂化形式和水合形式。也适用于本发明的方法、医药组合物和试剂盒的为任一这些化合物的药学上可接受的盐以及这些盐的溶剂化和水合形式。这些选择性奥诺拉A激酶抑制剂可以有机合成领域的技术人员众所周知的多种方式制备，包括(但不限于)本文所提及的参考文献中详细描述的合成方法。
可在体外或体内分析奥诺拉A激酶抑制剂选择性结合于和／或抑制奥诺拉A激酶的能力。体外分析包括测定选择性抑制奥诺拉A激酶磷酸化底物蛋白质或肽的能力的分析。替代性体外分析定量所述化合物选择性结合于奥诺拉A激酶的能力。选择性抑制剂的结合可通过在结合前放射性标记抑制剂、分离抑制剂／奥诺拉A激酶复合物以及测定结合的放射性标记的量来测量。或者，选择性抑制剂的结合可通过进行竞争实验测定，其中新颖抑制剂与结合于己知放射性配体的奥诺拉A激酶一起培育。也可分析这些化合物影响奥诺拉A激酶活性所介导的细胞或生理功能的能力。为评估对奥诺拉A激酶的选择性优于对奥诺拉B激酶，也可使用类似于上文关于奥诺拉A激酶所述的分析，分析抑制剂在体外和体内选择性结合于和／或抑制奥诺拉B激酶的能力。可通过pHisH3的免疫荧光检测分析抑制剂在体外和体内抑制奥诺拉A激酶而不抑制奥诺拉B激酶的能力。(美国国家科学院院刊(2007)104，4106)。每一这些活性的分析在所属领域中己知。
在一些实施例中，选择性奥诺拉A激酶抑制剂为由式(III)表示的化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
环A为经取代或未经取代的5或6元芳基、杂芳基、环脂肪族或杂环基环；
环B为经取代或未经取代的芳基、杂芳基、环脂肪族或杂环基环；
环C为经取代或未经取代的芳基、杂芳基、杂环基或环脂肪族环；
Re为氢、-OR5、-N(R4)2、-SR5或任选地经R3或R7取代的C1-3脂肪族基；
每一Rx和Ry独立地为氢、氟或任选地经取代的C1-6脂肪族基；或Rx和Ry连同其所连接的碳原子一起形成任选地经取代的3到6元环脂肪族环；
每一R3独立地选自由以下各物组成的群组：-卤基、-OH、-O(C1-3烷基)、-CN、-N(R4)2、-C(O)(C1-3烷基)、-CO2H、-CO2(C1-3烷基)、-C(O)NH2和-C(O)NH(C1-3烷基)；
每一R4独立为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；或同一氮原子上的两个R4连同所述氮原子一起形成任选地经取代的5到6元杂芳基或4到8元杂环基环，除所述氮原子外，还具有0-2个选自N、O和S的环杂原子；
每一R5独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；以及
每一R7独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基。
环A为经取代或未经取代的5或6元芳基、杂芳基、环脂肪族或杂环基环。环A的实例包括呋喃基(furano)、二氢呋喃基(dihydrofurano)、噻吩基(thieno)、二氢噻吩基(dihydrothieno)、环戊烯基(cyclopenteno)、环己烯基(cyclohexeno)、2H-吡咯基(2H-pyrrolo)、吡咯基(pyrrolo)、吡咯啉基(pyrrolino)、吡咯烷基(pyrrolidino)、噁唑基(oxazolo)、噻唑基(thiazolo)、咪唑基(imidazolo)、咪唑啉基(imidazolino)、咪唑烷基(imidazolidino)、吡唑基(pyrazolo)、吡唑啉基(pyrazolino)、吡唑烷基(pyrazolidino)、异噁唑基(isoxazolo)、异噻唑基(isothiazolo)、噁二唑基(oxadiazolo)、三唑基(triazolo)、噻二唑基(thiadiazolo)、2H-吡喃基(2H-pyrano)、4H-吡喃基、苯基(benzo)、吡啶基(pyridino)、哌啶基(piperidino)、二氧杂环己烷基(dioxano)、吗啉基(morpholino)、二噻烷基(dithiano)、硫吗啉基(thiomorpholino)、哒嗪基(pyridazino)、嘧啶基(pyrimidino)、吡嗪基(pyrazino)、哌嗪基(piperazino)和三嗪基(triazino)，任一这些基团可经取代或未经取代。环A的优选涵义包括(但不限于)选自由以下各物组成的群组的经取代或未经取代的环：呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。
环A可经取代或未经取代。在一些实施例中，环A中的每一可取代饱和环碳原子未经取代或经=O、=S、=C(R5)2、=N-N(R4)2、=N-OR5、=N-NHC(O)R5、=N-NHCO2R6、=N-NHSO2R6、=N-R5或-Rb取代，其中Rb、R4、R5和R6如下文所定义。环A中的每一可取代不饱和环碳原子未经取代或经-Rb取代。环A中的每一可取代环氮原子未经取代或经-R9b取代，并且任选地将环A中的一个环氮原子氧化。每一R9b独立地为-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-CO2R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2或任选地经R3或R7取代的C1-4脂肪族基。
每一Rb独立地为R2b、任选地经取代的脂肪族基或任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基；或两个邻近Rb连同插入环原子一起形成具有0到3个选自由O、N和S组成的群组的环杂原子的任选地经取代的稠合4到8元芳香族或非芳香族环。
每一R2b独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C(R5)=C(R5)(R10)、-C≡C-R5、-C≡C-R10、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2，其中变量R4、R5和R7具有上文所述的涵义；每一R6独立地为任选地经取代的脂肪族基或芳基；并且每一R10独立地为-CO2R5或-C(O)N(R4)2。
在一些实施例中，环A经0到2个取代基Rb取代。在一些这些实施例中，每一Rb独立地为C1-3脂肪族基或R2b，并且每一R2b独立地选自由-卤基、-NO2、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5和-N(R4)2组成的群组。在一些实施例中，每一Rb独立地选自由-卤基、C1-3脂肪族基、C1-3氟脂肪族基和-OR5组成的群组，其中R5为氢或C1-3脂肪族基。在某些优选实施例中，环A经0、1或2个独立地选自由氯、氟、溴、甲基、三氟甲基和甲氧基组成的群组的取代基、优选经0或1个取代基取代。
在一些实施例中，环B为选自由以下各物组成的群组的经取代或未经取代的单环或双环芳基或杂芳基环：呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和蝶啶基。
环B中的每一可取代饱和环碳原子未经取代或经=O、=S、=C(R5)2、=N-N(R4)2、=N-OR5、=N-NHC(O)R5、=N-NHCO2R6、=N-NHSO2R6、=N-R5或-Rc取代。环B中的每一可取代不饱和环碳原子未经取代或经-Rc取代。环B中的每一可取代环氮原子未经取代或经-R9c取代，并且环B中的一个环氮原子任选地经氧化。每一R9c独立地为-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-CO2R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2或任选地经R3或R7取代的C1-4脂肪族基。环B可未经取代或可在任何一个或一个以上其组分环上经取代，其中取代基可相同或不同。在一些实施例中，环B经0到2个独立选择的Rc和0到3个独立选择的R2c或C1-6脂肪族基取代。变量R3、R4、R5、R6和R7如上文关于环A所定义并且下文定义Rc和R2c。
每一Rc独立地为R2c、任选地经取代的C1-6脂肪族基或任选地经取代的芳基、杂芳基或杂环基。
每一R2c独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C(R5)=C(R5)(R10)、-C≡C-R5、-C≡C-R10、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2。
在一些实施例中，环B为经0到2个独立选择的Rc和0到2个独立选择的R2c或C1-6脂肪族基取代的单环5或6元芳基或杂芳基环。在某些这些实施例中，环B为经取代或未经取代的苯基或吡啶基环。
在一些实施例中，环B经0到2个取代基Rc取代。在一些这些实施例中，每一Rc独立地为C1-3脂肪族基或R2c，并且每一R2c独立地选自由-卤基、-NO2、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5和-N(R4)2组成的群组。在一些实施例中，每一Rc独立地选自由-卤基、C1-3脂肪族基、C1-3卤基脂肪族基和-OR5组成的群组，其中R5为氢或C1-3脂肪族基。在某些优选实施例中，环B经0、1或2个独立地选自由氯、氟、溴、甲基、三氟甲基和甲氧基组成的群组的取代基取代。
环C中的每一可取代饱和环碳原子未经取代或经=O、=S、=C(R5)2、=N-N(R4)2、=N-OR5、=N-NHC(O)R5、=N-NHCO2R6、=N-NHSO2R6、=N-R5或-Rd取代。环C中的每一可取代不饱和环碳原子未经取代或经-Rd取代。环C中的每一可取代环氮原子未经取代或经-R9d取代，并且任选地将环C中的环氮原子氧化。每一R9d独立地为-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-CO2R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2或任选地经R3或R7取代的C1-4脂肪族基。环C可未经取代或可在任何一个或一个以上其组分环上经取代，其中取代基可相同或不同。在一些实施例中，环C经0到2个独立选择的Rd和0到3个独立选择的R2d或C1-6脂肪族基取代。变量R3、R4、R5、R6和R7如上文关于环A和环B所述。下文描述变量Rd和R2d。
每一Rd独立地为R2d、任选地经取代的脂肪族基或任选地经取代的芳基、杂芳基或杂环基。
每一R2d独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C(R5)=C(R5)2(R10)、-C≡C-R5、-C≡C-Rm、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-S02N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2。另外，R2d可为-SO3R5、-C(O)N(R4)C(=NR4)-N(R4)2或-N(R4)C(=NR4)-N(R4)-C(O)R50
在一些实施例中，环C为经0到2个独立选择的取代基Rd和0到2个独立选择的R2d或C1-6脂肪族基取代的单环5或6元芳基或杂芳基环。在一些这些实施例中，环C为选自由吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基和噁唑基组成的群组的任选地经取代的杂芳基环。在一些其它实施例中，环C为经取代或未经取代的苯基环。在一些实施例中，环C为经0、1或2个如上文所定义的取代基Rd取代的单环5或6元芳基或杂芳基环。
在一些其它实施例中，环C为经0到2个独立选择的取代基Rd和0到2个独立选择的R2d或C1-6脂肪族基取代的单环5或6元杂环基或环脂肪族环。
在一些实施例中，选择性奥诺拉A激酶抑制剂为由式(IV)表示的化合物：
或其药学上可接受的盐；
其中：
Re为氢或任选地经R3或R7取代的C1-3脂肪族基；
环A经0到3个Rb取代；
每一Rb独立地选自由C1-6脂肪族基、R2b、R7b、-T1-R2b和-T1-R7b组成的群组；
每一R2b独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2；
每-R7b独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基；
环B经0到2个独立选择的Rc和0到2个独立地选择的R2c或C1-6脂肪族基取代；
每一Rc独立地选自由C1-6脂肪族基、R2c、R7c、-T1-R2c和-T1-R7c组成的群组；
每一R2c独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2；
每一R7c独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基；
T1为任选地经R3或R3b取代的C1-6亚烷基链，其中T1或其一部分任选地形成3到7元环的一部分；
环C经0到2个独立选择的Rd和0到3个独立选择的R2d或C1-6脂肪族基取代；
每一Rd独立地选自由C1-6脂肪族基、R2d、R7d、-T2-R2d、-T2-R7d、-V-T3-R2d和-V-T3-R7d组成的群组；
T2为任选地经R3或R3b取代的C1-6亚烷基链，其中所述亚烷基链任选地杂有-C(R5)=C(R5)-、-C≡C-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-SO2N(R4)-、-N(R4)-、-N(R4)C(O)-、-NR4C(O)N(R4)-、-N(R4)CO2-、-C(O)N(R4)-、-C(O)-、-C(O)-C(O)-、-CO2-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R4)-、-N(R4)-N(R4)-、-N(R4)SO2-或-SO2N(R4)-，并且其中T2或其一部分任选地形成3到7元环的一部分；
T3为任选地经R3或R3b取代的C1-6亚烷基链，其中所述亚烷基链任选地杂有-C(R5)=C(R5)-、-C≡C-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-SO2N(R4)-、-N(R4)-、-N(R4)C(O)-、-NR4C(O)N(R4)-、-N(R4)CO2-、-C(O)N(R4)-、-C(O)-、-C(O)-C(O)-、-CO2-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R4)-、-N(R4)-N(R4)-、-N(R4)SO2-或-SO2N(R4)-，并且其中T3或其一部分任选地形成3到7元环的一部分；
V为-C(R5)=C(R5)-、-C≡C-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-SO2N(R4)-、-N(R4)-、-N(R4)C(O)-、-NR4C(O)N(R4)-、-N(R4)CO2-、-C(O)N(R4)-、-C(O)-、-C(O)-C(O)-、-CO2-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R4)-、-C(NR4)=N-、-C(OR5)=N-、-N(R4)-N(R4)-、-N(R4)SO2-、-N(R4)SO2N(R4)-、-P(O)(R5)-、-P(O)(OR5)-O-、-P(O)-O-或-P(O)(NR5)-N(R5)-；
R2d为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2；以及
每一R7d独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基。
每一R3独立地选自由以下各物组成的群组：-卤基、-OH、-O(C1-3烷基)、-CN、-N(R4)2、-C(O)(C1-3烷基)、-CO2H、-CO2(C1-3烷基)、-C(O)NH2和-C(O)NH(C1-3烷基)；
每一R3b独立地为任选地经R3或R7取代的C1-3脂肪族基，或同一碳原子上的两个取代基R3b连同其所连接的碳原子一起形成3到6元碳环；
每一R4独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；或同一氮原子上的两个R4连同所述氮原子一起形成任选地经取代的5到8元杂芳基或杂环基环，除所述氮原子外，还具有0到2个选自N、O和S的环杂原子；
每一R5独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；
每一R6独立地为任选地经取代的脂肪族或芳基；以及
每一R7独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基。
表2提供式(IV)化合物的特定实例的化学名称。
表2.式(I㈡化合物的实例
在一些实施例中，选择性奥诺拉A激酶抑制剂由式(V)表示：
或其药学上可接受的盐；
其中：
Ra选自由C1-3脂肪族基、C1-3氟脂肪族基、-R1、-T-R1、-R2和-T-R2组成的群组；
T为任选地经氟取代的C1-3亚烷基链；
R1为任选地经取代的芳基、杂芳基或杂环基；
R2选自由卤基、-C≡C-R3、-CH=CH-R3、-N(R4)2和-OR5组成的群组；
R3为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；
每一R4独立为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；或同一氮原子上的两个R4连同所述氮原子一起形成任选地经取代的5到6元杂芳基或4到8元杂环基环，除所述氮原子外，还具有0到2个选自N、O和S的环杂原子；
R5为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；以及
Rb选自由氟、氯、-CH3、-CF3、-OH、-OCH3、-OCF3、-OCH2CH3和-OCH2CF3组成的群组。
在-些实施例中，R1为任选地经1或2个独立地选自由卤基、C1-3脂肪族基和C1-3氟脂肪族基组成的群组的取代基取代的5或6元芳基、杂芳基或杂环基环。在某些实施例中，R1为任选地经1或2个独立地选自由卤基、C1-3脂肪族基和C1-3氟脂肪族基组成的群组的取代基取代的苯基、呋喃基、吡咯烷基或噻吩基环。
在一些实施例中，R3为氢、C1-3脂肪族基、C1-3氟脂肪族基或-CH2-OCH3。
在一些实施例中，R5为氢、C1-3脂肪族基或C1-3氟脂肪族基。
在某些实施例中，Ra为卤基、C1-3脂肪族基、C1-3氟脂肪族基、-OH、-O(C1-3脂肪族基)、-O(C1-3氟脂肪族基)、-C≡C-R3、-CH=CH-R3或任选地经取代的吡咯烷基、噻吩基、呋喃基或苯基环，其中R3为氢、C1-3脂肪族基、C1-3氟脂肪族基或-CH2-OCH3。在某些特定实施例中，Ra选自由以下各物组成的群组：氯、氟、C1-3脂肪族基、C1-3氟脂肪族基、-OCH3、-OCF3、-C≡C-H、-C≡C-CH3、-C≡C-CH2OCH3、-CH=CH2、-CH=CHCH3、N-甲基吡咯烷基、噻吩基、甲基噻吩基、呋喃基、甲基呋喃基、苯基、氟苯基和甲苯基。在某些实施例中，Ra为任选地经1或2个独立地选自由卤基、C1-3脂肪族基和C1-3氟脂肪族基组成的群组的取代基取代的苯基、呋喃基、吡咯烷基或噻吩基环。
表3提供式(V)化合物的特定实例的化学名称。
表3.式(V)化合物的实例
在一个实施例中，式(III)、式(IV)或式(V)的化合物为4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸(阿利色替(alisertib)(MLN8237))或其药学上可接受的盐。在一个特定实施例中，式(III)、式(IV)或式(V)的化合物为4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠。在另一个实施例中，式(III)、式(IV)或式(V)的化合物为单水合4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠。在另一个实施例中，式(III)、式(IV)或式(V)的化合物为如以全文引用的方式并入本文中的US公开案第2008／0167292号、美国专利第8,026,246号和美国公开案第201I／0245234号所述的4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠2型多晶型物。
在另一方面，本发明提供一种抑制细胞生长／细胞增生的方法，其包含使细胞与MEK抑制剂(如本文所述)与奥诺拉A激酶的选择性抑制剂(如本文所述)的组合接触。在一个实施例中，本发明提供一种抑制细胞生长／细胞增生的方法，其包含使细胞与MEK抑制剂与奥诺拉A激酶的选择性抑制剂(例如4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠)的组合接触。在另一个实施例中，本发明提供一种抑制细胞生长／细胞增生的方法，其包含使细胞与MEK抑制剂(例如3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮或其药学上可接受的盐)与奥诺拉A激酶的选择性抑制剂的组合接触。
根据本发明的方法优选抑制所接触细胞的细胞增生。使用短语“抑制细胞增生”表示与未与抑制剂接触的细胞相比，MEK抑制剂和／或奥诺拉A激酶的选择性抑制剂抑制所接触细胞中细胞数量或细胞生长的能力。细胞增生可通过使用细胞计数器计数细胞或通过细胞生存力分析(例如BrdU、MTT、XTT或WST分析)来评估。在细胞于实体生长(例如实体瘤或器官)的情况下，所述细胞增生的评估可通过例如用测径规测量生长并且比较接触细胞与未接触细胞的生长的尺寸进行。
优选地，与未接触细胞的生长相比，与MEK抑制剂和奥诺拉A激酶的选择性抑制剂接触的细胞的生长阻滞至少约50％。在各个实施例中，与未接触细胞相比，接触细胞的细胞增生抑制至少约75％，至少约90％，或至少约95％。在一些实施例中，短语“抑制细胞增生”包括与未接触细胞相比，接触细胞的数量减少。因此，抑制接触细胞中细胞增生的MEK抑制剂和／或奥诺拉A激酶的选择性抑制剂可诱导接触细胞经历生长阻滞、经历生长停滞、经历程序性细胞死亡(即细胞凋亡)或经历坏死性细胞死亡。
在另一方面，本发明提供一种包含i)MEK抑制剂(如本文所述)；以及ii)奥诺拉A激酶选择性抑制剂(如本文所述)的医药组合物。在一些实施例中，MEK抑制剂选自由以下各物组成的群组：a)式(I)、式(II)和式(IIA)的化合物；b)例如以全文引用的方式并入本文中的WO08／079814、WO10／059503和2011年4月20日提交的美国申请案第61／477，196号中所公开的化合物，3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮、PD98059、U0126、Ro09-2210、CI-1040(辉瑞-先前为PD184352)、PD0325901(辉瑞)、AZD6244(艾瑞制药／阿斯利康-先前为ARRY-142886)、GDC-0973(爱克利斯／基因泰克-先前为XL518)、AR-119／RDEA119(阿迪亚生物技术／拜尔-先前为BAY869766)、GSK1120212(葛兰素史克)、AZD8330(艾瑞制药／阿斯利康)、R05126766、R04987655、R04927350、R05068760(罗氏霍夫曼)、AS703026、AS-701173和AS-701255(EMD雪兰诺)；以及c)其药学上可接受的盐。在一些实施例中，奥诺拉A激酶选择性抑制剂选自由以下各物组成的群组：a)式(III)、式(IV)和式(V)的化合物；b)例如美国公开案第2008／0045501号、美国专利第7,572,784号、WO05／111039、WO08／021038、美国专利第7,718,648号、WO08／063525、美国公开案第2008／0167292号、美国专利第8,026,246号、WO10／134965、美国公开案第2010／0310651号、WO11／014248、美国公开案第2011／0039826号和美国公开案第2011／0245234号中所公开的化合物；c)4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠、KW-2449(共和)、ENMD-2076(爱蒙)和MK-5108(沃德斯／默克)；以及d)任一上述的药学上可接受的盐。
如果这些组合物中利用MEK抑制剂或奥诺拉A激酶选择性抑制剂的药学上可接受的盐，那么所述盐优选由无机酸或碱或有机酸或碱衍生。对于适当盐的评述，参见例如贝尔热(Berge)等人，药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)66∶1-19(1977)和雷明顿：药物科学与实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，第20版，真纳罗(A.Gennaro)编，利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司(Lippincott Williams＆Wilkins)，2000。
适当酸加成盐的非限制性实例包括以下：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基-丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。
适当碱加成盐包括(但不限于)铵盐；碱金属盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；与有机碱形成的盐，这些有机碱例如二环己胺、N-甲基-D-葡萄胺、叔丁基胺、乙二胺、乙醇胺和胆碱；以及与氨基酸形成的盐，这些氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等。
此外，含碱性氮的基团可用例如以下的试剂季铵化：低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物以及碘化物；硫酸二烷酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物，例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物以及碘化物；芳烷基卤化物，例如苯甲基溴化物和苯乙基溴化物等等。由此获得水溶性或油溶性或分散性产物。
本文使用术语“药学上可接受的载剂”是指与接受者个体，优选为哺乳动物，更优选为人类兼容并且适用于将活性剂传递到目标部位而不会终止药剂活性的物质。与载剂相关的毒性或不良反应(若存在)优选针对活性剂的预定用途配合合理风险／利益比。
术语“载剂”、“佐剂”或“媒剂”在本文中可互换使用并且包括适于所要特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂以及其它液体媒剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等张剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体黏合剂、润滑剂等等。雷明顿：药物科学与实践(Remington：The Science and PracticeofPharmacy)，第20版，真纳罗(A.Gennaro)编，利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司(Lippincott Williams＆Wilkins)，2000公开调配药学上可接受的组合物所用的多种载剂以及其己知制备技术。除非任何常规载剂介质与本发明化合物不兼容(例如因产生任何不合乎需要的生物效应或以有害方式与药学上可接受的组合物中的任何其它组分发生相互作用而不兼容)，否则其使用涵盖于本发明的范围内。可充当药学上可接受的载剂的物质的一些实例包括(但不限于)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸氢二钠、磷酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化镁和氢氧化铝、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾)、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、无热原质水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠和锌盐)、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、羊毛脂、糖(例如乳糖、葡萄糖、蔗糖)、淀粉(例如玉米淀粉和马铃薯淀粉)、纤维素和其衍生物(例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素)、粉状黄蓍胶、麦芽、明胶、滑石、赋形剂(例如可可脂和栓剂蜡)、油类(例如花生油、棉籽油、红花子油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、二醇类(例如丙二醇和聚乙二醇)、酯类(例如油酸乙酯和月桂酸乙酯)、琼脂、海藻酸、等张生理食盐水、林格氏溶液(Ringer′s solution)、醇类(例如乙醇、异丙醇、十六醇和甘油)、环糊精、润滑剂(例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)、石油烃(例如矿物油和矿脂(petrolatum))。根据调配者的判断，组合物中也可存在着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂以及抗氧化剂。
本发明的医药组合物可通过所属领域中众所周知的方法来制造，例如常规造粒、混合、溶解、囊封、冻干或乳化工艺等。可制备呈各种形式的组合物，包括颗粒、沉淀物或微粒、粉末(包括冻干粉末、旋转干燥粉末或喷雾干燥粉末、非晶形粉末)、片剂、胶囊、糖浆、栓剂、注射剂、乳液、酏剂、悬浮液或溶液。配方可任选地含有适于所要特定剂型的溶剂、稀释剂和其它液体媒剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、pH值调节剂、等张剂、增稠剂或乳化剂、稳定剂和防腐剂、固体黏合剂、润滑剂等等。
根据优选实施例，本发明组合物调配为医药投与哺乳动物，优选人类。本发明的这些医药组合物可经口、不经肠、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或通过植入式贮器投与。如本文所用的术语“不经肠”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内以及颅内注射或输注技术。优选经口、静脉内或皮下投与组合物。本发明的配方可设计为短效、速释或长效配方。此外，化合物可以局部而非全身方式投与，例如在肿瘤部位投与(例如通过注射)。
口服液体剂型包括(但不限于)药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有所属领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂；增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二醇、环糊精、二甲基甲酰胺、油类(具体地说，棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯以及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可根据己知技术使用适当的分散剂或润湿剂和悬浮剂调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可为存于不经肠投与可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如于1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒剂和溶剂中，可利用水、林格氏溶液、U.S.P.和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。就本发明来说，可利用任何温和的不挥发性油，包括合成的单酸甘油酯和二酸甘油酯。另外，将脂肪酸，例如油酸用于制备注射剂。可注射配方可例如通过经细菌截留过滤器过滤或通过合并灭菌剂来灭菌，灭菌剂呈在使用前可溶于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。经调配用于不经肠投与的组合物可通过快速注射或定时推注注射，或通过连续输注投与。
为延长本发明化合物的作用，通常需要减缓化合物从皮下或肌肉内注射的吸收。此举可通过使用具有不良水溶性的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来达成。化合物的吸收速率则视其溶解速率而定，溶解速率又可取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油性媒剂中来延迟不经肠投与的化合物形式的吸收。可注射积存形式通过在可生物降解聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成化合物的微胶囊基质来制备。视化合物与聚合物的比率以及所采用的特定聚合物的性质而定，可控制化合物的释放速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将化合物覆埋于与身体组织兼容的脂质体或微乳液中来制备积存可注射配方。
用于经直肠或经阴道投药的组合物优选为栓剂，其可通过将本发明化合物与在周围温度下为固体，但在体温下为液体并且因此在直肠或阴道腔中熔融并释放活性化合物的适当非刺激性赋形剂或载剂(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备。
口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物可与以下混合：至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载剂，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和／或a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)黏合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)阻溶剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)润湿剂，例如十六烷醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠以及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂，例如磷酸盐或碳酸盐。
也可使用相似类型的固体组合物作为使用例如乳糖(1actose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的填充式软和硬明胶胶囊中的填充剂。可用包衣剂和虫胶(例如肠溶包衣和医药调配技术中众所周知的其它包衣剂)制备片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型。其可任选地含有遮光剂，并且也可为仅在或优先在肠道特定部分任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。相似类型的固体组合物也可用作使用例如乳糖(1actose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的填充式软和硬明胶胶囊中的填充剂。
活性化合物还可与一种或一种以上如上所述赋形剂一起呈微胶囊形式。可用包衣剂和虫胶(例如肠溶包衣、控释包衣和医药调配技术中众所周知的其它包衣剂)制备片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型。在这些固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如正常实务中，这些剂型还可包含除惰性稀释剂外的其它物质，例如制片润滑剂和其它制片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，这些剂型还可包含缓冲剂。其可任选地含有遮光剂，并且也可为仅在或优先在肠道特定部分任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部投与或经皮投与本发明化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳霜、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载剂和任何所需的防腐剂或缓冲剂按要求混合。眼用配方、滴耳剂和滴眼剂也涵盖于本发明的范围内。另外，本发明涵盖使用经皮贴片，其额外优点为提供化合物向身体的控制传递。这些剂型可通过在适当介质中溶解或分配化合物来制备。也可使用吸收促进剂来增加化合物的透皮通量。可通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。
本发明提供治疗细胞增生性病症的新颖组合疗法。如本文所用，术语“增生性病症”或“增生性疾病”包括(但不限于)癌性过度增生性病症(例如脑癌、肺癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳癌、头颈癌、头颈鳞状细胞癌、肾癌(renal cancer)(例如转移性肾细胞癌)、肝癌、肾癌(kidney cancer)、卵巢癌(例如进行性上皮癌或原发性腹膜癌)、前列腺癌(例如雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌)、结肠直肠癌、结肠癌、肝细胞癌、表皮样癌、食道癌、睾丸癌、妇科癌或甲状腺癌、宫颈癌、急性骨髓白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)、细支气管肺泡癌(BAC)和肺腺癌、神经内分泌癌(例如包括转移性神经内分泌肿瘤)、成神经细胞瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)(包括加速期CML和急变期CML(CML-BP))、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、霍奇金氏病(Hodgkin′sdisease，HD)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma，NHL)(包括滤泡性淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)、多发性骨髓瘤(MM)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom′s macroglobulinemia)、骨髓发育不良综合症(MDS)(包括难治性贫血(RA)、难治性贫血伴环形含铁胚血球(RARS)、(难治性贫血伴胚细胞过多(RAEB)和转形中的RAEB(RAEB-T)和骨髓增生性综合症))；非癌性过度增生性病症(例如皮肤良性增生(例如牛皮癣)、再狭窄和良性前列腺肥大(BPH))；以及与血小管生成或血管生成相关的疾病(例如肿瘤血管生成、血管瘤、神经胶质瘤、黑素瘤、鼻咽癌、小儿肉瘤、软组织肉瘤、骨癌、卡波济氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma)以及卵巢癌、乳癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌和表皮样癌)。这些“增生性病症”和“增生性疾病”涵盖原发性与转移性或晚期癌症，包括通路中转移(intransientmetastese)。在一个实施例中，癌症为转移性癌症。在另一个实施例中，可通过奥诺拉A激酶选择性抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的增生性病症或疾病包括卵巢癌、头颈癌、乳癌、结肠直肠癌、NSCLC、SCLC、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(包括滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、DLBCL、PTCL和伯基特氏淋巴瘤)、成神经细胞瘤、AML、肝细胞癌、鼻咽癌、小儿肉瘤、神经胶质瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和黑素瘤。在另一个优选实施例中，可通过奥诺拉A激酶选择性抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的疾病或病症包括肺癌、卵巢癌、前列腺癌、黑素瘤、结肠直肠癌和胰腺癌。在另一个优选实施例中，可通过奥诺拉A激酶选择性抑制剂和MEK抑制剂的组合治疗的疾病或病症包括胃癌、头颈鳞状细胞癌、小细胞肺癌、黑素瘤和结肠直肠癌。
如本文所用，术语“患者”意指动物，优选为哺乳动物，更优选为人类。在一些实施例中，患者在开始本发明方法的治疗前己用例如奥诺拉A激酶选择性抑制剂或MEK抑制剂的药剂治疗。在一些实施例中，患者为有显现或经历增生性病症复发风险的患者。
表达“治疗上有效”和“治疗效应”是指效益，包括(但不限于)本文所讨论增生性病症的症状的治疗或预防或改善。将了解治疗有效量或提供治疗效应所要的药剂的量将视预定应用(体外或体内)或治疗的个体和疾病病状(例如待治疗的病状的严重性、特定抑制剂、投药途径以及个别患者的年龄、体重、总体健康状况和反应)而改变，其可通过所属领域的技术人员轻易地判定。举例来说，如果一定量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂与一定量的MEK抑制剂的组合足以治疗或预防或改善本文所讨论的增生性病症的症状，那么其为治疗上有效的。
可调配用于本发明方法的组合物呈单位剂型以容易投与并且实现剂量均匀。如本文所用，表述“单位剂型”是指适于待治疗患者的药剂的物理离散单位。然而，应了解，本发明的化合物和组合物的每天总用量将由主治医师在正确医学判断范围内来决定。不经肠投与的单位剂型可为安瓶或多剂量容器。
MEK抑制剂可与奥诺拉A激酶选择性抑制剂以单一剂型或分开剂型投与。在一个实施例中，当以分开剂型投与时，MEK抑制剂可在投与本发明的奥诺拉A激酶选择性抑制剂前、同时或后投与。在另一个实施例中，当以分开剂型投与时，一种或一种以上剂量的MEK抑制剂可在本发明的奥诺拉A激酶选择性抑制剂前投与。在另一个实施例中，当以分开剂型投与时，一种或一种以上剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂可在本发明的MEK抑制剂前投与。
在一些特定实施例中，本发明的方法包含向患增生性病症的患者投与如本文所定义的式(I)、式(II)或式(IIA)的MEK抑制剂与如本文所定义的式(III)、式(IV）或式(V）的奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。
在另一个实施例中，本发明的方法包含向患增生性病症的患者投与3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮与如本文所定义的式(III)、式(IV）或式(V）的奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。
在另一个实施例中，本发明的方法包含向患增生性病症的患者投与如本文所定义的式(I)、式(II)或式(IIA)的MEK抑制剂与4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。
在另一个实施例中，本发明的方法包含向患增生性病症的患者投与3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮与4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。
另外，本发明涉及MEK抑制剂的用途，其用于制造以与奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合疗法用以治疗增生性病症的药剂。在其它特定实施例中，本发明涉及式(I)、式(II)或式(IIA)的MEK抑制剂(本文所定义)的用途，其用于制造以与式(III)、式(IV）或式(V）的奥诺拉A激酶选择性抑制剂(如本文所定义)的组合疗法用以治疗增生性病症的药剂。
在另一个实施例中，本发明涉及3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮的用途，其用于制造以与式(III)、式(IV)或式(V)的奥诺拉A激酶选择性抑制剂(如本文所定义)的组合疗法用以治疗增生性病症的药剂。
在另一个实施例中，本发明涉及式(I)、式(II)或式(IIA)的MEK抑制剂(如本文所定义)的用途，其用于制造以与如本文所定义的4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠的组合疗法用以治疗增生性病症的药剂。
在另一个实施例中，本发明涉及3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮的用途，其用于制造以与4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠的组合疗法用以治疗增生性病症的药剂。
如本文所特定涵盖，本发明包括以下方法：
a.一种治疗患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投与如本文所定义的MEK抑制剂与如本文所定义的奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。在一些实施例中，增生性病症选自由以下各物组成的群组：胃癌、头颈鳞状细胞癌、小细胞肺癌、黑素瘤和结肠直肠癌。在一实施例中，细胞增生性病症为胃癌。在另一个实施例中，增生性病症为头颈鳞状细胞癌。在另一个实施例中，增生性病症为小细胞肺癌。在另一个实施例中，增生性病症为结肠直肠癌。在另一个实施例中，增生性病症为黑素瘤。在另一个实施例中，增生性病症为卵巢癌。
b.一种治疗患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投与3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮或其药学上可接受的盐与如本文所定义的奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。在一些实施例中，增生性病症选自由以下各物组成的群组：胃癌、头颈鳞状细胞癌、小细胞肺癌、黑素瘤和结肠直肠癌。在一实施例中，细胞增生性病症为胃癌。在另一个实施例中，增生性病症为头颈鳞状细胞癌。在另一个实施例中，增生性病症为小细胞肺癌。在另一个实施例中，增生性病症为结肠直肠癌。在另一个实施例中，增生性病症为黑素瘤。在另一个实施例中，增生性病症为卵巢癌。
c.一种治疗患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投与如本文所定义的MEK抑制剂与4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。在一些实施例中，增生性病症选自由以下各物组成的群组：胃癌、头颈鳞状细胞癌、小细胞肺癌、黑素瘤和结肠直肠癌。在一实施例中，细胞增生性病症为胃癌。在另一个实施例中，增生性病症为头颈鳞状细胞癌。在另一个实施例中，增生性病症为小细胞肺癌。在另一个实施例中，增生性病症为结肠直肠癌。在另一个实施例中，增生性病症为黑素瘤。在另一个实施例中，增生性病症为卵巢癌。
d.一种治疗患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投与4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠与3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮或其药学上可接受的盐的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量在治疗上有效。在一些实施例中，增生性病症选自由以下各物组成的群组：胃癌、头颈鳞状细胞癌、小细胞肺癌、黑素瘤和结肠直肠癌。在一实施例中，增生性病症为胃癌。在另一个实施例中，增生性病症为头颈鳞状细胞癌。在另一个实施例中，增生性病症为小细胞肺癌。在另一个实施例中，增生性病症为结肠直肠癌。在另一个实施例中，增生性病症为黑素瘤。在另一个实施例中，增生性病症为卵巢癌。
在本发明的方法中，MEK抑制剂可在向患细胞增生性病症的患者投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂前(例如前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、相伴向患细胞增生性病症的患者投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂或在向患细胞增生性病症的患者投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂后(例如后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)投与。在一些实施例中，在同一次患者随访内投与MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂。在一些实施例中，患者在家中经大约与患者随访相同持续时间的时段投与MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂。
在一些实施例中，将MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂以一定次序并且在一定时间间隔内投与患者，例如哺乳动物，例如人类，以便第一次投与的抑制剂连同第二次投与的抑制剂一起作用以提供相较于如果以其它方式投与每一抑制剂更大的效益。举例来说，可同时或以任何次序在不同时间点依序投与MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂；然而，如果不是同时投与，那么在足够近时间内投与MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂以便提供所要的两种抑制剂的组合的治疗性或预防性效应。在一个实施例中，MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂在重迭的时间发挥其效应。在一些实施例中，MEK抑制剂和奥诺拉A激酶抑制剂各以分开剂型、以任何适当形式并且通过任何适当途径投与。在其它实施例中，同时投与呈单一剂型的MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂。
应了解，任一这些治疗剂的投与频率可为经约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约20天、约28天、约1周、约2周、约3周、约4周、约1个月、约每2个月、约每3个月、约每4个月、约每5个月、约每6个月、约每7个月、约每8个月、约每9个月、约每10个月、约每11个月、约每年、约每2年、约每3年、约每4年或约每5年的时间一次或一次以上。
举例来说，可每天、每周、每两周或每月投与药剂历时特定的一段时间。药剂可经14天时间每天给药，或经7天时间每天两次给药。在一些实施例中，可经14天时间每天投与一定量的MEK抑制剂。在一些实施例中，可每天投与一定量的选择性奥诺拉A激酶历时7天。或者，可每天、每周、每两周或每月投与药剂历时特定的一段时间，随后为特定的一段非治疗时间。在一些实施例中，可每天投与一定量的MEK抑制剂历时14天，随后七天不治疗，并且再重复两个每天投与14天随后七天不治疗的周期。在一些实施例中，可每天两次投与一定量的选择性奥诺拉A激酶抑制剂历时7天，随后14天不治疗，可再重复一或两个每天两次投与七天随后14天不治疗的周期。
在一个实施例中，经14天时间每天投与一定量的MEK抑制剂。在另一个实施例中，经12天、或11天、或10天、或9天、或8天时间每天投与一定量的MEK抑制剂。在另一个实施例中，经7天时间每天投与一定量的MEK抑制剂。
在一个实施例中，经7天时间每天投与一定量的选择性奥诺拉A激酶抑制剂。在另一个实施例中，经6天、或5天、或4天、或3天时间每天投与一定量的奥诺拉A抑制剂。
在一些实施例中，治疗过程相伴投与患者，即在一定时间间隔内(例如在1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、5天、6天、1周或2周内)投与个别剂量的分开剂型的MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂，以便两种抑制剂可一起作用。举例来说，可在28天周期中每天一次投与MEK抑制剂，例如3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮或其药学上可接受的盐历时21天，以及在21天周期中每天两次投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂，例如4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠历时7天。换句话说，给药方案相伴进行，此是因为即使不同时或不在周期每一天期间的同一天内投与治疗剂，每一周期的第1天仍在同一天开始。
在一个实施例中，依21天给药时程进行投药，其中每天一次投与MEK抑制剂历时14天，随后7天不治疗，以及每天两次投与奥诺拉A激酶选择性抑制剂历时7天，随后14天不治疗(例如在21天时程的第1天到第14天每天一次投与MEK抑制剂并且第1天到第7天每天两次投与奥诺拉A激酶选择性抑制剂)。
在一些实施例中，其间投与治疗剂的治疗期后接着为其间不投与患者治疗剂的特定的一段非治疗持续时间。此非治疗期后接着可为一系列相同或不同时间长度的相同或不同频率后续治疗期和非治疗期。在一些实施例中，治疗期和非治疗期交替。应了解，周期疗法中的治疗期可持续到患者实现完全反应或部分反应，此时可中止治疗。或者，周期疗法中的治疗期可持续到患者实现完全反应或部分反应，此时治疗期可持续特定周期数。在一些实施例中，治疗期的长度可为特定周期数，与患者反应无关。在一些其它实施例中，治疗期的长度可持续到患者复发。
在一些实施例中，以周期方式投与患者MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂。周期疗法涉及投与第一药剂(例如第一预防性或治疗性药剂)一段时间，随后投与第二药剂和／或第三药剂(例如第二和／或第三预防性或治疗性药剂)一段时间并且重复此依序投与。周期疗法可减少对一种或一种以上疗法的抗性的发展，避免或减少一种疗法的副作用和／或改善治疗功效。
在一些实施例中，投与MEK抑制剂历时特定时间长度，然后投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂。举例来说，在21天周期中，可在第1天到第5天、第1天到第7天、第1天到第10天或第1天到第14天投与MEK抑制剂，并且可在第6天到第21天、第8天到第21天、第11天到第21天或第14天到第21天投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂。在其它实施例中，投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂历时特定时间长度，后投与MEK抑制剂。举例来说，在21天周期中，可在第1天到第5天、第1天到第7天、第1天到第10天或第1天到第14天投与选择性奥诺拉A激酶抑制剂，并且可在第6天到第21天、第8天到第21天、第11天到第21天或第14天到第21天投与MEK抑制剂。
在另一个实施例中，依21天给药时程进行投药，其中在第8天开始投与每天一次剂量的MEK抑制剂历时7天，随后7天不治疗，以及每天两次投与奥诺拉A激酶选择性抑制剂历时7天，随后14天不治疗(例如在21天时程的第8天到第14天投与MEK抑制剂并且在第1天到第7天投与奥诺拉A激酶选择性抑制剂)。
在一些实施例中，MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂各以药剂用作单一药剂时通常使用的剂量和时程投与。在一些其它实施例中，当相伴投与MEK抑制剂和选择性奥诺拉A激酶抑制剂时，这些药剂中的一者或两者宜以低于将药剂用作单一药剂时通常投与的剂量投与，以便剂量低于引发不良副作用的临限值。
组合中MEK抑制剂和奥诺拉A激酶选择性抑制剂的治疗有效量或适当剂量视许多因素而定，包括待治疗的病状的严重性、特定抑制剂、投药途径以及个别患者的年龄、体重、总体健康状况和反应。在某些实施例中，如由皮肤有丝分裂指数增加、或肿瘤有丝分裂细胞中染色体比对和纺缍体两极性降低、或患细胞增生性病症的患者中有效暴露的其它标准量度所测量，适当剂量为实现有效暴露的剂量。在某些实施例中，如肿瘤消退或疾病进展、无疾病进展存活或总体存活的其它标准量度所测量，适当剂量为实现治疗性反应的剂量。在其它实施例中，适当剂量为实现此治疗性反应以及使与投与治疗剂相关的任何副作用最小的剂量。
单次或分次或多次给药的MEK激酶抑制剂的适当每天剂量一般可在作为单一药剂的最大耐受剂量的约10％到约120％的范围内。在某些实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约20％到约100％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约25％到约90％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约30％到约80％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约40％到约75％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约45％到约60％。在其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％、约105％、约110％、约115％或约120％。
单次或分次或多次给药的TAK-733的适当每天剂量一般可在每天约1mg到约40mg的范围内。单次或分次或多次给药的TAK-733的其它适当每天剂量一般可在每天约10mg到约30mg的范围内。单次或分次或多次给药的TAK-733的其它适当每天剂量一般可在每天约15mg到约25mg的范围内。在某些实施例中，适当剂量为每天一次约5mg到每天一次约40mg。在一些其它实施例中，适当剂量为每天一次约10mg到每天一次约30mg。在一些其它实施例中，适当剂量为每天一次约15mg到每天一次约25mg。在其它实施例中，适当剂量为每天约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg或约20mg。在某些其它实施例中，适当剂量为每天一次约6.2mg、约6.4mg、约6.6mg、约6.8mg、约7mg、约7.2mg、约7.4mg、约7.6mg、约7.8mg、约8mg、约8.2mg、约8.4mg、约8.6mg、约8.8mg、约9mg、约9.2mg、约9.4mg、约9.6mg、约9.8mg、约10mg、约10.2mg、约10.4mg、约10.6mg、约10.8mg、约11mg、约11.2mg、约11.4mg、约11.6mg、约11.8mg、约12mg、约12.2mg、约12.4mg、约12.6mg、约12.8mg、约13mg、约13.2mg、约13.4mg、约13.6mg、约13.8mg、约14mg、约14.2mg、约14.4mg、约14.6mg、约14.8mg、约15mg、约15.2mg、约15.4mg、约15.6mg、约15.8mg、约16mg、约16.2mg、约16.4mg、约16.6mg、约16.8mg或约17mg。
应了解，可在白天或晚上的任何时间服用适当剂量的MEK抑制剂。在一些实施例中，在早上服用适当剂量的MEK抑制剂。在一些其它实施例中，在晚上服用适当剂量的MEK抑制剂。应了解，可在有或无食物的情况下服用适当剂量的MEK抑制剂。在一些实施例中，随膳食服用适当剂量的MEK抑制剂。在一些实施例中，空腹时服用适当剂量的MEK抑制剂。
单次或分次或多次给药的奥诺拉A激酶选择性抑制剂的适当每天剂量一般可在作为单一药剂的最大耐受剂量的约10％到约120％的范围内。在某些实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约20％到约100％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约25％到约90％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约30％到约80％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约40％到约75％。在一些其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约45％到约60％。在其它实施例中，适当剂量为作为单一药剂的最大耐受剂量的约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％、约105％、约110％、约115％或约120％。
单次或分次或多次给药的阿利色替的适当每天剂量一般可在每天约20mg到约100mg的范围内。单次或分次或多次给药的阿利色替的其它适当每天剂量一般可在每天约30mg到约90mg的范围内。单次或分次或多次给药的阿利色替的其它适当每天剂量一般可在每天约40mg到约80mg的范围内。在某些实施例中，适当剂量为每天两次每次约10mg到每天两次每次约50mg。在一些其它实施例中，适当剂量为每天两次每次约15mg到每天两次每次约45mg。在一些其它实施例中，适当剂量为每天两次每次约20mg到每天两次每次约40mg。在一些其它实施例中，适当剂量为每天两次每次约25mg到每天两次每次约40mg。在一些其它实施例中，适当剂量为每天两次每次约30mg到每天两次每次约40mg。在其它实施例中，适当剂量为每天约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg或约100mg。在某些其它实施例中，适当剂量为每天两次每次约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg或约50mg。
应了解，可在白天或晚上的任何时间服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。在一些实施例中，在早上服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。在一些其它实施例中，在晚上服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。在一些其它实施例中，在早上与晚上服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。应了解，可在有或无食物的情况下服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。在一些实施例中，随膳食服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。在一些实施例中，空腹时服用适当剂量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂。
在一些实施例中，投与第一数量的奥诺拉A激酶选择性抑制剂的第一治疗期后可为投与相同或不同数量的相同或不同奥诺拉A激酶选择性抑制剂的另一治疗期。多种治疗剂与本发明的MEK抑制剂和奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合可具有治疗上相关的额外组合效益。可使用包含本发明的MEK抑制剂和奥诺拉A激酶选择性抑制剂以及一种或一种以上其它治疗剂的组合疗法例如以：1)增强本发明方法和／或一种或一种以上其它治疗剂的治疗效果；2)降低本发明方法和／或一种或一种以上其它治疗剂所展现的副作用；和／或3)降低本发明的MEK抑制剂和奥诺拉A激酶选择性抑制剂和／或一种或一种以上其它治疗剂的有效剂量。举例来说，这些治疗剂可与本发明的MEK抑制剂和奥诺拉A激酶选择性抑制剂组合以抑制不合乎需要的细胞生长，例如由不合乎需要的良性病状产生的不当细胞生长或肿瘤生长。
可与本发明的MEK抑制剂和奥诺拉A激酶选择性抑制剂的组合进行组合使用的治疗剂的实例包括(但不限于)抗增生剂、抗癌剂、烷基化剂、抗生素药剂、抗代谢药剂、激素药剂、植物源药剂和生物药剂。
烷基化剂为具有用烷基取代氢离子的能力的多官能化合物。烷基化剂的实例包括(但不限于)双氯乙胺(氮芥类，例如苯丁酸氮芥(ch1orambucil)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)、尿嘧啶芥(uracilmlstard))、氮丙啶(aziridine)(例如噻替派(thiotepa))、烷基酮磺酸酯(例如白消安(busulfan))、亚硝基脲(nitrosourea)(例如卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(1omustine)、链脲佐菌素(streptozocin))、非典型烷基化剂(六甲蜜胺(altretamine)、达卡巴嗪(dacarbazine)和丙卡巴肼(procarbazine))、铂化合物(卡铂(carboplastin)和顺铂(cisplatin))。这些化合物与磷酸酯基、氨基、羟基、硫氢基、羧基和咪唑基反应。在生理条件下，这些药物电离并且产生附着于易受影响的核酸和蛋白质的带正电离子，导致细胞周期停滞和／或细胞死亡。包括本发明抑制剂和烷基化剂的组合疗法对癌症可具有治疗协同效应，并且降低与这些化学治疗剂相关的副作用。
抗生素药剂为以类似于抗生素的方式产生的作为天然产物的改性的一组药物。抗生素药剂的实例包括(但不限于)蒽环霉素(anthracycline)(例如小红莓(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)和蒽二酮(anthracenedione))、丝裂霉素C(mitomycin C)、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、普卡霉素(plicatomycin)。这些抗生素药剂通过靶向不同细胞组分来干扰细胞生长。举例来说，一般相信蒽环霉素在转录活性DNA区域内干扰DNA拓扑异构酶II的作用，由此导致DNA股断裂。一般相信博莱霉素螯合铁并且形成活化复合物，其接着结合于DNA的碱基，引起股断裂和细胞死亡。包括本发明抑制剂和抗生素药剂的组合疗法对癌症可具有治疗协同效应，并且降低与这些化学治疗剂相关的副作用。
抗代谢药剂为干扰癌细胞生理学和增生所必需的代谢过程的一组药物。活跃增生的癌细胞需要连续合成大量核酸、蛋白质、脂质以及其它活力细胞成分。许多抗代谢物抑制嘌呤或嘧啶核苷的合成或抑制DNA复制的酶。一些抗代谢物也干扰核糖核苷和RNA的合成和／或氨基酸代谢以及蛋白质合成。通过干扰重要细胞成分的合成，抗代谢物可延迟或停滞癌细胞生长。抗代谢药剂的实例包括(但不限于)氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU)、氟尿苷(floxuridine，5-FUdR)、甲胺蝶呤(methotrexate)、甲酰四氢叶酸(1eucovorin)、羟基脲(hydroxyurea)、硫鸟嘌呤(thioguanine，6-TG)、巯嘌呤(mercaptopurine，6-MP)、阿糖胞苷(cytarabine)、喷司他丁(pentostatin)、氟达拉宾磷酸盐(fludarabine phosphate)、克拉屈滨(cladribine，2-CDA)、天冬酰胺酶和吉西他滨(gemcitabine)。包括本发明抑制剂和抗代谢药剂的组合疗法对癌症可具有治疗协同效应，并且降低与这些化学治疗剂相关的副作用。
激素药剂为调节其目标器官的生长和发育的一组药物。大部分激素药剂为性类固醇和其衍生物以及其类似物，例如雌激素、雄激素和助孕素。这些激素药剂可充当性类固醇受体的拈抗剂从而下调活力基因的受体表达和转录。这些激素药剂的实例为合成雌激素(例如己烯雌酚(diethylstibestrol))、抗雌激素药(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、氟甲固醇(fluoxymestero1)和雷洛昔芬(raloxifene))、抗雄激素药(比卡鲁胺(bicalutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和氟他胺(flutamide))、芳香酶抑制剂(例如胺鲁米特(aminoglutethimide)、阿那曲唑(anastrozole)和四唑(tetrazole))、酮康唑(ketoconazo1e)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、亮丙瑞林(1euprolide)、乙酸甲地孕酮(megestro1acetate)和米非司酮(mifepristone)。包括本发明抑制剂和激素药剂的组合疗法对癌症可具有治疗协同效应，并且降低与这些化学治疗剂相关的副作用。
植物源药剂为来源于植物或基于药剂的分子结构进行改性的一组药物。植物源药剂的实例包括(但不限于)长春花生物碱(例如长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)、长春利定(vinzolidine)和长春瑞滨(vinorelbine))、鬼臼毒素(podophyllotoxin)(例如依托泊苷(etoposide，VP-16)和替尼泊苷(teniposide，VM-26))和紫杉烷(例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)和多烯紫杉醇(docetaxel))。这些植物源药剂一般充当结合于微管蛋白并且抑制有丝分裂的抗有丝分裂剂。相信例如依托泊苷的鬼臼毒素通过与拓扑异构酶II的相互作用来干扰DNA合成，引起DNA股断裂。包括本发明抑制剂和植物源药剂的组合疗法对癌症可具有治疗协同效应，并且降低与这些化学治疗剂相关的副作用。
生物药剂为当单独或与化学疗法和／或放射疗法组合使用时引发癌症／肿瘤消退的一组生物分子。生物药剂的实例包括(但不限于)免疫调节蛋白质，例如细胞激素、抵抗肿瘤抗原的单株抗体、肿瘤抑制基因和癌症疫苗。包括本发明抑制剂和生物药剂的组合疗法对癌症可具有治疗协同效应、增强患者对致瘤信号的免疫反应并且降低与此化学治疗剂相关的可能副作用。
细胞激素具有深远的免疫调节活性。例如介白素-2(IL-2、阿地白介素(aldesleukin))的一些细胞激素和干扰素具有经证明的抗肿瘤活性并且己批准用于治疗具有转移性肾细胞癌和转移性恶性黑素瘤的患者。IL-2为对于T细胞介导的免疫反应为重要的T细胞生长因子。相信IL-2对一些患者的选择性抗肿瘤作用为区别自身与非自身的细胞介导的免疫反应的结果。可与本发明抑制剂结合使用的介白素的实例包括(但不限于)介白素2(IL-2)和介白素4(IL-4)、介白素12(IL-12)。
干扰素包括23种以上具有重迭活性的相关亚型，所有IFN亚型都在本发明范围内。IFN己对许多实体和血液科恶性病展示活性，后者似乎尤其敏感。
可与本发明抑制剂结合使用的其它细胞激素包括对血细胞生成和免疫功能发挥深远影响的那些细胞激素。这些细胞激素的实例包括(但不限于)红血球生成素、粒细胞-CSF(非格司亭(filgrastin))和粒细胞、巨噬细胞-CSF(沙格司亭(sargramostim))。这些细胞激素可与本发明抑制剂结合使用以降低化学疗法诱导的骨髓细胞生成毒性。
除细胞激素外的其它免疫调节剂也可与本发明的抑制剂结合使用以抑制异常细胞生长。这些免疫调节剂的实例包括(但不限于)卡介苗(bacillus Calmette-Guerin)、左旋咪唑(1evamisole)和奥曲肽(octreotide)(一种模拟天然产生激素生长抑素的作用的长效八肽)。
抵抗肿瘤抗原的单株抗体为对抗由肿瘤表达的抗原、优选肿瘤特异性抗原引发的抗体。举例来说，针对在包括转移性乳癌的一些乳房肿瘤中过度表达的人类表皮生长因子受体2(HER2)产生单株抗体(曲妥珠单抗(Trastruzumab))。HER2蛋白质的过度表达与侵袭性较强的疾病和较差临床预后相关。用作治疗患转移性乳癌并且肿瘤过度表达HER2蛋白质的患者的单一药剂。包括本发明抑制剂和的组合疗法对肿瘤，尤其对转移性癌症可具有治疗协同效应。
抵抗肿瘤抗原的单株抗体的另一实例为(利妥昔单抗(Rituximab))，其针对淋巴瘤细胞上的CD20而产生并且选择性地耗尽正常和恶性CD20+前B细胞和成熟B细胞。用作治疗患复发性或难治性低级或滤泡性、CD20+、B细胞非霍奇金淋巴瘤的患者的单一药剂。包括本发明抑制剂和的组合疗法不仅对淋巴瘤，而且也对其它形式或类型的恶性肿瘤具有治疗协同效应。
肿瘤抑制基因为用以抑制细胞生长和分裂周期，由此预防瘤形成发展的基因。肿瘤抑制基因突变将使细胞忽视抑制信号网络中的一种或一种以上组分，从而克服细胞周期检查点并且导致较高的控制细胞生长速率-癌症。肿瘤抑制基因的实例包括(但不限于)DPC-4、NF-1、NF-2、RB、p53、WT1、BRCA1和BRCA2。
DPC-4与胰腺癌有关并且参与抑制细胞分裂的细胞质途径。NF-1编码抑制Ras的蛋白质(一种细胞质抑制蛋白质)。NF-1与神经系统的神经纤维瘤和嗜铬细胞瘤以及骨髓白血病有关。NF-2编码与神经系统的脑膜瘤、神经鞘瘤和室管膜瘤有关的核蛋白。RB编码pRB蛋白质(一种作为细胞周期的主要抑制剂的核蛋白)。RB与成视网膜细胞瘤以及骨癌、膀胱癌、小细胞肺癌和乳癌有关。P53编码调节细胞分裂并且可诱导细胞凋亡的p53蛋白质。p53的突变和／或无作用可见于多种癌症中。WT1与肾脏的威尔姆氏肿瘤(Wilms tumor)有关。BRCA1与乳癌和卵巢癌有关，而BRCA2与乳癌有关。可将肿瘤抑制基因转移到肿瘤细胞中，肿瘤抑制基因于其中发挥其肿瘤抑制功能。包括本发明抑制剂和肿瘤抑制剂的组合疗法对患各种形式的癌症的患者可具有治疗协同效应。
癌症疫苗为诱导身体对肿瘤的特异性免疫反应的一组药剂。大部分处于研究与开发和临床试验中的癌症疫苗为肿瘤相关抗原(TAA)。TAA为存在于肿瘤细胞上并且在正常细胞上相对不存在或减少的结构(即蛋白质、酶或碳水化合物)。由于对肿瘤细胞相当独特，TAA提供目标给免疫系统以识别并且引起其破坏。TAA的实例包括(但不限于)神经节苷脂(GM2)、前列腺特异性抗原(PSA)、α胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)(由结肠癌以及例如乳癌、肺癌、胃癌和胰腺癌的其它腺癌产生)、黑素瘤相关抗原(MART-1、gp100、MAGE1，3酪氨酸酶)、乳头瘤病毒E6和E7片段、自体肿瘤细胞和异体肿瘤细胞的全细胞或部分／溶胞产物。
佐剂可用以加强对TAA的免疫反应。佐剂的实例包括(但不限于)卡介苗(BCG)、内毒素脂多糖、匙孔螺血氰蛋白(GKLH)、介白素-2(IL-2)、粒细胞巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)和环磷酰胺(cytoxan)(一种相信当以低剂量给予时降低肿瘤诱导的抑制的化学治疗剂)。
本发明也针对治疗增生性疾病的试剂盒和其它制品。在一个实施例中，提供一种试剂盒，其包含如本文所述的MEK抑制剂或其药学上可接受的盐；如本文所述的奥诺拉A激酶选择性抑制剂或其药学上可接受的盐；以及说明书。所述试剂盒可任选地进一步包括一种或一种以上其它治疗剂。说明书可指示使用所述试剂盒所针对的疾病病况、存储信息、给药信息和／或关于如何投与MEK抑制剂、奥诺拉A激酶选择性抑制剂和／或一种或一种以上其它治疗剂的说明书。试剂盒还可包含包装材料。所述包装材料可包含容纳试剂盒的内含物的容器。所述试剂盒还可任选地包含其它组分，例如投与试剂盒的内含物用的注射器。所述试剂盒可包含呈单次或多次剂型的MEK抑制剂、奥诺拉A激酶选择性抑制剂和／或一种或一种以上其它治疗剂。
在另一个实施例中，提供一种制品，其包含MEK抑制剂或其药学上可接受的盐；奥诺拉A激酶选择性抑制剂或其药学上可接受的盐；以及包装材料。所述制品可任选地进一步包括一种或一种以上其它治疗剂。所述包装材料可包含容纳制品的内含物的容器。所述容器可任选地包含指示使用所述制品所针对的疾病病况、存储信息、给药信息和／或关于如何投与MEK抑制剂、奥诺拉A激酶选择性抑制剂和／或一种或一种以上其它治疗剂的说明书。所述制品还可任选地包含其它组件，例如投与组合物用的注射器。所述制品可包含呈单次或多次剂型的MEK抑制剂、奥诺拉A激酶选择性抑制剂和／或一种或一种以上其它治疗剂。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与所属领域的技术者通常所理解的含义相同的含义。尽管类似或等效于本文中描述的那些方法和物质的任何方法和物质可用于实施或测试本发明，但本文中描述优选方法、装置和物质。本文中所提及的所有公开案以全文引用的方式并入本文中，目的在于描述并公开可结合本发明使用的公开案中所报导的物质和方法。
实例
在下文所述实例中，MLN8237(阿利色替)是指钠盐，单水合4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠，并且TAK-733是指3-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮。
细胞培养和化合物处理
A375、Co1o205、PC-3和SK-Mel-2人类肿瘤细胞系获自美国菌种保存中心(AmericanType Culture Collection，ATCC[弗吉尼亚州马纳萨斯(Manassas，VA)])并且根据ATCC的建议维持。A2780人类肿瘤细胞系获自欧洲细胞培养物保存中心(European Collection ofCell Cultures，ECACC)(西格玛奥德里奇经销(Sigma-Aldrich distribution)[美国密苏里州圣路易斯(St.Louis，MO，USA)])并且遵循ECACC的建议维持。这些研究中使用以下测试物品：MLN8237-004-H和TAK-733-00l-B，其获自内部药物来源，以10mM的浓度溶解于DMSO中并且等分到小瓶中以减少冻融周期数。将等分试样存储于-20℃。将DMSO用作媒剂。在添加细胞前先将所有化合物稀释于各特定细胞系的生长介质内。
统计分析
各个实验的统计显著性(p值)通过使用具有邦弗朗尼校正(Bonferroni correction)的双尾非成对t-检验、或单因子ANOVA方差分析随后邓奈特氏事后多重比较检验(Dunnett′smultiple comparison post test)、或用以评估不等方差的f-检验评估。
实验1：视频显微术
实验设计：将A2780和A375细胞分别以每毫升1.3×104或0.6×104个细胞接种于12孔细胞培养皿上并且在37℃和5％CO2下生长过夜。用DMSO、TAK-733、MLN8237或同时用TAK-733和MLN8237培育细胞。药物添加后立即将细胞置于维持于37℃和5％CO2下的活细胞延时环境室(索伦特科学公司(Solent Scientific)[英国赛根沃思(Segensworth，UK)])中。使用装备有20倍物镜和自动XYZ平台(前科学公司(PriorScientific)[美国马萨诸塞州罗克兰(Rockland，MA，USA)])的倒置式落射荧光显微镜(尼康(Nikon)Eclipse TE2000-U[纽约州梅尔维尔(Melville，NY)])，每五分钟通过明视场照明(霍夫曼调制(Hoffman modulation))获得细胞的活动目标影像历时120小时。使用冷却式CCD相机(滨松Orca-ER(Orca-ER，Hamamatsu)[美国新泽西州布里奇沃特(Bridgewater，NJ，USA)])捕捉影像，并且使用蜕变(Metamorph)软件(分子仪器公司(Molecular Devices)[美国加州桑尼维尔市(Sunnyvale，CA，USA)])堆栈影像并产生AVI档案。通过测量细胞变圆(有丝分裂细胞)、圆形细胞分裂以及新近分裂的细胞变平并且再附着于培养板表面所需的平均经过时间来测定细胞周期事件的时序。
结果：用Mek抑制剂TAK-733(200nM)处理的经培养的A2780细胞在5天实验期内持续分裂。在细胞周期进程的延时视频显微术观测中，用TAK-733处理的细胞以与对照细胞几乎相同的频率(约90％)经历一次和两次分裂。对于多达4次分裂，细胞以相对于对照组几乎40％的频率分裂(图1)。尽管TAK-733细胞在整个5天实验期持续分裂，但有丝分裂事件之间的时间相对于DMSO处理的细胞有所延迟，用200nM TAK-733处理的A2780中为29小时，而DMSO处理的对照组中为17小时(表4)，从而表明TAK-733处理会破坏正常细胞周期进程。
用流式细胞测量术使用CFDA-SE(羧基荧光素二乙酸盐丁二酰亚胺酯)证实上文所述的视频显微术分析中使用用200nM TAK-733处理的A2780细胞所观测到的结果。CFDA-SE为进入细胞中的细胞可渗透小分子，由此通过细胞内酯酶将其加工成CFSE，一种保留在细胞质内的荧光标记。CFSE信号的衰变速率为细胞分裂速率的一个量度，因为信号仅在分裂期间变弱。
实验2：羧基荧光素丁二酰亚胺酯(CFSE)分析
实验设计：用lμM预先升温到37℃维持10分钟的羧基荧光素二乙酸盐丁二酰亚胺酯(CFDA-SE，分子探针公司(Molecular Probes)／英杰(Invitrogen)[美国俄勒冈州尤金(Eugene，OR，USA)])的PBS溶液标记5×106个A375或Colo205细胞。通过向细胞中添加5体积的冰冷介质淬灭染色，随后在冰上培育5分钟。用新鲜温热介质洗涤细胞3次并且以每毫升2×104个细胞接种于6孔培养板中。用适当IC50或IC90浓度的DMSO(0.05％v／v)或TAK-733处理细胞24小时和48小时。在适当时间点用胰蛋白酶乙二胺四乙酸(EDTA)l×(格尔巴科(Gibco)／英杰[美国加州卡尔斯巴德(Carlsbad，CA，USA)])收集细胞，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤一次，接着再悬浮于含有l％BSA的PBS中。使样品流经细胞过滤器以确保单细胞悬浮液，并且通过流式细胞测量术(FACS Canto II，碧迪公司(Becton Dickinson)[美国加州圣何塞(San Jose，CA，USA)])评估CFSE荧光，并且使用FACSDIVA软件(碧迪公司[美国加州圣何塞])分析样品。
结果：以类似于对照组的速率出现响应TAK-733处理的CFSE信号衰减，此与Mek抑制后继续进行周期的细胞一致。己证明在TAK-733存在下出现此继续的细胞周期分裂，其中使用流式细胞测量术测定出异常DNA含量概况，此与通过S和G2／M阶段的速率的改变相一致。
实验3：BrdU增生分析
将A2780、A375、PC-3和SK-Mel-2人类肿瘤细胞系于80μL适当细胞培养生长介质中分别以每孔2.0×103、1.O×l03、4.0×103和2.0×103个细胞接种。接种密度经选择以确保经过120小时发生最佳线性生长。20小时后，将10μL每一化合物添加到基质中的细胞中，其中对两种药剂都存在剂量反应。将用由生长介质稀释的DMSO进行4倍连续稀释的MLN8237添加到所有细胞系中，以使最终浓度在5到0.00122μM的范围内。将用由生长介质稀释的DMSO进行10倍连续稀释的TAK-733添加到A375和SK-Mel-2细胞系中，以使最终浓度在10到1.0×10-7μM的范围内。对于A2780和PC-3细胞系，添加TAK-733以便最终浓度在50和25μM起始并且继续用由生长介质稀释的DMSO进行5倍连续稀释达10到0.00064μM。一式三份产生每一基质，每次在分开培养板上重复。用由生长介质稀释的DMSO处理的细胞(每个培养板n=l；A375和SK-Mel-2细胞系的最终浓度为0.65％，并且A2780和PC-3细胞系的最终浓度为0.75％)充当未处理对照组。在37℃下，在湿润细胞培养室中将细胞用MLN8237和TAK-733处理96小时。
使用细胞增生酶联结免疫吸附剂分析法(ELISA)、5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)比色试剂盒，根据制造商的说明书(罗氏(Roche)[德国曼海姆(Mannheim，Germany)])测量每一细胞系的细胞增生。所述分析通过定量复制的脱氧核糖核酸(DNA)中的BrdU掺入来测量细胞增生。简单地说，在37℃下，在湿润细胞培养室中用10μL BrdU标记试剂培育每一孔2小时。在吸出标记介质后，将培养板包覆于箔片中并且保持于4℃下以供将来分析。通过向各孔添加100μL乙醇将细胞固定并变性，并且在室温下培育30分钟。吸出乙醇并且将50μ1阻断试剂(罗氏[德国曼海姆])添加到细胞中并且培育30分钟。将100μL过氧化酶结合抗BrdU抗体([抗BrdU-POD]；用抗体稀释缓冲液以l：100稀释)添加到细胞中。在室温下用抗体培育细胞120分钟。接着每孔用150μL洗涤缓冲液洗涤细胞2次，并且接着添加100μL四甲基联苯胺。在室温下培育细胞15到30分钟，后进行分光光度分析。使用SpectraMax Plus384培养板读取器(分子仪器公司[美国加州桑尼维尔市(Sunny Vale，CA，USA)])或WALLAC1420工作站(珀金埃尔默(Perkin Elmer)[芬兰土尔库(Turku，Finland)])分别在395nm或405nm下(视所用机器而定)测量每一孔的吸光度。A2780和A375细胞系系使用SpectraMax Plus在395nm下测量，而PC-3和SK-Mel-2细胞系则使用WALLAC1420工作站在405nm下测量。使用GraphPad Prism5.0分析数据。
结果：将A2780、A375、SKMEL-2和PC-3细胞用各种浓度的MLN8237或TAK-733处理96小时，并且产生每一分子作为单一药剂的浓度反应曲线。接着如表5中所示测定各种浓度的TAK-733对MLN8237的IC50和IC90的影响。在A2780、SKMEL-2和PC-3细胞系中，添加TAK-733会以浓度依赖性方式改变MLN8237的IC50和IC90(表5)。在A375细胞系中未观测到额外效益。
表5培养的肿瘤细胞中不同浓度的TAK-733下的MLN8237IC50和IC90
a在用不同浓度的MLN8237和TAK-733处理细胞96小时后使用BrdU增生分析测定MLN8237IC50和IC90
实验4:通过流式细胞测量术定量亚二倍体细胞
在37℃和5％CO2下将A2780、A375、PC-3和SK-MEL-2细胞以每毫升2×104个细胞接种于6孔细胞培养皿上并且生长过夜。用DMSO、TAK-733、MLN8237或同时用TAK-733和MLN8237处理细胞并且在37℃和5％CO2下培育适当的时间量。在相关时间点，用胰蛋白酶乙二胺四乙酸(EDTA)l×(格尔巴科／英杰[美国加州卡尔斯巴德])收集细胞，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤一次，用70％乙醇固定并且存储于-20℃下至少24小时。细胞再用PBS洗涤一次，接着再悬浮于含50μg／ml碘化丙锭(英杰[美国加州卡尔斯巴德])和30μg／ml核糖核酸酶(RNAse)A(西格玛(Sigma)[美国密苏里州圣路易斯])的PBS中并且在室温并避光下培育30分钟。通过使用流式细胞测量术经FACS Canto II流式细胞仪(碧迪公司[美国加州圣何塞])测量脱氧核糖核酸(DNA)含量来测定细胞周期分布，并且使用FACSDIVA软件(碧迪公司[美国加州圣何塞])分析样品。
结果：在用DMSO、TAK-733、MLN8237或TAK-733与MLN8237的组合处理96和120小时后使用流式细胞测量术概况定量培养的A2780细胞的亚二倍体DNA含量(分别为图2A和图2B)。如图2A可见，除50nM MLN8237处理的样品外，相对于DMSO，测试浓度的TAK-733和MLN8237都不会引起亚二倍体细胞的百分比明显增加。然而，在组合中，若干种测试浓度的TAK-733与MLN8237，即200nM TAK-733／20nMMLN8237；50nM TAK-733／50nM MLN8237；以及200nM TAK-733／50nM MLN8237会引起亚二倍体细胞的百分比增加。如表示120小时细胞培养的图2B可见，较高浓度的MLN8237下TAK-733与MLN8237的组合会引起亚二倍体细胞的百分比增加。
如图1可见，相对于单独用任一药剂处理的A2780细胞，用TAK-733与MLN8237处理的细胞中，5天时间内出现有丝分裂事件的频率显著降低。此情况与相对于单一药剂用组合TAK-733与MLN8237处理的细胞中有丝分裂事件之间的平均时间增加一致(表4)。这些数据共同表明与任一单独药剂相比TAK-733与MLN8237的组合更大程度地扰乱细胞周期进程。在96小时由流式细胞测量术概况定量DNA大于4N的培养的A2780细胞的百分比(表6)。结果表明在24小时和48小时单一药剂MLN8237会引起DNA含量大于4N的细胞的百分比实质增加。除PC-3细胞外，在所有测试细胞系中，在添加TAK-733与MLN8237的组合时存在DNA含量大于4N的细胞的百分比显著降低(返回到类似于对照组水平的水平)。相反，在PC-3细胞系(仅对TAK-733不敏感的测试细胞系)中，未观测到DNA含量大于4N的细胞的百分比的此降低。这些数据支持以下观点：在MLN8237诱导的异常有丝分裂后，TAK-733抑制细胞周期进程。此结果与描述MEK通路在细胞周期检查点功能中的作用的公开文献一致((癌基因(2007)26：4689-98；细胞的分子生物学(2006)17：5227-40；癌症研究(2008)68：5113-21；细胞周期(2011)10：481-91；癌基因(2006)25：1153-64)。
表6：DNA大于4N的细胞的百分比a
a通过用碘化丙锭染色固定细胞和用流式细胞测量术测量DNA含量来测定大于4N细胞的百分比。
实验5：以单一药剂形式或以组合形式或以定期给药经口投与带有NCI-H23非小细 胞肺癌异种移植物的雌性裸小鼠的TAK-733和MLN8237的抗肿瘤活性
此研究的目的为通过测量经口投与小鼠时多次剂量的呈单一药剂或组合形式的TAK-733和MLN8237诱导的肿瘤生长延迟以及体重损失评估处理的肿瘤反应活性并且确立NCI-H23异种移植物的反应率。
测试和对照物品：每5天用0.5％甲基纤维素400(MC)(美国弗吉尼亚州里士满市美国沃克化学公司(Wako Chemical USA，Richmond，VA，USA))制备TAK-733，并且在大约25℃下存储于黑暗中。
每5天用10％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)(美国密苏里州圣路易斯市西格玛(Sigma，St.Louis，MO，USA))+1％NaHCO3(美国密苏里州圣路易斯市西格玛)制备MLN8237并且在大约25℃下存储于黑暗中。
测试系统：此研究中所用的动物描述于表7中。使低继代NCI-H23细胞于RPMI(洛斯维公园纪念研究所(Roswell Park Memorial Institute))-1640(美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC(ATCC，Manassas，VA，USA))10％胎牛血清(澳大利亚昆士兰莫宁赛德区PAA实验室PTY有限公司(PAA Laboratories PTY LTD，Morningside，QLD，Australia))中生长并且以每毫升基质胶支持物(美国马萨诸塞州贝德福德市碧迪生物技术公司(BD Biosciences，Bedford，MA，USA))5.0×107个细胞的浓度供应。每只动物将5.0×106个NCI-H23细胞(注射体积为0.1m1)皮下植入Balb／c裸小鼠的右侧腹。
表7测试系统
实验设计：用5.0×106个NCI-H23细胞(细胞悬浮液)皮下接种7到9周龄雌性Balb／c裸小鼠的侧腹。用游标测径规监测肿瘤生长。使用公式V=W2×L／2计算平均肿瘤体积。当平均肿瘤体积(MTV)达到大约105mm3时，将动物随机分成8个处理组(每组n=8)。接着给予小鼠媒剂组合(10％HP-β-CD+1％NaHCO3和0.5％MC)、TAK-733、MLN8237、TAK-733与MLN8237的组合，或在21天时间内个别投与TAK-733和MLN823710天，其间有一天休息。每周两次测量肿瘤生长和体重。在处理的第99天计算肿瘤生长抑制和体重变化。
通过计算第99天的TGI百分比([对照组的平均肿瘤体积-处理组的平均肿瘤体积]／对照组的平均肿瘤体积)测定抗肿瘤活性。处理在第1天开始历时21天。对于许多肿瘤／处理组合，疗法结束时的肿瘤体积提供肿瘤反应的不准确量度。许多疗法不会迅速杀死肿瘤细胞，但经几代增生将细胞杀死，并且对治疗结束时治疗效果的立即评估精确度有限。因此，使研究扩展到包括肿瘤再生长使得可评价各组之间肿瘤细胞反应的差异。使用第99天使得吾人得以评价肿瘤反应并且以统计方式比较再生长期内每一组的ΔAUC。
用以评价功效的其它终点为：完全和部分肿瘤反应(CR和PR)以及研究结束时的无肿瘤存活者(TFS)数量。CR定义为肿瘤质量降到不可检测的尺寸(<50mm3)，并且PR定义为肿瘤质量从第一次处理降低50％以上。如果在研究终止时(第135天)未观测到可测量的肿瘤，那么动物视为TFS，PR视为不包括CR，而TFS包括在CR计数内。
统计分析：用线性混合效应回归模型执行统计分析。此模型考虑了对照组与处理样品之间肿瘤生长趋势的差异。将小鼠中的差异视为随机效应，并且使用化合物对称协方差结构将每一小鼠的重复肿瘤测量值之间的可变性模型化。通过使用模型的拟合曲线计算肿瘤体积-对-时间曲线下面积的变化(ΔAUC)执行处理比较。使用排列检验评估ΔAUC的显著性。p值<0.05视为显著。
使用观测到的AUC值评估药物组合的协同作用。计算两个单一药剂处理组以及组合组的相对于对照组的AUC变化。接着通过比较组合组中观测到的AUC变化与两种单一药剂中观测到的变化的总和来评估两种化合物之间的相互作用。统计上显著的p值(p<0.05)表明两种化合物之间的相互作用为拈抗作用或协同作用。
结果与讨论
在所有存活小鼠中，媒剂对照组中的肿瘤逐渐生长并且在第71.6天MTV尺寸达到422mm3(2×肿瘤体积，初始尺寸两倍)。第0天与第28天之间的肿瘤生长大约为对数线性生长并且显示肿瘤体积倍增时间为35天。
在NCI-H23异种移植小鼠中每天经口投与10mg／kg TAK-733或20mg／kg MLN8237历时21天产生31.9％和43.4％的TGI，其相对于对照组统计上不显著(p>0.05)。每天一次经口投与10mg／kg TAK-733产生1／8的PR和1／8的CR和1／8的TFS。每天一次经口投与20mg／kg MLN8237产生2／8的CR和2的TFS。用30mg／kg MLN8237经口处理产生相对于媒剂对照组统计上显著的抗肿瘤活性(p<0.05)，其中TGI为73.3％并且PR为4／8并且CR为4／8并且TFS为2。用10mg／kg TAK-733和20mg／kg MLN8237并行组合处理(每天一次历时21天)产生显著不同于媒剂对照组的抗肿瘤活性(p<0.05)，其中在研究结束时总肿瘤负荷降低24.5％，并且CR为8／8并且TFS为2。10mg／kg TAK-733和30mg／kg MLN8237产生统计上显著(p<0.05)的抗肿瘤活性，其中TGI为100％并且CR为8／8并且TFS为7／8，并且显示效应为协同效应。高剂量组合处理也产生优于单一药剂疗法的TGI显著(p<0.05)增加。
TAK-733／MLN8237组合之间歇给药(交替)不会产生优于并行组合疗法的任何治疗性优点。在植入NCI-H23细胞的小鼠中，经口投与10mg／kg TAK-733(处理10天，1天停止给药)随后投与20mg／kg MLN8237(处理10天)，或相反，经口投与20mg／kgMLN8237(处理10天，1天停止给药)随后投与10mg／kg TAK-733(处理10天)分别产生12.5％和18.1％的显著(p<0.05)TGI。用TAK-733随后用MLN8237处理产生7／8的PR、1／8的CR和1／8的TFS。用MLN8237随后用TAK-733处理产生2／8的PR、2／8的CR和2／8的TFS。在媒剂对照组中未见到自发消退(PR或CR)。
在媒剂组、TAK-733(10mg／kg)组、MLN8237(20或30mg／kg)组、TAK-733／MLN8237(20mg／kg)组合组或TAK-733(10天)随后MLN823720mg／kg(10天)组中无重量损失。给予TAK-73310天，随后1天不处理并且接着给予MLN8237(20mg／kg)10天的小鼠在处理的第14天的平均最大体重变化百分比(BWC)为8.9％。MLN8237(20mg／kg)历时10天，随后一天不处理并且接着TAK-733历时10天的小鼠在处理的第14天的平均最大BWC为0.9％。
当并行投与TAK-733(10／kg)和MLN8237(30mg／kg)时，协同作用分析公开协同效应(p<0.05)。TAK-733(10mg／kg)和MLN8237(20mg／kg)并行组合给药和定期给药显示累加作用(p>0.05)。
在给药期期间并无小鼠从研究去除。在99天研究期结束前由于肿瘤尺寸从媒剂组去除一只小鼠。由于肿瘤尺寸从每天一次经口投与20mg／kg MLN8237组去除两只小鼠。发现一只TAK-733(10mg／kg)和MLN8237(30mg／kg)组合组的小鼠死亡，并且在给药期后(在第29天)从研究去除。并无小鼠因体重损失而从研究去除。
结论
在NCI-H23人类非小细胞肺癌肿瘤异种移植物模型中，与任一单独药物相比，经口投与TAK-733(10mg／kg)和MLN8237(30mg／kg)的并行组合疗法的抗肿瘤活性显著(p<0.05)增强，其中每天10mg／kg TAK733和每天30mg／kg MLN8237的功效最高，并且显示效应为协同效应(p<0.05)。如协同作用分析所证明，间歇组合疗法不产生优于单一药剂疗法的任何治疗性优点(p>0.05)。
实验6：以单一药剂形式或以组合形式经口投与带有Panc-1人类胰腺癌异种移植物 的雌性裸小鼠的TAK-733或MLN8237的抗肿瘤活性
此研究的目的为通过在带有Panc-1异种移植物的雌性裸小鼠中测量以单一药剂形式或组合形式经口投与的TAK-733或MLN8237诱导的肿瘤生长抑制以及体重损失来评估处理的肿瘤反应活性。
测试和对照物品：每5天用0.5％甲基纤维素400(MC)(美国弗吉尼亚州里士满市美国沃克化学公司)制备TAK-733，并且在大约25℃下存储于黑暗中。每5天用10％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)(美国密苏里州圣路易斯市西格玛)+1％NaHCO3(美国密苏里州圣路易斯市西格玛)制备MLN8237并且在大约25℃下存储于黑暗中。
测试系统：此研究中所用的动物描述于表8中。
表8测试系统
实验设计：使低继代(继代TC08)Panc-1细胞(美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC)于洛斯维公园纪念研究所(RPMI)-1640(美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC)10％胎牛血清(澳大利亚昆士兰莫宁赛德区PAA实验室PTY有限公司)中生长并且以每毫升5.0×107个细胞的浓度供应于达尔伯克氏磷酸盐缓冲盐水(Dulbecco′s phosphate-buffered saline，DPBS)(美国纽约州格兰德岛市英杰-格尔巴科(Invitrogen-Gibco，Grand Island，NY,USA))。细胞与基质胶支持物(美国马萨诸塞州贝德福德市碧迪生物科学公司)以1：1混合，并且每只动物将5.0×106个Panc-1细胞(注射体积为0.2mL)皮下植入雌性Balb／c裸小鼠的右侧腹。
每周两次使用测径规监测肿瘤生长并且使用公式(0.5×[长度×宽度2])计算平均肿瘤体积。当平均肿瘤体积达到大约208mm3时，将动物随机分成处理组(每组n=8)，并且每天一次皮下给予媒剂(HP-β-CD)加1％NaHCO3和0.5％甲基纤维素)、10mg／kg的TAK-733或30mg／kg的MLN8237历时21天。每周两次测量肿瘤尺寸和体重，并且在第63天当对照组中肿瘤达到大约1127.8mm3时终止研究。监测组合处理组中动物的肿瘤体积和BW直到第111天。
通过计算第63天的TGI百分比([对照组的平均肿瘤体积-处理组的平均肿瘤体积]／对照组的平均肿瘤体积)测定抗肿瘤活性。处理在第1天开始并且持续到第21天。评价处理期期间(第1天到第21天)的最大BWL百分比。抗肿瘤效应以完全消退(CR)、部分消退(PR)的发生率、研究结束时的无肿瘤存活者(TFS)的数量以及肿瘤生长抑制作用(TGI)来测量。CR定义为肿瘤减小到以下触诊限。部分消退(PR)定义为肿瘤减小了其初始尺寸的50％以上，但不到100％。达到视为持续的CR或PR所要的最短持续时间为7天。如果在研究终止时(第111天)未观测到可测量的肿瘤，那么动物视为TFS，PR视为不包括CR，而TFS包括在CR计数内。
使用观测到的AUC值通过使组合组中观测到的ΔAUC与两种单一药剂中观测到的变化的总和比较评估药物组合的协同作用。
统计分析：
肿瘤生长抑制作用：比较各处理组最后处理日相对于初始处理日的肿瘤体积变化值，以评估差异是否为统计上显著的。p值<0.05在统计上视为显著。
曲线下面积的变化(ΔAUC)：用线性混合效应回归模型执行统计分析。此模型考虑了对照组与处理样品之间肿瘤生长趋势的差异。将小鼠中的差异视为随机效应，并且使用化合物对称协方差结构将每一小鼠的重复肿瘤测量值之间的可变性模型化。通过使用模型的拟合曲线计算ΔAUC执行处理比较。使用排列检验评估ΔAUC的显著性。p值<0.05视为显著。
组合处理效应：使用组合分数计算解决组合处理的效应相对于个别处理是否超过累加效应(协同)、为累加效应或为次累加(拈抗)效应的问题。如果组合分数小于0，那么视为组合处理的效应超过累加效应，如果组合分数等于0，那么视为累加效应，并且如果组合分数大于0那么视为次累加效应。使用标准误差和95％置信区间(以2×SE计算)测定组合分数是否显著不同于0。p值<0.05视为显著。
结果与讨论
在所有存活小鼠中，媒剂对照组中的肿瘤快速并且逐渐生长并且中值肿瘤体积(MTV)尺寸在第57.8天达到832mm3(2×肿瘤体积，初始尺寸两倍)。
在植入Panc-1细胞的小鼠中，与媒剂处理相比时，10mg／kg TAK-733(TGI=41.7％，p<0.001)、30mg／kg MLN8237(TGI=-6.4％，p<0.001)和组合处理组(TGI=79.1％，p<0.001)中的肿瘤生长受到显著抑制。与单一药剂疗法相比，组合处理产生统计上显著的抗肿瘤活性(p=0.022)。在组合处理组中在两只动物中观测到部分肿瘤消退。
在此研究中无与测试物品处理相关的死亡。TAK-733(10mg／kg)和MLN8273(30mg／kg)作为单一药剂耐受性良好，其中平均最大体重损失分别为2.0％(第5天)和0.2％(第5天)。TAK-733与MLN8237的组合疗法也具耐受性，在第9天观测到的处理相关的重量损失为8.7％。
在研究期间无处理相关的死亡。
结论
在Panc-1人类胰腺癌肿瘤异种移植物模型中，经口投与TAK-733(10mg／kg)与MLN8237(30mg／kg)的组合疗法具耐受性并且与单独药物相比显示抗肿瘤活性显著增加(p=0.022)。
培养物中A2780和A375细胞的机制研究表明相对于任一单独药剂在TAK-733与MLN8237的组合下细胞周期进程减缓并且细胞死亡程度增加。由组合产生的延迟和细胞死亡增加致使MLN8237的抗增生性效应的IC50和IC90浓度改变。相对于单独MLN8237处理，组合处理还致使DNA含量异常的细胞减少。这些结果与除MEK抑制作用自身对细胞生存力的有害影响的外，MEK抑制作用还通过使杀死DNA含量异常的细胞增加而增强MLN8237对细胞生存力的有害影响的机制一致。
实验1到6表明奥诺拉A激酶选择性抑制剂与MEK抑制剂的组合致使抗肿瘤活性增强。可进行实验7中所述的临床研究以确定奥诺拉A激酶选择性抑制剂与MEK抑制剂的组合在治疗患细胞增生性病症的患者中的效用。
实验7：临床研究
空腹投与TAK-733和阿利色替。指示患者在每次给药前2小时和后1小时避免进食和饮用(水和处方药物除外)。经口投与每一剂量的TAK-733和／或阿利色替以及8盎司(240mL)水。在每次给予阿利色替前2小时到后2小时不可服用抗酸剂和含钙补充剂。
在21天周期的第1天到第14天每天一次经口投与TAK-733。在21天周期的第1天到第7天每天两次经口投与阿利色替。指示患者在第1天到第7天的早上同时服用TAK-733和阿利色替。在第1天到第7天的晚上，在早上给药后大约12小时服用第二剂量的阿利色替。在第8天到第14天的早上，患者仅服用TAK-733。每个14天给药期后为7天无治疗恢复期。
以上投药时程的例外出现于第2周期PK扩增群组中的患者。在第2周期期间，指示PK扩增群组中的患者在第1天到第7天的早上仅服用阿利色替。在第1天到第7天的晚上，在早上给药后大约12小时服用第二剂量的阿利色替。在第8天到第14天的早上，患者仅服用TAK-733。如其它周期一般，每个14天给药期后为7天无治疗恢复期。此替代时程使无TAK-733相伴投与的阿利色替和无阿利色替相伴投与的TAK-733的血浆PK特征化。
指示患者每天大约同时服用研究药物，并且不会在任何时间服用超出处方的剂量。早上给予阿利色替的同时服用TAK-733。在患者未能在指定时间范围内服用其TAK-733和／或阿利色替剂量的情况下，跳过所述剂量并且其视为缺失剂量(missed dose)。患者在给药日记中记录任何缺失剂量并且在下一预定时间以处方剂量重新开始给药。在任何情况下，患者均不应相隔小于6小时服用阿利色替剂量。
如果出现严重呕吐或黏膜炎，那么阻止患者服用预定剂量，跳过所述剂量。如果在摄入研究药物后出现呕吐，那么不再投与所述剂量，并且患者在下一预定时间以处方剂量重新开始给药。患者在其给药日记中记录呕吐的时间。在任何情况下，患者都不应重复给药或双倍给药。

Claims (11)

1.一种治疗患增生性病症的患者的方法，其包含向所述患者投与MEK抑制剂与奥诺拉(Aurora)A激酶选择性抑制剂的组合，其中当组合使用时每一抑制剂的量均是治疗上有效的。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述增生性病症为癌症。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述癌症选自由以下各项组成的群组：胃癌、头颈鳞状细胞癌、小细胞肺癌、黑素瘤和结肠直肠癌。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述MEK抑制剂由式(IA)表示：
或其互变异构体、对映异构体或药学上可接受的盐，其中：
X1为CR6；
X5为CR6；
R1为(C4-12)芳基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的磺酰基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的亚磺酰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的卤基(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的羟基(C1-10)烷基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；
R3选自由以下各物组成的群组：氢；羟基；(C1-10)烷氧基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；羟基(C1-10)烷氧基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；(C1-10)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；本身具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；卤基(C1-10)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；羟基(C1-10)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；氨基(C1-10)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；(C3-12)环烷基(C1-5)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基，其中所述杂(C3-12)环烷基选自由哌啶基、4-吗啉基、4-哌嗪基、吡咯烷基、1，3-二氧杂环己基和1，4-二氧杂环己基组成的群组并且未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；芳基(C1-10)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；杂芳基(C1-5)烷基，其中所述杂芳基选自由呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、1，2，3-噁二唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啉基、噻唑基、1，3，4-噻二唑基、三唑基和四唑基组成的群组并且未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；(C3-12)环烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；以及(C1-10)烷基；(C4-12)芳基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的磺酰基；具有选自由(C1-10)烷基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的亚磺酰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的卤基(C1-10)烷基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的羟基(C1-10)烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；杂(C1-10)芳基，其中所述杂芳基选自由呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、1，2，3-噁二唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啉基、噻唑基、1，3，4-噻二唑基、三唑基和四唑基组成的群组并且未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；(C3-12)环烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；
R5为(C1-6)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基；
R6各独立地选自由以下各物组成的群组：氢；卤基；未经取代或经一个或一个以上(C1-10)烷基取代的氨基；以及(C1-5)烷基，其未经取代或经一个或一个以上选自由以下各物组成的群组的取代基经由可用原子价取代：卤基；硝基；氰基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的硫基；羟基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基、(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；(C4-12)芳氧基；具有选自由氢和(C1-10)烷基组成的群组的取代基的氧羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基羰基；本身任选地具有(C1-10)烷基的氨基；本身任选地具有(C1-10)烷基的(C1-10)烷基氨基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基和(C3-12)环烷基组成的群组的取代基的(C4-12)芳基。
5.根据权利要求4所述的方法，其中R1包含：
其中：
R14a、R14b、R14c、R14d和R14e各独立地选自由以下各物组成的群组：氢；卤基；氰基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-10)烷氧基；本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、羟基、(C1-10)烷氧基、氨基(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的(C1-3)烷基；以及本身任选地具有选自由卤基、硝基、氰基、(C1-10)烷氧基、氨基(C3-12)环烷基和(C4-12)芳基组成的群组的取代基的羟基(C1-3)烷基。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述MEK抑制剂由式(II)表示：
或其药学上可接受的盐；
其中：
m选自由0、1、2、3、4和5组成的群组；
n选自由1、2、3、4、5和6组成的群组；R11选自由以下各物组成的群组：氢、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代；
每一R12和R13独立地选自由以下各物组成的群组：氢、卤基、硝基、氰基、硫基、氧基、羟基、羰氧基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、羰基、氧羰基、氨基羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代；以及
每一R14独立地选自由以下各物组成的群组：氢、卤基、硝基、氰基、硫基、氧基、羟基、羰氧基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、羰基、氧羰基、氨基羰基、氨基、(C1-10)烷基氨基、磺酰胺基、亚氨基、磺酰基、亚磺酰基、(C1-10)烷基、卤基(C1-10)烷基、羰基(C1-3)烷基、硫羰基(C1-3)烷基、磺酰基(C1-3)烷基、亚磺酰基(C1-3)烷基、氨基(C1-10)烷基、亚氨基(C1-3)烷基、(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、杂(C3-12)环烷基(C1-5)烷基、芳基(C1-10)烷基、杂芳基(C1-5)烷基、(C9-12)双环芳基(C1-5)烷基、杂(C8-12)双环芳基(C1-5)烷基、(C3-12)环烷基、杂(C3-12)环烷基、(C9-12)双环烷基、杂(C3-12)双环烷基、(C4-12)芳基、杂(C1-10)芳基、(C9-12)双环芳基和杂(C4-12)双环芳基，每一者经取代或未经取代，或两个R14一起形成经取代或未经取代的环。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述MEK抑制剂为3-[(2Ｒ)-2,3-二羟基丙基]-6-氟-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-甲基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)或其药学上可接受的盐。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述奥诺拉A激酶选择性抑制剂由式(III)表示：
或其药学上可接受的盐；
其中：
环A为经取代或未经取代的5或6元芳基、杂芳基、环脂肪族或杂环基环；
环B为经取代或未经取代的芳基、杂芳基、环脂肪族或杂环基环；
环C为经取代或未经取代的芳基、杂芳基、杂环基或环脂肪族环；
Re为氢、-OR5、-N(R4)2、-SR5或任选地经R3或R7取代的C1-3脂肪族基；
每一Rx和Ry独立地为氢、氟或任选地经取代的C1-6脂肪族基；或Rx和Ry连同其所连接的碳原子一起形成任选地经取代的3到6元环脂肪族环；
每一R3独立地选自由以下各物组成的群组：-卤基、-OH、-O(C1-3烷基)、-CN、-N(R4)2、-C(O)(C1-3烷基)、-CO2H、-CO2(C1-3烷基)、-C(O)NH2和-C(O)NH(C1-3烷基)；
每一R4独立为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；或同一氮原子上的两个R4连同所述氮原子一起形成任选地经取代的5到6元杂芳基或4到8元杂环基环，除所述氮原子外，还具有0到2个选自N、O和S的环杂原子；
每一R5独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；以及
每一R7独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述奥诺拉A激酶选择性抑制剂由式(IV)表示：
或其药学上可接受的盐；
其中：
Re为氢或任选地经R3或R7取代的C1-3脂肪族基；
环A经0到3个Rb取代；
每一Rb独立地选自由C1-6脂肪族基、R2b、R7b、-T1-R2b和-T1-R7b组成的群组；
每一R2b独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R4、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R4、-CO2R5、-C(O)-C(O)R4、-C(O)R4、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R4)2或-P(O)(OR5)2；
每一R7b独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基；
环B经0到2个独立选择的Rc和0到2个独立选择的R2c或C1-6脂肪族基取代；
每一Rc独立地选自由C1-6脂肪族基、R2c、R7c、-T1-R2c和-T1-R7c组成的群组；
每一R2c独立地为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2；
每一R7c独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基；
T1为任选地经R3或R3b取代的C1-6亚烷基链，其中T1或其一部分任选地形成3到7元环的一部分；
环C经0到2个独立选择的Rd和0到3个独立选择的R2d或C1-6脂肪族基取代；
每一Rd独立地选自由以下各物组成的群组：C1-6脂肪族基、R2d、R7d、-T2-R2d、-T2-R7d、-V-T3-R2d和-V-T3-R7d；
T2为任选地经R3或R3b取代的C1-6亚烷基链，其中所述亚烷基链任选地杂有-C(R5)=C(R5)-、-C≡C-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-SO2N(R4)-、-N(R4)-、-N(R4)C(O)-、-NR4C(O)N(R4)-、-N(R4)CO2-、-C(O)N(R4)-、-C(O)-、-C(O)-C(O)-、-CO2-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R4)-、-N(R4)-N(R4)-、-N(R4)SO2-或-SO2N(R4)-，并且其中T2或其一部分任选地形成3到7元环的一部分；
T3为任选地经R3或R3b取代的C1-6亚烷基链，其中所述亚烷基链任选地杂有-C(R5)=C(R5)-、-C≡C-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-SO2N(R4)-、-N(R4)-、-N(R4)C(O)-、-NR4C(O)N(R4)-、-N(R4)CO2-、-C(O)N(R4)-、-C(O)-、-C(O)-C(O)-、-CO2-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R4)-、-N(R4)-N(R4)-、-N(R4)SO2-或-SO2N(R4)-，并且其中T3或其一部分任选地形成3到7元环的一部分；
V为-C(R5)=C(R5)-、-C≡C-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-SO2N(R4)-、-N(R4)-、-N(R4)C(O)-、-NR4C(O)N(R4)-、-N(R4)CO2-、-C(O)N(R4)-、-C(O)-、-C(O)-C(O)-、-CO2-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R4)-、-C(NR4)=N-、-C(OR5)=N-、-N(R4)-N(R4)-、-N(R4)SO2-、-N(R4)SO2N(R4)-、-P(O)(R5)-、-P(O)(OR5)-O-、-P(O)-O-或-P(O)(NR5)-N(R5)-；
R2d为-卤基、-NO2、-CN、-C(R5)=C(R5)2、-C≡C-R5、-OR5、-SR6、-S(O)R6、-SO2R6、-SO2N(R4)2、-N(R4)2、-NR4C(O)R5、-NR4C(O)N(R4)2、-NR4CO2R6、-O-CO2R5、-OC(O)N(R4)2、-O-C(O)R5、-CO2R5、-C(O)-C(O)R5、-C(O)R5、-C(O)N(R4)2、-C(=NR4)-N(R4)2、-C(=NR4)-OR5、-N(R4)-N(R4)2、-N(R4)C(=NR4)-N(R4)2、-N(R4)SO2R6、-N(R4)SO2N(R4)2、-P(O)(R5)2或-P(O)(OR5)2；以及
每一R7d独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基，
每一R3独立地选自由以下各物组成的群组：-卤基、-OH、-O(C1-3烷基)、-CN、-N(R4)2、-C(O)(C1-3烷基)、-CO2H、-CO2(C1-3烷基)、-C(O)NH2和-C(O)NH(C1-3烷基)；
每一R3b独立地为任选地经R3或R7取代的C1-3脂肪族基，或同一碳原子上的两个取代基R3b连同其所连接的碳原子一起形成3到6元碳环；
每一R4独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；或同一氮原子上的两个R4连同所述氮原子一起形成任选地经取代的5到8元杂芳基或杂环基环，除所述氮原子外，还具有0到2个选自N、O和S的环杂原子；
每一R5独立地为氢或任选地经取代的脂肪族基、芳基、杂芳基或杂环基；
每一R6独立地为任选地经取代的脂肪族基或芳基；以及
每一R7独立地为任选地经取代的芳基、杂环基或杂芳基。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述奥诺拉A激酶选择性抑制剂为4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸(阿利色替(a1isertib)(MLN8237))或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述药学上可接受的盐为4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5，4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸钠。
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