CN103910638B - 氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法，以及由该方法所制备的氢化诺卜基三乙基碘化铵用作人体肿瘤抑制剂的应用，该化合物对人体肿瘤细胞具有明显的抑制作用；氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法是由氢化诺卜基氯与碘化钠反应制得氢化诺卜基碘，再由氢化诺卜基碘与三乙胺反应得到氢化诺卜基三乙基碘化铵。本发明氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法所制备的氢化诺卜基三乙基碘化铵对人肺癌H460细胞、人乳腺癌MCF7细胞、人肝癌SMMC7721细胞、人胃癌MK-45细胞的半数抑制浓度IC₅₀值分别为8.3μg/ml、13.25μg/ml、2.28μg/ml、1.27μg/ml，基本小于10μg/ml，部分达到SFDA《抗肿瘤药物药效学指导原则》的要求，表现出良好的抗肿瘤活性。

Description

氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法与氢化诺卜基三乙基碘化铵用作人体肿瘤抑制剂的应用，属于医药领域。

背景技术

松节油的来源为松科松属植物树干分泌的松脂，松脂蒸馏后所得到的挥发油即为松节油。松节油的主要成分是α-蒎烯和β-蒎烯。我国松树资源非常丰富，松林面积约为1-600万km²，松节油的年产量约为8～10万吨，仅次于美国，居世界第2位，但在深度加工产品品种及利用上与发达国家相比还有一定的差距。从香脂冷杉叶提取的精油主要成分有β-蒎烯(31％)、α-蒎烯(16％)、δ-3-蒈烯(20％)、醋酸冰片(7％)、α-葎草烯(0.16％)。体外实验显示，香脂冷杉精油对MCF7、PC-3、A-549、DID-1、M4BEU、纤维细胞、L-929和CT-26生长均具抑制作用，GI₅₀为0.76～1.7mg/mL，对正常纤维细胞的作用小于对肿瘤细胞的作用，提示肿瘤细胞对其具敏感性。但该项研究证明α-葎草烯对上述癌细胞具有抗癌活性，而精油中其它化合物没有抑制肿瘤细胞生长的活性，即α-蒎烯和β-蒎烯没有抗癌活性。

过量β-蒎烯与多聚甲醛在无水ZnCl₂催化下反应制得诺卜醇，诺卜醇经高压催化加氢得到氢化诺卜醇。氢化诺卜醇的学名是1-羟乙基-6，6-二甲基诺蒎烷或6，6-二甲基双环[3，1，1]庚-2-烷-2-乙醇。氢化诺卜醇具有松叶的清淡气息，可参与调香，也可直接用作化工原料，或经化学改性后还可以进一步用于合成其他香料并应用于医药领域。氢化诺卜醇衍生物的合成与性能研究为开发和利用松节油开辟了新途径。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法与氢化诺卜基三乙基碘化铵用作人体肿瘤抑制剂的应用。

本发明所说的化合物是氢化诺卜基三乙基碘化铵，其基本参数如表1所示。

表1氢化诺卜基三乙基碘化铵的基本参数

本发明中氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法，包括以下步骤：将氢化诺卜基氯与碘化钠反应，二者的摩尔比为1∶1.5，加热下反应制得氢化诺卜基碘代烷；再由氢化诺卜基碘代烷与三乙胺在乙腈中反应，二者摩尔比为1∶1.1，70～80℃加热回流6h得到氢化诺卜基三乙基碘化铵。

本发明经过试验筛选，发现氢化诺卜基三乙基碘化铵(C₁₇H₃₄NI)对人体的一些肿瘤细胞具有很好的抑制效果，对人肺癌H460细胞、人肝癌SMMC7721细胞、人乳腺癌MCF7细胞和人胃癌细胞MKN-45等得半数抑制浓度IC₅₀值分别为8.3μg/ml、13.25μg/ml、2.28μg/ml、1.27μg/ml，基本小于10μg/ml。

本发明用阳性药达沙替尼(sprycel，分子量506.02)做对照试验，按照SFDA《抗肿瘤药物临床前研究技术指导原则》的要求，考察氢化诺卜基三乙基碘化铵对体外培养的人肿瘤细胞的生长抑制作用及其作用强度，为寻找抗肿瘤候选药物提供理论依据。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

一种氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法，包括以下步骤：

1)在装有机械搅拌器、回流冷凝管的500ml三口烧瓶中，放入100ml丙酮，0.2mol氢化诺卜基氯和35g碘化钠，搅拌，加热回流。8h后取样GC分析。当醇转化完全后，冷至室温，过滤去盐。处理后得到微黄色的氢化诺卜基碘代烷。

2)在250ml磨口锥形瓶上安装回流冷凝管，锥形瓶置于磁力搅拌器上，在瓶内加入0.1mol氢化诺卜基碘代烷、45ml乙腈和0.11mol三乙胺，搅拌，70～80℃加热回流6h。反应液转移至蒸馏装置中，蒸出乙腈和过量的三乙胺，残夜冷却形成固体，氯仿重结晶得晶体，抽滤，真空干燥得目标产物氢化诺卜基三乙基碘化铵(分子式：C₁₇H₃₄NI)。

将C₁₇H₃₄NI溶于二甲亚砜(DMSO)，准确配制0.1M浓度的储备液，临用前以细胞培养基稀释至所需浓度，各剂量受试物DMSO终浓度小于0.1％。采用MTT比色法进行试验。

H460细胞、SMMC7721细胞、MCF7细胞、MKN-45细胞(RPMR1640培养基，10％胎牛血清，0.25％胰酶加0.02％EDTA消化)；以上细胞均在37℃、5％CO₂饱和湿度的培养箱中常规培养，收集对数生长期的细胞用于试验。

将处于对数生长期的细胞(H460细胞、SMMC7721细胞、MCF7细胞、MKN-45细胞)，用0.25％胰酶加0.02％EDTA消化，制成细胞悬液，以适当的细胞浓度加入96孔酶标板内100μl/孔，设三复孔，置37℃5％CO₂孵箱内培养24h左右，再分别加入浓度为100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM的C₁₇H₃₄NI，作用48h后加5mg/mlMTT溶液20μl/孔，37℃孵育4h，弃去上清，加入DMSO150μl/孔，微型振荡器上振荡5min，使结晶完全溶解，用酶联仪570nm波长处测定吸光度值(A)，计算细胞抑制率。计算细胞抑制率。抑制率％＝(1-对照组细胞平均吸光值/加药组细胞平均吸光值)×100％

根据改进寇氏法计算半数抑制浓度(IC₅₀)，当IC₅₀＜10μg/ml时，判断该化合物具有体外抗肿瘤活性。

将处于对数生长的肿瘤细胞用0.25％胰酶消化，制成细胞悬液2.5×105/ml，放入25ml细胞培养瓶，24h后加入不同浓度的药物，作用48h后光镜下观察细胞形态。

将阳性药达沙替尼与样品进行平行试验，计算达沙替尼IC₅₀，并与文献报道值进行比较，如值接近说明本试验系统真实、可靠。

表2、3、4、5分别为氢化诺卜基三乙基碘化铵对H460、MCF7、SMMC7721、MKN-45细胞的抑制情况。

表2不同浓度C₁₇H₃₄NI对H460细胞的抑制率及IC₅₀值(n＝2)

表3不同浓度C₁₇H₃₄NI对MCF7细胞的抑制率及IC₅₀值(n＝2)

表4不同浓度C₁₇H₃₄M对SMMC7721细胞的抑制率及IC₅₀值(n＝2)

表5不同浓度C₁₇H₃₄NI对MKN-45细胞的抑制率及IC₅₀值(n＝2)

以上实验结果表明：受试物C₁₇H₃₄NI表现出良好的抗肿瘤活性，对人乳腺癌MCF7细胞、人胃癌MK-45细胞的IC₅₀均小于10μM，抑制效果均较达沙替尼略优。

根据SFDA《抗肿瘤药物药效学指导原则》的要求：合成化合物或植物提取纯品的IC₅₀＜10μg/ml，植物粗提物的IC₅₀＜20μg/ml时，则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用。将本次试验受试物C₁₇H₃₄NI和达沙替尼对体外培养的四株人肿瘤细胞抑制率IC₅₀值换算成以μg/ml为单位，见表6。

表6受试物C₁₇H₃₄NI和达沙替尼对不同细胞株的抑制率IC₅₀值(n＝2)

由表6可知，受试物C₁₇H₃₄NI的IC₅₀值基本均＜10μg/ml，表明该化合物对人体肿瘤细胞具有一定的抑制作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种氢化诺卜基三乙基碘化铵的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将氢化诺卜基氯与碘化钠反应，二者的摩尔比为1∶1.5，加热下反应制得氢化诺卜基碘代烷；再由氢化诺卜基碘代烷与三乙胺在乙腈中反应，二者的摩尔比为1∶1.1，70～80℃加热回流6h得到氢化诺卜基三乙基碘化铵。