CN103920151A - 一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种内服治疗糖尿病慢性并发症的醛糖还原酶抑制剂，该组合物有选自醛糖酶抑制作用与至少一种α-糖苷酶抑制作用的天然药物，提供含有醛糖酶抑制作用与α糖苷酶抑制作用等双重作用的组合物。本发明组合物通过临床及药理意外的发现，具备通过糖苷酶抑制降低餐后血糖、醛糖还原酶抑制作用，保护糖尿病患者视网膜，延缓糖尿病老年痴呆进程、改善糖尿病老年痴呆症状。

Description

一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物

技术领域

本发明涉及一种内服治疗糖尿病并发症的醛糖还原酶抑制剂；属天然药物领域。

背景技术

醛糖还原酶存在于人体神经、红细胞、晶状体、视网膜等组织器官中，在多元醇通路中催化血液中的葡萄糖生成山梨醇。山梨醇本身由于极性强不易通过细胞膜，在细胞内会形成蓄积，使细胞膜的通透性发生改变，并使细胞中Na⁺-K⁺-ATP酶活性下降，造成肌醇丧失，导致细胞代谢与功能的损害。醛糖还原酶是多元醇通路的关键限速酶。当血糖浓度维持在正常生理水平时，它并不激活，它对葡萄糖的亲和力较低，此时葡萄糖很少转化为山梨醇。在高血糖状况下（如糖尿病），己糖激酶被饱和，这时醛糖还原酶激活，促使体内的葡萄糖转化为山梨醇。

山梨醇的增多使得果糖也随之增多,果糖的聚集继而抑制山梨醇脱氢酶的活性,使山梨醇分解减少。以上两方面的作用使山梨醇在组织中大量堆积,它作为一种极性很强的化合物,不能自由出入细胞,造成细胞内的高渗状态,从而造成细胞的渗透性水肿, 同时细胞内山梨醇大量蓄积也可使Na⁺、K⁺-ATP酶活性下降，细胞中肌醇流失，从而导致细胞代谢与功能的损害，进而出现糖尿病并发症等器官病变。

由于眼睛和神经细胞等组织内醛糖还原酶的含量较高，糖尿病病人体内高血糖的环境使这一通路很容易被打开，造成对这些组织的病理损害，如糖尿病、白内障、神经病变、肾脏病变、视网膜病变、动脉粥样硬化等糖尿病并发症。

临床需要能够有效调控血糖浓度，并能改善糖尿病眼睛和神经细胞慢性并发症的安全药物。

发明内容

铁皮石斛(PendrobiumofficinaleKiMuraetMigo')为兰科(Prchidaceaes)石斛属多年生草本植物的新鲜或干燥茎。其味甘，性微寒，归胃、肾经，具有养阴清热、益胃生津的功效，用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。《神农本草经》中记载:石斛“主伤中，除痹，下气，补五脏，虚痨羸瘦，强阴，久服厚肠胃”。李时珍在《本草纲目》中评价铁皮石斛“除痹，下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，久服，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，益智除惊，轻身延年。”但一直以来，铁皮石斛的药用配伍不甚明确，常规的中药材提取制备方法对石斛的药用价值有较大破坏或遗失。

桑叶是卫生部公布的药食同源物品，充分、合理、高效的利用药食同源物质，可以防病治病，改善患者生活质量。

本发明的目的在于提供含有醛糖酶抑制剂的组合物，用于糖尿病患者控制血糖、同时延缓糖尿病慢性并发症的进程。

本发明全部选用天然中草药制成适当的药物；还可以制成食品、保健食品、食品补充剂、或饮料。

本发明提供一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物，由有效成分和药学上可接受的载体组成,其特征在于：所述的有效成分是来自于下列原料制成的：至少一种醛糖酶还原抑制剂与至少一种α-糖苷酶抑制剂，所述组合物制剂α-糖苷酶抑制剂选自桑叶提取物、桑枝提取物或桑白皮提取物或荷叶提取物一种或两种以上,所述组合物制剂醛糖还原酶抑制剂选自石斛、或石斛提取物或桑寄生、或槲寄生、或槐米、或知母一种或两种以上。

所述的桑叶提取物中，桑叶提取物的桑叶总生物碱含量为15%〜35%、桑叶多糖含量为5%-25%；石斛提取物中，石斛提取物是药材洗净，用不超过低温50℃的水、或乙醇提取；不超过70℃低温浓缩制成的。

优选的所述的桑叶、石斛提取物提取物中，石斛提取物是通过药材洗净，用不超过低温50℃的水、醇提取；滤过、冻干固化而成的。

本发明特别提供该组合物在制备治疗糖尿病视网膜病中的应用。

本发明特别提供该组合物在制备治疗糖尿病老年痴呆症中的应用。

本发明并提供该组合物在制备治疗糖尿病患者肾小管转分化相关疾病的应用。

本发明特别提供该组合物在制备治疗糖尿病患者肾脏间质成纤维细胞活化相关疾病的应用。

本发明组合物技术方案以石斛为君药，桑叶为臣药。君药性味甘寒入胃生津；臣药性味甘平，入肺经，疏散肺热而润燥；使肺金清肃，则金能生水，有利于口干口渴证的改善。二药合用，石斛滋胃生津、桑叶润肺燥、清肺热。二药相合，作用互济互补达到共同改善消渴胃阴耗伤、肺燥的特殊病机，二药配伍作用难得的协同性及作用的完备性。

本发明同时提供了基于α-糖苷酶抑制作用与醛糖还原酶抑制作用双重作用的组合物，有效的改善了高血糖所带来的引起人脑血管动脉粥样硬化导致高血压、高血脂，严重者发生心肌梗塞、脑梗塞等病理进程，从而防治糖尿病慢性并发症。

本发明的技术效果：

实验例：

桑叶-石斛提取物对糖尿病大鼠肾醛糖还原酶活性的影响

方法: 用桑叶-石斛提取物和醛糖还原酶抑制剂螺旋已内酰脲(sorbinil)对糖尿病 Wistar大鼠模型进行治疗 ,并观察肾组织肾醛糖还原酶（AR）活性、尿蛋白和Na+2K+2ATP酶活性的变化。

结果: 糖尿病鼠模型组其肾醛糖还原酶活性显著高于正常鼠组( P<0.01) ,使用螺旋已内酰脲（sorbinil）、桑叶-石斛提取物后醛糖还原酶活性明显下降(P<0.01)),与正常对照组相比较无显著性差异(P>0.05) 。治疗8周末 ,两个治疗组尿蛋白水平与4周末相当 ,但糖尿病模型组尿蛋白明显升高 ,远高于两个治疗组(P<0.01)) ,治疗后两组间无明显差异(P>0.05) 。用 sorbinil和桑叶-石斛提取物治疗后 ,Na+2K+2ATP酶活性显著升高(与模型组相比 P<0.05)) 。结论: 桑叶-石斛提取物可通过抑制糖尿病大鼠肾脏组织醛糖还原酶活性而发挥其防治效用。

1、实验动物及分组 　

32 只雄性 Wistar 大鼠随机分出8只为正常对照组(以下称正常组) ;另 24 只用四氧嘧啶 ( 100 mg/ kg) 诱发糖尿病 , 血糖值 >11. 0 mmol/ L ,随机分为糖尿病模型组、 sorbinil 治疗组、桑叶-石斛提取物治疗组。

sorbinil用法为10mg·kg-1/天;

桑叶-石斛提取物由桑叶-石斛等中药组成(锦州医学院新药开发中心制备),每日灌服提取物混悬溶液10ml/kg,每毫升溶液中含生药0.5g。

2、实验方法　

实验开始第4、8周各测定血糖和尿蛋白1次,第16周时将大鼠断头处死,取肾脏剔除附着物,捣碎取匀浆,供测定AR活性用。

肾醛糖还原酶活性测定参照Maragoudakis 法测定；即记录NADPH在340nm处吸收光值下降10U来表示酶活性。

其中使用两种反应体系，反应体系Ⅰ包括67mmol/L、pH6.2的Na-K磷酸缓冲液,10mmol/L的DL-甘油醛，5mmol/L的2-巯基乙醇，0.1mmol/L的NADPH和酶适量；实验杯包括全部试剂，对照杯以双蒸水代替底物DL2甘油醛。

反应体系Ⅱ以0.1mmol/L的NADH代替NADPH，其余试剂同反应体系Ⅰ。

测定组织匀浆酶活性，同时测定蛋白含量，一单位酶活性规定为1min产生1μmolNADP+(或NAD+)的酶量,各组织酶活性用比活性进行比较，比活性=酶单位/mg蛋白。

3、Na⁺2K⁺2ATP酶活性测定：

取少量肾皮质和髓质，称重后用组织匀浆缓冲液(含蔗糖0.2mmol/L、Tris2HCl0.02mmol/L、pH7.40)，组织重量与组织匀浆缓冲液比为1∶40,在玻璃匀浆器中制备匀浆，直接用粗制肾组织匀浆加于酶反应管中(总量1.0ml)，反应液中各化合物浓度为：NaCl100、Mg2Cl22.5、KCL10、EDTA2.0、ATPNa21.0mmol/L或哇巴因0.2mmol/L，37℃水浴中反应30min,速加无机磷显色剂2.5ml(含0.02%孔雀绿、0.55%钼酸铵和0.1%TWEEN220)，再加24%柠檬酸钠0.2ml,室温反应30min，用波长660nm比色测光密度,计算无机盐含量,Na+2K+2ATP酶活性单位以每小时每克组织蛋白(g-1pro)产生的无机磷(Pi)含量(mmol)来表示,即mmolPi·g-1pro·h-1。每次作标准曲线,各反应管均作复管。

统计学方法　计量资料值以x±s表示,各配伍组样本均数比较采用方差分析。

4、结果：

体重、血糖变化 　治疗开始糖尿病鼠体重与正常鼠相当 ,治疗8周结束时 ,糖尿病各组的体重明显低于正常组 ,用2种药物治疗血糖无变化 ,糖尿病各组间体重无明显差异。

肾脏 AR 活性：

分别以还原型辅酶 Ⅱ(NADPH) 和还原型辅酶 Ⅰ(NADH) 测定肾脏的 AR活性，结果见表 1。

糖尿病鼠模型组其AR活性显著高于正常组( P < 0. 01) ,使用 sorbinil、桑叶-石斛提取物后AR活性明显下降 ,与模型组相比 , P值均 < 0. 01 ;虽然各治疗组 AR 活性仍高于正常组 ,但与正常组相比较无显著性差异( P > 0.05) 。

表1：各组肾脏醛糖还原酶AR活性比较

尿蛋白含量的变化 ：　

随病程进展 ,糖尿病鼠各组尿蛋白均有上升趋势，用 sorbinil、桑叶-石斛提取物治疗后尿蛋白基本维持不变。治疗 8 周末 ,两个治疗组尿蛋白水平与 4 周末相当 ,但模型组尿蛋白明显升高 ,远高于两个治疗组水平( P < 0. 01) ,两治疗组治疗后组间无明显差异( P > 0. 05) ，见表各组尿蛋白比较：

对糖尿病大鼠肾组织 Na+2K+2ATP 酶活性的影响：　

注射四氧嘧啶 8周后 ,模型组与正常组比较 ,Na+2K+2ATP 酶活性显著降低 ( P<0.05) ,而用sorbinil 和桑叶-石斛提取物治疗后 ,Na+2K+2ATP 酶活性显著升高 ,两治疗组间无显著性差异( P>0.05),结果见表3。

本发明意外地发现，石斛低温冻干匀浆液相对于其他石斛有效成分的提取、腹肌方法，具有更好的醛糖还原酶抑制活性。

具体实施方式：

实施例1：

该种内服治疗糖尿病的中药组合物，制成有效成分的原料按下述重量为：

桑叶1000g、加8～12倍量水，水煎，60～100℃加热，搅拌1～2小时，过滤，滤液高速离心后，聚砜酰胺滤膜过滤，滤液在温度60～110℃、真空度0.08～0.09MPa的条件下减压浓缩至相对密度约0.8～1.5(60℃)的清膏，加辅料适量，物料干燥温度75～100℃，雾化压力0.06～0.09MPa，喷雾频率速度30～40kg/h，喷雾干燥，即得桑叶提取物浸膏，备用；

鲜石斛250g高压喷淋洗净，切成1cm小段，与纯化水适量打成均质的匀浆，

过滤，滤液与上述桑叶提取物制成口服液1000ml即得；或根据实验需要，配置成动物实验灌胃所需的溶液浓度，用于药理实验动物灌胃给药。

实施例2、

低温冻干石斛匀浆液的制备：

石斛1000g

取石斛药材高压喷淋洗净，切成0.5-1cm的小段，加10倍量乙醇，不超过50℃回流提取；提取液不超过50℃低温回收乙醇，浓缩液至适量，分装，冻干即得。

低温保存，临用时用纯化水溶解口服。

实施例3、

桑叶2000g

石斛1000g

桑叶2000g、加8～12倍量水，水煎，60～100℃加热，搅拌1～2小时，过滤，滤液高速离心后，聚砜酰胺滤膜过滤，浓缩至3000ml，备用

取石斛药材高压喷淋洗净，切成0.5-1cm的小段，加10倍量乙醇，不超过50℃回流提取；提取液不超过50℃低温回收乙醇，浓缩液至适量，兑入上述桑叶提取液，分装，冻干即得。

实施例4、

桑叶2000g

石斛1000g

桑叶2000g、加8～12倍量水，水煎，60～100℃加热，搅拌1～2小时，过滤，滤液高速离心后，聚砜酰胺滤膜过滤，浓缩至3000ml，备用

取石斛药材高压喷淋洗净，切成0.5-1cm的小段，加10倍量乙醇，不超过50℃回流提取；提取液不超过50℃低温回收乙醇，浓缩液至适量，兑入上述桑叶提取液，及适量纯化水，陶瓷超滤膜过滤灭菌，分装，密封，低分储存。

实验例：

桑叶-石斛冻干匀浆液对D-半乳糖性白内障大鼠晶状体浑浊程度影响

1 材料与方法

1 动物与分组

选取 Wister 大白鼠42 只, 雌雄各半, 体重在250~ 300g之间, 饲养10d 后,供检, 随机分为3 组,即: 正常对照组、 白内障模型组和桑叶-石斛冻干匀浆液治疗组, 每组 14只大鼠, 先称量每只大鼠体重及血糖检测, 作为造型前及用药前的体重和血糖值。

2 白内障的诱发与药物的给予

用作预防的大鼠,每日腹腔注射50% ( w / v)和饮用 10% ( w / v) 的半乳糖水溶液, 注射剂量为5g/ kg 体重; 15d 后,停止注射和饮用半乳糖,挑选晶状体轻度混浊, 且程度相似的大鼠, 随机分为 2 组,每组10 只, 即半乳糖模型组, 仍以同体积的半乳糖水溶液腹腔注射和灌胃; 桑叶-石斛冻干匀浆液治疗组，在注射和饮用同剂量半乳糖的同时, 每日灌服桑叶-石斛冻干匀浆液溶液 1mL/100g 体重,每毫升溶液中含生药0. 4g。

另设正常对照组,注射和饮用同体积的生理盐水并未给予任何药物的正常大鼠; 并观察晶状体浑浊度的变化。

3 晶状体的检查与分级

将晶状体混浊程度分为:

Ⅰ无混浊:晶状体透明清亮;

Ⅱ轻度混浊:只在赤道部有空泡;

Ⅲ高度混浊:空泡扩展到中央;

Ⅳ核混浊:只在中央呈现核白内障;

Ⅴ完全混浊:晶状体完全性白内障,

共5 级进行研究。

在动物开始注射和饮用半乳糖后每5d 用裂隙灯检查晶状体1 次,记录晶状体出现不同浑浊程度的时间。

桑叶-石斛冻干匀浆液溶对D-半乳糖性白内障大鼠晶状体浑浊程度影响：

实施例5、

桑叶2000g

石斛1000g

桑叶2000g、加8～12倍量水，水煎，60～100℃加热，搅拌1～2小时，过滤，滤液高速离心后，聚砜酰胺滤膜过滤，浓缩至3000ml，备用

取石斛药材高压喷淋洗净，切成0.5-1cm的小段，加10倍量乙醇，不超过50℃回流提取；提取液不超过50℃低温回收乙醇，浓缩液至适量，兑入上述桑叶提取液，超低温冻干，压片，分装，密封，即得。

实施例6：

该种内服治疗糖尿病的中药组合物，制成有效成分的原料按下述重量为：

桑叶1000g、加8～12倍量水，水煎，60～100℃加热，搅拌1～2小时，过滤，滤液高速离心后，聚砜酰胺滤膜过滤，滤液在温度60～110℃、真空度0.08～0.09MPa的条件下减压浓缩至相对密度约0.8～1.5(60℃)的清膏，加辅料适量，物料干燥温度75～100℃，雾化压力0.06～0.09MPa，喷雾频率速度30～40kg/h，喷雾干燥，即得桑叶提取物浸膏，干燥粉碎；备用

鲜石斛250g高压喷淋洗净，切成1cm小段，与纯化水适量打成均质的匀浆，

过滤，滤液冻干制成固体、粉碎；与上述桑叶提取物粉末、适当辅料压片，即得。

实施例7: 本发明所述桑叶-石斛冻干片改善糖尿病认知功能障碍的放射诊断分析

受试者为30例2型糖尿病患者和30例按近似体重指数（±10%）匹配的健康志愿者。入组时，使用静息状态下脑功能连接分析检查后扣带皮层（PCC）与整个脑区之间的联系。使用稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评估右侧颞中回（MTG），左侧舌回，左侧枕中回和左侧中央前回、左侧小脑后叶，右侧额上回和右侧额中回连接强度。

受试患者持续使用本发明所述桑叶-石斛冻干片，患者每日3次，每次3片；疗程60天，健康志愿者常规饮食，于实验结束时，再次使用静息状态下脑功能连接分析检查后扣带皮层（PCC）与整个脑区之间的联系。使用稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评估右侧颞中回（MTG），左侧舌回，左侧枕中回和左侧中央前回、左侧小脑后叶，右侧额上回和右侧额中回连接强度。

结果：

与健康对照者相比，2型糖尿病患者大脑某些特定区域内，包括右侧颞中回（MTG），左侧舌回，左侧枕中回和左侧中央前回，PCC功能连接强度显著下降；同时，在左侧小脑后叶，右侧额上回和右侧额中回发现扣带皮层PCC功能连接强度增加。

通过治疗，包括右侧颞中回（MTG），左侧舌回，左侧枕中回和左侧中央前回，PCC功能连接强度显著回升；同时，在左侧小脑后叶，右侧额上回和右侧额中回发现扣带皮层PCC功能连接下降；提示本发明桑叶-石斛冻干片具有改善糖尿病认知功能障碍效果。

实施例8：

如本发明实施例5所述桑叶-石斛冻干片用于187例糖尿病并发症患者。

其中男106人、女81人进行诊治。患者每日3次，每次3片，每片相当于省药材2.5g，开水送服，坚持服用一个疗程60天。

诊断依据：根据《中华人民共和国中医药行业标准一中医病证诊断疗效标准》的规定，参考“消渴的诊断依据”:口渴多饮，多食易饥，尿频量多，形体消瘦。入组时查尿蛋白、尿酮体，血尿素氮、肌酐，二氧化碳结合力及血钾、钠、钙、氯化物等

疗效评定:根据《中华人民共和国中医药行业标准：中医病证诊断疗效标准的规定，参考“消渴的疗效评定”:治愈:症状消失，实验室检查多次正常。好转:主要症状及有关实验室检查有改善。未愈:症状及实验室检查无变化。

服药患者持续跟踪眼底检查，视力跟踪评测；老年痴呆改善用长谷川简易痴呆量表、谈话评分进行评测；每周查24小时尿蛋白定量及微量蛋白尿。

结果：眼底检查，视力改善显效率67.2%，无效14.6%；老年痴呆评分改善显效34.5%，无效33.2%；24小时尿蛋白定量及微量蛋白尿及肾功综合改善55.4%。无效17.2%。

实施例9：

应用低温冻干制备糖尿病肾病药物

桑叶2000g

桑寄生 500g

赤芍 500g

石斛 1000g

桑叶、桑寄生、赤芍等加8～12倍量水，水煎，60～100℃加热，搅拌1～2小时，过滤，滤液高速离心后，聚砜酰胺滤膜过滤，浓缩至4500ml至10000ml，喷雾干燥；备用；

取石斛药材高压喷淋洗净，切成0.5-1cm的小段，加10倍量乙醇，不超过50℃回流提取；提取液不超过50℃低温回收乙醇，浓缩液至适量，超低温冻干，与上述桑叶、桑寄生、赤芍提取物制粒，分装，密封，即得。

Claims (8)

1.一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物，由有效成分和药学上可接受的载体组成,其特征在于：所述的有效成分是来自于下列原料制成的：至少一种α-糖苷酶抑制剂与至少一种醛糖酶还原抑制剂，所述组合物制剂中α-糖苷酶抑制剂选自桑叶提取物、桑枝提取物或桑白皮提取物或荷叶提取物一种或两种以上，所述组合物制剂中醛糖还原酶抑制剂选自石斛、或石斛提取物或桑寄生、或槲寄生、或槐米、或知母一种或两种以上。

2.根据权利要求1所述的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物，其特征在于：所述的桑叶提取物中，桑叶提取物的桑叶总生物碱含量为15%〜35%、桑叶多糖含量为5%-25%。

3.根据权利要求2所述的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物，其特征在于：所述的石斛提取物中，石斛提取物是药材洗净，用不超过低温50℃的水、醇提取；不超过70℃低温浓缩制成的。

4.根据权利要求2所述的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物，其特征在于：所述的石斛提取物中，石斛提取物是通过药材洗净，用不超过低温50℃的水、醇提取；滤过、冻干固化而成的。

5.如权利要求1～3中任意一项的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物在制备治疗糖尿病视网膜病中的应用。

6.如权利要求1～3中任意一项的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物在制备治疗糖尿病老年痴呆症中的应用。

7.如权利要求1～3中任意一项的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物在制备治疗糖尿病患者肾小管转分化相关疾病的应用。

8.如权利要求1～3中任意一项的一种治疗糖尿病慢性并发症的组合物在制备治疗糖尿病患者肾脏间质成纤维细胞活化相关疾病的应用。